- KB (Human epidemic carcinoma) – tế bào ung thư biểu mô. - Hep – G2 (Hepatocellular carcinoma) – tế bào ung thư gan. - LU (Human lung carcinoma) – tế bào ung thư phổi.
- MCF – 7 (Human breast carcinoma) – tế bào ung thư vú. 2.3.3.3. Chất chuẩn dương tính
Ellipticin của hãng Sigma - Aldrich. 2.3.3.4. Tiến hành
- Chuẩn bị tế bào
Các dòng tế bào ung thư nghiên cứu được nuôi cấy trong các môi trường nuôi cấy phù hợp có bổ sung thêm 10% huyết thanh bào thai bò (FBS) và các thành phần cần thiết khác ở điều kiện tiêu chuẩn (5% CO2, 37oC, độ ẩm 98%, vô trùng tuyệt đối).
Tùy thuộc vào các đặc tính của từng dòng tế bào khác nhau, thời gian cấy chuyển cũng khác nhau.
Tế bào phát triển ở pha log sẽ được sử dụng để thử độc tính. - Quy trình xác định hoạt tính kháng tế bào ung thư
Pha 200 L dung dịch tế bào ở pha log nồng độ 3 x 104 tế bào/mL vào mỗi giếng (đĩa 96 giếng) trong môi trường DMEM cho các dòng tế bào Hep - G2, MCF - 7, KB, LU.
Mẫu thử được pha loãng sao cho đạt đến nồng độ cuối cùng là 128 g/mL; 32 g/mL; 8 g/mL; 2 g/mL; 0,5 g/mL. Ủ ở 37oC, 5% trong 3 ngày.
Giếng điều khiển (đối chứng dương) chỉ gồm 200 L dung dịch tế bào 3 x 104 tế bào/mL.
Sau 3 ngày nuôi cấy; ủ tiếp với MTT 0,2 mg/mL ở 37oC trong 4 giờ. Loại bỏ môi trường, thêm 100 L DMSO lắc đều để formazan có thể hòa tan hoàn toàn.
Đọc mật độ quang ở bước sóng 540 nm trên máy Spectrophotometter Genios TECAN. Mật độ quang phản ánh số lượng tế bào còn sống sót.
Chương 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1. TỔNG HỢP HÓA HỌC
Dẫn chất 2-aryl-4-quinazolinon được tổng hợp theo các bước sau: - Tổng hợp chất trung gian 2-amino-4-methylbenzamid (sơ đồ 3.1):
Sơ đồ 3.1: Sơ đồ tổng hợp chất trung gian 2-amino-4-methylbenzamid - Tổng hợp các dẫn chất 2-aryl-4-quinazolinon bằng phản ứng ngưng tụ các dẫn chất 2-aminobenzamid với các aldehyd thơm theo sơ đồ phản ứng sau (sơ đồ 3.2):
Sơ đồ 3.2: Sơ đồ tổng hợp các dẫn chất 2-aryl-4-quinazolinon 3.1.1. Tổng hợp chất trung gian 2-amino-4-methylbenzamid (2)
Công thức:
CTPT: C8H10N2O, KLPT: 150,18
Sơ đồ: Chất (2) được tổng hợp theo sơ đồ 3.1.
Tiến hành:
Lấy 1,32 g (10 mmol) 2-amino-4-methylbenzonitril 1 cho vào bình cầu 100 mL. Thêm từ từ 24 mL EtOH vào khuấy đến khi tan hoàn toàn, sau đó thêm 2,8 g (50 mmol) KOH vào hỗn hợp trên. Hỗn hợp được đun hồi lưu ở 90oC trong môi trường khí N2 và theo dõi phản ứng bằng SKLM với hệ dung môi khai triển
n-hexan-Ethylacetat (1:1). Phản ứng kết thúc sau 2 giờ, thêm nước vào và chiết hỗn hợp phản ứng bằng Ethylacetat (chiết 3 lần, mỗi lần 20 mL). Dịch chiết ethylacetat được làm khô qua natri sulfat khan, cuối cùng cô cất loại dung môi. Cặn được tinh chế bằng sắc ký cột với hệ dung môi rửa giải n-hexan-ethylacetat để thu được 2-amino-4-methylbenzamid 2 là chất bột màu trắng ngà. Khối lượng sản phẩm: 1,10 g. Hiệu suất phản ứng: 73%.
