tình hình bệnh streptococcosis trên cá rô phi và thử nghiệm trị bệnh cho cá ở hải phòng

Bảng 2.4 Bố trí thí nghiệm để xác định khả năng gây bệnh ở cá rô phi của chủngStreptococcus agalactiae...18 Bảng 2.5 Liều kháng sinh dùng để trị bệnh streptococcosis cho cá rô phi nuôi ở

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG

-o0o -NGUYỄN THÚY HẰNG

TÌNH HÌNH BỆNH STREPTOCOCCOSIS TRÊN CÁ RÔ PHI VÀ THỬ

NGHIỆM TRỊ BỆNH CHO CÁ Ở HẢI PHÒNG

LUẬN VĂN THẠC SĨ

NHA TRANG - 2014

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG

-o0o -NGUYỄN THÚY HẰNG

TÌNH HÌNH BỆNH STREPTOCOCCOSIS TRÊN CÁ RÔ PHI VÀ

THỬ NGHIỆM TRỊ BỆNH CHO CÁ Ở HẢI PHÒNG

Chuyên ngành: Nuôi trồng thủy sản

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi Các số liệu, kết quả được nêu trong luận văn là hoàn toàn trung thực và chưa từng được công bố trong bất kỳ một công trình nghiên cứu nào khác Đồng thời tất cả các thông tin trích dẫn trong luận văn đều đã được chỉ rõ nguồn gốc

Tác giả

Nguyễn Thúy Hằng

LỜI CẢM ƠN

Tôi xin trân trọng gửi lời cảm ơn tới: Ban giám hiệu trường Đại học Nha Trang, Ban lãnh đạo Viện nghiên cứu Hải Sản, Hải Phòng, Khoa sau đại học - Trường Đại học Nha Trang, Phòng đào tạo – Viện nghiên cứu Hải Sản, Trường Trung cấp nghề Thủy sản Hải Phòng đã giúp đỡ tôi hoàn thành khóa học này.

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc nhất tới PGS.TS Đỗ Thị Hòa –Đại học Nha Trang là người đã định hướng và trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ tôi hoànthành luận văn này

Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám đốc và các anh chị em cơ quan thú y vùng II– Cục thú y – Hải Phòng, Ban giám hiệu trường Trung cấp nghề Thủy sản đã tạo mọiđiều kiện tốt nhất để tôi hoàn thành khóa học cũng như thực hiện đề tài

Tôi xin được bày tỏ lòng kính trọng, biết ơn chân thành tới các thầy cô giáotrường Đại học Nha Trang, trong suốt hai năm học tôi đã được sự quan tâm dạy dỗ vàdìu dắt tận tình của các thầy cô giáo

Nhân đây, tôi xin gửi lời cảm ơn tới tất cả các bạn bè đồng nghiệp và các thànhviên trong gia đình những người đã góp ý chân thành, giúp đỡ động viên tôi trong suốtthời gian tôi thực hiện luận văn này

Tác giả

Nguyễn Thúy Hằng

MỤC LỤC

LỜI CAM ĐOAN i

LỜI CẢM ƠN ii

MỤC LỤC iii

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v

DANH MỤC BẢNG v

DANH MỤC HÌNH vii

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 Một số đặc điểm sinh học của cá rô phi 3

1.1.1 Nguồn gốc 3

1.1.2 Phân loại 3

1.1.3 Đặc điểm môi trường sống và dinh dưỡng 4

1.2 Tình hình nuôi cá rô phi 4

1.2.1 Trên thế giới 4

1.2.2 Ở Việt Nam 6

1.3 Tình hình nghiên cứu dịch bệnh ở cá rô phi 7

1.3.1 Nghiên cứu của thế giới về bệnh streptococcosis ở cá rô phi 7

Hình 1.1: Tác nhân gây bệnh trên cá rô phi ở các giai đoạn nuôi 10

Bảng 1.1: Vi khuẩn gây bệnh trên cá rô phi nuôi tại khu vực Đông Nam Á (Labrie, 2007) 10

1.3.2 Tình hình nghiên cứu dịch bệnh cá rô phi ở trong nước 10

CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13

2.1 Thời gian, địa điểm và đối tượng nghiên cứu 13

2.1.1 Thời gian nghiên cứu: Từ 8/2013 đến 10/2014 13

2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 13

2.1.3 Đối tượng nghiên cứu 13

2.2 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 13

2.3 Vật liệu dùng cho nghiên cứu 14

2.4 Phương pháp nghiên cứu: 15

2.4.1 Phương pháp điều tra tình hình bệnh streptococcosis ở cá rô phi 15

Bảng 2.2 Phân bố số mẫu điều tra (N=50) 15

2.4.2 Phương pháp kiểm tra độ nhạy với kháng sinh của chủng vi khuẩn Streptococcus agalactiae 15

Bảng 2.3: Đánh giá đường kính vòng vô khuẩn chuẩn 16

2.4.3 Xác định khả năng gây bệnh ở cá rô phi của chủng S agalactiae 17

Bảng 2.4: Bố trí thí nghiệm để xác định khả năng gây bệnh ở cá rô phi của chủng Streptococcus agalactiae 17

2.4.4 Phương pháp bố trí trị bệnh cho cá rô phi trong điều kiện thí nghiệm 17

2.4.5 Trị bệnh streptococcosis cho cá rô phi ở ao nuôi 19

Bảng 2.5 Liều kháng sinh dùng để trị bệnh streptococcosis cho cá rô phi nuôi ở 2 ao nuôi thương phẩm tại Hải Phòng 20

2.5 Phương pháp xử lý số liệu 20

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 21

3.1 Tình hình dịch bệnh streptoccocosis gây ra trên cá rô phi nuôi tại Hải Phòng 21

3.1.1 Tình hình bệnh streptoccocosis ở cá rô phi nuôi trong giai đoạn 2011-2013 21

Bảng 3.1: Thông tin về bệnh streptococcosis ở cá rô phi nuôi tại Hải Phòng 21

3.1.2 Kết quả điều tra trực tiếp từ các nông hộ 22

Bảng 3.3 Mùa vụ, kích cỡ cá thường bị bệnh và tác hại của bệnh streptococcosis ở cá rô phi (n=41) 23

