Nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý của chó được gây bệnh thực nghiệm bằng chủng virus care (CDV 768)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM  BOUNHEUANG SIHOUNGVANH “NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ðẶC ðIỂM BỆNH LÝ CỦA CHÓ ðƯỢC GÂY BỆNH THỰC NGHIỆM BẰNG CHỦNG VIRUS CARE (CDV-768)” LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI, 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM  BOUNHEUANG SIHOUNGVANH “NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ðẶC ðIỂM BỆNH LÝ CỦA CHÓ ðƯỢC GÂY BỆNH THỰC NGHIỆM BẰNG CHỦNG VIRUS CARE (CDV-768)” CHUYÊN NGÀNH: THÚ Y Mà SỐ:60.64.01.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : PGS.TS. NGUYỄN THỊ LAN HÀ NỘI, 2014 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Kinh tế Page iii LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan rằng, số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và chưa từng ñược sử dụng ñể bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam ñoan rằng, mọi sự giúp ñỡ cho việc hoàn thành luận văn này ñã ñược cảm ơn, các thông tin trích dẫn trong luận văn ñã ñược ghi rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng năm 2014 Tác giả luận văn BOUNHEUANG SIHOUNGVANH Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Kinh tế Page iv LỜI CẢM ƠN Trước hết, tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo Học viện Nông nghiệp Việt Nam, ñặc biệt là các thầy cô giáo Khoa Thú y ñã truyền ñạt cho tôi những kiến thức chuyên ngành trong suốt quá trình học tập và thực tập tốt nghiệp vừa qua. ðây là những kiến thức tạo cơ sở cho tôi ứng dụng và phát huy trong sự nghiệp chuyên môn của tôi sau này. Với lòng biết ơn sâu sắc, tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS. Nguyễn Thị Lan, giảng viên bộ môn Bệnh lý Thú y, Khoa Thú y -Học viện Nông nghiệp Việt Nam ñã hướng dẫn và chỉ bảo tận tình cho tôi trong suốt quá trình thực tập và hoàn thành luận văn tốt nghiệp. Tôi xin tỏ lòng biết ơn tới các kỹ sư trên Phòng thí nghiệm trọng ñiểm công nghệ sinh học thú y - Khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Namñã tạo mọi ñiều kiện cho tôi thực hiện tốt ñề tài nghiên cứu của mình. Cuối cùng, tôi xin cảm ơn gia ñình, bạn bè và những người thân ñã ñộng viên, giúp ñỡ tôi trong suốt thời gian học tập tại trường cũng như quá trình thực tập và hoàn thành luận văn tốt nghiệp. Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2014 Học viên BOUNHEUANG SIHOUNGVANH Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Kinh tế Page v MỤC LỤC Trang Lời cam ñoan iii Lời cảm ơn iv Mục lục v Danh mục các chữ cái viết tắt viii Danh mục bảng ix Danh mục hình x MỞ ðẦU 1 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. Tình hình nghiên cứu ngoài nước 3 1.2. Tình hình nghiên cứu trong nước 5 1.3. Căn bệnh học 6 1.3.1. Phân loại virus gây bệnh Care 6 1.3.2. Hình thái của virus Care 7 1.3.3. Cấu trúc của virus Care 8 1.3.4. Sức ñề kháng của virus Care 9 1.3.5. Cơ chế sinh bệnh 10 1.4. Truyền nhiễm học 12 1.4.1. Chất chứa virus 12 1.4.2. ðường xâm nhập và cách thức lây lan 12 1.4.3. Tỷ lệ ốm, tỷ lệ chết 12 1.5. Triệu chứng bệnh tích 13 1.5.1. Triệu chứng lâm sàng 13 1.5.2. Bệnh tích 15 1.6. Chẩn ñoán bệnh 17 1.6.1. Dựa vào ñặc ñiểm dịch tễ học của bệnh 17 1.6.2. Dựa vào triệu chứng lâm sàng 17 1.6.3. Chẩn ñoán trong phòng thí nghiệm 18 1.6.4. Chẩn ñoán phân biệt với bệnh sau 21 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Kinh tế Page vi CHƯƠNG 2. