ĐỀ ÁN TỐT NGHIỆP-Tìm hiểu về các chất gây dị ứng trong đậu phộng

Một số trong số này có gây dị ứng, và có thể kích hoạt các kháng thể IgE - mỗi phân tử kháng thể được đặc hiệu với chất gây dị ứng kích hoạt của nó... • Sự khác nhau trong các loại triệ

GVHD: cô Nguyễn Thị Hiền

SV: Lâm Minh Hiếu

MSSV: 60600680

Tỷ lệ hiện nhiễm

• Ở các nước phương Tây: 1/10 000

• 1/200 trên các dân tộc khác nhau

• 28% dị ứng thức ăn ở trẻ em

• Ở Mỹ cao hơn bất kỳ quốc gia nào

• Ở Trung Quốc: không có dấu hiệu lâm sàng với dị ứng đậu phông

- Cơ địa, vùng địa lý (di cư)

Các triệu chứng

• Da (nổi mề đay, đỏ, sưng mô, đặc biệt là của khuôn mặt).

• Đường hô hấp (thở khò khè, ho, khó

thở, cổ họng như bị siết chặt, nghẹt mũi).

• Đường tiêu hóa (nôn mửa, tiêu chảy,

đau bụng).

• Hệ thống tim mạch (tụt huyết áp, nhịp tim không đều, tim ngừng nhịp đập).

50% (1), 30% (2), 10-15% (3), 1% (cả 4

hệ thống)

Các chất gây dị ứng

Đậu phộng (Arachis hypogea)

Có chứa protein khác nhau, mỗi loại có cấu trúc riêng biệt của nó Một số trong số này có gây dị ứng, và có

thể kích hoạt các kháng thể IgE - mỗi phân tử kháng thể được đặc hiệu với chất gây dị ứng kích hoạt của nó

• Ara h2 (thường xuyên nhất) • Ara h8

Các chất gây dị ứng Nghiên cứu (Becker, et al, 2001) 40 bệnh nhân mẫn cảm với đậu phộng

Ara h7 (43%), Ara h6 (38%), Ara h5 (13%)

Ara h6 được coi là một chất gây dị ứng phụ, lại có các triệu chứng lâm sàng nặng hơn so với hầu hết các chất gây dị ứng khác.

Mẫn cảm với loại này nhiều hơn loại khác dù hàm lượng như nhau.

Sự Phát triển của dị ứng

• Giai đoạn 1: xảy ra khi một cá nhân nhạy cảm được tiếp xúc lần đầu tiên với

một chất gây dị ứng gây đủ số lượng để kích thích một phản ứng miễn dịch cơ

bản

• Giai đoạn 2: nếu các cá nhân nhạy tiếp xúc một dịp tiếp theo, sau đó một phản

ứng miễn dịch tăng tốc và ào ạt hơn có thể được kích động, dẫn đến phản ứng

quá mẫn viêm trong mục tiêu có liên quan hoặc các cơ quan nội tạng.

Số lượng của chất gây dị ứng cần thiết để tạo ra hoặc gợi ra một phản ứng dị ứng thường không rõ

Đáp ứng thừa

Phản vệ (phản tác dụng bảo vệ)

Các tuyến đường bị dị ứng

- Qua bào thai của mẹ

- Bú sữa mẹ

- Tiếp xúc qua da từ kem dưỡng da (có dầu đậu phộng)

- Qua ăn uống

- Qua hít bụi

- Qua nước bọt (hôn)

- Các nguồn lây nhiễm tình cờ khác

Ngưỡng liều

Khó khăn vì nhiều biến số

• Sự khác biệt vê lượng giữa các các đối tượng: 100 mcg, 1 gm hoặc nhiều hơn

• Sự khác nhau trong các loại triệu chứng được biểu hiện trong các cá nhân khác nhau

• Sự thay đổi các triệu chứng trong cùng 1 cá nhân trong những dịp khác nhau Năm 2002 (Wensing, et al., 2002)

26 bệnh nhân người lớn với một lịch sử thuyết phục của các triệu chứng liên quan đến đậu phộng, sự hiện diện của kháng thể IgE đặc hiệu đậu phộng trong máu của họ, và một thử nghiệm phản ứng da dương tính với đậu phộng trải

qua double-blind, placebo-controlled food challenges thử thách thực phẩm được

kiểm soát với liều lượng ngày càng tăng của đậu phộng

Ngưỡng liều phản ứng dị ứng thay đổi từ một liều thấp tới 100 mcg lên đến 1

gm của protein đậu phộng

50% có một phản ứng dị ứng sau khi ăn vào 3 mg protein đậu phộng

• (Sicherer, et al., 1999)