Bảng 3.5: Các biện pháp phòng bệnh cho cá rô phi tại Hải Phòng (n=50) 27

3.2 Khả năng gây bệnh cho cá rô phi của chủng vi khuẩn Streptococcus agalactiae 28

Bảng 3.6 Độ dài trung bình (n=3 ) của đường kính vòng vô khuẩn của các loại kháng sinh với

chủng Streptococcus agalactiae 29

Bảng 3.7 Các loại kháng sinh có độ mẫn cảm cao với vi khuẩn S agalactiae 30

3.3 Sự mẫn cảm của vi khuẩn Streptococcus agalactiae với các loại kháng sinh 30

Hình 3.3 Tỷ lệ (%) cá rô phi chết tích lũy trung bình sau thí nghiệm cảm nhiễm chủng vi khuẩn Streptococcus agalactiae 31

3.4 Kết quả thí nghiệm trị bệnh strepptococosis cho cá rô phi 33

3.5 Kết quả trị bệnh streptococcosis cho cá rô phi nuôi trong ao nuôi 34

3.5.1 Kết quả thử nghiệm trị bệnh cho cá rô phi tại Xã Tú Sơn, Kiến Thụy 34

Bảng 3.8 Một vài chỉ số môi trường ao nuôi cá rô phi bị bệnh 36

3.5.2 Kết quả thử nghiệm trị bệnh cho cá rô phi tại Xã Ngũ Đoan, Kiến Thụy 37

Bảng 3.10 Một số yếu tố môi trường ao đang bị bệnh tại ao anh Hùng 38

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 41

1 Kết luận 41

2 Đề xuất ý kiến: 41

TÀI LIỆU THAM KHẢO 42

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT

BHIA Môi trường thạch nuôi cấy vi khuẩn BHIB Môi trường tăng sinh vi khuẩn Ctv Cộng tác viên

DANH MỤC BẢNG

Bảng 1.1 Vi khuẩn gây bệnh trên cá rô phi nuôi tại khu vực Đông Nam Á 10

Bảng 2.1 Các loại đĩa giấy thấm kháng sinh đã sử dụng 14

Bảng 2.2 Phân bố số mẫu điều tra (N=50) 15

Bảng 2.3 Đánh giá đường kính vòng vô khuẩn chuẩn 16

Bảng 2.4 Bố trí thí nghiệm để xác định khả năng gây bệnh ở cá rô phi của chủng

Streptococcus agalactiae 18

Bảng 2.5 Liều kháng sinh dùng để trị bệnh streptococcosis cho cá rô phi nuôi ở 2 aothương phẩm tại Hải Phòng 21Bảng 3.1 Thông tin về bệnh streptococcosis ở cá rô phi nuôi tại Hải Phòng 22Bảng 3.2 Tần số xuất hiện của bệnh streptococcosis tại các nông hộ 23Bảng 3.3 Mùa vụ, kích cỡ cá thường bị bệnh và tác hại của bệnh streptococcosis ở cá

rô phi (n=41) 24Bảng 3.4 Kháng sinh và hóa chất trị bệnh streptococcosis cho cá rô phi nuôi tại HảiPhòng 26Bảng 3.5 Các biện pháp phòng bệnh cho cá rô phi tại Hải Phòng (n=50) 28Bảng 3.6 Độ dài trung bình (n=3) đường kính vòng vô khuẩn của các loại kháng sinhvới chủng S.agalactiae 30

Bảng 3.7 Các loại kháng sinh có độ mẫn cảm cao với vi khuẩn S.agalactiae 31

Bảng 3.8 Một vài chỉ số môi trường ao nuôi cá rô phi bệnh tại ao của bà Vinh 36Bảng 3.9 Kết hợp kháng sinh và hóa chất để trị bệnh streptococcosis ở cá rô phi nuôitrong ao tại xã Tú Sơn và hiệu quả được ghi nhận 37Bảng 3.10 Một số yếu tố môi trường ao nuôi đang bị bệnh tại ao của anh Hùng 38Bảng 3.11 Dùng kháng sinh để trị bệnh streptococcosis ở cá rô phi và hiệu quả trị bệnhtại ao của anh Hùng 39

DANH MỤC HÌNH

Hình 1.1 Tác nhân gây bệnh trên cá rô phi ở các giai đoạn nuôi 10Hình 2.1 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 13Hình 2.2 Mô hình thí nghiệm trị bệnh streptococcosis ở cá rô phi trong điều kiện thínghiệm 19Hình 3.1 Cá rô phi bị bệnh streptococcosis tại ao nuôi ở Thủy Nguyên 29Hình 3.2 Vòng vô khuẩn của các kháng sinh trong đề tài 30Hình 3.3 Tỷ lệ (%) cá rô phi chết tích lũy trung bình sau thí nghiệm cảm nhiễm chủng

MỞ ĐẦU

Trong những năm gần đây, thực hiện chủ trương chuyển dịch cơ cấu sản xuất, một sốhuyện thuộc Hải Phòng như: Thuỷ Nguyên, Tiên Lãng, Kiến Thụy đã tích cực chuyển đổinhiều diện tích đất cấy lúa năng suất thấp sang nuôi trồng thủy sản với những đối tượng

nuôi mới, cho giá trị kinh tế cao như: Cá rô phi – Oreochromis niloticus, cá Diêu hồng Oreochromis sp Nhờ vậy hiệu quả kinh tế trong canh tác nông nghiệp của người nông dân

-ở các vùng nuôi này tiếp tục được nâng cao Trong số các loài cá đang được nuôi phổ biến

ở Hải Phòng, cá rô phi đã thể hiện khả năng phát triển tốt tại các mặt nước nuôi thủy sản ởHải Phòng

