KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP KHẢO sát TÌNH HÌNH NHIỄM ESCHERICHIA COLI TRÊN BỆNH NHÂN có hội CHỨNG TIẾT DỊCH NIỆU đạo – âm đạo tại BỆNH VIỆN DA LIỄU TRUNG ƯƠNG

coli là một vi khuẩn thuộc vi hệ, chiếm khoảng 80% các vi khuẩn hiếu khí củađường tiêu hóa [1], tuy nhiên chúng có thể là nguyên nhân quan trọng của cácnhiễm trùng trong và ngoài ruột tư

NGUYỄN THỊ THÙY LINH

KHẢO SÁT TÌNH HÌNH NHIỄM

ESCHERICHIA COLI

TRÊN BỆNH NHÂN CÓ HỘI CHỨNG TIẾT DỊCH NIỆU ĐẠO – ÂM ĐẠO TẠI BỆNH

VIỆN DA LIỄU TRUNG ƯƠNG

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KỸ THUẬT Y HỌC

KHÓA 2011 – 2015Giảng viên hướng dẫn: Ts Lê Văn Hưng

HÀ NỘI - 2015

nhận được rất nhiều sự giúp đỡ và hướng dẫn tận tình của các thầy cô, các anhchị, gia đình và bạn bè để em có thể hoàn thành khóa luận một cách tốt nhất.Với tất cả tình cảm chân thành của mình, em xin được bày tỏ lòng biết ơn sâusắc tới:

Ban giám hiệu, Phòng đào tạo Đại học trường Đại học Y Hà Nội, Bộ

môn Vi sinh – Ký sinh Lâm sàng trường Đại học Y Hà Nội đã tạo mọi điều

kiện thuận lợi giúp đỡ em học tập và hoàn thành khóa luận trong suốt thờigian qua

TS Lê Văn Hưng, Phó trưởng Khoa Kỹ thuật Y học Trường Đại học Y

Hà Nội Người thầy luôn dành cho sinh viên những tình cảm ưu ái nhất, người

đã tận tình hướng dẫn và tạo mọi điều kiện tốt nhất cho em trong suốt quátrình học tập và nghiên cứu

Ban Giám đốc Bệnh viện Da liễu Trung Ương cùng tập thể cán bộ nhânviên của khoa xét nghiệm bệnh viện Da Liễu Trung Ương đã tạo những điềukiện tốt nhất giúp em hoàn thành đề tài nghiên cứu này

Em cũng xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cha mẹ, các anh chị trong giađình và bạn bè đã luôn bên cạnh động viên, ủng hộ em, giúp em có điều kiệnhọc tập và hoàn thành khóa luận

Em xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, ngày…tháng…năm 2015

Sinh viên

Nguyễn Thị Thùy Linh

Tôi xin cam đoan nghiên cứu này là của riêng tôi, các số liệu của khóaluận được lấy trung thực, chính xác và kết quả chưa được công bố bởi bất kỳtác giả nào.

Hà Nội, ngày… tháng …năm 2015

Sinh viên

Nguyễn Thị Thùy Linh

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 3

1.1 Lịch sử 3

1.2 Tình hình nhiễm và khả năng đề kháng 4

1.3 Đặc điểm sinh học 5

1.3.1 Hình thể 5

1.3.2 Tính chất nuôi cấy 5

1.3.3 Tính chất sinh vật hóa học 6

1.3.4 Khả năng đề kháng 8

1.3.5 Kháng nguyên 8

1.4 Khả năng gây bệnh 8

1.4.1 Độc tố 8

1.4.2 Yếu tố giả thiết gây tiêu chảy của E coli 9

1.4.3 Gây bệnh ngoài đường tiêu hóa 10

1.5 Chẩn đoán vi sinh 10

1.5.1 Nhuộm soi trực tiếp 10

1.5.2 Nuôi cấy phân lập 11

1.5.3 Phương pháp miễn dịch 11

1.5.4 Phương pháp sinh học phân tử 11

1.6 Nguyên tắc phòng phòng và điều trị 12

1.6.1 Nguyên tắc phòng bệnh 12

1.6.2 Nguyên tắc điều trị 12

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG – VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13