• 10 người

được nghiên cứu

Tác nhân dị ứng khác ngoài Protein:

Chất béo

Một nghiên cứu năm 2003 của 6 người bị dị ứng với đậu phộng được biết chứng minh rằng phản ứng của 4 trong số các đối tượng đã được tăng lên đáng kể khi đậu phộng có trong một bữa ăn có hàm lượng cao chất béo (Grimshaw, et al., 2003)

Phản ứng chéo giữa các loại đậu

Đậu nành, đậu xanh, đậu lăng, đậu,

đậu Hà Lan, cam thảo, và tất cả

các thành viên khác của họ

Leguminoceae ????

- Trong thí nghiệm ở phòng thí

nghiệm: thường xuyên

- Trong thử nghiệm lâm sàng, các

Phản ứng chéo giữa các loại đậu

Ô nhiễm từ tái sử dụng dầu

chiên chiên đậu phộng,

protein đậu phộng đi vào

Ảnh hưởng của phương pháp nấu ăn

Rang đậu phộng đã được chứng minh là làm tăng tính chất dị ứng của chúng, so với khi chế biến bằng phương pháp khác (Maleki, et al., 2000)

Do nhiệt độ cao đạt tới trong quá trình rang, so với chiên

hoặc đun sôi



thay đổi mẫu protein: dạng không hòa tan

 ít hơn của protein sẽ phá hủy bởi acid dạ dày hơn là dạng được hòa tan nguồn liên tục của các chất gây dị ứng chủ yếu trong đường tiêu hóa, khi cùng một protein ở dạng hòa tan có thể đã được loại ra khỏi hệ thống nhiều hơn

(Kopper, et al., 2005).

Sơ đồ phản ứng chung cho phản ứng Maillard

Các sản phẩm sau Maillard

• Ara h 1 có liên kết ngang thông qua các phản ứng Maillard để

hình thành trimers và hexamers liên kết cộng hóa trị

Trimers, hexamers ổn định thông qua tương tác kỵ nước và vị trí của các dư lượng kỵ nước trùng với việc các vị trí nhận dạng IgE

Sự hình thành của một phức tam phân có thể củng cố phân tử bảo

vệ nào đó từ protease tiêu hóa và biến tính, cho phép thông qua các mảnh lớn Ara h 1 có chứa vài vị trí liên kết IgE nguyên vẹn qua lumen của ruột non và do đó góp phần vào sự dị ứng của nó

• Sản phẩm phụ khác có thể đóng góp vào các mức liên kết IgE cao

hơn so với chất chiết xuất từ rang, chẳng hạn như các sản phẩm oxy hóa lipid (hiện đang được điều tra)

• Thay đổi sự liên kết của các kháng thể IgE đặc hiệu đậu phộng với

Ara h1, Ara h2, và Ara h3.

• Xử lý nhiệt của các protein thì ảnh hưởng đáng kể đến

sự tương tác giữa các chất gây dị ứng và các kháng thể được sản xuất 

sự phát triển các triệu chứng của cá nhân

(Beyer, et al., 2001; Mondoulet, et al, 2005.).

Ảnh hưởng của chiếu tia UV trên

các chất gây dị ứng đậu phộng

Ara h 1 (63 kDa) và Ara h 2 (18-20 kDa) được coi là chất gây dị ứng đậu phộng chủ yếu, vì Ara h 1 và Ara h 2 được công nhận bởi 70% đến 90% của cá nhân mẫn cảm (Burks và những người khác 1998)

phản ứng với carbohydrates để tạo thành các sản phẩm cuối glycation tân tiến (AGE) trong thời gian làm nóng hoặc rang của đậu phộng, và kết quả là, các tính chất gây dị ứng đậu phộng gia tăng (Chung và Champagne 1999, 2001; Maleki và những người khác 2000)

- Phương pháp trị liệu với peroxidase, polypheol oxidase / caffeic acid,

đồng / hydrogen peroxide, và acid phytic đã được phát triển trong phòng thí nghiệm của chúng tôi (Chung và những người khác năm 2004, 2005, 2006;

Chung và Champagne 2007)

- Trong nghiên cứu này, PUV để làm giảm các tính chất gây dị ứng của chất chiết xuất từ đậu phộng và bơ đậu phộng lỏng

Hệ thống tiệt trùng ánh sáng UV xung (Xenon Steripulse XL-3000)

(A)

SDS-PAGE của chất chiết xuất từ đậu phộng thô (pH 7) được điều trị bằng ánh sáng PUV và đun sôi,

(B)

SDS-PAGE của bơ đậu phộng lỏng qua xử lý PUV Sau khi điều trị, các mẫu đậu phộng được ly tâm, và supernatants qua SDS-PAGE T = treated (được điều trị)

 chỉ có kháng nguyên 63 kDa bị ảnh hưởng bởi ánh sáng PUV

Sự biến mất của nó trong SDS-PAGE cho thấy phần lớn các chất gây dị ứng 63 kDa không ở trong các chất chiết xuất từ đậu phộng được qua xử

lý PUV như các protein hòa tan.

