nghiên cứu một số công thức phối hợp cao dược liệu có tác dụng giảm cân

SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ THÀNH ĐOÀN TP. HỒ CHÍ MINH TP. HỒ CHÍ MINH CHƯƠNG TRÌNH VƯỜN ƯƠM SÁNG TẠO KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ X * W B B Á Á O O C C Á Á O O N N G G H H I I Ệ Ệ M M T T H H U U NGHIÊN CỨU MỘT CÔNG THỨC PHỐI HỢP CAO DƯỢC LIỆU CÓ TÁC DỤNG GIẢM CÂN Chủ nhiệm đề tài: NGUYỄN ĐỨC HẠNH Cơ quan chủ trì: TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ 2 LỜI GIỚI THIỆU Chè xanh và Sen đã được sử dụng trong nhiều bài thuốc giảm cân, chống béo phì. Tuy nhiên, độc tính và tác dụng giảm cân khi phối hợp hai dược liệu này vẫn chưa được nghiên cứu. Đề tài nghiên cứu phối hợp cao chiết xuất từ hai dược liệu trên vào thức ăn với tỷ lệ cao chiết 3% (CTa), 5% (CTb) và nghiên cứu tác dụng giảm cân của hai công thức này trên chuột nhắt với chế ăn độ giàu chất béo (HF). Chuột Swiss albino đực trở nên béo phì sau 4 tuần cho ăn thức ăn giàu chất béo so với nhóm chuột cho ăn thức ăn thường. Sau 9 tuần thử nghiệm, chuột được cho ăn theo CTa và CTb giảm cân đáng kể so với chuột ăn thức ăn giàu chất béo. Kết quả nghiên cứu cho thấy hai công thức này không biểu hiện độc tính cấp ngay khi dùng liều 6g/kg (liều cao nhất có thể cho chuột uống) và CTa, CTb có tác dụng giảm cân và chống béo phì. INTRODUCTION Camellia sinensis and Nelumbo nucifera have been mentioned to be beneficial for the suppression of obesity. However, the effect and toxicity of a combination of these plants still remain unclear. In this study, formula a (CTa) and b (CTb) were prepared from extracts of above-mentioned plants. Anti-obesity effects of these two formulae were investigated in the mice fed on a high-fat (HF) diet. Male Swiss albino mice became obese by feeding the HF diet over 4 weeks compared to normal diet group. Mice fed on HF containing 3% (CTa) and 5% (CTb) gained significantly less body weight than that of control animal fed on HF diet alone during a 9-week experimental period. Acute toxicity study of these formulae revealed normal behaviour and no mice was dead even at 6g/kg (highest dose that could be administered through oral route for mice). Our results suggest that CTa may be useful in the treatment of obesity and related disorders as anti-obesity agents. 3 MỤC LỤC MỤC LỤC 3 DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT 4 DANH SÁCH BẢNG 5 DANH SÁCH HÌNH 7 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN 8 1.1. TỔNG QUAN VỀ THỪA CÂN VÀ BỆNH BÉO PHÌ 8 1.2. TỔNG QUAN VỀ CHÈ XANH VÀ LÁ SEN 11 1.3. PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐỘC TÍNH CẤP 19 1.4. CÁC MÔ HÌNH THỬ TÁC DỤNG CHỐNG BÉO PHÌ 21 CHƯƠNG 2. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 24 2.1. NGUYÊN VẬT LIỆU 24 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 36 3.1. KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU 36 3.2. KẾT QUẢ CHIẾT XUẤT VÀ TIÊU CHUẨN HÓA CAO 47 3.3. THỬ NGHIỆM ĐỘC TÍNH CẤP CỦA CÔNG THỨC PHỐI HỢP CAO DƯỢC LIỆU TRÊN CHUỘT 57 3.4. THỬ NGHIỆM TÁC DỤNG GIẢM CÂN CỦA CÔNG THỨC PHỐI HỢP CAO DƯỢC LIỆU TRÊN CHUỘT 59 3.5. KẾT QUẢ THỬ NGHIỆM ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN 65 CHƯƠNG 4. