TỔNG hợp và THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG tế bào UNG THƯ của một số dẫn CHẤT 2 1 NAPHTHYL 4 QUINAZOLINAMIN

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI CHU VĂN TOẢN TỔNG HỢP VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƯ CỦA MỘT SỐ DẪN CHẤT 2-(1-NAPHTHYL)-4-QUINAZOLINAMIN LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI CHU VĂN TOẢN TỔNG HỢP VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƯ CỦA MỘT SỐ DẪN CHẤT 2-(1-NAPHTHYL)-4-QUINAZOLINAMIN LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH : CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ MÃ SỐ : 60720402 Người hướng dẫn khoa học: TS Văn Thị Mỹ Huệ TS Lê Nguyễn Thành HÀ NỘI 2016 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, em xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Văn Thị Mỹ Huệ TS Lê Nguyễn Thành người cô, người thầy tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi động viên em suốt trình thực luận văn Em xin cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình của: TS Nguyễn Minh Hằng, TS Cao Bích Huệ, Ths Đào Đình Cường, Ths Trần Hữu Giáp, cử nhân Nguyễn Anh Dũng, cử nhân Hà Thị Thoa, cử nhân Nguyễn Thị Tú Oanh (trung tâm nghiên cứu phát triển thuốc - Viện Hoá sinh biển - Viện Hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam), thầy cô môn Hoá hữu thầy cô môn, phòng ban, thư viện khác trường Đại học Dược Hà Nội Mặc dù có nhiều cố gắng hạn chế thời gian, kiến thức tài liệu tham khảo nên luận văn em tránh khỏi sai sót nội dung hình thức, em mong nhận góp ý quý thầy cô để luận văn em hoàn thiện Cuối cùng, xin cảm ơn mẹ, cảm ơn vợ bạn bè động viên giúp đỡ suốt trình học tập nghiên cứu vừa qua Hà Nội, ngày 30 tháng năm 2016 Học viên Chu Văn Toản MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC SƠ ĐỒ DANH MỤC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 HỢP CHẤT QUINAZOLINAMIN VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC 1.1.1 Tác dụng chống ung thư 1.1.2 Các tác dụng khác 1.2 PHƯƠNG PHÁP TỔNG HỢP 10 CHƯƠNG 2: NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, HOÁ CHẤT, DUNG MÔI 12 2.2 THIẾT BỊ THÍ NGHIỆM 13 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 13 2.3.1 Tổng hợp hoá học 13 2.3.2 Thử tác dụng sinh học 13 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.4.1 Phương pháp tổng hợp dẫn chất quinazolinamin 13 2.4.2 Phương pháp tinh chế xác định cấu trúc 14 2.4.3 Phương pháp xác định hoạt tính sinh học 14 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 18 3.1 TỔNG HỢP HOÁ HỌC 18 3.1.1 Tổng hợp dẫn chất trung gian 6-methyl-2-(naphthalen-1-yl)-quinazolin4(3H)-on (5) 19 3.1.2 Tổng hợp dẫn chất trung gian 4-cloro-6-methyl-2-(naphthalen-1-yl)quinazolin (6) 20 3.1.3 Tổng hợp dẫn chất 6-methyl-2-(naphthalen-1-yl)-4-quinazolinamin (7al) 20 3.2 THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƯ 40 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 43 4.1 VỀ TỔNG HỢP HOÁ HỌC 43 4.2 VỀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC 43 4.2.1 Phổ hồng ngoại 43 4.2.2 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 44 4.2.3 Phổ khối lượng MS 47 4.3 VỀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƯ 48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 50 KẾT LUẬN 50 KIẾN NGHỊ 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT 13 C-NMR Carbon Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13 H-NMR C) Hydro Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) ATCC the American Type Culture Collection (Tổ chức tài nguyên tiêu chuẩn vật liệu sinh học Mỹ) BRCP Breast Cancer Resistant Protein (Protein kháng ung thư vú) CA Carbonic anhydrase CTCT Công thức cấu tạo CTPT Công thức phân tử DMAC N,N-dimethylacetamid DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium (Môi trường nuôi cấy tế bào ung thư) DMF Dimethylformamid DMSO Dimethylsufoxid EC50 Half Maximal Effective Concentration (Nồng độ 50% có tác dụng tối đa) EGFR Epidermal growth factor receptor (Yếu tố tăng trưởng biểu mô) ESI Electron Spray Ionization (Ion hoá phun điện tử) GI50 Half Maximal Grow Inhibitory Concentration (Nồng độ 50% ức chế tối đa phát triển) Hep-G2 Hepatocellular Carcinoma (Tế bào ung thư gan) IC50 Half maximal inhibitory concentration (Nồng độ ức chế tối đa 50% tế bào) IR Infrared spectrometry (Phổ hồng ngoại) J Hằng số tương tác spin-spin (đơn vị Hz) KB Human Epidermic Carcinoma (Tế bào ung thư biểu mô) LU Human Lung Carcinoma (Tế bào ung thư phổi) MCF-7 Human Breast Carcinoma (Tế bào ung thư vú) MIC Minimum inhibitory concentration (Nồng độ ức chế tối thiểu) MS Mass spectrometry (Phổ khối lượng) MTT 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromid NCI National Cancer Institute (Viện Ung thư Quốc Gia Hoa Kỳ) OD Optical density (Mật độ quang học) PIK3 Phosphatidylinositol-3-kinase SKLM Sắc ký lớp mỏng δ (ppm) Độ dịch chuyển hoá học (phần triệu) DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 2.1: Nguyên liệu, hoá chất, dung môi dùng nghiên cứu 12 Bảng 3.1: Kết tổng hợp dẫn chất 7a-l 28 Bảng 3.2: Giá trị nhiệt độ nóng chảy Rf dẫn chất 7a-l 29 Bảng 3.3: Số liệu phổ 1H-NMR chất 7a-l 30 Bảng 3.4: Số liệu phổ 13C-NMR chất 7a-l 33 Bảng 3.5: Số liệu phổ MS chất 7a-l 36 Bảng 3.6: Số liệu phổ IR dẫn chất 7a-l 38 Bảng 3.7: Hoạt tính gây độc tế bào chất 7a-l 40 DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 3.1: Sơ đồ tổng hợp dẫn chất trung gian 18 Sơ đồ 3.2: Sơ đồ tổng hợp dẫn chất 7a-l 18 Sơ đồ 3.3: Tổng hợp dẫn chất trung gian 20 Sơ đồ 3.4: Tổng hợp dẫn chất 7a 20 Sơ đồ 3.5: Tổng hợp dẫn chất 7b 21 Sơ đồ 3.6: Tổng hợp dẫn chất 7c 22 Sơ đồ 3.7: Tổng hợp dẫn chất 7d 22 Sơ đồ 3.8: Tổng hợp dẫn chất 7e 23 Sơ đồ 3.9: Tổng hợp dẫn chất 7f 24 Sơ đồ 3.10: Tổng hợp dẫn chất 7g 24 Sơ đồ 3.11: Tổng hợp dẫn chất 7h 25 Sơ đồ 3.12: Tổng hợp dẫn chất 7i 25 Sơ đồ 3.13: Tổng hợp dẫn chất 7j 26 Sơ đồ 3.14: Tổng hợp dẫn chất 7k 27 Sơ đồ 3.15: Tổng hợp dẫn chất 7l 27 Sơ đồ 4.1: Cơ chế phản ứng amin với dẫn chất 4-cloro-quinazolin 43 DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1: Cấu trúc khung quinazolinamin Hình 1.2: Cấu trúc số thuốc mang khung quinazolinamin Phụ lục 9.3: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C (13C-NMR) chất 7i Phụ lục 9.4: Phổ khối lượng (MS) chất 7i Phụ lục 10.1: Phổ hồng ngoại (IR) chất 7j Phụ lục 10.2: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (1H-NMR) chất 7j Phụ lục 10.3: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C (13C-NMR) chất 7j Phụ lục 10.4: Phổ khối lượng (MS) chất 7j Phụ lục 11.1: Phổ hồng ngoại (IR) chất 7k Phụ lục 11.2: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (1H-NMR) chất 7k Phụ lục 11.3: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C (13C-NMR) chất 7k Phụ lục 11.4: Phổ khối lượng (MS) chất 7k Phụ lục 12.1: Phổ hồng ngoại (IR) chất 7l Phụ lục 12.2: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (1H-NMR) chất 7l Phụ lục 12.3: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C (13C-NMR) chất 7l Phụ lục 12.4: Phổ khối lượng (MS) chất 7l Phụ lục 13: Kết thử hoạt tính gây độc tế bào dẫn chất 7a-l [...]... trên một số dòng tế bào ung thư như tế bào ung thư biểu mô (KB), ung thư gan (Hep-G2), ung thư phổi (LU) và ung thư vú (MCF-7) 1 Luận văn : Tổng hợp và thử hoạt tính kháng tế bào ung thư của một số dẫn chất 2- (1- naphthyl) -4- quinazolinamin được tiến hành với hai mục tiêu: - Tổng hợp được một số dẫn chất 2- (1- naphthyl) -4- quinazolinamin - Thử hoạt tính kháng tế bào ung của các chất tổng hợp được trên một. .. SF2 54 (Merck), sắc ký cột - Máy cất quay Buchi R - 21 0 (Thụy Sỹ) - Tủ sấy Memmert (Đức) 2. 