Hiện tượng này đã được chứng minh bởi một số nghiên cứu sử dụng điện trường xung và xung laser để vô hoạt enzym

(Castro và những người khác năm 2001; Jelinek và những người khác

2007; Wei và những người khác 2007)

Là một kết quả của biến tính protein Nhưng biến tính như thế nào thì chưa được biết.

Kết quả

• Tóm lại, nghiên cứu này cho thấy mức giảm của chất gây dị ứng đậu phộng hòa

tan trong các chất chiết xuất từ đậu phộng được điều trị PUV

• Điều trị đun sôi có rất ít ảnh hưởng trên tác nhân gây dị ứng đậu phộng

Điều này được tiếp tục thể hiện ở ciELISA:

- chất chiết được điều trị đun sôi: có liên kết IgE cao hơn chất chiết qua điều trị PUV

- ciELISA của bơ đậu phộng lỏng qua điều trị PUV chỉ ra rằng:

liên kết kháng thể IgE của kiểm soát cao hơn khoảng 7 lần so với bơ đậu phộng lỏng qua điều trị PUV

Nghiên cứu hiện tại do đó cung cấp một phương pháp tiếp cận đến sự phát triển một sản phẩm đậu phộng với tính chất gây dị ứng có thể thấp hơn Tuy nhiên, việc giảm tính gây dị ứng trong thực tế cần phải được xác nhận bởi gây dị ứng các nghiên cứu lâm sàng.

Môi trường an toàn đậu phộng

• Bảo đảm rằng tất cả nhân viên trong một cơ sở này được rõ các thông tin về nguy hiểm đối với người dị ứng đậu phộng ô nhiễm ngẫu nhiên

• Quy tắc nghiêm ngặt về vệ sinh.

• Cấm đem đậu phộng vào khu vực, và các lý do cho các hạn chế.

• Giáo dục của người có liên quan đến dị ứng đậu phộng tránh tiếp xúc với đậu phộng, bao gồm:

- Tránh các loại thực phẩm có khả năng chứa, hoặc bị nhiễm đậu phộng.

- Nhận thức của tất cả các điều khoản trên nhãn thực phẩm mà có thể cho biết có thể có sự hiện diện của đậu phộng.

- Mang theo một EpiPen của adrenalin (epinephrine) tiêm chích, và quen

thuộc với việc sử dụng nó trong trường hợp tiếp xúc tình cờ và một phản ứng

dị ứng.

- Đeo một thẻ MedicAlert hoặc vòng đeo tay trong trường hợp mất ý thức trong một phản ứng dị ứng.

• Thông báo cho tất cả nhân viên trong các cơ sở về thủ tục khẩn cấp cho bất cứ

ai cần trong khu vực phát triển các triệu chứng và cần điều trị y tế Thông tin như thế cần bao gồm:

- Quen thuộc với việc sử dụng của EpiPen khi thích hợp.

- Liên lạc với những người chăm sóc quyết định như cha mẹ và người giám hộ của trẻ em

Những đề xuất nghiên cứu thêm

- Nhạy cảm / khoan dung trong tử cung với chất gây dị ứng đậu phộng.

- Mẫn cảm với các tác nhân gây dị ứng đậu phộng thông qua sữa mẹ.

- Các tuyến đường khác ngoài những tuyến đường được đề cập trong 2 tuyến ở trên có thể dẫn đến mẫn cảm với đậu phộng của trẻ sơ sinh.

- Bản chất của phản ứng dị ứng liên quan của các cá nhân dị ứng với đậu phộng và các cây hạt không liên quan họ hàng thực vật với nó.

- Các biện pháp điều trị có thể thay đổi nhạy cảm đậu phộng và / hoặc cải thiện các triệu chứng của dị ứng đậu phộng;

- Cơ sở cho việc đánh dấu mức độ nghiêm trọng và bền bỉ của các

dị ứng đậu phộng so với các chất gây dị ứng thực phẩm khác

- Các protein đậu phộng chịu trách nhiệm về các phản ứng dị ứng.