Theo thống kê của sở Nông nghiệp & Phát triển nông thôn, đến năm 2012, tại HảiPhòng đã có gần 3000 ha nuôi cá rô phi với sản lượng đạt gần 50.000 tấn/năm 2012 (Báocáo tổng hợp của Sở Nông nghiệp và phát triển nông thôn Hải Phòng năm 2012)

Tuy nhiên, khi diện tích nuôi cá rô phi thâm canh được mở rộng, thì tại đây người nuôi cá

đã phải đối mặt với nhiều loại dịch bệnh khác nhau, đôi khi bệnh bùng phát gây chết cá nuôihàng loạt, ảnh hưởng không nhỏ tới năng suất, sản lượng và hiệu quả kinh tế của nghề này.Qua nghiên cứu, đã chỉ ra rằng các bệnh thường gặp ở cá rô phi nuôi thương phẩm ở HảiPhòng gồm: Các bệnh do vi khuẩn, nấm, hoặc ký sinh trùng, trong đó bệnh streptococcosis do

liên cầu khuẩn gram (+) Streptococcus agalactiae, đã gây thiệt hại lớn cho nghề nuôi cá rô phi

và nghề nuôi cá nước ngọt ở địa phương (Nguyễn Viết Khuê & ctv, 2009)

Trước thực tế đó, việc tìm hiểu tình hình bệnh và nghiên cứu thực nghiệm để tìm ragiải pháp phòng và trị bệnh streptococosis ở cá rô phi nuôi là một nhu cầu cấp thiết củathực tế ở địa phương Vì vậy, để hoàn thành chương trình đào tạo thạc sĩ, tôi được Viện

NTTS, Trường Đại học Nha Trang giao cho thực hiện đề tài: “Tình hình bệnh streptococcosis trên cá rô phi và thử nghiệm trị bệnh cho cá ở Hải Phòng” nhằm góp

một phần vào sự phát triển ổn định nghề nuôi cá rô phi tại Hải Phòng

Mục tiêu của đề tài:

Đánh giá tình hình nhiễm bệnh streptococcosis và thử nghiệm để tìm ra loại kháng

sinh có hiệu quả dùng trị bệnh này ở loài cá rô phi nuôi thương phẩm tại Hải Phòng

Ý nghĩa khoa học của đề tài:

Kết quả nghiên cứu của luận văn đã đưa ra một đánh giá khoa học về tình hìnhbệnh streptococcosis ở cá rô phi nuôi tại Hải Phòng: Vùng nuôi bị bệnh, mùa vụ xuấthiện, giai đoạn phát triển của cá chịu tác hại của bệnh, thiệt hại do bệnh này đã gây ra

cho nghề nuôi cá rô phi ở địa phương Ngoài ra, độ nhạy kháng sinh của loài vi khuẩn

Streptococcus agalactiae là tác nhân gây ra bệnh streptococcosis ở cá rô phi nuôi cũng

đã được xác định

Ý nghĩa thực tiễn của đề tài:

Kết quả của đề tài là cơ sở khoa học cho các giải pháp quản lý và trị bệnh nàytrên cá rô phi nuôi tại địa phương

Các nội dung chính của luận án:

- Điều tra để đánh giá tình hình bệnh streptococcosis gây ra ở cá rô phi nuôi tạiHải Phòng

- Kiểm tra độ nhạy kháng sinh của chủng vi khuẩn thuộc loài Streptococcus agalactiae đã được xác định là tác nhân gây ra bệnh streptococcosis ở cá rô phi.

- Thử nghiệm trị bệnh streptococcosis ở cá rô phi trong điều kiện thí nghiệm bằngloại kháng sinh có độ nhạy cao

- Thử nghiệm trị bệnh streptococcosis trong 2 ao nuôi thương phẩm tại HảiPhòng

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số đặc điểm sinh học của cá rô phi

1.1.1 Nguồn gốc

Cá rô phi có nguồn gốc từ châu Phi, thuộc họ Cichlidae, bộ cá Vược Perciformes.Hiện nay người ta đã biết đến khoảng 80 loài trong đó có khoảng 10 loài có giá trị kinh

tế trong nuôi thủy sản (Magintosh và Little, 1995).

Cá rô phi Oreochromis niloticus được đưa vào nuôi khá sớm, ngay từ năm 1924

ở Ai Cập Sau đó, loài cá này đã được di nhập vào châu Mỹ La Tinh, châu Á và đượcnuôi phổ biến ở những nơi có nhiệt độ ấm áp khác nhau trên thế giới Loài cá rô phi

đen O mossambicus đã được di nhập vào Philippin năm 1950, loài rô phi vằn O niloticus, nhập muộn hơn, năm 1972 (Philippart và Ruwet, 1982). Cá rô phi nuôi ởNhật Bản có nguồn gốc từ Ai Cập, được nhập về quốc gia này năm 1962, trong khi đó,ngay từ năm 1944, cá rô phi đen đã được nhập vào Đài Loan, đến năm 1966 nhập loài

cá rô phi vằn từ Nhật bản (Nguyễn Công Dân và ctv, 1998) Hiện nay, cá rô phi được

nuôi khắp thế giới, với các loài nuôi phổ biến nhất là cá rô phi vằn O niloticus, rô phi xanh O aureus và rô phi đen O mossambicus, trong đó sản lượng nuôi cá rô phi vằn

đang ngày càng tăng cao (Phạm Anh Tuấn, 2002)

Ở Việt Nam, cá rô phi đen được nhập vào miền Bắc từ năm 1951 và cá rô phivằn được nhập vào miền Nam Việt Nam vào năm 1973 từ Đài Loan, đây là loài cókích cỡ lớn, lớn nhanh, cho năng suất cao Đến năm 1977 loài cá này được nuôi ở Việnnghiên cứu Nuôi trồng thủy sản I và các tỉnh miền Bắc Từ năm 1994 đến nay, cá rô

phi vằn O niloticus thuần chủng liên tiếp được nhập vào nước ta từ Đài Loan, Ai Cập,