2.1 Đối tượng 13

2.1.1 Đối tượng 13

2.1.2 Nguồn bệnh phẩm 13

2.2.3 Hóa chất 14

2.2.4 Sinh phẩm 14

2.3 Phương pháp 14

2.3.1 Phương pháp nghiên cứu 14

2.3.2 Quy trình thực hiện 15

2.3.3 Thời gian – địa điểm nghiên cứu 20

2.3.4 Y đức trong nghiên cứu 20

2.3.5 Xử lý số liệu 20

Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 21

3.1 Xác định tỷ lệ nhiễm E coli trên bệnh nhân có hội chứng tiết dịch niệu đạo – âm đạo đến khám tại Bệnh viện Da Liễu Trung Ương từ 10/2014 – 4/1015 21

3.1.1 Tỷ lệ nhiễm chung 21

3.1.2 Tỷ lệ nhiễm theo giới tính 22

3.1.3 Theo nhóm tuổi 24

3.1.4 Chỉ số bạch cầu 26

3.2 Đánh giá mức độ đề kháng của các chủng E coli phân lập được 27

Chương 4: BÀN LUẬN 28

4.1 Tỷ lệ nhiễm E coli trên bệnh nhân có hội chứng tiết dịch niệu đạo – âm đạo đến khám tại Bệnh viện Da Liễu Trung Ương từ tháng 10/2014 – 4/2015 28

4.1.1 Tỷ lệ nhiễm chung 28

4.1.2 Phân bố theo giới 29

4.1.3 Theo nhóm tuổi 30

4.1.4 Về chỉ số bạch cầu 31

4.2 Đánh giá mức độ đề kháng của các chủng E coli phân lập được 32

KIẾN NGHỊ

TÀI LIỆU THAM KHẢO

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

E coli : Escherichia coli

EHEC : Enterohemorrhagic E coli

ETEC : Enterotoxigenic E coli

EPEC : Enteropathogenic E coli

EAEC : Enteroaggregative E coli

EIEC : Enteroinvasive E coli

HIV/AIDS : Human immunodeficiency virus infection / acquired

immunodeficiency syndrome (Hội chứng suy giảm miễndịch mắc phải)

HCTDNDAD : Hội chứng tiết dịch niệu đạo – âm đạo

LTQDTD : Lây truyền qua đường tình dục

WHO : World Health Organization (Tổ chức Y tế Thế giới)

BVDLTW : Bệnh viện Da Liễu Trung Ương

Bảng 2.1 Tiêu chuẩn KSĐ CLSI sử dụng cho E coli 19

Bảng 3.1 Tỷ lệ nhiễm E coli 21

Bảng 3.2: Tỷ lệ bệnh nhân phân bố theo giới 22

Bảng 3.3: Tỷ lệ nhiễm E coli phân bố theo giới 23

Bảng 3.4: Tỷ lệ BN phân bố theo nhóm tuổi 24

Bảng 3.5 Tỷ lệ nhiễm E coli phân bố theo nhóm tuổi 25

Bảng 3.6: Tỷ lệ chỉ số bạch cầu của BN nhiễm E coli 26

Bảng 3.7 Tỷ lệ kháng kháng sinh 27

DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Tỷ lệ nhiễm E coli 21

Biểu đồ 3.2 Tỷ lệ bệnh nhân bố theo giới 22

Biểu đồ 3.3 Tỷ lệ nhiễm E coli phân bố theo giới 23

Biểu đồ 3.4 Tỷ lệ BN phân bố theo nhóm tuổi 24

Biểu đồ 3.5 Tỷ lệ nhiễm E coli phân bố theo nhóm tuổi 25

Biểu đồ 3.6 Tỷ lệ chỉ số bạch cầu của BN nhiễm E coli 26

Hình 1.1 E coli dưới kính hiển vi điện tử 5

Hình 1.2 E coli trên tiêu bản nhuộm Gram 5

Hình 1.3: E coli trên môi trường MacConkey 6

Hình 1.4: E coli trên môi trường thạch máu 6

ĐẶT VẤN ĐỀ

Escherichia coli (E coli) được Theodore Escherich phát hiện lần đầu

tiên năm 1885 [1] Chi Escherichia thuộc họ vi khuẩn đường ruột, và trong các loài thuộc chi này E coli được coi là điển hình và đóng vai trò quan trọng