Chuẩn đoán

1 Một bệnh sử dị ứng, và sự xuất hiện các triệu chứng

(xem ở trên) sau khi tiếp xúc với đậu phộng;

2 Xét nghiệm da dương tính với đậu phộng;

3 Sự hiện diện của kháng thể IgE đặc hiệu đậu phộng trong máu được đo bằng một bài kiểm tra

radioallergosorbent (RAST).

4 Trường hợp cần thiết để xác nhận, một bài kiểm tra

có tính thử thách dương tính trong đó các triệu chứng phát triển sau khi bệnh nhân tiêu thụ đậu phộng được giám sát trong khung kiểm soát (Thử nghiệm này

thường không thực hiện nếu có nguy cơ cho một phản ứng quá mẫn cảm đe dọa tính mạng.)

Thí nghiệm RAST đo nồng độ của kháng thể trong máu

• Thí nghiệm RAST được dùng để phát hiện ra mức độ dị ứng

của người đối với 1 chất nào đó (phấn hoa chẳng hạn), chất

gây dị ứng này kí hiệu là KN (antigen: kháng nguyên).

• Cơ chế dị ứng ở người:

Với một loại kháng nguyên A nào đó, trong cơ thể người

có kháng thể (KT) tương ứng với KN A (antibody) để phát

hiện và loại trừ A

Khi A xâm nhập vào cơ thể Chúng có khả năng gây dị ứng, sẽ kích động lên hệ miễn dịch Một báo động vang lên và các KT ùa đến Chúng bám vào A và gây ra đủ loại phản ứng đối với cơ thể (hắt hơi, nổi mề đay, nổi ngứa đỏ, ) để báo

động cơ thể đẩy A ra ngoài.

Đối với các kháng nguyên khác nhau, sẽ có nhiều loại kháng thể khác nhau

Nồng đồ của kháng thể tương ứng với A trong máu càng cao thì người đó càng dễ bị dị ứng với A.

• Thí nghiệm RAST đo nồng độ của KT trong máu:

Cách làm như sau:

1/ Bệnh nhân được trích máu và mẫu máu này đựoc tách bỏ hết hồng cầu bạch cầu, phần còn lại chính là huyết thanh (serum) Mẫu huyết thanh này sau đó được gửi đến phòng thí nghiệm.

2/ Ở phòng thí nghiệm người ta tiến hành các bước sau:

2a/ Lấy một lượng kháng nguyên KN (đã biết khối lượng là m), mà các phân tử

KN liên kết với 1 chất không hòa tan cho vào ống nghiệm N Kháng nguyên liên kết với chất không hòa tan (kí hiệu là kt: kết tủa) trở thành KNkt Sở dĩ dùng chất không hòa tan, bởi vì , và cho phép ta tách riêng hỗn hợp kết tủa ra cùng với những gì liên kết với nó (sau khi xả hết dung dịch cùng với những gì hòa tan cùng trong dung dịch).

2b/ Cho huyết thanh của bệnh nhân vào N, lượng huyết thanh đã biết là m2 Trong huyết thanh của bệnh nhân có các kháng thể KT (với nồng độ chưa

biết) Các kháng thể này sẽ bám vào KNkt Nếu nồng độ kháng thể càng cao thì

sẽ có càng nhiều kháng thể bám vào các các KNkt, KNkt trở thành KT-KNkt Tách kết tủa KT-KNkt ra, và đưa chúng đến giai đoạn 2c/.

2c/ 1 lượng kháng thể khác đã được đánh dấu bằng phóng xạ (px) (chất phóng

xạ để đánh dấuthường là 1 đồng vị px 131 của I ót) với khối lượng là m3 cho vào N Các KT phóng xạ (KTpx) này sẽ bám vào các KT-KNkt Càng nhiều KT-KNkt thì sẽ càng nhiều KTpx bám vào, và thu đựoc KTpx - KT-KNkt

Tách kết tủa KTpx - KT-KNkt ra.

2d/ Đo độ phóng xạ của KTpx-KT- KNkt Nếu như lượng KT trong huyết

tương ban đầu càng nhiều thì rõ ràng độ phóng xạ này sẽ càng lớn.

Cuối cùng so sánh độ phóng xạ đó với tiêu chuẩn sẽ cho ta kết luận về mức độ dị ứng của người bệnh đối với KN.

3/ Bác sĩ, hoặc chuyên gia kết luận.