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1. ðối tượng nghiên cứu 23 2.2. ðịa ñiểm nghiên cứu 23 2.3. Thời gian nghiên cứu 23 2.4. Nội dung nghiên cứu 23 2.5. Nguyên liệu 23 2.5.1. Virus 23 2.5.2. ðộng vật thí nghiệm 24 2.5.3. Hoá chất 24 2.5.4. Máy móc và dụng cụ 24 2.6. Phương pháp nghiên cứu 25 2.6.1. Phương pháp gây bệnh thực nghiệm 25 2.6.2. Theo dõi triệu chứng lâm sàng của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 26 2.6.3. Phương pháp phân lâp virus trên môi trường tế bào Vero-DST 26 2.6.4. Phương pháp ELISA 27 2.6.5. Kiểm tra virus học 27 2.6.6. Phương pháp RT-PCR 28 2.6.7. Phương pháp quan sát, mô tả 31 2.6.8. Phương pháp mổ khám, quan sát bệnh tích ñại thể của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 31 2.6.9. Phương pháp làm tiêu bản vi thể và quan sát bệnh tích trên tiêu bản của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 32 2.6.10. Phương pháp nhuộm hóa mô miễn dịch (Immunohistochemistry – IHC) 36 2.6.11. Phương pháp thống kê, xử lý số liệu 37 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 3.1. Kết quả xét nghiệm kháng thể kháng virus Care của chó trước khi gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 38 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Kinh tế Page vii 3.2. Kết quả gây bệnh thực nghiệm cho chó bằng chủng virus Care (CDV-768) 40 3.3. Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 41 3.3.1. Thân nhiệt của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 43 3.3.2. Tần số tim của chó trước và sau khi ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 45 3.3.3. Tần số hô hấp của chó trước và sau khi ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 48 3.4. Kết quả nghiên cứu một số chỉ tiêu huyết học của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 51 3.4.1. Kết quả khảo sát chỉ tiêu bạch cầu của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 51 3.4.2. Kết quả khảo sát chỉ tiêu hồng cầu của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 52 3.5. Kiểm tra một số bệnh tích của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 54 3.5.1. Bệnh tích ñại thể của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 54 3.5.2. Bệnh tích vi thể chủ yếu củachó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 58 3.6. Sự phân bố của chủng virus Care (CDV-768) trong các cơ quan của chó 62 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 65 1. Kết luận 65 2. ðề nghị 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Kinh tế Page viii DANH MỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT STT Tên viết tắt Tên ñầy ñủ 1 CPV Canine Parvovirus 2 CAV Canine Adenovirus 3 CD Canine Distemper 4 CDV Canine Distemper Virus 5 LEPTO Leptospirose 6 CPE Cyto Pathogenic Effect 7 EDTA Ethylene diamine tetra acetic acid 8 ELISA Enzyme-linked immunosorbent asay 9 HE Haematoxilin - Eosin 10 MV Measles Virus 11 PBS Photphate buffer saline 12 RNA Ribonucleic acid 13 RPV Rinderpest Virus 14 RT-PCR Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction 15 TCID 50 50% Tissue Culture Infective Dose 16 DMEM Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium 17 OD Optical Density 18 TMB Tetramethylbenzidine 19 Ig Immunoglobulin Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Kinh tế Page ix DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 3.1. Kết quả xét nghiệm kháng thể kháng virus Care bằng phương pháp ELISA 38 Bảng 3.2. Kết quả xét nghiệm sự có mặt của virus Care và một số virus khác bằng phương pháp RT – PCR 39 Bảng 3.3. Kết quả nhiệt ñộ của chó kiểm tra trước khi gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) ( 0 C). 