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO 77 4 DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT BMI Body Mass Index DĐVN III Dược điển Việt Nam III FDA Food and Drug Administration LD 50 Lethal Dose 50 NICE Nation Institute of Clinical Excellence SEM Standard Error of Mean UV Ultra Violet HF High-fat TT Thuốc thử 5 DANH SÁCH BẢNG Bảng 2.1. Các hành vi của chuột cần chú ý trong thời gian theo dõi 30 Bảng 2.2. Thành phần của 100 g thức ăn chuột 32 Bảng 3.1. Dự thảo tiêu chuẩn lá Chè xanh 40 Bảng 3.2. Độ ẩm của lá Sen 44 Bảng 3.3. Tỷ lệ tạp chất của lá Sen 44 Bảng 3.4. Tỷ lệ vụn nát của lá Sen 44 Bảng 3.5. Hàm lượng alkaloid toàn phần của lá Sen 46 Bảng 3.6. Kết quả chiết xuất của các dược liệu 47 Bảng 3.7. Độ tan trong nước của cao Chè xanh và lá Sen 49 Bảng 3.8. Độ tan trong EtOH 96% của cao Chè xanh và lá Sen 49 Bảng 3.9. Độ ẩm của cao Chè xanh và lá Sen 50 Bảng 3.10. Độ tro toàn phần của cao Chè xanh và lá Sen 50 Bảng 3.11. Tro không tan trong HCl của cao Chè xanh và lá Sen 50 Bảng 3.12. Hàm lượng tannin trong cao Chè xanh 53 Bảng 3.13. Hàm lượng tannin và alkaloid trong cao lá Sen 54 Bảng 3.14. Dự thảo tiêu chuẩn cao Chè xanh 55 Bảng 3.15. Dự thảo tiêu chuẩn cao lá Sen 56 Bảng 3. 16. Kết quả thử nghiệm độc tính cấp đường uống 57 Bảng 3.17. Theo dõi cân nặng chuột nhóm 1 59 Bảng 3.18. Theo dõi cân nặng chuột nhóm 2 60 Bảng 3.19. Theo dõi cân nặng chuột nhóm 3 60 Bảng 3.20. Theo dõi cân nặng chuột nhóm 4 61 Bảng 3.21. Theo dõi cân nặng chuột nhóm 5 61 Bảng 3.22. Khối lượng trung bình của các nhóm chuột thử nghiệm 62 6 Bảng 3.23. Thể trọng chuột trong thử nghiệm độc tính mãn 66 Bảng 3.24. Đánh giá chức năng gan khi sử dụng cao dược liệu 66 Bảng 3.25. Đánh giá chức năng thận khi sử dụng cao dược liệu 67 Bảng 3.26. Đánh giá ảnh hưởng của cao dược liệu đến thông số triglycerid.68 Bảng 3.27. Đánh giá ảnh hưởng của cao dược liệu lên thông số bạch cầu 68 Bảng 3.28. Đánh giá ảnh hưởng của cao dược liệu lên thông số hồng cầu 69 Bảng 3.29. Đánh giá ảnh hưởng của cao dược liệu lên thông số của tiểu cầu70 7 DANH SÁCH HÌNH Hình 1.1. Dược liệu Chè xanh 11 Hình 1.2. Dược liệu Sen 16 Hình 2.1. Chuột được nuôi trong lồng với đầy đủ thức ăn và nước uống 24 Hình 2.2. Dụng cụ đun hồi lưu (a) và máy cô quay chân không (b) 25 Hình 2.3. Sơ đồ quy trình chiết xuất dược liệu Chè xanh 26 Hình 2.4. Sơ đồ quy trình chiết xuất dược liệu lá Sen 27 Hình 3.1. Lá Chè xanh 36 Hình 3.2. Vi phẫu phiến lá Chè xanh 37 Hình 3.3. Các thành phần trong vi phẫu phiến lá Chè xanh 37 Hình 3.4. Các cấu tử soi bột lá Chè xanh 38 Hình 3.5. Lá Sen khô 41 Hình 3.6. Vi phẫu lá Sen. 42 Hình 3.7. Các thành phần trong vi phẫu lá Sen 42 Hình 3.8. Các cấu tử soi bột lá Sen 43 Hình 3.9. Cao Chè xanh 48 Hình 3.10. Cao lá Sen 48 Hình 3.11. Sắc ký lớp mỏng của cao Chè xanh (a) và lá Sen (b) 52 Hình 3.12. Vi phẫu gan một mẫu đại diện của lô chứng và lô thử 71 Hình 3.13. Vi phẫu thận một mẫu đại