Thái Lan và Philippine Do vậy, hiện nay, ở Việt Nam đang tồn tại 4 dòng rô phi vằnthuần chủng: dòng GIFT (Philippin), dòng Swansea (Ai Cập), dòng Thái Lan và dòngĐài Loan (Phạm Anh Tuấn, 2002)

1.1.2 Phân loại

Ngành: Chordata

Lớp: ActinopterygiiBộ: PerciformesHọ: CichlidaeGiống: Oreochromis

Loài: Oreochromis niloticus

1.1.3 Đặc điểm môi trường sống và dinh dưỡng

Rô phi là loài cá có nguồn gốc ở vùng nhiệt đới nên khả năng thích nghi với nhiệt

độ cao tốt hơn nhiệt độ thấp Nhiệt độ thích hợp cho cá sinh trưởng và phát triển tốt là

25 – 30oC Rô phi là loài cá phân bố chủ yếu ở nước ngọt nhưng chúng cũng có khảnăng sống và phát triển trong môi trường nước lợ, mặn có nồng độ muối tới 35‰, đây làđặc điểm giúp người ta có thể nuôi cá rô phi ở nhiều loại mặt nước khác nhau (Balarin

và Haller, 1982) Cá rô phi là loài cá có thể chịu đựng được hàm lượng oxy hòa tan thấp

ở mức 1 mg 02/l, nhưng không thể kéo dài khi hàm lượng oxy xuống dưới 0,7mg02/l(Balarin và Haller, 1982) Cá rô phi có khả năng sống trong môi trường nước có biên độ

pH rất rộng, từ 5 - 11, nhưng thích hợp nhất là 6,5 - 8,5 Cá rô phi sẽ chết khi pH củanước giảm thấp ≤ 3,5 hay ≥ 12 sau 2 – 3 giờ (Philipart và Ruwet, 1982)

Rô phi là loài cá ăn tạp, khi còn nhỏ cá ăn sinh vật phù du là chủ yếu, 20 ngàytuổi cá chuyển dần sang thức ăn của loài Cá trưởng thành ăn mùn bã hữu cơ, tảo cácloại, ấu trùng của côn trùng, sinh vật đáy, thực vật thượng đẳng (Zong Linh,1991).Ngoài ra, trong ao nuôi cá rô phi còn có thể ăn các loại thức ăn bổ sung như cám gạo,bột ngô và các phụ phẩm nông nghiệp khác Đặc biệt cá rô phi có thể sử dụng rất hiệuquả thức ăn công nghiệp và thức ăn tự chế biến (Balarin và Haller, 1982) Đây là mộtđặc điểm thuận lợi, giúp cho việc nuôi cá rô phi thâm canh đạt năng suất cao

1.2 Tình hình nuôi cá rô phi

1.2.1 Trên thế giới

Các loài cá rô phi khác nhau có đặc điểm chung là tốc độ lớn nhanh, khả năngchống chịu tốt với điều kiện môi trường bất lợi, ít bệnh tật, dễ tạo nguồn giống nuôibằng con đường nhân tạo Chính vì thế sản lượng cá rô phi trên thế giới đã tăng rấtnhanh trong những năm gần đây

Theo công bố của FAO năm 1995, hiện nay có hơn 100 quốc gia trên thế giớinuôi cá rô phi Sản lượng cá rô phi nuôi đã tăng rất nhanh trong 10 năm gần đây, nếunăm1986 đạt 253 nghìn tấn, năm 1990 đạt 410 nghìn tấn, thì đến năm 1995 đã đạt 659nghìn tấn, tăng sản lượng lên 269% sau 10 năm

Có ba loài cá rô phi được nuôi nhiều nhất trên thế giới hiện nay là rô phi vằn

O.niloticus, rô phi xanh O.aureus và rô phi đen O.mossambicus, sản lượng của 3 loài

này đã chiếm 90% tổng sản lượng có rô phi nuôi của toàn thế giới (Magintosh vàlittle, 1995)

Cũng theo FAO (1996), sản lượng cá rô phi nuôi tập trung chủ yếu ở các quốcgia thuộc châu Á, sản lượng cá rô phi đen nuôi ở khu vực này chiếm 98,1%, cá rô phivằn chiếm 90,2% so với sản lượng nuôi của loài rô phi đó trên toàn thế giới, trong đóvùng Đông Á và Đông Nam Á thực sự đã là quê hương thứ hai của cá rô phi.

Hiện nay, cá rô phi là loài cá được nuôi phổ biến thứ 2 trên thế giới, chỉ đứng sau

loài cá chép Cyprinus carpio (Fitzsimmons và Gonznlez, 2005) Những năm gần đây,

sản lượng cá rô phi nuôi không ngừng tăng lên và ngày càng đóng vai trò quan trọngtrong việc cải thiện nguồn cung cấp dinh dưỡng cho người nghèo và nuôi cá rô phiđược coi là một nghề sinh kế tốt nhất cho nông dân thoát khỏi sự đói nghèo Hiện nay,Trung Quốc là quốc gia có sản lượng cá rô phi đứng đầu thế giới, 710.000 tấn

(Fitzsimmons & Gonzalez, 2005)

Như đã biết, Trung Quốc là quốc gia đứng đầu thế giới về nuôi và tiêu thụ cá rôphi Các hình thức nuôi tại quốc gia này rất đa dạng, từ nuôi ở ao nhỏ sau nhà, nuôiquảng canh, quảng canh cải tiến cho đến thâm canh và siêu thâm canh Quốc gia này

có tốc độ tăng trưởng xuất khẩu cá rô phi nhanh nhất thế giới, năm 2000 tăng gần 3 lần

so với năm liền kề trước đó (1999) Tính đến năm 2011, sản lượng cá rô phi nuôi ởTrung Quốc đạt mức 1,1 – 1,2 triệu tấn/ năm và dự kiến vẫn tiếp tục tăng vào các nămtới (Lisifa,1997)

