Vdi kel qua cùa càc qui trình diéu tra sàng Ige ed he thóng va càc tién bò ve phuong phàp, trong dd trirdc hdt phài ké ddn su phàt trién va àp dung càc phuong phàp phàn tich va nhàn dang
Trang 1NGHIÉN CCaj PHÀN LÀP VA THCT H O A T T I N H S I N H HOC, KHÀO SÀT
CÀU TRÙC CÙA MOT SO ANCALOIT TRONO CHI CRIUM
Nguyèn Thi Minh, Tran Bach Ducmg
Khua Hóa hoc Truòng DH KHTN - DHQG Ha Nói
1 Dàt vàn de
Nguón thuc vàt ó Viét Nam rit phong phù va da dang Cho dè'n nay ed trén 7000 loài thuc vàt bàc cao dà dugc bidt dè'n va theo du doàn eùa càc nhà thuc vàt hge thì con so cùa eie loài này co thè dat tói 12.000 loài Trong sÓ dd hon 2000 loài thuc vàt là eie eiy thuóc
Cho tdi nay, màc diu ed nhiéu loài cày dugc dùng làm thud'e chil'a bènb, nhung nhiéu thành phàn trong dd cùng nbu co che' tàc dung cùa chiing vSn con chua dugc bidt rd Diéu do khién cho vièc xàe djnh liéu lugng dugc liéu su dung con tuy tién, va ddi khi nhirng tic diing phu cùa chùng cQng chua dugc lini y diy dù
Trong càc loài thuc vàt ed chùa càc Idp chat khàc nbau nbu: càc Teepen, càc lacton, càc ancaloit, càc cumarin, v.v Riéng trong chi Crinum thudc hge Thùy TiSn ed chira càc ancaloit vdi eie dang ciu true khàc nhaii va rit dae tnmg
Hièn nay trèn thè gidi dà ed trèn 10.000 ancaloit vdi càc ciu trtic khàc nhau dà dugc bidt dén va djnh rd dàe diém [ 11
Hóa hge càc ancaloit quan tàm trude tièn dè'n su phàij làp, nhàn dang, xàe dinh dac diém, ciu tnic va tóng hgp Idp ehit này Vdi kel qua cùa càc qui trình diéu tra sàng Ige ed he thóng va càc tién bò ve phuong phàp, trong dd trirdc hdt phài ké ddn su phàt trién va àp dung càc phuong phàp phàn tich va nhàn dang ed hieu qua (nbu sàc ky Idp mòng, sàe ky long bièu lue cao ) Càc phuong phàp phàn ti'ch vài ly hién dai dugc àp dung de xàe djnh ciu tnic nbu phd cdng huòng tu proton ('H-NMki va eaebon 13 ("C-NMR), phd khdi Immg (MS), eie phuong phàp quang bit ddi xutig, phuong phàp phàn lich ciu triie (nhd tia X)
Dàc biet ly thii là boat tfnh sinh hge cùa rit nhiéu ancaloit Mdt sd ancaloit ed tic dung dugc ly rit man, do vày trude day càc dugc liéu chira ancaloit boac càc djch ehié't thuóc ngàm rugu cùa chùng va ngày nay càc ehit tinh khiét là bd phàn viìng chàe cùa kho tàng thuóc chùa bénh
Càc ancaloit con là nhùng ehit màu (model) ly tudng cho vice phàt trién vd so Ioai thuóc tóng hgp Nhiéu loài ed chùa ancaloit va dugc su dung trong nén y hge dàn tdc Viét Nam dd chira nhiéu bénh ed két qua [2]
Càc loài thudc hg Thùy Tiòn mgc d Viét Nam nbu cày Nàng Hoa tràng (Crinum
asiaticum Linn.), cày Nàng Hoa dd [Crimini amabile Donn.), cày hoa Loa Kèn (Kippeastrium equestre Herb.), cày hoa Thùy Tién (Narcissus tazetta Linn.) Chùng hiu hdt ed hoa dep nén