diện của lô chứng và lô thử 72 8 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN 1.1. TỔNG QUAN VỀ THỪA CÂN VÀ BỆNH BÉO PHÌ Thừa cân và béo phì là những rối loạn dinh dưỡng thường gặp ở các quốc gia trên toàn thế giới. Vấn đề này làm cho chất lượng cuộc sống của người bệnh bị giảm sút và tạo gánh nặng khổng lồ trên hệ thống chăm sóc sức khỏe [7,14]. Nhiều bằng chứng cho thấy thừa cân và béo phì có liên quan mật thiết đến nguy cơ mắc phải các bệnh mạch vành, lo ạn lipid huyết, không dung nạp glucose, kháng insulin và tăng huyết áp [7,17,20]. Do đó, nhiều quốc gia đã xem chương trình phòng chống thừa cân và béo phì là biện pháp cơ bản để phòng ngừa các bệnh nói trên. Một người gọi là béo phì khi có BMI ≥ 25 đối với người Châu Á, hay BMI ≥ 30 đối với người Châu Âu (Chỉ số BMI được tính bằng cân nặng (kg) chia bình phương chiều cao (m 2 )) [7,22]. Hiện nay, ở Việt Nam nói riêng và trên toàn thế giới nói chung, tỷ lệ người thừa cân và béo phì đang tăng nhanh đến tốc độ báo động. Trên thế giới, hiện nay có khoảng 1 tỷ người thừa cân và hơn 300 triệu người béo phì. Tỷ lệ béo phì tăng từ 10 – 40% trên hầu hết các quốc gia ở Châu Âu trong suốt thập kỷ qua [7,20]. Sự tăng trưởng kinh tế, tốc độ đô thị hóa, sự thay đổi lối sống,… đang làm tỷ lệ thừa cân và béo phì tăng lên nhanh chóng bởi những nguyên nhân sau : + Công nghiệp hóa, đô thị hóa và cuộc cách mạng công nghệ đã mang lại nhiều thuận tiện cho con người, làm giảm tiêu thụ năng lượng cần thiết cho sinh họat hằng ngày. Tuy nhiên, những những thuận tiện này lại làm mất đi điều kiện họat động thể lực. 9 + Sự gia tăng thu nhập năng lượng do tăng sự sẵn có của thức ăn ngon, giá rẻ, nhiều chất béo và năng lượng. Hai nguyên nhân trên đã làm lệch cán cân cung – cầu năng lượng, dẫn đến tình trạng thừa cân và béo phì – căn bệnh của "thế kỷ tự động hóa". Một số phương pháp hiện đang được sử dụng để quản lý và điều trị thừa cân và béo phì gồm: chế độ ăn, họat động thể lực, sử dụng thuốc và phẫu thuật. Việc giảm cân đem lại các lợi ích: + Giảm nguy cơ tử vong và bệnh tật kết hợp với béo phì. Nhiều nghiên cứu cho thấy giảm 10 kg cân nặng dẫn tới: Giảm 20 – 25% tỷ lệ tử vong chung Giảm 30 – 40% tỷ lệ tử vong liên quan đến đái tháo đường Giảm 40 – 50% tỷ lệ t ử vong do ung thư liên quan đến béo phì. + Việc giảm nhẹ từ 5 – 10% cân nặng so với trước can thiệp góp phần cải thiện các rối loạn sức khỏe đi kèm như đái tháo đường tuýp 2, tăng huyết áp, bệnh tim mạch và kéo dài tuổi thọ [7,19]. Hiện nay, loại thuốc được cả FDA và NICE công nhận dùng để điều trị béo phì trong thời gian dài là orlistat (Xenical) và sibutramin (Reductil, Meridia). Ngoài ra, còn có rimonabant (Acomplia) đang được FDA xem xét để sớm đưa ra thị trường. Các thu ốc này cho phép duy trì giảm cân khoảng 10% trong 1 – 2 năm. Tuy nhiên, nhiều tác dung phụ đã được ghi nhận và thường làm bệnh nhân ngừng sử dụng thuốc và không hợp tác điều trị [17,20,22]. Trong khi đó, Chè xanh và lá Sen đã được sử dụng trong rất nhiều bài thuốc giảm cân cổ truyền. Dịch chiết từ lá Sen có tác dụng ngăn cản hoạt