Đánh giá một số chỉ tiêu của vacxin phòng bệnh xuất huyết ở cá rô phi do vi khuẩn Streptococcus Spp. gây ra

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM *** BÙI THỊ HIỀN ðÁNH GIÁ MỘT SỐ CHỈ TIÊU CỦA VACXIN PHÒNG BỆNH XUẤT HUYẾT Ở CÁ RÔ PHI DO VI KHUẨN STREPTOCOCCUS SPP. GÂY RA CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y Mà SỐ : 60.64.01.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. NGUYỄN HỮU VŨ TS. HUỲNH THỊ MỸ LỆ HÀ NỘI - 2014 Page i Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả ñược nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược công bố trong bất kỳ một công trình nào khác. ðồng thời tất cả các thông tin tôi trích dẫn trong luận văn ñều ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Tác giả Bùi Thị Hiền Page ii Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành các nội dung cơ bản trong luận văn tốt nghiệp này, ngoài sự nỗ lực và cố gắng của bản thân tôi còn nhận ñược sự giúp ñỡ tận tình của nhiều tổ chức, cơ quan và các cá nhân. Lời ñầu tiên, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc nhất tới TS. Nguyễn Hữu Vũ – Giám ñốc Công ty Cổ phần Dược và Vật tư thú y (Hanvet), TS. Huỳnh Thị Mỹ Lệ - Học viện Nông nghiệp Việt Nam là những người ñịnh hướng và trực tiếp hướng dẫn tôi hoàn thành luận văn. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc nhất tới ThS. Hồ Thu Thủy cùng các anh chị Trung tâm nghiên cứu – Công ty Hanvet ñã tận tình hướng dẫn, giúp ñỡ tôi trong quá trình thực hiện ñề tài. Tôi xin ñược bày tỏ lòng kính trọng, biết ơn chân thành tới các thầy cô giáo trong trường Học viện Nông nghiệp Việt Nam, Khoa Thú y, Bộ môn Vi sinh vật – Truyền nhiễm – Khoa Thú y ñã tạo mọi ñiều kiện tốt nhất ñể tôi thực hiện ñề tài. Tôi xin cảm ơn tới gia ñình, bạn bè, ñồng nghiệp những người ñã giúp ñỡ và ñộng viên tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn tốt nghiệp. Tác giả Bùi Thị Hiền Page iii Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp MỤC LỤC LỜI CAM ðOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH ix MỞ ðẦU 1 1. ðặt vấn ñề 1 2. Mục ñích của ñề tài 2 3. Ý nghĩa khoa học của ñề tài 2 4. Ý nghĩa thực tiễn của ñề tài 2 Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. Một số ñặc ñiểm sinh học của cá rô phi 3 1.1.1. Nguồn gốc 3 1.1.2. Phân loại 3 1.1.3. ðặc ñiểm hình thái 4 1.1.4. ðặc ñiểm môi trường sống 4 1.1.5. ðặc ñiểm dinh dưỡng 5 1.1.6. ðặc ñiểm sinh sản 5 1.2. Tình hình nuôi cá rô phi 7 1.2.1. Tình hình nuôi cá rô phi trên thế giới 7 1.2.2. Tình hình nuôi cá rô phi tại Việt Nam 9 1.3. Tình hình dịch bệnh ở cá rô phi 9 1.3.1. Trên thế giới 9 1.3.2. Ở Việt Nam 10 1.4. Một số thông tin về bệnh do liên cầu khuẩn Streptococcus spp. gây ra 10 1.4.1. Tình hình dịch bệnh 10 Page iv Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 1.4.2. Một số thông tin về liên cầu khuẩn Streptococcus spp. gây bệnh trên cá rô phi 13 1.4.3. Triệu chứng và bệnh tích 18 1.4.4. Sự phân bố và lan truyền của bệnh 18 1.5. Khái quát về hệ thống miễn dịch của cá 19 1.5.1. ðáp ứng miễn dịch tự nhiên ở cá 19 1.5.2. ðáp ứng miễn dịch thu ñược ở cá (miễn dịch ñặc hiệu) 20 1.6. Một số thông tin về vacxin phòng bệnh cho cá 22 1.6.1. Nguyên tắc ứng dụng vacxin 22 1.6.2. Các dạng vacxin dùng cho cá 22 1.6.3. Các phương pháp sử