nhất trong y học Chúng là vi khuẩn thuộc vi hệ đường ruộ t của người khỏe

mạnh, được phân lập chủ yếu từ hệ tiêu hóa của người và động vật E coli là

một vi khuẩn thuộc vi hệ, chiếm khoảng 80% các vi khuẩn hiếu khí củađường tiêu hóa [1], tuy nhiên chúng có thể là nguyên nhân quan trọng của cácnhiễm trùng trong và ngoài ruột tương tự các trường hợp suy giảm miễn dịch

[2] E coli đứng đầu trong các vi khuẩn gây tiêu chảy, viêm đường sinh dục –

tiết niệu, viêm đường mật, nhiễm khuẩn huyết [2], hay gây các bệnh khác nhưviêm phổi, viêm màng não, nhiễm khuẩn vết thương, dễ dàng lây nhiễm giữa

người với người qua đường chân – tay – miệng Tuy nhiên, E coli lại được sử

dụng làm mô hình nghiên cứu về sinh học phân tử trong lĩnh vực vi sinh họcnói riêng và sinh học nói chung Mặc dù được quan tâm nghiên cứu sâu từ rấtsớm, nhưng cho đến nay, nó vẫn tiếp tục được nghiên cứu với các phát hiệnmới tầm phân tử, đặc biệt là các cơ chế bệnh sinh cũng như khả năng đềkháng với các kháng sinh hiện có

Tổ chức y tế thế giới WHO đã ghi nhận hàng loạt vụ dịch E coli nguy hiểm trên toàn thế giới như: Vụ dịch nghiêm trọng năm 2011 tại Đức do E.

coli (EHEC), vụ dịch do E coli tại Anh và Nhật năm 1996 hay năm 2000 ở

Canada

Tại Việt Nam, do việc sử dụng kháng sinh không theo chỉ định của bác

sĩ, kháng sinh được bán tràn lan, không có sự kiểm soát chất lượng chặt chẽhay áp lực của các bác sĩ khi kê đơn thuốc… tất cả đã dẫn đến tình trạngkháng kháng sinh ngày càng tăng cao, đặc biệt là với các vi khuẩn gây bệnh

phổ biến trong đó có E coli Trên các bệnh nhân có HCTDNDAD, E coli cũng là một căn nguyên thường được tìm thấy trong nhiễm trùng này E coli

đã kháng lại gần hết các kháng sinh phổ biến hiện nay như Ampicilin,

Amoxicilin, Cephalosporin Khả năng đề kháng kháng sinh của E coli đã và

đang trở thành thách thức với ngành Y tế khi tỷ lệ lây nhiễm và xuất hiện cácchủng kháng thuốc ngày càng tăng

Để góp phần chẩn đoán các căn nguyên gây hội chứng tiết dịch niệu đạo

– âm đạo, chúng tôi thực hiện đề tài “Khảo sát tình hình nhiễm Escherichia

coli trên bệnh nhân có hội chứng tiết dịch niệu đạo – âm đạo tại Bệnh

Viện Da Liễu Trung Ương” với mục tiêu:

1 Xác định tỷ lệ nhiễm E coli trên bệnh nhân có hội chứng tiết dịch niệu đạo

– âm đạo đến khám tại Bệnh Viện Da Liễu Trung Ương từ 10/2014 –4/2015

2 Đánh giá mức độ đề kháng của các chủng E coli phân lập được.