động của 10 α – amylase và lipase, làm giảm hấp thu lipid và tăng chuyển hóa lipid, điều hòa sự tiêu thụ năng lượng [25]. Chè xanh giúp tăng cường năng lực phân giải mỡ thừa và thúc đẩy phản ứng oxy hoá của mỡ, làm tăng sử dụng năng lượng và giúp giảm cân. Các catechin trong Chè xanh có khả năng ức chế hoạt động của các men phân giải mỡ của dạ dày và tuyến tụy, do đó giảm sự nhũ hoá, phân giải và hấp thu chất béo. Cafein trong Chè có thể tăng cường hoạt động của các polyphenol trên tác dụng kiểm soát cân nặng và tích luỹ năng lượng [12,23]. Với những tác dụng trên Chè xanh và lá Sen đã và đang được sử dụng rộng rãi để điều trị thừa cân và béo phì ở nhiều quốc gia trên thế giới [12,23,24, 25]. Tuy nhiên, tác dụng chống béo phì của các dược liệu này chỉ được nghiên cứu khi dùng riêng lẻ. Việc phối hợp các cao chiết d ược liệu duy trì tác dụng chống béo phì và giảm độc tính thì chưa được nghiên cứu. Kết quả nghiên cứu của đề tài sẽ góp phần giải quyết một vấn đề xã hội - y tế ngày càng phát triển, giúp ngăn ngừa các bệnh nguy hiểm (đái tháo đường, bệnh mạch vành, cao huyết áp, cao lipid máu, thấp khớp…) trong cộng đồng, góp phần nâng cao năng suất lao động xã hội do giảm số người béo phì, tiết kiệm ngoạ i tệ nhập khẩu thuốc trị béo phì. Hơn nữa, đề tài thành công sẽ góp phần nâng cao khả năng sử dụng nguồn dược liệu, thế mạnh của đất nước, trong việc bảo vệ và chăm sóc sức khoẻ cộng đồng. [...]... cao dược liệu (cao Chè xanh : cao lá Sen = 1:1) CT b: HF + 5% cao dược liệu ( cao Chè xanh : cao lá Sen = 1: 1) 32 Đánh giá kết quả Các số liệu được trình bày dưới dạng: TB ± SEM Sử dụng phần mềm thống kê SPSS ver 13 để thống kê các số liệu Phân tích các số liệu bằng phép kiểm Kolmogorov-Smirnov cho thấy có sự phân bố không bình thường ở một số dãy số liệu Do đó, việc thống kê trong đề tài này sử dụng. .. nhận số súc vật chết trong từng lô, lập bảng phân suất tử vong Xét nghiệm đại thể ngay sau khi chết đối với chuột bị chết và làm xét nghiệm đại thể sau khi kết thúc thử nghiệm đối với súc vật còn sống Xác định LD50 theo phương pháp Karber-Behrens 31 2.2.6 THỬ NGHIỆM TÁC DỤNG GIẢM CÂN CỦA CÔNG THỨC PHỐI HỢP CAO DƯỢC LIỆU TRÊN CHUỘT [21] Nguyên tắc Trộn cao dược liệu vào thức ăn gây tăng cân, theo dõi tác. .. có những trường hợp không xác định LD50 Có nhiều thuốc cho uống với liều rất cao mà con vật không chết Một con chuột nhắt, chỉ có thể cho uống với thể tích tối đa một lần là 1ml Cao dược liệu chỉ có thể cô đến một mức độ nào đó, nếu cô quá sẽ thành cao đặc và không thể qua kim để cho uống được Kết quả có thể gặp hai trường hợp: Trường hợp 1 Đã thử đến liều có động vật thí nghiệm chết, nhưng không có. .. kết quả: dịch chiết và alkaloid toàn phần của lá Sen có tác dụng an thần, tăng trương lực và co bóp cơ tử cung thỏ, chống co thắt cơ trơn ruột gây ra bởi histamin và acetylcholin Lá Sen có tác dụng chống choáng phản vệ, tác dụng an thần của lá Sen mạnh hơn tâm 17 Sen Lá Sen có tác dụng bảo vệ đối với các loạn nhịp tim Cao cồn có tác dụng mạnh hơn cao nước, cơ chế là do tăng ngưỡng kích thích tâm trương... TIÊU