1H-NMR (500MHz, DMSO-d6), δ (ppm): xem phụ lục 2, bảng 3.8.
3.1.2. Tổng hợp dẫn chất 2-aryl-4-quinazolinon (4a-e)
Sơ đồ: Các chất (4a-e) được tổng hợp theo sơ đồ 3.2.
Quy trình tổng hợp chung:
Hòa tan hợp chất amino benzamid (2) (2 mmol) và các benzaldehyd tương ứng 3 (2 mmol) trong N,N-dimethylacetamid (5 mL), sau đó cho thêm muối NaHSO3 (208 mg, 2 mmol). Hỗn hợp phản ứng được đun hồi lưu ở nhiệt độ 150oC trong 2 giờ. Theo dõi phản ứng bằng SKLM với hệ dung môi triển khai n- hexan-ethylacetat. Sau khi phản ứng kết thúc, để nguội bình phản ứng, đổ hỗn hợp phản ứng vào nước đá, kết tủa tạo thành được lọc hút kiệt, rửa tủa nhiều lần bằng nước cất, ethylacetat, ethanol. Hút khô thu được sản phẩm 2-aryl-4- quinazolinon (4a-e). Sau đây là kết quả cụ thể:
* 7-methyl-2-(o-tolyl)quinazolin-4(3H)-on (4a) Công thức: NH N Me O Me CTPT: C16H14N2O, KLPT: 250,30. Tiến hành:
Hợp chất (4a) được tổng hợp từ 2 mmol chất (2); 0,23 mL (2 mmol) 2- methylbenzaldehyd, 208 mg (2 mmol) NaHSO3, trong 5 mL DMAC.
Sản phẩm thu được là 270 mg chất bột màu trắng. Hiệu suất 54% (bảng 3.1).
Nhiệt độ nóng chảy 219-221oC (bảng 3.2).
Rf =0,75 (TLC, Silicagel 60 F254, hệ dung môi n-hexan-EtOAc (2:1) (bảng 3.2). MS: xem phụ lục 3, bảng 3.3. IR(KBr, υmax (cm-1)): xem phụ lục 4, bảng 3.4. 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6), δ (ppm): xem phụ lục 1, bảng 3.5. 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6), δ (ppm): xem phụ lục 2, bảng 3.6. * 7-methyl-2-(m-tolyl)quinazolin-4(3H)-on (4b) Công thức: CTPT: C16H14N2O, KLPT: 250,30. Tiến hành:
Hợp chất (4b) được tổng hợp từ 2 mmol chất (2); 0,23mL (2 mmol) 3- methylbenzaldehyd; 208 mg (2 mmol) NaHSO3; trong 5 mL DMAC.
Sản phẩm thu được là 395 mg chất rắn màu trắng. Hiệu suất 79% (bảng 3.1).
Nhiệt độ nóng chảy 241-243oC (bảng 3.2).
Rf=0,68 (TLC, Silicagel 60 F254, hệ dung môi n-hexan-EtOAc (2:1) (bảng 3.2).
MS: xem phụ lục 7, bảng 3.3.
IR(KBr, υmax (cm-1)): xem phụ lục 8, bảng 3.4.
13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6), δ (ppm): xem phụ lục 6, bảng 3.6. * 2-(3-methoxyphenyl)-7-methylquinazolin-4(3H)-on (4c)
Công thức:
CTPT: C16H14N2O2, KLPT: 266,29.
Tiến hành:
Hợp chất (4c) được tổng hợp từ 2 mmol chất (2); 272 mg (2 mmol) 3- methoxybenzaldehyd; 208 mg (2 mmol) NaHSO3; trong 5 mL DMAC. Sản phẩm thu được là 388 mg chất rắn màu trắng ngà.
Hiệu suất 73% (bảng 3.1).
Nhiệt độ nóng chảy 212-214oC (bảng 3.2).
