Trước khi gây bệnh thực nghiệm, chó ựược theo dõi trong vòng 7 ngày thấy chó khỏe mạnh, ăn uống bình thường, không sốt, không ỉa chảy. Chúng tôi tiến hành lấy máu của 5 chó thắ nghiệm, chắt huyết thanh kiểm tra sự tồn tại kháng thể kháng virus Care bằng phương pháp ELISA. Kết quả ựược trình bày trong bảng 3.1.Theo kắt của nhà sản xuất (Inmunologia Y Genetica Aplicada, s.a):
Bảng 3.1. Kết quả xét nghiệm kháng thể kháng virus Carebằng phương pháp ELISA STT Chó OD Kết quả 1 TN1 0,170 - 2 TN2 0,152 - 3 TN3 0,186 - 4 đC1 0,147 - 5 đC2 0,124 - 6 đối chứng dương 1,230 + 7 đối chứng âm 0,138 -
Ghi chú: + Dương tắnh; - Âm tắnh
Phản ứng ựạt yêu cầu khi: OD ựối chứng dương >1 OD ựối chứng âm <0,2
Cách tắnh kết quả: cut off = OD ựối chứng dương x0,2 OD mẫu > cut off: mẫu dương tắnh OD mẫu <cut off: mẫu âm tắnh
Từ số liệu bảng 3.1 cho thấy cả 5 con chó thắ nghiệm và ựối chứng ựều không có kháng thể kháng virus Care trong máu.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Kinh tế Page 39 đồng thời với việc kiểm tra sự tồn tại của kháng thể kháng virus Care bằng phương pháp ELISA, chúng tôi tiến hành kiểm tra sự có mặt của virus Care và một số virus khác bằng phương pháp RT-PCR. Kết quả ựược trình bày trong bảng 3.2.Theo kắt của nhà sản xuất QIAamp Viral RNA Mini Kit (250).
Bảng 3.2. Kết quả xét nghiệm sự có mặt của virus Care và một số virus khác bằng phương pháp RT Ờ PCR
STT Chó CDV CPV LEPTO CAV RABIES
1 TN1 - - - - -
2 TN2 - - - - -
3 TN3 - - - - -
4 đC1 - - - - -
5 đC2 - - - - -
Ghi chú: + Dương tắnh; - Âm tắnh
Giải thắch: CDV (Canine Distemper Virus) là sài sốt trên chó CPV (Canine Parvovirus) là bệnh Parvovirus LEPTO là bệnh Leptospirose
CAV (Canine Adenovirus) là bệnh viêm gan chó RABIES VIRUS là bệnh dại
Kết quả bảng 3.2 cho thấy, toàn bộ chó dùng làm thắ nghiệm và chó ựối chứng ựều cho kết quả âm tắnh với virus Care và một số bệnh khác.
Bảng 3.3. Kết quả nhiệt ựộ của chó kiểm tra trước khi gây nhiễm chủng virus Care (CDV-768) (0C).
Ngày
Chó 1 2 3 4 5 6 7
TN1 38,8ổ0,12 38,6ổ0,28 38,7ổ0,15 38,9ổ0,31 38,7ổ0,16 38,5ổ0,22 38,8ổ0,03 TN2 38,9ổ0,32 38,7ổ0,41 38,6ổ0,20 38,9ổ0,27 39,0ổ0,12 38,8ổ0,15 38,9ổ0,20
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Kinh tế Page 40
TN3 38,5ổ0,24 38,7ổ0,30 38,9ổ0,08 38,6ổ0,40 38,9ổ0,04 38,8ổ0,29 39,0ổ0,14 đC1 38,9ổ0,25 38,5ổ0,18 39,0ổ0,26 38,7ổ0,27 38,6ổ0,21 38,6ổ0,30 38,7ổ0,17 đC2 38,7ổ0,09 38,8ổ0,04 38,9ổ0,19 38,4ổ0,03 38,7ổ0,12 38,6ổ0,02 38,9ổ0,23
Hình 3.1. Biểu ựồ nhiệt ựộ của chó trước khi gây nhiễm thực nghiệm
Từ số liệu bảng 3.3 và hình3.1 nhiệt ựộ của chó cho thấy trước khi gây nhiễm chủng virus Care thực nghiệm cả 5 con chó thắ nghiệm và ựối chứng có nhiệt ựộ dao ựộng từ 38,2 Ờ 39,00C ựây là nhiệt ựộ sinh lý bình thường của chó. Như vậy, cả 5 con chó ựạt yêu cầu thắ nghiệm.
3.2. Kết quả gây bệnh thực nghiệm cho chó bằng chủng virus Care (CDV-768)
Sau khi gây bệnh thực nghiệm chủng virus Care (CDV-768), chúng tôi tiến hành lấy máu, dịch swab (nhử mắt, nhử mũi) và phân vào ngày thứ 3, 5, 7 ở cả chó thắ nghiệm và chó ựối chứng. để phát hiện sự có mặt của virus Care bằng phương pháp RT-PCR, kết quả ựược trình bày ở bảng 3.4.
Bảng 3.4. Kết quả xét nghiệm virus Care bằng phương pháp RT Ờ PCR Ngày
sau gây
Số mẫu dương tắnh/Số mẫu kiểm tra
Lô thắ nghiệm (n=3) Lô ựối chứng (n=2) 37.5 38 38.5 39 39.5 40 1 2 3 4 5 6 7 N h iệ t ự ộ ( 0 C) Ngày TN1 TN2 TN3 đC1 đC2
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Kinh tế Page 41
nhiễm Máu Swab Phân Máu Swab Phân
3 0/3 3/3 0/3 0/2 0/2 0/2
5 3/3 3/3 3/3 0/2 0/2 0/2
7 3/3 3/3 3/3 0/2 0/2 0/2
Kết quả bảng 3.4 cho thấy:
Ở ngày thứ 3 sau khi gây nhiễm, cả 3 chó TN (1,2 và 3) ựều cho kết quả dương tắnh (+) với virus Care dịch swab (dịch mắt, dịch mũi). Máu và phân âm tắnh (-). Phải ựến ngày thứ 5 và ngày thứ 7 thì cả 3 chó thắ nghiệm ựều cho kết quả (+) với virus Careở cả trong máu, dịch swab (nhử mắt, nhử mũi) và phân. 2 chó ựối chứng ở cả 3 lần lấy mấu (ngày thứ 3, 5 và 7) ựều cho kết quả âm tắnh (-). điều ựó chứng tỏ chúng tôi ựã gây nhiễm thành công.