tróng dd làm eành
Mdt SÓ loài Thùy Tién cdn dugc su dung trong y hge din tdc Viét Nam Thi du Nàng Hoa tràng va Nàng Hoa dd dugc dùng de chùa benh thip khdp Ngudi ta dùng là nàng ho ndng
164
Trang 2dd chffa bong gin khi ngà hoàe tip thd thao Ò mot sd vùng ngudi ta dùng djch nude dun sdi cùa càc cày này dd xù ly ben ngoài khi chùa bénh tri Ngoài ra djch nude ép eùa ré nàng dugc dùng làm chat gay non ma khdng gay tàc dung phu hoàe làm thud'e chùa viém tai
Chi Crinum thudc hg Thùy Tién (Amarryllidaceae) Càc loài thudc hg này dà dugc bidt dèh bòi su ed màt cùa càc ancaloit dàc trung Cho ddn nay, dà ed khoàng 150 loài thudc 36 ehi cùa hg này dà dugc nghién cùu ve thành phin ancaloit trèn 1000 ancaloit khàc nhau ve ciu tnic bao góm 12 kiéu vòng dà dugc phin làp tu nhùng bd phàn khàc nhau vào càc giai doan phàt trién khàc nhau cùa eie loài thudc hg Amarryllidaceae
Chi Crinum là dai dién thuc thu cùa hg Thùy Tién (Amanyllidaceae) vi ehi này thè hién
tit cà nhirng net chinh ve màt hda hge eùa hg cày Vi vày, càc tnic eùa càc Crinum ancaloit màc diu khàc nhau nhung chùng déu din xuit tu 3 nhàn co bàn là N-(3,4 - dioxybenzyI)4oxyphenethylamin (vi du norbelladin 1), pyrrolo/de/phenanthridin (vi du lycorin 2) va 5,10b -ethanophenanthridin (vi du vitamin/(-)-erinin 3) [6]
MO
'H
,011
Boat tinh sinh hge eùa càc Crinum ancaloit cùng rit ding ehù y Vi du, trong eie nghién cùu in vitro, lycorin làm giàm dàng kd khà nàng song cùa càc té bào khdi u Lycorin - l-O-glucosid vói càc liéu lugng |Lig dà gay ra d càc mùe dd khàc nhau su kich thich gay phin bào batch huyét trong làch chugt Hon nùa chat này ed dd dde cip thip (> 200 mg/kg chudt bach)
Vi vày, lycorin-1-O-gIueosid ed khà nang là mdt tic nhin kieh thi'eh mién djch Ddi vdi eie ancaloit khàc eùa hg Thùy Tién cùng ed nhùng ànb hudng tucfng tu, vi du nbu: dihydro lycorin, pseudolycorin, nareielasin, baemanthamin Càc djch chidt (metanol) eùa nhiéu eiy Amarryllidaceae bao góm cà càc loài Crinum cùng bidu thj boat tfnh diét khuin va diét nim rd rét
Muc dich va nhiém vu eùa dd lai nghién cùu cùa chùng tdi là:
Nghién cùu thành phàn hóa hoc cày Crinum asiaticum (Nàng hoa tràng) Viét Nam Chùng tòi tàp trung vào vièc nghién cùu qui trình phàn làp bòn hgp ancaloit trong eiy nàng hoa tràng va mdt sd phuong phàp phin tich hdn hgp này nhàm thu dugc mot so ancaloit tinh khiét
2 Thuc nghièm
De thuc hién eie nhiém vii cùa de tài rlghièn cùru, chùng tdi dà tién bànb nghién cùu
thành phàn ancaloit ed trong cày Nàng hoa tràng (Crinumasiatieum Linn.) theo càc bude sau (so
dò 1):
Trang 3Sodò 1
Xù Iv màu thuc vàt
;
Chiét tàch tdng ancaloit
ir
Phàn làp riéng biét càc ancaloit tu tdng ancaloit