Rf=0,75 (TLC, Silicagel 60 F254, hệ dung môi n-hexan-EtOAc (2:1) (bảng 3.2). MS: xem phụ lục 11, bảng 3.3. IR(KBr, max (cm-1)): xem phụ lục 12, bảng 3.4. 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6), (ppm): xem phụ lục 9, bảng 3.5. 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6), (ppm): xem phụ lục 10, bảng 3.6. *2-(2-florophenyl)-7-methylquinazolin-4(3H)-on (4d) Công thức: NH N Me O F CTPT C15H11FN2O, KLPT 254,26. Tiến hành:
Hợp chất (4d) được tổng hợp từ 2 mmol chất (2); 248 mg (2 mmol) 2- florobenzaldehyd; 208 mg (2 mmol) NaHSO3; trong 5 mL DMAC.
Sản phẩm thu được là 279 mg chất rắn màu trắng ngà. Hiệu suất 55% (bảng 3.1).
Nhiệt độ nóng chảy 185-187oC (bảng 3.2).
Rf=0,75 (TLC, Silicagel 60 F254, hệ dung môi n-hexan-EtOAc 2:1) (bảng 3.2). MS: xem phụ lục 15, bảng 3.3. IR(KBr, max (cm-1)): xem phụ lục 16, bảng 3.4. 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6), (ppm): xem phụ lục 13, bảng 3.5. 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6), (ppm): xem phụ lục 14, bảng 3.6. * 2-(3-Florophenyl)-7-methylquinazolin-4(3H)-on (4e) Công thức: CTPT C15H11FN2O, KLPT 254,26. Tiến hành:
Hợp chất (4e) được tổng hợp từ 2mmol chất (2); 248 mg (2 mmol) 2- florobenzaldehyd; 208 mg (2 mmol) NaHSO3; trong 5 mL DMAC.
Sản phẩm thu được là 370 mg chất rắn màu trắng ngà. Hiệu suất 73% (bảng 3.1).
Nhiệt độ nóng chảy 291-293oC (bảng 3.2).
Rf=0,7 (TLC, Silicagel 60 F254, hệ dung môi n-hexan-EtOAc 2:1) (bảng 3.2).
IR(KBr, max (cm-1)): xem phụ lục 20, bảng 3.4. 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6), (ppm): xem phụ lục 17, bảng 3.5. 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6), (ppm): xem phụ lục 18, bảng 3.6. Bảng 3.1:Kết quả tổng hợp các dẫn chất (4a-e) TT Ký hiệu R M (đ.v.c) Hiệu suất (%) Tính chất 1 4a 2-CH3 250,30 54 Chất bột trắng 2 4b 3-CH3 250,30 79 Chất bột trắng 3 4c 3-OCH3 266,29 73 Chất bột trắng ngà 4 4d 2-F 254,26 55 Chất bột trắng ngà 5 4e 3-F 254,26 73 Chất bột trắng ngà
Ghi chú: M là khối lượng phân tử.
3.2. KIỂM TRA ĐỘ TINH KHIẾT, KHẲNG ĐỊNH CẤU TRÚC 3.2.1. Kiểm tra độ tinh khiết 3.2.1. Kiểm tra độ tinh khiết
Sau khi tổng hợp các dẫn chất (4a-e) được tiến hành kiểm tra độ tinh khiết bằng sắc ký lớp mỏng (SKLM) và đo nhiệt độ nóng chảy (To
nc). - Sắc ký lớp mỏng (SKLM)
SKLM được tiến hành trên bản nhôm tráng sẵn Silicagel 60 F254. Các chất
(4a-e) được hòa tan trong dung môi EtOAc, chạy sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi n-hexan:EtOAc (2:1). Sau khi chạy sắc ký, đem soi bản mỏng dưới đèn tử ngoại có bước sóng 254 nm thì thấy các chất đem thử đều cho một vết gọn, rõ. Giá trị Rf của các chất (4a-e) khi triển khai với hệ dung môi được tóm tắt ở bảng 3.2.
Các chất (4a-e) được kiểm tra độ tinh khiết bằng SKLM đồng thời được tiến hành đo nhiệt độ nóng chảy. Kết quả đo nhiệt độ nóng chảy cho thấy: các dẫn chất tổng hợp được đều có điểm chảy rõ ràng, khoảng chênh lệch hẹp. Kết quả cụ thể được tóm tắt ở bảng 3.2.