Tại Philippin, Ðài Loan, sản lượng cá rô phi trung bình đạt 110.000 tấn/ năm Cá

rô phi của Ðài Loan, Philippine và Thái Lan thường xuất khẩu sang thị trường Mỹ vàNhật dưới dạng sản phẩm nguyên con đông lạnh hoặc phi lê Cá rô phi nuôi ởInđônêxia có sản lượng hàng năm đạt khoảng 30.000 tấn, phần lớn tiêu thụ nội địa(Fitzsimmons, 2004)

Tại châu Mỹ cũng có một số quốc gia nuôi cá rô phi, quốc gia sản xuất cá rô phinhiều nhất ở châu Mỹ là Mêxicô, đạt 110.000 tấn vào năm 2003, kế đến là Braxin đạt75.000 tấn, 2003 Mỹ cũng là quốc gia có nuôi cá rô phi nhưng sản lượng chỉ đạtchừng 7500 tấn trong 2003 Tại Ecuađo, một quốc gia nuôi tôm nổi tiếng ở Nam Mỹ,nhưng trong những năm gần đây đang đối mặt với dịch bệnh, trong đó chủ yếu là bệnhđốm trắng do WSSV gây ra, do vậy người nuôi tôm ở đây đã chuyển sang nuôi cá rôphi ở những ao nuôi tôm nhằm cải thiện môi trường, khi môi trường tốt hơn họ lại tiếnhành nuôi tôm Chu kỳ nuôi luân canh tôm-cá đã chứng tỏ được hiệu quả trong việccải thiện môi trường và giảm thiểu dịch bệnh (Fitzsimmons, 2004) Một quốc gia khác

là Pêru tuy mới phát triển nuôi cá rô phi, dự tính đạt sản lượng đạt 3.000 tấn vào năm

2005, nhưng nuôi cá rô phi là nghề sản xuất có nhiều triển vọng trong tương lai tạiquốc gia này (Fitzsimmons, 2004)

Mặc dù châu Phi là quê hương của cá rô phi, nhưng nuôi cá rô phi tại khu vựcnày lại chỉ mới bắt đầu phát triển Trong năm 2003, Ai Cập là là quốc gia nuôi cá rôphi nhiều nhất châu Phi, sản lượng nuôi của năm này đạt 200.000 tấn/năm, chiếm 90%sản lượng cá rô phi nuôi tại châu phi, ngoài ra tại đây còn một sản lượng cá rô phikhông nhỏ được khai thác từ tự nhiên Zămbia có kế hoạch mở rộng nuôi cá rô phi

theo mô hình tổng hợp heo - cá, loài được nuôi là cá rô phi địa phương Oreochromis andersonii và cá rô phi toàn đực dòng Ai Cập Với hình thức nuôi này, mặc dù mang

lại hiệu quả cao nhưng chất lượng cá nuôi không đảm bảo yêu cầu vệ sinh Gần đâyGhana và Nigiêria đã thành lập nhiều trang trại có quy mô lớn và được quản lý tốt

Mục tiêu là tạo ra sản phẩm xuất khẩu sang thị trường EU (Fitzsimmons, 2004).

Tại châu Âu, sản lượng cá rô phi nuôi ở châu Âu rất thấp, do khu vực này có

nhiệt độ thấp không thuận lợi để nuôi cá rô phi Bỉ là nước nuôi loài cá này nhiều nhấtvới sản lượng đạt khoảng 300 tấn/năm Cá rô phi cũng được nuôi ở Hà Lan, Thụy Sỹ,Tây Ban Nha, Ðức, Pháp và Anh Hiện nay nhu cầu tiêu thụ cá rô phi ở các quốc gianày tăng lên, cá rô phi được bày bán ở nhà hàng và hệ thống siêu thị nhằm phục vụcho một bộ phận dân cư có nguồn gốc từ châu Á (Roderick, 2003)

Theo Gupta và Acosta (2004) trên thế giới có đến 70 loài cá rô phi, trong đó có 9loài đã được đưa vào nuôi trong các trại và đến năm 2000 sản lượng cá rô phi của thếgiới đạt 1,27 triệu tấn chiếm 3,57 % sản lượng nghề nuôi trồng thủy sản của toàn thế

giới Loài cá rô phi vằn Oreochromis niloticus đã được nuôi rất phổ biến với sản lượng

năm 2007 đạt 2,12 triệu tấn (FAO, 2009)

1.2.2 Ở Việt Nam

Từ những năm 90 trở lại đây, nghề nuôi cá rô phi ở Việt Nam đã phát triểnmạnh mẽ Cá rô phi là loài cá dễ nuôi, ít dịch bệnh, thức ăn không đòi hỏi chất lượngcao, giá thành sản xuất thấp nên các quốc gia đang phát triển như Việt Nam đặc biệtchú trọng phát triển nuôi loài cá này Thêm vào đó, thịt loài cá này có chất lượng thơmngon, ít xương dăm nên được người tiêu dùng ưa chuộng Các nỗ lực nhằm phát triểnnghề nuôi cá rô phi ở nước ta trong thời gian qua đã đạt được nhiều thành tựu khảquan như nghiên cứu cải thiện di truyền, quy trình sản xuất giống và nuôi thươngphẩm (Phạm Anh Tuấn, 2006)

Diện tích nuôi cá rô phi của cả nước ta là 22.340 ha chiếm 3% tổng diện tích nuôitrồng thủy sản, trong đó nuôi nước lợ, mặn là 2.068 ha, nuôi nước ngọt là 20.272 ha.Tổng sản lượng cá rô phi ước tính đạt 54.486,8 tấn chiếm 9,08% tổng sản lượng cá nuôi.Đồng bằng sông Hồng và đồng bằng sông Cửu Long là hai vùng nuôi cá rô phi chủ yếu

ở Việt Nam, lần lượt chiếm 17,6% và 58,4% tổng sản lượng cá rô phi của cả nước ỞViệt Nam, cá rô phi được nuôi dưới nhiều hình thức khác nhau, trong năm 2005, sảnlượng cá rô phi nuôi ở ao và đầm phá đã đạt 37.931,8 tấn, nuôi trong lồng bè đạt 10.182tấn Tổng cục thủy sản đã đưa ra mục tiêu nuôi cá rô phi đến năm 2015 đạt sản lượng200.000 tấn/năm, trong đó sẽ giành 40% cho xuất khẩu, phần còn lại để tiêu thụ nội địa

(Phạm Anh Tuấn, 2006).