dụng vacxin cho cá 23 Chương 2. NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1. Nội dung nghiên cứu 25 2.1.1. Kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của vacxin phòng bệnh xuất huyết ở cá rô phi do vi khuẩn Streptococcus spp. 25 2.1.2. Kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin phòng bệnh xuất huyết ở cá rô phi do vi khuẩn Streptococcus spp. 25 2.1.3. ðánh giá hiệu lực của vacxin phòng bệnh xuất huyết ở cá rô phi do vi khuẩn Streptococcus spp. 25 2.1.4. ðánh giá ñộ dài miễn dịch của vacxin ở các thời ñiểm 21 ngày, 2 tháng, 3 tháng, 4 tháng, 5 tháng và 6 tháng 25 2.1.5. ðánh giá hiệu quả của vacxin sau bảo quản 3 tháng, 6 tháng, 9 tháng, 12 tháng, 15 tháng 25 2.2. ðối tượng nghiên cứu 25 2.3. Thời gian và ñịa ñiểm nghiên cứu 25 2.3.1. Thời gian nghiên cứu 25 2.3.2. ðịa ñiểm nghiên cứu 25 2.4. Nguyên liệu 25 Page v Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 2.5. Phương pháp nghiên cứu 26 2.5.1. Phương pháp thu mẫu cá bệnh 26 2.5.2. Phương pháp kiểm tra dấu hiệu bên ngoài và mổ khám bệnh tích 27 2.5.3. Phương pháp ñếm mật ñộ vi khuẩn 28 2.5.4. Phương pháp phân lập vi khuẩn Streptococcus spp. có trong mẫu bệnh phẩm 29 2.5.5. Phương pháp kiểm tra chỉ tiêu vô trùng 29 2.5.6. Phương pháp kiểm tra chỉ tiêu an toàn: 30 2.5.7. Phương pháp kiểm tra chỉ tiêu hiệu lực 31 2.5.8. Phương pháp ngưng kết trên phiến kính 32 2.5.9. Phương pháp ñánh giá ñộ dài miễn dịch của cá sau khi tiêm vacxin 32 2.5.10. Phương pháp ñánh giá hiệu quả của của vacxin sau bảo quản 33 2.5.11. Phương pháp xử lý số liệu 34 Chương 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 35 3.1. Quy trình sản xuất vacxin 35 3.2. Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của vacxin 36 3.3. Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin 38 3.4. Kết quả kiểm tra chỉ tiêu hiệu lực của vacxin 41 3.4.1. Kết quả kiểm tra bằng phương pháp ngưng kết trên phiến kính 41 3.4.2. Kết quả kiểm tra bằng phương pháp công cường ñộc 43 3.5. Kết quả kiểm tra ñộ dài miễn dịch của cá 54 3.5.1. Kết quả kiểm tra bằng phương pháp ngưng kết trên phiến kính: 54 3.5.2. Kết quả kiểm tra bằng phương pháp công cường ñộc: 56 3.5.3. Theo dõi trọng lượng cá ở các thời ñiểm thí nghiệm: 58 3.6. Kết quả ñánh giá hiệu quả của vacxin sau bảo quản 59 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 66 1. Kết luận 66 2. ðề nghị 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 Page vi Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vii Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BA Blood Agar BHIA Brain Heart Infusion Agar BHIB Brain Heart Infusion Broth CFU Colony-forming unit Cs Cộng sự Ctv Cộng tác viên FAO Food and Agriculture Organization NA Nutrient Agar RPS Relative Percentage of Survival VK Vi khuẩn Page viii Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 1.1: Vi khuẩn gây bệnh trên cá rô phi nuôi tại khu vực ðông Nam Á (Lauke Labrie, 2007) 14 Bảng 3.1: Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của 3 lô vacxin vô hoạt phòng bệnh xuất huyết ở cá rô phi do vi khuẩn Streptococcus spp. gây ra 37 Bảng 3.2: Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin vô hoạt phòng bệnh xuất huyết ở cá rô phi do vi khuẩn Streptococcus spp. gây ra 40 Bảng 3.3: Kết quả kiểm tra bằng phương pháp