Bảng 3.2:Giá trị Rf và To
nc của các dẫn chất (4a-e)
TT Ký hiệu R Nhiệt độ nóng chảy
(oC) Rf Hệ dung môi 1 4a 2-CH3 219-221 0,75 HE:EA=2:1 2 4b 3-CH3 241-243 0,68 HE:EA=2:1 3 4c 3-OCH3 212-214 0,75 HE:EA=2:1 4 4d 2-F 185-187 0,75 HE:EA=1:1 5 4e 3-F 291-293 0,70 HE:EA=1:1
Ghi chú: Rf là hệ số lưu giữ.
Thông qua sắc ký đồ khi chạy SKLM và nhiệt độ nóng chảy của các dẫn chất có thể sơ bộ cho thấy các chất này là tinh khiết, đủ điều kiện để đo phổ và thử hoạt tính sinh học.
3.2.2. Khẳng định cấu trúc 3.2.2.1. Phổ khối lượng (MS) 3.2.2.1. Phổ khối lượng (MS)
Các dẫn chất tổng hợp được ghi phổ khối lượng theo phương pháp phun mù điện tử (ESI-MS) trên máy LC-MSD-Trap-SL tại Viện Hóa học các hợp chất thiên nhiên – Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam. Dữ liệu phổ đồ được ghi ở bảng 3.3.
Bảng 3.3:Kết quả phân tích phổ khối lượng của các dẫn chất (4a-e) TT Ký hiệu R M (đ.v.c) m/z (MS) 1 4a 2-CH3 250,30 251,1 [M+H]+ 2 4b 3-CH3 250,30 249,0 [M-H]- 3 4c 3-OCH3 266,29 267,1 [M+H]+ 4 4d 2-F 254,26 255,1[M+H]+ 5 4e 3-F 254,26 253,1[M-H]-
Ghi chú: m/z là tỷ số khối lượng – điện tích.
3.2.2.2. Phổ hồng ngoại (IR)
Phổ hồng ngoại được ghi trên máy Perkin Elmer tại Viện Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam. Kết quả phân tích số liệu phổ hồng ngoại được ghi ở bảng 3.4.
Bảng 3.4: Số liệu phổ IR của các dẫn chất (4a-e)
TT Ký hiệu R Phổ IR (KBr), cm-1 NH (amid) CH (aromatic) C=O (amid) C=C (aromatic) 1 4a 2-CH3 3100 3022 1676 1612, 1453 2 4b 3-CH3 3150 3041 1682 1611, 1484 3 4c 3-OCH3 3331 3170 1662 1548, 1511 4 4d 2-F 3513 3379 1621 1585, 1484 5 4e 3-F 3147 3041 1677 1585, 1484
3.2.2.3. Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR)
Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton và 13C được ghi trên máy phổ AVANCE Spectrometer AV500 (BRUKER, Đức) trong dung môi DMSO – d6 tại Viện Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam. Kết quả phân tích số liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton và carbon của 5 chất được ghi ở bảng 3.5 và 3.6.
Bảng 3.5:Số liệu phổ cộng hưởng từ nhân proton của các dẫn chất (4a-e)
TT Ký hiệu R 1H-NMR (500 MHz,DMSO), (ppm), J(Hz) 1 4a 2-CH3 12,30 (s,1H), 8,04 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,49 (m, 2H), 7,42 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,36-7,30 (m, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,37 (s, 3H). 2 4b 3-CH3 12,30 (s,1H), 8,02 (m, 2H), 7,96 (d, J = 7,5 Hz, 1H),7,54 (s, 1H), 7,43-7,38 (m, 2H), 7,33 (d, J = 8 Hz, 1H), 2,46 (s, 3H), 2,40 (s, 3H). 3 4c 3-OCH3 12,40 (s,1H), 8,03 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,44 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 8 Hz, 1H), 3,85 (s, 3H), 2,46 (s, 3H) 4 4d 2-F 12,40 (s,1H), 8,05 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,78 (td, J = 7,5 Hz, J = 1,5 Hz, 1H), 7,65-7,60 (m, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,41- 7,36 (m, 3H), 2,48 (s, 3H). 5 4e 3-F 12,50 (s,1H), 8,05 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,99 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,62-7,57 (m, 2H), 7,78 (dd, J = 7,5 Hz, J = 2,5 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 2,51 (s, 3H).