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN

Escherichia coli là vi khuẩn thuộc vi hệ đường ruột của người khỏe

mạnh, được phân loại trong họ Enterobacteriacea [3, 4] E coli được phân

lập chủ yếu từ người và động vật, không có khả năng sống tự do trong môitrường tự nhiên

1 Lịch sử.

Năm 1885, tại München, một bác sĩ nhi khoa tên là TheodorEscherich rất quan tâm đến những phát hiện quan trọng của LouisPasteur và Robert Koch về vi khuẩn Cùng với việc nghiên cứu bệnh tiêuchảy, Escherich tỏ rõ mối lưu ý tới một vi sinh vật đường ruột trẻ em quanhiều thí nghiệm lâm sàng Vi khuẩn do Escherich phát hiện từ trong tã lót

của trẻ em được công bố với tên gọi đầu tiên là Bacterium coli commune Chỉ

4 năm sau vi khuẩn này được giới chuyên môn đổi tên thành Escherich nhằm tri ân người có công khám phá Tuy nhiên, nó được gọi bằng tên Bacillus

coli vào năm 1895 và Bacterium coli vào một năm sau đó Cuối cùng, sau

nhiều tên gọi khác nhau, đến năm 1919 loài vi khuẩn này được định danh

thống nhất toàn cầu là Escherichia coli.

Về phân loại khoa học E coli được xếp vào:

- Loài: Escherichia coli

2 Tình hình nhiễm và khả năng đề kháng.

E coli là loài vi khuẩn phổ biến trên thế giới cũng như ở Việt Nam Nó

là một thành viên trong nhóm vi hệ đường ruột [1], tuy nhiên nó lại trở thànhtác nhân gây bệnh khi ra ngoại cảnh và lây nhiễm ngược trở lại cơ thể conngười

Tổ chức Y Tế Thế Giới WHO đã ghi nhận hàng loạt vụ dịch E coli trên

diện rộng như đợt dịch bùng phát ở Mỹ năm 1982 do EHEC, STEC ước tínhgây ra khoảng 100.000 ca bệnh, 3.000 ca nhập viện và 90 trường hợp tử vonghàng năm tại Hoa Kỳ [4], hay vụ dịch do EHEC ở Đức năm 2011, ở Nhật

năm 1996 Gần đây là vụ dịch năm 2011 ở Châu Âu, E coli hiện nay đang là

thủ phạm gây ra vụ dịch lớn nhất, tính đến trung tuần tháng 6 có khoảng3.256 người nhiễm bệnh phải nhập viện, khoảng 812 người bị nhiễm trùngtiêu hoá nặng, 100 người đang trong giai đoạn nguy kịch và có tới 35 người

đã chết

Tại Việt Nam, E coli xếp hàng đầu trong các vi khuẩn thường gặp gây

bệnh, thường xuyên gây các vụ ngộ độc thực phẩm tại các bếp ăn tập thể,trường học, công ty Không những vậy gần đây xuất hiện các chủng đakháng gây nguy hiểm và khó khăn cho điều trị như 4 trường hợp trẻ dưới 5

tuổi bị tiêu chảy có kết quả dương tính với E coli kháng thuốc, trong đó 2

trường hợp đã tử vong tại Bệnh viện Nhi Đồng Cần Thơ năm 2013 Ở nước ta

hiện nay, E coli đứng hàng thứ hai trong các vi khuẩn kháng thuốc Theo tổng hợp của Viện Vệ Sinh Dịch Tễ Trung Ương, tỉ lệ đa kháng của E coli ở

nước ta hiện nay khoảng 20 – 25%, tỉ lệ tử vong cao Nhóm vi khuẩn gram

âm như E coli đứng hàng thứ hai trong các vi khuẩn kháng thuốc nguy hiểm.

Theo số liệu giám sát năm 2012 của khoa xét nghiệm Bệnh Viện Nhiệt Đới

Trung Ương, tỷ lệ kháng Ampicilin của E coli lên tới 81,4%; kháng

Amoxicillin/Clavunanic và Ampicillin/Sulbactam khoảng 40% Các kháng

sinh nhóm Cephalosporin thế hệ ba cũng bị kháng đến gần một nửa, và nhómfluoro – quinolon cũng bị kháng khoảng 45% [5].

3 Đặc điểm sinh học.

3.1.1 Hình thể.

E coli là trực khuẩn Gram âm, hầu hết có khả năng di động nhờ các lông

xung quanh thân, đôi khi có vỏ, không sinh nha bào [1]

Hình 1.1 E coli dưới kính hiển vi điện tử Hình 1.2 E coli trên tiêu bản nhuộm Gram.