39 Bảng 3.4. Kết quả xét nghiệm virus Care bằng phương pháp RT – PCR 40 Bảng 3.5. Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) (n TN =3, n ðC =2) 42 Bảng 3.6. Thân nhiệt của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) ( 0 C) 44 Bảng 3.7. Biến ñộng tần số tim trước và sau khi ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) (lần/phút) 46 Bảng 3.8. Biến ñộng tần số hô hấp trước và sau khi gây ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) (lần/3phút) 49 Bảng 3.9. Số lượng bạch cầu của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) (x10 3 µl) 51 Bảng 3.10. Số lượng hồng cầu của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) (x10 6 /µl) 53 Bảng 3.11. Bệnh tích ñại thể chủ yếu của chó ñược gây bệnh thực nghiệm bằng chủng virus Care (CDV-768) 55 Bảng 3.12. Bệnh tích vi thểchủ yếu của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 58 Bảng 3.13. Kết quả nhuộmhóa mô miễn dịch 62 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Kinh tế Page x DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1. Hình thái của virus ñược chụp dưới kính hiển vi 8 Hình 1.2. Kít chẩn ñoán nhanh bệnh Care 21 Hình 1.3. Khi chó mắc bệnh Care kít lên hai vạch 21 Hình 3.1. Biểu ñồ nhiệt ñộ của chó trước khi gây nhiễm thực nghiệm 40 Hình 3.2. Biểu ñồ thể hiện thân nhiệt của chó sau khi ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 45 Hình 3.3. Biểu ñồ thể hiện tần số tim của chó trước và sau khi ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 47 Hình 3.4. Biểu ñồ thể hiện tấn số hô hấp của chó trước và sau khi ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) 50 Hình 3.5. Biểu ñồ thể hiện biến ñộng số lượng bạch cầu của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) (x10 3 /µl) 52 Hình 3.6. Biểu ñồ thể hiện biến ñộng số lượng hồng cầu của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) (x10 6 /µl) 53 Hình 3.7. Xoang ngực tích nước 57 Hình 3.8. Ruột xuất huyết 57 Hình 3.9. Phổi nhục hóa 57 Hình 3.10. Túi mật sưng to 57 Hình 3.11. Não sung huyết 57 Hình 3.12. Lách hoại tử vùng rìa 57 Hình 3.13. Hạch bị viêm (HE.10X) 61 Hình 3.14. Hạch bị viêm (HE.40X) 61 Hình 3.15. Trong lòng các phế nang có dịch viêm (HE.10X) 61 Hình 3.16. Trong lòng các phế nang có dịch viêm (HE.40X) 61 [...]... nh tích ñ i th , b nh tích vi th cơ quan t ch c c a chó ñư c gây nhi m ch ng virus Care (CDV- 768) - Nghiên c u s phân b c a ch ng virus Care (CDV- 768) trong các cơ quan c a chó ñư c gây b nh th c nghi m 2.5 Nguyên li u 2.5.1 Virus Virus s d ng là ch ng virus Care (CDV- 768), ñư c phân l p t chó m c b nh Care t i ñ a bàn Hà N i Chó này có bi u hi n chó kém ăn, s t 40 – 410C, rũ, m t m i Ngoài ra còn... Phòng thí nghi m b môn B nh lý Thú y - Khu nuôi ñ ng v t thí nghi m c a Khoa Thú Y – H c vi n Nông nghi p Vi t Nam 2.3 Th i gian nghiên c u T tháng 07/2013 ñ n tháng 11/2014 2.4 N i dung nghiên c u - Gây b nh th c nghi m cho chó b ng ch ng virus Care (CDV- 768) - Nghiên c u m t s tri u ch ng lâm sàng, ch tiêu huy t h c c a chó ñư c gây nhi m ch ng virus Care (CDV- 768) - Nghiên c u m t s b nh tích ñ... ñ c ñi m b nh lý và ñ c bi t là vi c xác ñ nh s có m t c a virus cơ quan nào là ch y u Xu t phát t tình hình th c ti n, nh m ñ i phó v i d ch b nh Care ñang bùng phát hi n nay ñ ng th i nh m xác ñ nh ch ng virus Care (CDV- 768) này có ñ c l c hay không chúng tôi ti n hành nghiên c u ñ tài: Nghiên c u m t s ñ c ñi m b nh lý c a chó ñư c gây b nh th c nghi m b ng ch