TỔNG HỢP VÀ THỬ HỌAT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƯ CỦA MỘT SỐ DẪN CHẤT 2 ARYL 4 QUINAZOLINON

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ THỊ HUYỀN TỔNG HỢP VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƯ CỦA MỘT SỐ DẪN CHẤT 2-ARYL-4QUINAZOLINON KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2015 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ THỊ HUYỀN TỔNG HỢP VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƯ CỦA MỘT SỐ DẪN CHẤT 2-ARYL-4QUINAZOLINON KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Văn Thị Mỹ Huệ TS Lê Nguyễn Thành Nơi thực hiện: Bộ mơn Hóa hữu cơ-Đại học Dược Hà Nội Trung tâm Nghiên cứu Phát triển thuốcViện Hóa sinh biển-Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam HÀ NỘI - 2015 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp thời hạn, đạt mục tiêu đề ra, thời gian vừa qua, em nhận giúp đỡ tận tâm từ thầy cô, bạn bè trường Đại học Dược Hà Nội Nhân dịp này, em xin bày tỏ lòng biết ơn tới: TS.Văn Thị Mỹ Huệ, cô thường xuyên động viên, giúp đỡ, tạo điều kiện cho em thực đề tài TS Lê Nguyễn Thành, Trung tâm Nghiên cứu Phát triển thuốc –Viện Hóa Sinh Biển–Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, thầy theo dõi giúp đỡ em q trình làm khóa luận Các thầy giáo Bộ mơn Hóa Hữu truyền đạt kiến thức quý báu suốt thời gian em học tập trường tạo tảng giúp em thực tốt nhiệm vụ khóa luận tốt nghiệp Các cán Trung tâm Nghiên cứu Phát triển thuốc, phòng Nghiên cứu cấu trúc – Viện Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam giúp đỡ em trình thực nghiệm Cuối cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè quan tâm, giúp đỡ, tạo điều kiện để em tập trung hồn thành khóa luận tốt nghiệp hạn, thu kết mong muốn Hà Nội, ngày 10 tháng 05 năm 2015 Sinh viên Vũ Thị Huyền MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 HỢP CHẤT 3-ARYLISOQUINOLINON VÀ HƯỚNG PHÁT TRIỂN CẤU TRÚC 1.1.1 Tác dụng chống ung thư dãy hợp chất 3-arylisoquinolinon 1.1.2 Phát triển khung 3-arylisoquinolinon thành 2-aryl-4-quinazolinon 1.2 HỢP CHẤT 2-ARYL-4-QUINAZOLINON VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC 1.2.1 Tác dụng chống ung thư 1.2.2 Tác dụng sinh học khác 1.3 PHƯƠNG PHÁP TỔNG HỢP DẪN CHẤT 2-ARYL-4QUINAZOLINON 10 1.3.1 Phản ứng 2-halobenzamid arylamin 10 1.3.2 Phản ứng acid anthranilic nitril 11 1.3.3 Phản ứng anthranilamid aroyl halogenid 11 1.3.4 Phản ứng anthranilamid aldehyd 12 Chương 2: NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ 14 2.1.1 Nguyên vật liệu, hóa chất, dung môi 14 2.1.2 Thiết bị thí nghiệm 14 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 15 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.3.1 Phương pháp tổng hợp 