1.3.2 Tính chất nuôi cấy.

E coli là trực khuẩn gram âm, phát triển dễ dàng trên các môi trường

nuôi cấy thông thường [1], đặc biệt là môi trường thạch MacConkey Nhiệt độthích hợp 370C, phát triển trong khoảng nhiệt độ dao động rộng (từ 5 – 40°C),

pH thích hợp là 7,0 – 7,2 Hiếu khí và kỵ khí tuỳ tiện [1]

Môi trường canh thang: Nuôi cấy sau 3 – 4 giờ vi khuẩn phát triển làmđục nhẹ môi trường, sau 2 ngày trên mặt môi trường có váng mỏng, nhữngngày sau vi khuẩn lắng xuống đáy ống

Môi trường thạch thường: Nuôi cấy sau 8 – 10 giờ có thể nhìn thấykhuẩn lạc riêng rẽ qua kính phóng đại, khuẩn lạc to dần, tròn lồi, hơi phồng,mặt nhẵn, bờ đều, đường kính khoảng 1,5 mm Những ngày sau, khuẩn lạcchuyển thành màu xám xanh, giữa đục xám Có thể thấy khuẩn lạc dạng R (xùxì) và M (nhầy)

- Không lên men đường adonit và inozit.

- Nghiệm pháp IMVIC: Dùng để phân biệt E coli với các vi khuẩn đường

ruột khác, gồm có các phản ứng:

+ Phản ứng sinh indol (I): E coli có indol (+) [1].

+ Phản ứng đỏ metyl (M): E coli có phản ứng đỏ metyl (+).

+ Phản ứng Voges Proskauer (V): Phản ứng này dùng để kiểm tra khả

năng sinh ra acetyl – metyl carbinol, E coli có pbản ứng Voges

Bảng 1.1: Tính chất hóa sinh của một số loài vi khuẩn thuộc chi

Escherichia.

E coli

(bình thường)

- Bị tiêu diệt ở 550C trong 1 giờ hoặc 600C trong 30 phút

- Dễ bị diệt bởi các thuốc sát trùng thông thường

1.3.5 Kháng nguyên.

- Có kháng nguyên O, kháng nguyên H và kháng nguyên bề mặt K [6]

+ Kháng nguyên O: Có khoảng 157 kháng nguyên O được đánh số 1, 2,

3, 4 [1]

+ Kháng nguyên H: Có tới 52 kháng nguyên H [1]

+ Kháng nguyên K: Gồm có kháng nguyên L và B không chịu nhiệt vàkháng nguyên А, M chịu nhiệt Kháng nguyên bề mặt K thường ngăn cảnhiện tượng ngưng kết О của vi khuẩn sống Nếu đun sôi 1 giờ huỷ khángnguyên K, hiện tượng ngưng kết О lại xuất hiện [13] Có khoảng 100 khángnguyên K

- Dựa vào cấu trúc kháng nguyên, E coli được chia thành các typ huyết

thanh Với sự tổ hợp của các yếu tố kháng nguyên, sẽ có rất nhiều typ huyếtthanh khác nhau, mỗi typ huyết thanh được kí hiệu bằng kháng nguyên O vàkháng nguyên K

E coli được đánh số theo thứ tự kháng nguyên O, kháng nguyên K và H.

Ví dụ: E coli O111: B4:12 (có kháng nguyên O là 111, kháng nguyên K

- E coli sản xuất Shiga toxin (STEC) còn được gọi là Enterohemorrhagic

E coli (EHEC) – E coli gây chảy máu đường ruột.

- Enterotoxigenic E coli (ETEC) – E coli sinh độc tố ruột.

- Enteropathogenic E coli (EPEC) – E coli gây bệnh đường ruột.

- Enteroaggregative E coli (EAEC) – E coli bám dính đường ruột.

- Enteroinvasive E coli (EIEC) – E coli xâm nhập đường ruột.

