CAO VIỆT PHƢƠNG mã SINH VIÊN 1401474 TỔNG hợp và THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG tế bào UNG THƢ của một số dẫn CHẤT ACYLHYDRAZON mới MANG KHUNG 2h BENZOb1,4OXAZIN 3(4h) ON KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dƣợc sĩ

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI -  - CAO VIỆT PHƢƠNG MÃ SINH VIÊN: 1401474 TỔNG HỢP VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƢ CỦA MỘT SỐ DẪN CHẤT ACYLHYDRAZON MỚI MANG KHUNG 2H-BENZO[b][1,4]OXAZIN-3(4H)-ON KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI - 2019 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI -  CAO VIỆT PHƢƠNG MÃ SINH VIÊN: 1401474 TỔNG HỢP VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƢ CỦA MỘT SỐ DẪN CHẤT ACYLHYDRAZON MỚI MANG KHUNG 2H-BENZO[b][1,4]OXAZIN-3(4H)-ON KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Trần Phƣơng Thảo ThS Lê Cơng Hn Nơi thực hiện: Bộ mơn Hóa Dƣợc HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Trƣớc trình bày nội dung phần thuộc đề tài mình, tơi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến ngƣời suốt thời gian qua hỗ trợ động viên tơi hồn thành cách tốt khóa luận tốt nghiệp Trƣớc tiên, tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến với ngƣời thầy, ngƣời đáng kính tơi: TS Trần Phƣơng Thảo, ThS Lê Cơng Hn, - Bộ mơn Hóa Dƣợc - trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội Thầy cô không tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thành khóa luận mà ln có dẫn xác, kịp thời động viên tơi lúc khó khăn Tơi xin gửi lời cảm ơn đến thầy giáo, cô giáo anh chị kỹ thuật viên Bộ mơn Hóa Dƣợc - trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội, Khoa Hóa - Đại học Khoa học tự nhiên Hà Nội, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, Khoa Dƣợc - Đại học quốc gia Chungbuk - Hàn Quốc giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho thực khóa luận Cuối cùng, tơi muốn cảm ơn gia đình, bạn bè, anh chị, bạn nhóm nghiên cứu mơn Hóa Dƣợc,đặc biệt anh Dƣơng Tiến Anh, bạn Lê Công Trực, em Phan Huy Đức, Bùi Xuân Trƣờng, Hoàng Bảo Ngọc chia sẻ buồn vui, giúp đỡ khích lệ tơi suốt trình nghiên cứu MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ, CÁC KÝ HIỆU VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 CÁC ENZYM CASPASE 1.1.1 Chu trình chết tự nhiên tế bào (Apoptosis) 1.1.2 Các enzym caspase 1.2 CÁC CHẤT HOẠT HÓA CASPASE-3 1.2.1 Vai trò ion kẽm với q trình hoạt hóa caspase-3 1.2.2 Tác dụng hoạt hóa caspase PAC-1 1.2.3 Những nghiên cứu chất hoạt hóa caspase 1.3 TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA MỘT SỐ DẪN CHẤT MANG KHUNG 2HBENZO[B][1,4]OXAZIN-3(4H)-ON 1.3.1 Tác dụng chống kết tập tiểu cầu 1.3.2 Tác dụng kháng khuẩn kháng nấm 10 1.3.3 Hoạt tính kháng ung thư 11 CHƢƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ 12 2.1.1 Hóa chất 12 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ 12 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 13 2.2.1 Tổng hợp hóa học 13 2.2.2 Thử tác dụng sinh học dẫn chất tổng hợp 13 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.3.1 Tổng hợp hóa học 13 2.3.2 Thử tác dụng sinh học 15 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 16 3.1 HÓA HỌC 16 3.1.1 Tổng hợp hóa học 16 3.1.2 Kiểm tra độ tinh khiết 27 3.1.3 Xác định cấu trúc 29 3.2 THỬ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƢ 35 3.3 BÀN LUẬN 37 3.3.1 Tổng hợp hóa học 37 3.3.2 Khẳng định cấu trúc 39 3.3.3 Thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư 42 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 4.1 KẾT LUẬN 44 4.1.1 Về tổng hợp khẳng định cấu trúc 44 4.1.2 Về hoạt tính sinh học 44 4.2 KIẾN NGHỊ 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 DANH MỤC CÁC CHỮ, CÁC KÝ HIỆU VIẾT TẮT 13 C-NMR : Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân carbon (Carbon-13 nuclear magnetic resonance) H-NMR : Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân proton (Proton nuclear magnetic resonance) AcOH : Acid acetic ADN : Acid desoxyribonucleic d : Vạch đôi phổ 1H-NMR (Doublet) DCM : Dicloromethan dd : Vạch chẻ đôi lần phổ 1H-NMR (Doublet of doublet) DMF : Dimethylformamid DMSO : Dimethylsulfoxid DMSO-d6 : Dimethylsulfoxid deuteri hóa ESI : Ion hóa phun bụi điện tử (Electrospray ionization) FDA : Cục quản lý Thực phẩm Dƣợc phẩm Mỹ (U.S Food and Drug Administration) H (%) : Hiệu suất IC50 : Nồng độ ức chế 50% (The half maximal inhibitory concentration) IR : Hồng ngoại (Infrared) J : Hằng số ghép cặp phổ 1H-NMR m : Đa vạch phổ 1H-NMR (Multiplet) MeOH : Methanol MS : Phổ khối lƣợng (Mass spectrometry) NCI-H23 : Dòng tế bào ung thƣ phổi NST : Nhiễm sắc thể PC-3 : Dòng tế bào ung thƣ tuyến tiền liệt Rf : Hệ số lƣu giữ sắc ký lớp mỏng s : Vạch đơn phổ 1H-NMR (Singlet) SW620 : Dòng tế bào ung thƣ đại tràng t : Vạch ba phổ 1H-NMR (Triplet) tºnc : Nhiệt độ nóng chảy TLC : Sắc ký lớp mỏng (Thin layer chromatography) TMS : Tetramethylsilan UV : Tử ngoại (Ultraviolet) δ : Độ dịch chuyển hóa học (phần triệu) phổ NMR υ : Dao động hóa trị phổ IR DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1.Chỉ số lý hóa hiệu suất tổng hợp sản phẩm Va-c 26 Bảng 3.2.Chỉ số lý hóa hiệu suất tổng hợp sản phẩm VIa-d 27 Bảng 3.3 Giá trị Rf nhiệt độ nóng chảy (tonc) dẫn chất Va-c 28 Bảng 3.4 Giá trị Rf nhiệt độ nóng chảy (tonc) dẫn chất VIa-d 29 Bảng 3.5 Kết phân tích phổ IR dẫn chất Va-c 29 Bảng 3.6 Kết phân tích phổ IR dẫn chất VIa-d 30 Bảng 3.7 Kết phân tích phổ MS dẫn chất Va-c 31 Bảng 3.8 Kết phân tích phổ MS dẫn chất VIa-d 31 Bảng 3.9.Kết phân tích phổ 1H-NMR dẫn chất Va-c, VIa-d 32 Bảng 3.10.Kết phân tích phổ 13C-NMR dẫn chất Va-c, VIa-d 34 Bảng 3.11 Kết thử tác dụng ức chế sinh trƣởng số dòng tế bào ung thƣ 36 dẫn chất Va-c, VIa-d Bảng 3.12 Kết thử hoạt tính kháng tế bào ung thƣ chất VIa, VIb 37 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Trang Hình 1.1 Tiến trình apoptosis Hình 1.2 Phân loại caspase Hình 1.3 Cấu trúc PAC-1 Hình 1.4 Tác dụng ức chế hoạt tính tế bào ung thƣ PC-3 có mặt ion kẽm PAC-1 (A) lƣợc đồ chế PAC-1 hoạt hóa caspase-3 (B) Hình 1.5 Cấu trúc dẫn chất ZnA-DPA Hình 1.6 Cấu trúc dẫn chất WF-208 WF-210 Hình 1.7 Cấu trúc dẫn chất có hoạt tính chống kết tập tiểu cầu nghiên cứu Tian cộng Hình 1.8 Cấu trúc dẫn chất có tác dụng kháng nấm nghiên cứu 10 Bollu cộng Hình 1.9 Cấu trúc dẫn chất có độc tính với tế bào ung thƣ nghiên cứu 11 Zhou cộng Hình 3.1 Dẫn chất nhân acyl lần 39 Hình 3.2 Phổ đồ MS chất Vc 40 Hình 3.3 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR chất Vb 42 Hình 3.4 Kết thử hoạt tính kháng tế bào ung thƣ chất VIa, VIb 43 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Trang Sơ đồ 3.1 Quy trình tổng hợp chung 16 Sơ đồ 3.2 Quy trình tổng hợp chất II 17 Sơ đồ 3.3 Quy trình tổng hợp chất III 18 Sơ đồ 3.4 Quy trình tổng hợp chất IV 19 Sơ đồ 3.5 Quy trình tổng hợp chất Va 19 Sơ đồ 3.6 Quy trình tổng hợp dẫn chất Vb 20 Sơ đồ 3.7 Quy trình tổng hợp dẫn chất Vc 21 Sơ đồ 3.8 Quy trình tổng hợp dẫn chất VIa 22 Sơ đồ 3.9 Quy trình tổng hợp dẫn chất VIb 23 Sơ đồ 3.10.Quy trình tổng hợp dẫn chất VIc 24 Sơ đồ 3.11.Cơ chế phản ứng tạo thành VId 25 Sơ đồ 3.12.Cơ chế phản ứng tạo chất II 38 Sơ đồ 3.13.Cơ chế phản ứng tạo chất III 38 Phụ lục 21 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 1H-NMR VId Phụ lục 22 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR Va Phụ lục 22 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR Va Phụ lục 23 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR Vb Phụ lục 23 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR Vb Phụ lục 24 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR Vc Phụ lục 24 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR Vc Phụ lục 25 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR VIa Phụ lục 25 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR VIa Phụ lục 26 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR VIb Phụ lục 26 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR VIb Phụ lục 27 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR VIc Phụ lục 27 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR VIc Phụ lục 28 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR VId Phụ lục 28 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C-NMR VId ...BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI -  CAO VIỆT PHƢƠNG MÃ SINH VIÊN: 1401474 TỔNG HỢP VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG TẾ BÀO UNG THƢ CỦA MỘT SỐ DẪN CHẤT ACYLHYDRAZON MỚI MANG KHUNG 2H- BENZO[b][1,4]OXAZIN -3(4H)- ON. .. acylhydrazon mang khung 2Hbenzo[b][1,4]oxazin -3(4H)- on? ??với hai mục tiêu: Tổng hợp số hợp chất acylhydrazon mang khung 2H- benzo[b][1,4]oxazin3(4H) -on Thử tác dụng kháng tế bào ung thƣ chất tổng hợp đƣợc... trúc chất vừa tổng hợp đƣợc 2.2.2 Thử tác dụng sinh học dẫn chất tổng hợp đƣợc - Thử khả ức chế sinh trƣởng tế bào ung thƣ - Thử độc tính số tế bào ung thƣ: ung thƣ đại tràng (SW620), ung thƣ