1.3 Tình hình nghiên cứu dịch bệnh ở cá rô phi

Cá rô phi đã được phát triển nuôi ở nhiều quốc gia với các hình thức nuôi khácnhau, trong đó khá phổ biến loại hình nuôi cá rô phi thâm canh với mật độ cao, sảnlượng lớn, làm tăng nguy cơ bùng phát bệnh dịch do chất lượng nước suy giảm.Shoemaker (2008) thông báo rằng, cá rô phi thường bị nhiễm một số tác nhân gâybệnh như vi khuẩn, nấm hoặc kí sinh trùng Đã có một số loài vi khuẩn được xác nhận

đã từng gây bệnh cho cá rô phi nuôi, như: Streptococcus agalactiae, S inae, Flavobacterium columnare, Aeromonas hydrophla, Edwarsiella tarda và một số ký

sinh trùng thường gây hại cho cá rô phi ở giai đoạn cá con: trùng quả dưa

Ichthyophitirius multifillis, trùng bánh xe Tricodhina spp và sán lá đơn chủ 18 móc Gyrodactylus niloticus (Klesius và ctv, 2008).

1.3.1 Nghiên cứu của thế giới về bệnh streptococcosis ở cá rô phi

Liên cầu khuẩn gram (+) Streptococcus spp đã được xác nhận là tác nhân gây

cảm nhiễm hệ thống và gây viêm não ở cá rô phi và cá hồi nuôi tại Isreal vào năm

1986, sau đó bệnh này nhanh chóng lan rộng ra các quốc gia khác và gây ra tổn thất

lớn về kinh tế cho nghề nuôi cá rô phi ở các quốc gia này (Buller, 2004) Các nghiên

cứu đầu tiên về bệnh viêm não ở cá rô phi đã xác định tác nhân gây ra bệnh này là loài

cầu khuẩn Streptococcus shiloi và Streptococcus difficile, sau đó 2 loài vi khuẩn này được đổi tên thành S iniae và S agalactiae (Evans và Shoemmaker, 2006) Perera

(1994) cho rằng, trong thực tế, có nhiều tác nhân có thể gây chết cá rô phi nuôi, trong

đó liên cầu khuẩn Streptococcus spp là tác nhân gây bệnh thường gặp, đặc biệt hay

xuất hiện trong các trang trại nuôi cá rô phi thâm canh với mật độ cao, quản lý kém

Khi cá rô phi bị cảm nhiễm cầu khuẩn Streptococcus spp, thường bộc lộ các dấu hiệu

chính như: cá bệnh có dấu hiệu vận động không định hướng, mất thăng bằng, bơivòng, bơi xoắn, mắt bị lồi rất to và giác mạc bị đục, đôi khi kèm xuất huyết Khi giảiphẫu bên trong nhận thấy xoang cơ thể của cá bệnh chứa nhiều dịch, gan, lá lách và

thận bị sưng to (Perera, 1994; Al- Harbi, 1994; Siti- Zahrah 2005).

Năm 2000, tại một số hồ chứa của Malaysia đã ghi nhận được hiện tượng cá rôphi nuôi lồng bị chết, kết quả thu mẫu đã phân lập được vi khuẩn từ các nội quan như

mắt, não, thận của cá bệnh Trong đó, vi khuẩn Streptococcus agalactiae chiếm 70 %

tổng số các chủng vi khuẩn phân lập được từ những mẫu cá bệnh (Pretto- Giordano và

ctv, 2010).

Bệnh dịch streptococcosis ở cá rô phi nuôi tại Thái Lan đã được quan sát thấytrong lồng nuôi trên sông Mekong tại thành phố Mukudahan, phía đông Bắc Thái Lanvào tháng 5 năm 2001 Tỷ lệ cá chết do dịch bệnh vào khoảng 40 – 60% sau hai tuầnxuất hiện bệnh lý Dấu hiệu điển hình của cá bị bệnh là chướng bụng, trong xoangbụng chứa dịch và hậu môn bị sưng (Yuasa, 2005)

Trong năm 2002 và 2003, tại thành phố Lubuk Linggan, miền Nam Sumatra,Indonesia cá rô phi nuôi lồng cũng đã xuất hiện hiện tượng cá bị chết với dấu hiệubệnh lý hai mắt đục, lồi và đổi màu Vi khuẩn phân lập từ não và các cơ quan khác của

cá rô phi bị bệnh từ Thái Lan và Indonesia đã được xác định là Streptococcus agalactiae và S iniae (Pretto- Giordano và ctv, 2010; Yuasa, 2005; Plumb,1999).

Trong những năm qua, đã có nhiều đợt dịch bệnh do nhiễm vi khuẩn

Streptococcus agalactiae đã được ghi nhận ở các trang trại nuôi cá rô phi ở khu vực

châu Á (Musa và ctv, 2009; Suanyuk và ctv, 2005)

Từ tháng 7 đến tháng 12 năm 2009 bệnh Streptococcosis trên cá rô phi đã bùng

phát tại bốn tỉnh Guangdong, Guangxi, Hainan và Fujian, nơi nuôi cá rô phi chủ yếu,chiếm tới 90% sản lượng nuôi đối tượng này tại Trung Quốc, gây ra thiệt hại nặng nềcho người nông dân nuôi đối tượng này tại địa phương (Lisifa,1997)

Trong khi đó, Wongtavatchai và Maisak (2008) đã thông báo rằng, tại Thái Lan,

khi cá rô phi vằn (Oreochromis niloticus) bị bệnh streptococcosis, các chủng vi khuẩn phân lập và định danh được chủ yếu là loài Streptococcus agalactiae (112 chủng), tuy nhiên thỉnh thoảng cũng có gặp loài Streptococcus iniae phân lập từ cá rô phi vằn (8

chủng)