Bảng 3.6:Số liệu phổ cộng hưởng từ nhân carbon của các dẫn chất (4a-e) TT Ký hiệu R 13C-NMR (125 MHz, DMSO), δ(ppm) 1 4a 2-CH3 161,6 (C4), 154,3(C2), 148,8(C9), 144,8(C7), 136,0(C2‘), 134,2(C3‘), 130,4(C1‘), 129,7(C4‘), 129,0(C5), 127,9(C6‘), 126,9(C6), 125,6(C5‘), 125,6(C8), 118,5(C10), 21,3(CH3-C7), 19,5(CH3-C2‘). 2 4b 3-CH3 162,0(C4), 152,3(C2), 148,8(C9), 144,9(C7), 137,8(C3‘), 132,6(C4‘), 131,8(C5), 128,4(C5‘), 128,1(C1‘), 127,8(C6), 127,0(C2‘), 125,6(C6‘), 124,7(C8), 118,5(C10), 21,3(CH3- C7), 20,9(CH3-C3‘). 3 4c 3-OCH3 162,0(C4), 159,3(C3‘), 151,9(C2), 148,7(C9), 145,0(C7), 134,0(C5‘), 129,6(C1‘), 127,9(C5), 127,1(C6), 125,6(C8), 120,0(C6‘), 118,5(C2‘), 117,5(C10), 112,4(C4‘), 55,3(OCH3- C3‘), 21,2(CH3-C7). 4 4d 2-F 161,3(C4), 159,5(C2‘), 149,9(C2), 148,7(C9), 145,1(C7), 132,8(C4‘), 130,9(C5), 128,4(C6‘), 127,1(C6), 125,6(C5‘), 124,6(C8), 122,3(C1‘), 118,6(C10), 116,1(C3‘), 21,3(CH3- C7). 5 4e 3-F 162,0(C3’), 161,9(C4), 151,0(C2), 148,5(C9), 145,1(C7), 135,0(C5’), 130,7(C1’), 128,3(C5), 127,2(C6), 125,7(C8), 123,8(C6’), 118,7(C10), 118,3(C4’), 114,5(C2’), 21,3(CH3- C7).
3.3. THỬ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO
Thử hoạt tính gây độc tế bào trên một số dòng tế bào ung thư người được tiến hành tại Phòng Hóa Sinh ứng dụng – Viện Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
Tại phòng Hóa sinh ứng dụng (Viện Hóa học), 5 dẫn chất (4a-e) đã được thử hoạt tính gây độc tế bào trên các dòng tế bào ung thư người theo phương pháp MTT. Các dòng tế bào ung thư được sử dụng là KB (Human epidemic carcinoma)- ung thư biểu mô, Hep-G2 (Hepatocelluar carcinoma)-ung thư gan, LU (Human lung carcinoma)- ung thư phổi và MCF-7 (Human breast carcinoma)-ung thư vú. Ban đầu, cả 5 chất đều được thử tác dụng sinh học với dòng KB, sau đó, 2 chất (4c) và (4d) có hoạt tính được tiến hành thử tác dụng sinh học với 3 dòng tế bào Hep-G2, LU và MCF-7.
Kết quả thử hoạt tính gây độc tế bào của 5 dẫn chất tổng hợp được trình bày ở bảng 3.7.
Bảng 3.7:Kết quả thử hoạt tính gây độc tế bào của (4a-e) T T Ký hiệu R Giá trị IC50 (μg/ml) KB Hep-G2 LU MCF-7 1 4a 2-CH3 >128 nt nt nt 2 4b 3-CH3 >128 nt nt nt 3 4c 3-OCH3 13,05 (49,01 mM) 13,88 (52,12 mM) 17,00 (63,84 mM) 23,72 (89,08 mM) 4 4d 2-F 21,50 (84,56 mM) 21,09 (82,95 mM) 30,00 (117,99 mM) >128 5 4e 3-F >128 nt nt nt 6 Ellipticin 0,31 (1,26 mM) 0,35 (1,42 mM) 0,45 (1,83 mM) 0,53 (2,15 mM)
Ghi chú: IC50 là nồng độ ức chế 50% sự sống của tế bào, KB là tế bào ung thư biểu mô, Hep-G2 là tế bào ung thư gan, LU là tế bào ung thư phổi, MCF-7 là tế bào ung thư vú, nt là not test
3.4. BÀN LUẬN
3.4.1. VỀ TỔNG HỢP HÓA HỌC
3.4.1.1. Tổng hợp chất trung gian 2-amino-4-methylbenzamid và khẳng định cấu trúc định cấu trúc
* Tổng hợp 2-amino-4-methylbenzamid
Chất (2) được tổng hợp theo sơ đồ 3.1.