Phàn tdch tóng ancaloit
La tuoi (30g) va cu tuoi (40kg) cùa cày Nàng hoa tràng (Crinum asiaticum L.) duc»c thu
hai tai Vàn Giang - Hung Yèn vào thàng 11 nam 1998 va de riéng rè Màu dugc tbài nhd, Hong ngoài kbdng khi, sau do sà\ ò 45-50''C dé'n khó rói xay thành b<)t min
Bdt kbò cùa là va cu diri*c ngàm chiét riéng rè b nhiet dd pbòng làn lugt vdi metanol va
axit axetic 2M trong meianol Cac dich chiét duev góp chung rói cà't Ioai dung mói Phàn can dugc bòa tan trong axii axetic 2N, rói chiét làn lum vdi cte dàu hda (kboàng sdi 30-60"C, ete etylic va clorofoc Tiép dd phàn dich nirc'fc - axit dugc kiem hóa veti amorùac, rdi chiét bang clorofoc, sau khi cài Ioai cloroioc thu dirc*c"tóng ancaloit"
Hiéu suat "tdng ancaloit ";
T ù l i : 5g (0,17"'v so \ói khdi lir(<nc là tuiti):
Tir cu: 4,6g fO,!"'." so \ói khdi limii; cu iiroi)
Phàn tàch càc ;incal<Mi
Kbào sàt "tdng an.ilnir cua hi \,! cua cii bang s.ic ky h'tp móngìTLC: silicagel DC -Alufolicn 60 F-5_, (Mcivk 55541; he (-lung mói CHCIy'CH/iH (9: 1, v/\ ): phun Ibufic thù DragendorlT - Munier) cho thu> "iòni: micaloit" cùa là \à cu chùa 14 dé'n 15 thành phàn hién màu da cam rò rct \(ti ihuóc ihir Dragcndcrli - Munier
De phan làch cac "tdng iincaknt" ihìinh càc nhóm riéng biét ed dd phàn circ khàc nhau
chùng Idi dà su dimt: phucnig phàp sÀc ky long già K'K; va gradient dune mdi \('ti thiéi bi
Rackstroem Sepani AB dm'fi x:^c dicu kicn difi'ti day:
- Duìmg ki'nh cól: 25mm;
- Chat hap Ihu: Silicagel Merck W] (cohai (i.()|5-ti.(U0miTii;
- Ty le hdn hcrp can i.K-h '.hai hàp phu = i/.'^n:
- Hdn h(.fp cfin l ln.v dira leu eoi h.niL; ^.ieh uuii ién Silicagel Mcivk 60 (0,015-0,040mm) rói nhói ién dau eòi;
166
Trang 4- He dung mdi rùa giài: eie hdn hgp eùa eté dàu hda (kboàng sdi 30 - 60 "C), (CH3);C0,
CH3OH, trong CHClj, gradien;
- Toc dò rùa giài: 15ml/phùt; lOml/phàn doan
Ké't q u i dà tàch "tóng ancaloit" eùa eù va cùa là thành 3 nhóm ehit: I (ed R, tu 0,95
-0,7), n (R, 0,7 - 0,35) va ffl (R, 0,35 - 0,05) Dugc ky hiéu vdi eù va là thành càc nhdm tuong
ùng là CAI; CA2; CA3 (ddi vdi eù) va LAI; LA2; LA3 (ddi vdi là)
Dd phàn làp riéng biét eie ancaloit tir càc nhdm I, n va DI, chùng tdi dà sir dung phuong
phàp sic k^ còt nhanh thdng thudng (FC) dirdi àp suat - 0,2 bar, vdi chat hip phu silicagel Merck 60 (0,015 - 0,040mm), va càc he dung mdi là eie dàu hoa (khoàng sdi 30 - 60''C), (CH3)2C0, CH3OH, trong CHCI3, gradien
Két qua chùng tdi dà phàn làp dugc bòn ancaloit ky hiéu lan lugt A2, A7, A8 va AIO Càc ancaloit néu trèn dà dugc tinh che bang eàeh két tinh trong dung mdi tbicb hgp, kidm tra dd tinh khiét bang sàe ky Idp mdng (silicagel, bè dung mdi I, thuóc thù Dragendorft -Munier) va kbào sàt phó khdi lugng (EI - MS, 70 eV) xàe djnh so bd phàn tu lugng