ngưng kết trên phiến kính 43 Bảng 3.4: Kết quả theo dõi triệu chứng của cá sau khi công cường ñộc 45 Bảng 3.5. Kết quả theo dõi cá chết 47 Bảng 3.6. Kết quả mổ khám bệnh tích 49 Bảng 3.7: Kết quả phân lập vi khuẩn Streptococcus spp. từ mẫu cá bệnh 51 Bảng 3.8: Tỷ lệ bảo hộ của vacxin 53 Bảng 3.9: Kết quả kiểm tra ñộ dài miễn dịch của cá bằng phương pháp ngưng kết trên phiến kính 55 Bảng 3.10: Kết quả kiểm tra ñộ dài miễn dịch của cá bằng phương pháp công cường ñộc 57 Bảng 3.11: Kết quả theo dõi trọng lượng cá 59 Bảng 3.12: Kết quả kiểm tra chỉ tiêu cảm quan, vô khuẩn và an toàn của vacxin sau thời gian bảo quản 60 Bảng 3.13: Kết quả kiểm tra chỉ tiêu hiệu lực của vacxin sau thời gian bảo quản 63 Page ix Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang Hình 1.1: Cá rô phi vằn (Oreochromis niloticus) 3 Hình 1.2. Cá rô phi (cá ñiêu hồng) 4 Hình 1.3: Hình thái của vi khuẩn Streptococcus spp. dưới kính hiển vi x 1000 lần 15 Hình 2.1: ðường cắt giải phẫu xoang cơ thể cá 27 Hình 2.2: Giải phẫu não cá 28 Hình 2.3. Cá rô phi thí nghiệm 31 Hình 3.1. Tóm tắt quy trình sản xuất vacxin vô hoạt phòng bệnh xuất huyết ở cá rô phi do vi khuẩn Streptococcus spp. gây ra 35 Hình 3.2. Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của vacxin 38 Hình 3.3: Tiêm cá thí nghiệm 39 Hình 3.4: Hình ảnh lấy máu cá 41 Hình 3.5. Hình ảnh thu huyết thanh cá 41 Hình 3.6. Kết quả phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính 42 Hình 3.7. Dấu hiệu bệnh lý của cá rô phi 46 Hình 3.8: Hình ảnh nội quan xuất huyết 48 Hình 3.9: Hình thái khuẩn lạc Streptococcus spp. khi nuôi cấy trên môi trường BHIA 52 Hình 3.10: Tỷ lệ bảo hộ sau một thời gian tiêm vacxin cho cá rô phi 58 Hình 3.11: Trọng lượng cá tại các thời ñiểm kiểm tra 59 Hình 3.12 : Tỷ lệ bảo hộ của vacxin sau thời gian bảo quản 65 [...]... tra ch tiêu vô trùng c a vacxin phòng b nh xu t huy t cá rô phi do vi khu n Streptococcus spp 2.1.2 Ki m tra ch tiêu an toàn c a vacxin phòng b nh xu t huy t cá rô phi do vi khu n Streptococcus spp 2.1.3 ðánh giá hi u l c c a vacxin phòng b nh xu t huy t cá rô phi do vi khu n Streptococcus spp - Phương pháp ngưng k t trên phi n kính - Phương pháp công cư ng ñ c 2.1.4 ðánh giá ñ dài mi n d ch c a vacxin. .. ra bi n pháp phòng b nh xu t huy t cá rô phi do vi khu n Streptococcus spp gây ra có hi u qu cao; - ðánh giá ñư c ch tiêu vô trùng, an toàn và hi u l c c a vacxin phòng b nh xu t huy t cá rô phi do vi khu n Streptococcus spp nh m ñánh giá hi u qu s d ng vacxin trong phòng thí nghi m trư c khi th nghi m ngoài th c ñ a ñ quy t ñ nh ñưa vào s n xu t, áp d ng ñ i trà trong th c ti n; - ðánh giá ñư c ñ dài... t nhi u tr n d ch trên cá rô phi Tr n d ch năm 1992 ñã làm ch t r t nhi u cá rô phi trong nh ng ao nuôi nư c ng t ñ o trong khu v c mi n ðông Nam ðài Loan sau ñó lan r ng ra các c nư c l và nư c m n T i Israel, m t tác nhân gây b nh r t gi ng n m Branchiomyces ñã làm ch t 85% cá rô phi ñ và cá rô phi lai 1.3.2 Vi t Nam Hi n nay Vi t Nam, các công trình nghiên c u v b nh cá rô phi chưa nhi u Nh ng công... cá rô phi nói riêng và cá nư c ng t nói chung, làm nh hư ng ñ n hi u qu kinh t c a ngành nuôi tr ng th y s n Hi n nay, trên th gi i ñã có 36 lo i vacxin phòng b nh do vi khu n và 02 lo i vacxin phòng b nh do virus cho cá