2-aryl-4-quinazolinon 15 2.3.2 Phương pháp tinh chế xác định cấu trúc 16 2.3.3 Phương pháp xác định hoạt tính kháng tế bào ung thư 16 2.3.3.1 Nguyên tắc 16 2.3.3.2 Dòng tế bào thử nghiệm 16 2.3.3.3 Chất chuẩn dương tính 17 2.3.3.4 Tiến hành 17 Chương THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 19 3.1 TỔNG HỢP HÓA HỌC 19 3.1.1 Tổng hợp chất trung gian 2-amino-4-methylbenzamid 19 3.1.2 Tổng hợp dẫn chất 2-aryl-4-quinazolinon 4a-e 20 3.2 KIỂM TRA ĐỘ TINH KHIẾT, KHẲNG ĐỊNH CẤU TRÚC 24 3.2.1 Kiểm tra độ tinh khiết 24 3.2.2 Khẳng định cấu trúc 25 3.2.2.1 Phổ khối lượng (MS) 25 3.2.2.2 Phổ hồng ngoại (IR) 26 3.2.2.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 27 3.3 THỬ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ 28 3.4 BÀN LUẬN 30 3.4.1 VỀ TỔNG HỢP HÓA HỌC 30 3.4.1.1 Tổng hợp chất trung gian 2-amino-4-methylbenzamid khẳng định cấu trúc 30 3.4.1.2 Tổng hợp dẫn chất 2-aryl-4-quinazolinon (4a-e) 31 3.4.2 VỀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC 33 3.4.2.1 Phổ khối lượng (MS) 33 3.4.2.2 Phổ hồng ngoại (IR) 34 3.4.2.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (1H-NMR) 35 3.4.2.4 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C (13C-NMR) 36 3.4.3 VỀ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƯ 37 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT 13 C-NMR H-NMR Ar CDCl3 CTPT d Đ.v.c dd DMAC DMSO EA ED50 (effective dose) EGFR (epidermal growth factor receptor) Et EtOAc HE IC50 (half maximal inhibitory concentration) IR KLPT L1210 m Me MS nt PMB s SKLM t TLC Tonc TT VEGFR (vascular endothelial growth factor receptor) Phổ cộng hưởng từ nhân carbon Phổ cộng hưởng từ nhân proton Aryl Cloroform-D Công thức phân tử Doublet Đơn vị carbon Doublet of doublet N,N-dimethyl acetamid Dimethyl sulfoxid Ethylacetat Liều có tác dụng với 50% cá thể Thụ thể yếu tố phát triển biểu bì Ethyl Ethylacetat n-hexan Nồng độ ức chế 50% sống tế bào Phổ hồng ngoại Khối lượng phân tử Tế bào bạch cầu lympho chuột Multiplet Methyl Phổ khối lượng Not test p-methoxybenzyl Singlet Sắc ký lớp mỏng Triplet Sắc ký lớp mỏng Nhiệt độ nóng chảy Thứ tự Thụ thể yếu tố phát triển mạch máu DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Kết tổng hợp dẫn chất 4a-e 24 Bảng 3.2: Giá trị Rf Tonc dẫn chất 4a-e 25 Bảng 3.3: Kết phân tích phổ khối lượng dẫn chất 4a-e 26 Bảng 3.4: Số liệu phổ IR dẫn chất 4a-e 26 Bảng 3.5 Số liệu phổ 1H-NMR dẫn chất 4a-e 27 Bảng 3.6: Số liệu phổ 13C-NMR dẫn chất 4a-e 28 Bảng 3.7: Kết thử hoạt tính gây độc tế bào 4a-e 30 Bảng 3.8: Phổ 1H-NMR chất trung gian 31 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ HÌNH VẼ Hình 1.1: Cấu trúc hợp chất 3-aryl-6-methylisoquinolinon nghiên cứu Cho cộng Hình 1.2: Cấu trúc số