ng virus Care (CDV- 768) * M c ñích... tra s có m t c a virus 2 con chó ñ i ch ng khôngñư c tiêm virus Care Sau khi gây nhi m ch ng virus Care (CDV- 768) n u chó có bi u hi n tri u ch ng s t cao, b ăn, có d m t mũi, a ch y cho ñ n khi chó ch t ho c chó có tri u ch ng ñi n hình c a b nh Care thì ti n hành m khám, ki m tra b nh tích ñ i th , làm tiêu b n b nh lý quan sát b nh tích vi th , làm hóa mô mi n d ch xem s phân b virus các cơ quan... lâm sàng 5 chó ñư c l y máu ñ ki m tra các ch tiêu huy t h c vào ngày b t v và ngày th 7, ñ ng th i xét nghi m s có m t c a virus Care và m t s virus khác như b nh Pavovirus, Lepto, viêm gan chó và b nh d i b ng phương pháp RT-PCR ð i v i 3 con chó thí nghi m ñư c gây nhi m 2ml ch ng virus Care (CDV- 768) li u 106TCID50/25 l qua niêm m c m t, khí dung và mi ng Trong vòng 21 ngày k t ngày gây nhi m,... nguyên nhân gây t vong trên chó như b nh n i khoa, ngo i khoa, ký sinh trùng, truy n nhi m, s n khoa.ð c bi t là các b nh truy n nhi m chi m m t t l khá cao.M t trong s các b nh truy n nhi m gây b nh trên chóhay g p nh t là b nh Care B nh Care (b nh sài s t chó) là m t b nh truy n nhi m c p tính nguy hi m c a loài chó, do virus Care (Canine Distemper Virus – CDV) gây ra B nh thư ng x y ra chó non, lây... nhi u h n ch Ch ng virus Care (CDV- 768) ñư c phân l p t chó m c b nh Care t i ñ a bàn thành ph Hà N i Chó thu c gi ng Phú Qu c 2 tháng tu i có tri u ch ng lâm sàng ñi n hình c a b nh Care như chó có bi u hi n nôn m a, a ch y, a ra máu, có n t sài trên da, bàn chân sưng.ði u này ñã gây thi t h i r t l n v m t kinh t cũng như tinh th n c a ngư i nuôi chó ð kh ng ch , phòng và tr b nh Care hi u qu thì nh... kê các nghiên c u cho th y, b nh Care góp ph n quan tr ng vào s tuy t ch ng c a ch n chân ñen, h Tasmania và là nguyên nhân gây t vong ñ nh kỳ c a chó hoang dã châu Phi Năm 1991, b nh x y ra trên qu n th sư t Serengeti Tanzania làm gi m 20% s lư ng toàn ñàn ð c bi t virus Care ñã bi n ñ i và có kh năng gây b nh cho m t s ñ ng v t bi n Canine distemper virus (CDV) là nguyên nhân gây nên b nh Care H... mu n nghiên c u l a ch n ñư c ch ng virus Care ñ i di n cho các ch ng ñang lưu hành và gây b nh t i Vi t Nam ñ làm ch ng g c s n xu t vacxin và mong mu n t o ñư c vacxin có hi u qu phòng b nh t t cho ñàn thú c nh 1.3 Căn b nh h c 1.3.1 Phân lo i virus gây b nh Care Canine Distemper Virus (CDV) là m t thành viên c a gi ng Morbillivirus, thu c h Paramixoviridae Các thành viên khác c a gi ng Morbillivirus... mang l i hi u qu cao (Greene và Appel, 1987) 1.3.5 Cơ ch sinh b nh Virus gây b nh Care là virus gây nhi m hư ng mô lympho, niêm m c và mô th n kinh ð u tiên, virus nhân lên mô lympho c a h hô h p Sau ñó virus nhi m vào các d ch b ch huy t r i vào máu gây b i huy t Virus tác ñ ng ñ n n i m c m ch máu và gây s t, s t kéo dài t 1 - 2 ngày Virus theo máu vào h hô h p, h tiêu hóa, h ti t ni u và h th ng th . hành nghiên cứu ñề tài: Nghiên cứu một số ñặc ñiểm bệnh lý của chó ñược gây bệnh thực nghiệm bằng chủng virus Care (CDV- 768) . * Mục ñích của ñề tài Xác ñịnh ñược khả năng gây bệnh của chủng. virus Care (CDV- 768) 54 3.5.1. Bệnh tích ñại thể của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV- 768) 54 3.5.2. Bệnh tích vi thể chủ yếu củachó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV- 768) 58 . quả gây bệnh thực nghiệm cho chó bằng chủng virus Care (CDV- 768) 40 3.3. Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của chó ñược gây nhiễm chủng virus Care (CDV- 768) 41 3.3.1. Thân nhiệt của chó ñược gây