nhưng Vi t Nam hi n ch có m t lo i vacxin phòng b nh do vi khu n cho cá Do v y vi c phòng tr b nh trên cá nư c ng t v n ch y u d a vào vi c s d ng thu c kháng sinh và hóa ch t Vi c... khu n Streptococcus spp gây ra nh m ñánh giá hi u qu c a vac xin trư c khi ñưa vào áp d ng trong th c ti n 2 M c ñích c a ñ tài ðánh giá các ch tiêu vô trùng, an toàn, hi u l c, ñ dài mi n d ch và ñ dài b o qu n c a vacxin phòng b nh xu t huy t cá rô phi do vi khu n Streptococcus spp gây ra nh m ñánh giá hi u qu c a vacxin trong ph m vi phòng thí nghi m 3 Ý nghĩa khoa h c c a ñ tài - Là cơ s ñ ra bi... chi m 90% s n lư ng cá rô phi châu l c này Các qu c gia khác như Ghana, Nigieria, Kenya, Zimbabiwe… s n lư ng cá rô phi không ñáng k , ch y u ph c v tiêu th n i ñ a Châu Âu S n do nhi t ñ th p không thu n l i cho vi c nuôi cá rô phi nên s n lư ng cá rô phi không ñáng k Theo th ng kê c a FAO, s n lư ng cá rô phi nuôi Châu Âu là 270 t n (năm 1999) Hi n nay, B là nơi nuôi nhi u cá rô phi nh t v i s n lư... huy t ñư c thu t nh ng bè nuôi cá ñiêu h ng thâm canh Ti n Giang ti n hành ki m tra vi khu n h c xác ñ nh do vi khu n Streptococus agalactiae gây ra (ð ng Th Hoàng Oanh và ctv, 2012) 1.4.2 M t s thông tin v liên c u khu n Streptococcus spp gây b nh trên cá rô phi Vi khu n gây b nh Streptococcus gây b nh trên cá rô phi bao g m hai loài chính ñó là Streptococcus iniae và Streptococcus agalactiae (B ng... phân l p ñư c cá rô phi l n ñ u tiên cá rô phi nuôi t i Nh t B n g m hai loài là Streptococcus shiloi và Streptococcus difficile Sau ñó các loài vi khu n gây b nh trên cá rô phi ñư c phân lo i l i như Streptococcus shiloi ñư c là Streptococcus iniae, còn Streptococcus difficile ñư c xác nh n là Streptococcus agalactiae Năm 2005 t i m t s h ch a c a Malaysia ñã ghi nh n ñư c hi n tư ng cá rô phi nuôi l... c ph bi n t i Vi t Nam là : Cá rô phi v n ( Rô phi ðài Loan, Oreochromis niloticus ) ñư c nh p vào Vi t Nam năm 1973 t ðài Loan Hình 1.1: Cá rô phi v n (Oreochromis niloticus) Page 3 H c vi n Nông nghi p Vi t Nam – Lu n văn Th c s Khoa h c Nông nghi p Cá rô phi ñ (Oreochromis sp.), còn ñư c g i là cá ñiêu h ng, có màu h ng ñư c nh p vào Vi t Nam năm 1985 t Malaysia Hình 1.2 Cá rô phi (cá ñiêu h ng)... s th c ăn là 1,0 ÷ 1,8 (Ph m Anh Tu n và ctv, 2006) Các nư c Châu M b t ñ u quan tâm ñ n nuôi cá rô phi trong vòng 10 năm g n ñây ñ c bi t là sau r i ro c a ngh nuôi tôm do d ch b nh gây ra Các nư c vùng Trung Nam M như Mehico, Brazil, Ecuador là nh ng nư c s n xu t cá rô phi ch y u khu v c này Cá rô phi có ngu n g c t Châu Phi nhưng ngh nuôi cá rô phi khi v c này ch m i phát tri n trong 10 năm qua . Kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của vacxin phòng bệnh xuất huyết ở cá rô phi do vi khuẩn Streptococcus spp. 25 2.1.2. Kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin phòng bệnh xuất huyết ở cá rô phi do vi khuẩn. loại vacxin phòng bệnh do vi khuẩn và 02 loại vacxin phòng bệnh do virus cho cá nhưng ở Vi t Nam hiện chỉ có một loại vacxin phòng bệnh do vi khuẩn cho cá. Do vậy vi c phòng trị bệnh trên cá. Streptococcus spp. gây ra 37 Bảng 3.2: Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin vô hoạt phòng bệnh xuất huyết ở cá rô phi do vi khuẩn Streptococcus spp. gây ra 40 Bảng 3.3: Kết quả kiểm tra bằng