dẫn chất 3-arylisoquinolinon nghiên cứu Cho năm 2009 Hình 1.3: Cấu trúc pharmacophore giả định dẫn chất 3-arylisoquinolinon Hinh 1.4: Thiết kế dẫn chất 2-aryl-4-quinazolinon dựa phương pháp nhóm đẳng cấu sinh học Hình 1.5: Cấu trúc nhóm hợp chất 6-alkylamino- 2,3-dihydro-3’methoxy-2-phenyl-4-quinazolinon Hình 1.6: Cấu trúc nhóm hợp chất 2-aryl-4-quinazolinon Hình 1.7: Dãy hợp chất 6-pyrrolidinyl-2-(2-substituted phenyl)-4quinazolinon Hình 1.8: Dãy hợp chất 2-aryl-6-substituted quinazolinon Hình 1.9: Một số chế phẩm điều trị ung thư có chứa khung quinazolinon7 Hình 1.10: Một sooa dẫn chất 2-aryl-4-quinazolinon có hoạt tính kháng tế bào ung thư tốt………………………………………………… Hình 1.11: Dãy hợp chất 2-aryl-4-quinazolinon có khả ức chế enzym βglucuronodase Hình 1.12: 2-(4-aminophenyl)-7-cloroquinazolin-4-on Hình 1.13: 2-(2-(2,6-diclorophenylamino)benzyl)-3-(4,5-dihydro-5- phenylpyrazol-3-ylamino)-6-iodoquinazolin-4-on Hình 1.14: 1-((3-(4-florophenyl)-3,4-dihydro-6-iodo-4-oxoquinazolin-2-yl) methylen) thiosemicarbazid Hình 1.15: 2-(phenyl amino methylen acetyl-4’-oxo-1’-thiazolidinyl-3-(indol3’’-yl)-4-quinazolinon 10 Hình 1.16: Chất lỏng ion có tính acid 12 SƠ ĐỒ Sơ đồ 1.1: Sơ đồ tổng hợp 2-aryl-4-quinazolinon từ 2-halobenzamid arylamin 11 Sơ đồ 1.2: Sơ đồ tổng hợp 2-aryl-4-quinazolinon từ nitril 11 Sơ đồ 1.3: Sơ đồ tổng hợp 2-aryl-4-quinazolinon từ anthranilamid aroyl clorid 12 Sơ đồ 1.4: Sơ đồ tổng hợp 2-aryl-4-quinazolinon 13 Sơ đồ 3.1: Sơ đồ tổng hợp chất trung gian 2-amino-4-methylbenzamid 19 Sơ đồ 3.2: Sơ đồ tổng hợp dẫn chất 2-aryl-4-quinazolinon 19 Sơ đồ 3.3: Cơ chế phản ứng tạo 2-aryl-4-quinazolinon 32 Phụ lục 9: Phổ 1H-NMR chất (4c) Phụ lục 10: Phổ 13C-NMR chất (4c) Phụ lục 11: Phổ MS chất (4c) Phụ lục 12: Phổ IR chất (4c) Phụ lục 13: Phổ 1H-NMR chất (4d) Phụ lục 14: Phổ 13C-NMR chất (4d) Phụ lục 15: Phổ MS chất (4d) Phụ lục 16: Phổ IR chất (4d) Phụ lục 17: Phổ 1H-NMR chất (4e) Phụ lục 18: Phổ 13C-NMR chất (4e) Phụ lục 19: Phổ MS chất (4e) Phụ lục 20: Phổ IR chất (4e) Phụ lục 21: Phổ 1H-NMR chất trung gian (2) Phụ lục 22: Phổ 1H-NMR chất (I) ... kiếm dẫn chất có hoạt tính kháng tế bào ung thư, đề tài: ? ?Tổng hợp thử hoạt tính kháng tế bào ung thư số dẫn chất 2- aryl- 4- quinazolinon? ?? tiến hành với hai mục tiêu : Tổng hợp số dẫn chất 2- aryl- 4- quinazolinon. .. hoạt tính gây độc tế bào ung thư chất tổng hợp dòng tế bào ung thư người tế bào ung thư biểu mô KB, tế bào ung thư gan Hep-G2, tế bào ung thư phổi LU, tế bào ung thư vú MCF-7 Kết cho thấy chất (4c)... 2- CH3 25 0,30 25 1,1 [M+H]+ 4b 3-CH3 25 0,30 24 9,0 [M-H]- 4c 3-OCH3 26 6 ,29 26 7,1 [M+H]+ 4d 2- F 25 4 ,26 25 5,1[M+H]+ 4e 3-F 25 4 ,26 25 3,1[M-H]- Ghi chú: m/z tỷ số khối lượng – điện tích 3 .2. 2 .2 Phổ