CHUẨN HÓA CAO DƯỢC LIỆU Các cao dược liệu được tiêu chuẩn hóa với các chỉ tiêu: - Độ tan trong nước - Độ tan trong cồn cao độ - Độ ẩm - Tro toàn phần - Tro không tan trong acid hydrochloric - Định tính - Định lượng 27 2.2.5 THỬ NGHIỆM ĐỘC TÍNH CẤP CỦA CÔNG THỨC PHỐI HỢP CAO DƯỢC LIỆU TRÊN CHUỘT [4,6] Điều kiện thí nghiệm Thuốc thử nghiệm: các bột cao được hòa vào trong nước cất Dụng cụ thí nghiệm:... nghiệm dược lý ban đầu có thể bằng 1/5 Dmax hoặc lớn hơn Dmax là tùy theo kinh nghiệm của nhà nghiên cứu dược lý 1.4 CÁC MÔ HÌNH THỬ TÁC DỤNG CHỐNG BÉO PHÌ [15] Để thử tác dụng các thuốc điều trị tăng cân và béo phì, một số phương pháp đã được xây dựng với các mô hình sau: 1.4.1 GÂY BÉO PHÌ BẰNG THỨC ĂN Béo phì được gây ra trên chuột bởi chế độ ăn chứa dầu bắp và sữa đặc Chuột được chia thành 2 nhóm: một. .. trương và giai đoạn trơ của tâm nhĩ và tâm thất LD50 của cao lá Sen tiêm phúc mạc trên chuột nhắt trắng là 17 mg/kg thể trọng Alkaloid toàn phần của lá Sen có tác dụng ức chế loạn nhịp tim thực nghiệm, tác dụng này có phần tốt hơn cả ajmalin Nuciferin có tác dụng an thần kéo dài giấc ngủ gây bởi pentobarbital trên chuột nhắt trắng Trên điện não, có tác dụng tăng cường quá trình ức chế trong các tế bào thần... nuciferin là alkaloid chính Ngoài ra còn có quercetin, isoquercetin, leucocyanidin, leucodelphinidin nelumbosid, tannin, vitamin C và acid hữu cơ Tác dụng dược lý Lá Sen có tác dụng ngăn cản hoạt động của α – amylase và lypase, làm giảm hấp thu lipid và carbohydrat, tăng chuyển hóa lipid, điều hòa lên sự tiêu thụ năng lượng, do đó, có tác dụng chống béo phì [25] Các nghiên cứu trên Sen ở Việt Nam cho kết quả:... tim, lợi tiểu và kích thích ăn ngon Hàm lượng fluor khá cao trong Chè tốt cho răng, Chè tươi có vitamin C cao giúp cơ thể tăng sức đề kháng, một số chất có tác dụng của vitamin P (flavonol và polyphenol), giúp bền thành mạch Công dụng Dùng trong các trường hợp: tinh thần mệt mỏi, ngủ nhiều, đau đầu, mắt mờ, sốt khát nước, tiểu tiện không lợi, ngộ độc rượu, béo phì Thường dùng lá Chè tươi nấu nước uống... nhận thấy vào tuần tuổi thứ ba [16] 23 CHƯƠNG 2 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU 2.1.1 DƯỢC LIỆU Lá Sen được thu mua tại Công ty cổ phần Dược liệu Trung Ương 2 - số 24, Nguyễn Thị Nghĩa, Quận 1 Chè xanh mua tại chợ Tân Bình, thành phố Hồ Chí Minh Các dược liệu được lưu mẫu tại ban khoa Dược, Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh 2.1.2 SÚC VẬT Chuột nhắt đực trắng (chủng Swiss abino, 5 – 6 . được sử dụng trong nhiều bài thuốc giảm cân, chống béo phì. Tuy nhiên, độc tính và tác dụng giảm cân khi phối hợp hai dược liệu này vẫn chưa được nghiên cứu. Đề tài nghiên cứu phối hợp cao chiết. 47 3.3. THỬ NGHIỆM ĐỘC TÍNH CẤP CỦA CÔNG THỨC PHỐI HỢP CAO DƯỢC LIỆU TRÊN CHUỘT 57 3.4. THỬ NGHIỆM TÁC DỤNG GIẢM CÂN CỦA CÔNG THỨC PHỐI HỢP CAO DƯỢC LIỆU TRÊN CHUỘT 59 3.5. KẾT QUẢ THỬ. NGHIÊN CỨU MỘT CÔNG THỨC PHỐI HỢP CAO DƯỢC LIỆU CÓ TÁC DỤNG GIẢM CÂN Chủ nhiệm đề tài: NGUYỄN ĐỨC HẠNH Cơ quan chủ trì: TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CÔNG