Các triệu chứng lâm sàng của tiêu chảy liên quan đến DAEC thườngkhông rõ ràng [7, 8]

4.1.2 Yếu tố giả thiết gây tiêu chảy của E coli.

Có nhiều yếu tố giả định đã được mô tả Không có typ nào lại có yếu tốgây bệnh rõ ràng được khẳng định từ các tình nguyện viên hoặc từ các điềutra dịch tễ học [9]

Chủng DAEC biểu hiện thành các mảng bám dài đặc trưng ở trên tế bàoHep – 2, nó được cho là nguyên nhân tiêu chảy của một vài nghiên cứu dịch

tễ học Một truyền tín hiệu thác phức tạp đã được đề xuất như là cơ chế bệnhsinh của DAEC [11]

Các chủng E coli sản xuất độc tố gây chết tế bào bằng cách làm tế bào

trương lên xuất ra 1 loại tác nhân không bền nhiệt bao gồm kích tố bào vàđộc tố tế bào làm thay đổi tế bào buồng trứng của chuột đồng Trung Quốctương tự LT [11] Yếu tố này không ảnh hưởng đến tế bào Y – 1 Kết quả từ

một nghiên cứu từ Banglades chỉ ra rằng các chủng E coli này liên quan đến

tiêu chảy [12], tuy nhiên kết quả này vẫn cần có thêm các nghiên cứu khác đểkhẳng định

Một vài dịch tiêu chảy có liên quan đến các chủng E coli, mà các chủng

này không thuộc về bất cứ một typ nào từng được công bố Một số chủng lạimang gen mã hóa độc tố bám ST giống như độc tố EAST – 1, độc tố này cóquan hệ với độc tố ST của ETEC Các công trình sau này cần chứng minh yếu

tố độc lực của các chủng này Tuy nhiên gen EAST – 1 lại có thể được dùngtrong công nghệ phân tử

4.1.3 Gây bệnh ngoài đường tiêu hóa.

Khác với E coli gây bệnh đường ruột (IPEC), các E coli gây bệnh ngoài

đường ruột (ExPEC) là những vi khuẩn gây bệnh cơ hội khi “lạc chỗ” Chúng

có thể là thành viên của hệ vi khuẩn bình thường ở ruột nhưng khi vào máu,vào dịch tủy não, vào đường tiết niệu thì trở thành tác nhân gây bệnh, nhất là

ở những người có cơ chế đề kháng bị suy giảm Tuy nhiên đã xác định đượcnhững gen độc lực của ExPEC thường gặp trong các nhiễm trùng ngoàiđường ruột

Theo kết quả của nhiều nghiên cứu, tới 80% các trường hợp viêm màng

não ở trẻ sơ sinh do E coli EPEC là nguyên nhân chủ yếu của nhiễm trùng

đường tiết niệu Yếu tố độc lực quan trọng của EPEC là P – pili Nhờ Pili này,

E coli có thể gắn đặc hiệu vào kháng nguyên P, là một trong các kháng

nguyên nhóm máu Ngoài ra nó còn có một số yếu tố độc lực khác cũng thamgia vào cơ chế gây bệnh Và các nhóm huyết thanh hay gặp là O1, O2, O4,O6, O7 và O75 Các chủng có kháng nguyên K1, K2, K3, K5, K12, K13 làhay gặp nhất Những vi khuẩn này thường có các gen mã hóa cho các yếu tố

độc lực như yếu tố bám dính, vỏ, các độc tố

4.2 Chẩn đoán vi sinh.

4.2.1 Nhuộm soi trực tiếp.

- Có thể làm tiêu bản soi trực tiếp đối với một số loại bệnh phẩm như cặn

ly tâm nước tiểu hoặc nước não tủy [1]

- Làm tiêu bản nhuộm gram với bệnh phẩm phân, dịch niệu đạo – âmđạo, máu

Kết quả: các trực khuẩn gram âm, bắt màu đỏ trên tiêu bản nhuộm gram [1]

4.2.2 Nuôi cấy phân lập.

- Phân: Bệnh phẩm phân được nuôi cấy trên hai môi trường phân lập:một môi trường có chất ức chế chọn lọc như Endo, MacConkey; một môitrường không có chất ức chế như thạch thường, thạch máu [14]