Khào sàt so bd tinb kbàng khuin, khàng n&i eùa càc tóng ancaloit
Hoat tfnh khàng khuin - khàng nam eùa càc "tdng ancaloit" dugc xàe djnh bang ky thuàt khuyéch tàn trén mdi trudng dàc Càc "tdng ancaloit" dugc tim trén khoanh giiy sàe ky so 5 (N°5) v i dàt trén màt dia thach dinh dudng dà trdn nhù dich vi khuàn - vi nam ed to'" - 10^ té bào/ml ty le 1% so vdi mdi trudng Chùng tdi dà tién hành thù tàc dung eùa càc "tóng ancaloit" trén 5 chùng vi khuin gram (-); 5 chùng vi kbuan (+) va hai chùng vi nim
Két qua dà djnh dugc tàc dung ire che ro rét cùa càc can "tónganealoit" CA ddi vdi càc
chùng vi khuin Bacillus subtilis, Sacrina lutea, Staphylocociis aurens, Eschericha coli va LA ddi vói e i e chùng vi khuin Sacrina lutea, Escerichia coli
3 Két luàn
Trong q u i trình tbirc hién de tài nghién cùu, chùng tdi dà thu dugc mdt sd két qua sau
day:
1 Dà àp dung ed cài tién qui trình chiét ddi vdi ancaloit nói chung dd ehié't tàeh càc ancaloit ed trong eiy Nàng hoa tràng (Crinum asiaticum Linn ), chùng tdi dà thu dugc tdng ancaloit tu eie màu là, eù cày va lycorin (là mot Crinum ancaloit ehù yéu)
2 Bang càc phuong phàp sàe ky hién dai:
- Sàe ky Idp mòng (SKLM),
Sic ky Idng già toc vi gradient dung mdi (Aeeelerating gradient ehromatography -AGC),
- Sàe ky long cdt nhanh (FC), chùng tdi dà phàn làp dugc bd'n (04) ancaloit tinh khiét tu càc tóng ancaloit cùa eù v i là cày
3 Càc ancaloit này dà dugc két tinh phàn doan vdi càc dung mdi khàc nhau va xàe djnh
so bd phin tu lugng bang phuong phàp quang phd khdi lirgng (MS)
4 Két qua thù tàc dung khàng khuin, khàng nam cùa càc can tdng ancaloit (CA va LA) cho thiy:
-I- Dói vdi can tóng ancaloit CA ed nóng dò lOmg/ml ed khà nàng ùc che e i e chùng vi
khuin nbu: Bacillus subtilis, Sacrina lutea, Staphylocociis aurens, Escherichia coli
Trang 5+ Vói càn tóng ancaloit LA co nóng dd 10 mg/mi ed khà nàng ùc che' càc chùng
vi khu^n nhu: Sorcina lutea, Escherichia coli
Tài liéu tham khào
1 Le Tran Chi'n, VQ Vàn Chuyén, Tran Hgp, Dja ly càc hg cày b Viét Nam
-NXB Khoa hge va ky thuàt, bang 177, 1987
2 Vù Vàn Chuyén, Phin Ioai thuc vit bac cao, tip II, trang 224, NXB Y hge Ha Nói, 1971
3 v a Vàn Chuyén, Vò Vàn Chi, Pham Nguyén Hong, Tran Hgp, Le Khà Ké', Dò Tit Lgi, Thài Vàn Chùng (ehù bién Le Khà Ké), Cày co thudng thiy d Viét Nam, tàp V, trang 19, NXB Khoa hoc va ky thuàt, 1975
4 Pham Hoàng Ho, Cày co mién Nam Viét Nam, quyén II, trang 627, 628, 1972
5 Dò Tit Lgi, Nhùng eiy thuóc va vj thuóc Viét Nam, trang 770-773, NXB Khoa hoc Ha Nói 1969
6 Ghosal S., Saini K S and Razdan S., Phylochemistry 1985, 24, 2141
171