Nghiên cứu về dịch tễ học của bệnh streptococcosis trong 8 năm ở cá rô phi đã

thể hiện rằng, tần suất gặp loài Streptococcus agalactiae cảm nhiễm ở cá bị bệnh chiếm 82%, trong khi đó loài Streptococcus iniae chỉ có 18%, trong tổng số 500 chủng

phân lập từ 13 nước thuộc châu Á và châu Mỹ La Tinh (Sheehan và ctv, 2009) Trên

cá rô phi đỏ (Oreochromis sp), các kết quả đã nghiên cứu đều kết luận rằng, tác nhân chính gây bệnh streptococcosis ở loài cá này là Streptococcus agalactiae (Hernandez

và ctv, 2009; Mian và ctv, 2009; Zamri – saad và ctv, 2010)

Nghiên cứu về sự phân bố của tác nhân gây bệnh streptococcosis trên cá rô phi đã chứng tỏ rằng, vi khuẩn Streptococcus iniae và Streptococcus agalactiae có thể tồn tại

ngoài môi trường quanh năm Vi khuẩn này có thể phân lập được từ đất, từ các chấthữu cơ lắng tụ hoặc từ chất nhầy của những con cá bệnh Ngoài ra, vi khuẩn

Streptococcus spp có thể được thải ra môi trường từ những con cá bị bệnh hoặc đã

khỏi bệnh Do vi khuẩn này thích hợp với điều kiện nhiệt độ cao nên mùa đông ít khi

phân lập được các loài vi khuẩn này (Bromage và ctv, 1999).

Theo Intervet (2006), cá rô phi nuôi có thể bị cảm nhiễm nhiều loại tác nhân khácnhau, nhưng mỗi loại tác nhân lại thường bùng phát ở các giai đoạn phát triển khác nhautrong chu kỳ sản xuất giống và nuôi thương phẩm của cá rô phi Trong đó bệnhstreptococcosis thường xuất hiện khi cá nuôi đạt khối lượng ≥ 100g đến 1kg, do vậy với

tỷ lệ chết tích lũy của bệnh này có thể gây ra tới 70%, tác hại của bệnh này lên cá nuôi làrất lớn (Hình 1.1)

Hình 1.1: Tác nhân gây bệnh trên cá rô phi ở các giai đoạn nuôi

(Intervet, 2006)

Labrie, L (2007) đã tổng hợp các kết quả nghiên cứu về các bệnh nhiễm khuẩn

ở cá rô phi nuôi tại khu vực Đông Nam Á và đã công bố rằng, có 2 loài liên cầu khuẩn

đã gặp rất phổ biến ở cá rô phi bị bệnh streptococcosis là Streptococcus iniae và S agalactiae (Bảng 1.1).

Bảng 1.1: Vi khuẩn gây bệnh trên cá rô phi nuôi tại khu vực Đông Nam Á

(Labrie, 2007) Loài vi khuẩn Số mẫu cá bị nhiễm Số điểm thu Quốc gia

Malaysia, Thái Lan, TrungQuốc và Việt Nam

Flavobacterium

1.3.2 Tình hình nghiên cứu dịch bệnh cá rô phi ở trong nước

Việt Nam là một quốc gia ở châu Á có nghề nuôi cá rô phi khá phát triển, sảnlượng nuôi trong năm 2005 đã đạt 54.486 tấn, chiễm 9,08% sản lượng cá nuôi và mụctiêu cần đạt được trong năm 2015 là 200.000 tấn để phục vụ cho xuất khẩu và tiêu thụ

0g 1g 10g 100g 1kg

Hatchery

Sex-reversal

Flavobacterium columnare

Saprolegnia & orther fungi Trichodina & Dactylogyrus

RLO

Iridovirus

Streptococcus spp

nội địa tại Việt Nam (Phạm Anh Tuấn, 2006) Cá rô phi là loài có sức đề kháng caohơn so với các loài cá khác, tuy nhiên với mô hình nuôi thâm canh, mật độ cao, đầu tư

thức ăn lớn, nên cũng dễ làm phát sinh dịch bệnh (Bùi Quang Tề, 2005).

Năm 2009-2010, đã xảy ra dịch bệnh gây chết hàng loạt cá rô phi nuôi thươngphẩm (tới 90-100% trong ao), tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam như Hà Nội, HảiPhòng, Hải Dương, Bắc Ninh, Quảng Ninh và Hà Giang Đây được coi là đợt dịch lớnnhất kể từ trước đến nay đối với nghề nuôi cá rô phi ở nước ta và những nghiên cứu

bước đầu đã xác định rằng, đây là bệnh streptococcosis do liên cầu khuẩn Gram (+), Streptococcus spp gây ra (Nguyễn Viết Khuê và ctv, 2009)

Đồng Thanh Hà và ctv (2010) đã công bố những nghiên cứu sâu hơn về bệnhnày ở cá rô phi nuôi ở Việt Nam, như những quan sát ở mức siêu hiển vi đối với vi

khuẩn Streptococcus spp và dựa trên các đặc điểm sinh vật, hóa học để xác định rằng, liên cầu khuẩn gây bệnh ở cá rô phi chính là loài S agalactiae Ngoài ra, một số đặc điểm sinh thái của chủng vi khuẩn này cũng đã được công bố: Loài S agalactiae phân

lập từ cá rô phi nuôi ở Việt Nam có khả năng phát triển ở độ mặn 30 – 35‰, ở nhiệt

độ 37oC và ở pH = 12 có thể ức chế và tiêu diệt vi khuẩn này Những nghiên cứu này

đã cảnh báo khả năng vi khuẩn này có thể lây lan và gây tác hại cho các loài cá nuôinước mặn và cả con người

Dấu hiệu của bệnh streptococcosis ở cá rô phi nuôi ở phía Bắc Việt Nam cũng đã

được một số tác giả mô tả khá rõ ràng: dấu hiệu đầu tiên là cá yếu bơi lờ đờ, kém ănhoặc bỏ ăn, hậu môn, gốc vây chuyển màu đỏ, mắt, mang, cơ quan nội tạng và cơ xuấthuyết, thận, gan, lá lách mềm nhũn Đặc biệt, cá bệnh thường bơi vòng hoặc bơi xoắn,không định hướng, mắt đục với tròng mắt lồi ra ngoài (Đồng Thanh Hà và ctv, 2010;

Nguyễn Viết Khuê và ctv, 2009).