Hợp chất (2) được tạo thành bằng cách thủy phân dẫn chất nitril tương ứng trong môi trường kiềm, dung môi EtOH.
Phản ứng diễn ra trong điều kiện dễ thực hiện, nhiệt độ không quá cao (90oC), hiệu suất phản ứng tốt (73%).
* Khẳng định cấu trúc
Sản phẩm thu được (2) được khẳng định cấu trúc bằng phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (bảng 3.8, phụ lục 21).
Bảng 3.8: Phổ 1H-NMR của chất trung gian (2)
TT Chất
1H-NMR
(DMSO; (ppm), J(Hz))
1 2 7,26 (m, 1H), 6,49 (s, 1H), 6,47 (d, 1H,
J=8,0Hz), 2,26 (s, 3H).
Ghi chú: δ là độ dịch chuyển hóa học, J là hằng số tương tác.
Phổ đồ 1H-NMR của chất (2) cho thấy:
- Tín hiệu của proton vòng thơm xuất hiện ở vùng 6,47-7,26 ppm. - Tín hiệu của proton nhóm thế methyl xuất hiện ở vị trí 2,26 ppm. Phổ 1H-NMR của (2) phù hợp với dữ liệu tham khảo được [1], đồng thời cho thấy chất (2) đủ độ tinh khiết cần thiết để sử dụng cho các phản ứng tổng hợp tiếp theo.
3.4.1.2. Tổng hợp dẫn chất 2-aryl-4-quinazolinon (4a-e)
Trong đề tài này chúng tôi tiến hành tổng hợp dãy 2-aryl-4-quinazolinon theo phương pháp của Mann-Jen Hour, tiến hành ngưng tụ 2-amino-4- methylbenzamid (2) với các aldehyd thơm, đun nóng ở 150oC trong môi trường N,N-dimethylacetamid có mặt NaHSO3 (sơ đồ 3.2) sau đó tinh chế thu sản phẩm. Phương pháp này có khá nhiều ưu điểm:
- Nguyên liệu và các hợp chất aldehyd thơm ban đầu sẵn có, đa dạng. - Điều kiện phản ứng tương đối dễ thực hiện, hiệu suất phản ứng cao.
- Quá trình tinh chế thu sản phẩm tinh khiết khá đơn giản, do hầu hết các chất đều kết tinh trong nước, chỉ cần lọc rửa bằng nước cất.
- Phản ứng diễn ra trong thời gian ngắn, ít chịu ảnh hưởng bởi yếu tố môi trường.
Việc sử dụng phương pháp tổng hợp này đã khắc phục nhược điểm của các phương pháp trước, đó là phải sử dụng hợp chất benzoyl clorid kém bền, dễ bị thủy phân trong điều kiện nóng ẩm ở nước ta, phản ứng tạo acid vô cơ HCl gây hao mòn thiết bị thí nghiệm.
Về khả năng phản ứng, trong 5 phản ứng thực hiện, hiệu suất phản ứng tạo
(4a) và (4d) (54-55%) thấp hơn hẳn (4b), (4c) và (4e) (73-83%). Có thể giải thích điều này dựa trên cơ chế phản ứng giả định về sự đóng vòng tạo 2-aryl-4- quinazolinon (sơ đồ 3.3) [17].
Sơ đồ 3.3: Cơ chế phản ứng tạo 2-aryl-4-quinazolinon
Theo đó, phản ứng có thể gồm 3 giai đoạn:
- Giai đoạn 1: phản ứng ngưng tụ tạo imin giữa nhóm amin của chất (2) và nhóm carbonyl của aldehyd.
- Giai đoạn 2: đóng vòng hợp chất imin tạo vòng 6 cạnh.
- Giai đoạn 3: dưới tác dụng của NaHSO3 vòng 6 cạnh tạo vòng quinazolinon.
Như vậy, bản chất nhóm thế R của aldehyd là một yếu tố ảnh hưởng đến phản ứng. Độ cồng kềnh của R có ảnh hưởng đến phản ứng cộng ái nhân ở cả
giai đoạn 1 và giai đoạn 2. R càng cồng kềnh thì khả năng tiếp cận của nhóm