3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 2. 3 .1 Tổng hợp hoá học - Tổng hợp dẫn chất trung gian 6-methyl -2- (1- naphthyl) -quinazolinon - Tổng hợp các hợp chất 2- (1- naphthyl) -4- quinazolinamin 2. 3 .2 Thử tác dụng sinh học Các dẫn chất 2- (1- naphthyl) -quinazolinamin 7a-l được đem đánh giá tác dụng gây độc tế bào ung thư trên 4 dòng tế bào. .. thế có đóng góp vào hoạt tính Các hợp chất mới được đánh giá hoạt tính gây độc tế bào trên một số dòng tế bào ung thư như tế bào ung thư biểu mô (KB), ung thư gan (Hep-G2), ung thư phổi (LU) và ung thư vú (MCF-7) Bên cạnh tác dụng chống ung thư, các hợp chất 2- aryl-quinazolin -4- amin còn thể hiện nhiều hoạt tính sinh học đáng chú ý như hạ huyết áp, chống viêm, kháng khuẩn, kháng lao 8 1. 1 .2 Các tác dụng... trung gian 6-methyl -2- (naphthalen -1- yl)-quinazolinon được tổng hợp từ acid 5-methyl -2- nitro benzoic theo phương pháp đã được công bố trước đây [4] Sơ đồ 3 .1: Sơ đồ tổng hợp dẫn chất trung gian 5  Các dẫn chất 2- (naphthalen -1- yl) -quinazolinamin được tổng hợp theo sơ đồ dưới đây: Sơ đồ 3 .2: Sơ đồ tổng hợp các dẫn chất 7a-l 18 3 .1. 1 Tổng hợp dẫn chất trung gian 6-methyl -2- (naphthalen -1- yl)quinazolin -4( 3H)-on... dòng tế bào MCF-7 (ung thư vú), HELA (ung thư cổ tử cung), Hep-G2 dòng (ung thư gan) với nồng độ IC50 tương ứng là 3,76; 3,98 và 4 ,17 μg/mL [ 12 ] Năm 20 11 , các dẫn chất 4- quinazolinamin được đánh giá theo cơ chế ức chế hoạt động HSP90 (heat shock protein 90, là một loại protein đóng vai trò trong việc duy trì và phát triển của tế bào ung thư) Hợp chất quinazolinamin II, III có tác dụng chống ung thư. .. KB, Hep-G2, LU, MCF-7 [9] 2. 4. 3 .2 Dòng tế bào thử nghiệm Các dòng tế bào ung thư ở người được cung cấp bởi ATCC gồm: - KB (Human epidemic carcinoma) - tế bào ung thư biểu mô - Hep-G2 (Hepatocellular carcinoma) - tế bào ung thư gan - LU (Human lung carcinoma) - tế bào ung thư phổi - MCF-7 (Human breast carcinoma) - tế bào ung thư vú Chất chuẩn dương tính: Ellipticin của hãng Sigma - Aldrich 2. 4. 3.3 Tiến... của 2- aryl -4- quinazolinamin là 2- aryl-quinazolinon đã được nghiên cứu có tác dụng chống ung thư khá tốt, trong đó nhóm thế 6-methyl và 2- (1- naphthyl) là các nhóm thế có đóng góp vào hoạt tính gây độc tế bào [4] ,[ 5] Tiếp nối hướng nghiên cứu đó, một số dẫn chất 2- (1- naphthyl) - 4quinazolinamin mới với các nhóm thế amino khác nhau ở vị trí số 4 được thiết kế tổng hợp và đánh giá hoạt tính gây độc tế bào. .. chế hệ enzym USP1/UAF1 (ubiquitin-specific protease/USP -1 associate factor), là đích tác dụng mới trong điều trị ung thư phổi Nhiều hợp chất được phát hiện với hoạt tính rất cao, dưới 1 µM [27 ] 5 Trong nghiên cứu về tác dụng gây độc tế bào trên 3 dòng tế bào ung thư của dãy dẫn chất thế 2, 4- quinazolin (IX), hợp chất IXa thể hiện hoạt tính trung bình với các dòng tế bào CNE -2 (tế bào ung thư biểu mô vòm... bào) Nhóm đã tìm ra hợp chất Xa có hoạt tính gây độc tế bào tốt trên nhiều dòng tế bào với nồng độ 0 ,13 -9,96 µM và ức chế PIK3α ở nồng độ nM (IC50 = 4, 2nM) [22 ] Một nhóm nghiên cứu người Trung quốc khác báo cáo dãy hợp chất 2aryl -4- morpholinoquinazolin (XI) có tác dụng gây độc tế bào trên các dòng tế bào HCT -11 6 (ung thư đại tràng) và MCF-7 (ung thư vú) và thể hiện tác dụng chống ung thư thông qua cơ... Anilin Aldrich 22 NH4OH Trung Quốc 8 Benzylamin Merk 23 n-hexan Trung Quốc 9 Cyclopentylamin Merck 24 Nước cất Việt Nam 10 Dicloromethan Merck 25 11 Dimethylformamid Merck 1 Piperazin Merck 12 Ethanol Merck 26 Propanamin Aldrich 13 Ethyl acetat Trung Quốc 27 tert-butylamin Aldrich Aldrich 28 Thionylclorid Merck Trung Quốc 29 14 15 Furan -2- ylmethan amin KHCO3 12 Palladium on carbon 10 % Merck 2. 2 THIẾT BỊ