- Nước tiểu: Nước tiểu giữa dòng được tiến hành cấy đếm trên môitrường đặc, trước đây thường sử dụng thạch thường, hiện nay có môi trườnguriselect vừa có giá trị cấy đếm, vừa có khả năng định danh

- Máu: Tiến hành cấy máu khi nghi có nhiễm khuẩn máu

- Dịch niệu đạo – âm đạo: cấy trên thạch thường, thạch máu…

Sau khi đã phân lập được vi khuẩn thuần nhất thì tiến hành định danhbằng cách xác định tính chất sinh vật hóa học và phản ứng ngưng kết trênphiến kính với các kháng huyết thanh mẫu

đến bệnh tiêu chảy đặc biệt hữu ích với điều tra dịch tễ [15]

Nhược điểm: rất tốn kém, hầu như không dùng

4.2.4 Phương pháp sinh học phân tử.

Kỹ thuật khuếch đại gen PCR cũng đã được áp dụng trong chẩn đoán E.

coli như:

- Xác định gen mã hóa sản xuất độc tố Shiga (Stx) bằng thăm dò DNAhay PCR [16]

- Xét nghiệm miễn dịch enzyme cạnh tranh, xét nghiệm ngưng kết latexthụ động đảo ngược để phát hiện độc tố ST của ETEC [17].

Ở nước ta hiện nay chủ yếu mới sử dụng PCR trong định danh khi vi

khuẩn đã được phân lập thuần nhất Các kỹ thuật PCR xác định E coli trực

tiếp từ bệnh phẩm đang được nghiên cứu phát triển

- Phòng đặc hiệu: hiện nay chưa có phương pháp phòng E coli đặc hiệu [1].

4.3.2 Nguyên tắc điều trị.

E coli thuộc vào các loại vi khuẩn có tỷ lệ kháng thuốc rất cao hiện nay

[1], nhất là các chủng vi khuẩn phân lập được từ nước tiểu, vì vậy phải làmkháng sinh đồ để lựa chọn kháng sinh phù hợp [1], điều trị hiệu quả và hạnchế tình trạng kháng kháng sinh

Ngoài việc sử dụng kháng sinh, một số việc khác rất có giá trị trong điềutrị như bồi phụ nước, điện giải trong trường hợp tiêu chảy, giải quyết các cảntrở trên đường tiết niệu như rút thăm dò, ống thông sớm nếu có thể [1].

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG – VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng.

2.1.1 Đối tượng.

1024 bệnh nhân có hội chứng tiết dịch niệu đạo – âm đạo đến khám tạibệnh viện Da Liễu Trung Ương từ tháng 10/2014 – 4/2015

2.1.2 Nguồn bệnh phẩm.

- Bệnh phẩm: dịch niệu đạo – âm đạo

- Tiêu chuẩn lựa chọn:

+ Bệnh nhân có hội chứng tiết dịch niệu đạo – âm đạo

- Tiêu chuẩn loại trừ:

+ Bệnh nhân đang hành kinh, rong kinh, rong huyết, xuất huyết âm đạo

+ Bệnh nhân sử dụng kháng sinh trong vòng 10 ngày trước xét nghiệm

+ Bệnh nhân có đặt thuốc âm đạo, thụt rửa âm đạo

+ Bệnh nhân suy giảm miễn dịch: HIV/AIDS, lao …

- Máy tính, máy in.

- Bút viết kính, găng tay, thước đo

- Khay đựng tiêu bản, khay hạt đậu

- Môi trường nuôi cấy phân lập: thạch máu, thạch thường

- Các kit định danh: thạch mềm, môi trường KIA, môi trường citrate –simmon, thạch uriselect, uri – indol

- Môi trường làm kháng sinh đồ: Mueler – hinton

- Khoanh giấy kháng sinh: hãng OXOID

2.3 Phương pháp.

2.3.1 Phương pháp nghiên cứu.

Phương pháp nghiên cứu mô tả cắt ngang

2.3.2 Quy trình thực hiện.

Tình hình KKSXđịnh tỷ lệ nhiễm

Yếu tố liên quan