Một số đặc điểm dịch tễ của cá rô phi cũng đã được đề cập đến trong các công bố

gần đây: Bệnh streptococcosis ở cá rô phi thường xảy ra vào mùa hè, đặc biệt khi nhiệt

độ nước cao, mùa đông và mùa xuân, mật độ vi khuẩn thường thấp và không đủ

ngưỡng gây bệnh (Đồng Thanh Hà và ctv, 2010) Tại hai tỉnh An Giang và Vĩnh Long,

bệnh streptococcosis thường xuất hiện trong các ao nuôi thâm canh, chủng vi khuẩn

Streptococcus spp có tần suất từ 95 – 100% vào mùa khô (tháng 1) và vào giai đoạn giao mùa (tháng 5, tháng 11) (Đinh Thị Thủy, 2007)

Từ những mẫu cá điêu hồng (Oreochromis sp) bị bệnh đục và lồi mắt, xuất

huyết thu từ những bè nuôi thâm canh ở Tiền Giang, đã phân lập, xác định được tác

nhân gây dịch bệnh là Streptococcus agalactiae Bệnh xuất hiện hầu hết các tháng

trong mùa mưa (từ tháng 7 đến tháng 10) và các tháng giao thời giữa hai mùa khô và

mưa, có tỷ lệ chết cao, gây thiệt hại nghiêm trọng (Đặng Hoàng Oanh và ctv, 2012).

Năm 2013, Phạm Hồng Quân đã công bố về bệnh xuất huyết của cá rô phi tại 4tỉnh: Hà Nội, Hải Dương, Hải Phòng, Quảng Ninh và kết quả đã phân lập được 5 loài

vi khuẩn trong các mẫu cá bệnh, trong đó loài Streptococcus agalactiae có tần xuất

gặp là loài cao nhất, ở 52 trong tổng số 60 mẫu cá đưa vào nghiên cứu, chiếm tỷ lệ86,67% Ngoài ra, tác giả này cũng cho rằng, chủng vi khuẩn này rất mẫn cảm với hailoại kháng sinh là Enrofroxacine và Doxycyline Điều đó chứng tỏ rằng, nếu ngườinuôi dùng kháng sinh bằng cách đưa vào thức ăn đúng thời điểm khi đàn cá chớmbệnh, chọn được loại kháng sinh có độ nhạy cao thì có thể chữa trị bệnh thành công

CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Thời gian, địa điểm và đối tượng nghiên cứu

2.1.1 Thời gian nghiên cứu: Từ 8/2013 đến 10/2014

2.1.2 Địa điểm nghiên cứu

+ Mẫu cá bệnh và cá khỏe dùng cho nghiên cứu được thu từ các trang trại nuôi cánước ngọt tại các huyện: Kiến Thụy, Thủy Nguyên và Vĩnh Bảo thành phố Hải Phòng.+ Phân tích mẫu cá bệnh và kiểm tra độ nhạy kháng sinh tại phòng thí nghiệmcủa cơ quan Thú y vùng II, thuộc Cục Thú y

+ Thí nghiệm trị bệnh được thực hiện tại phòng thí nghiệm ướt của TrườngTrung cấp nghề Thủy sản Hải Phòng

+ Thí nghiệm trị bệnh ngoài ao được thực hiện ở 2 trại nuôi cá nước ngọt tạihuyện Kiến Thụy của bà Nguyễn Thị Vinh (thôn Đầm Tám, xã Tú Sơn) và ôngNguyễn Văn Hùng (thôn Đồng Rồi, xã Ngũ Đoan)

2.1.3 Đối tượng nghiên cứu

Bệnh streptococcosis và thử nghiệm chữa trị bệnh này ở cá rô phi

2.2 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu

Thử nghiệm trị bệnh streptococcosis trên cá rô phi ngoài ao nuôi

Tình hình bệnh streptococcosis trên cá rô phi và thử nghiệm trị bệnh cho cá nuôi tại

Hải Phòng

Kết luận và đề xuất ý kiến

Đề xuất một số giải pháp phòng và trị bệnh streptococcosis trên cá rô phi nuôi tại Hải Phòng.

Hình 2.1 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu

2.3 Vật liệu dùng cho nghiên cứu

Chủng vi khuẩn Streptococcus agalactiae dùng trong luận án này được phân lập

từ mẫu cá rô phi nuôi tại Hải Phòng bị bệnh với các dấu hiệu bệnh lý đặc trưng củabệnh streptococcosis như bơi lờ đờ, mất định hướng, trướng bụng, xuất huyết, mắt lồi,các cơ quan nội tạng như gan, thận, lá lách bị nhợt nhạt, hay xuất huyết

Môi trường phân lập/nuôi cấy vi khuẩn

Môi trường Brain Heart Infusion Agar- BHIA (hiệu Merck, sản xuất của Đức)dùng cho phân lập vi khuẩn từ cá bệnh và môi trường Brain Heart Infusion Broth-BHIB (hiệu Merck, sản xuất của Đức) dùng để nuôi tăng sinh vi khuẩn, nhằm tạo racác dịch huyền phù với mật độ khác nhau dùng cho cảm nhiễm vào cá khỏe

Đĩa kháng sinh

Các loại đĩa giấy thấm kháng sinh (của Bio-Rad) được dùng để kiểm tra độ nhạy

kháng sinh của chủng vi khuẩn Streptococcus agalactiae (Bảng 2.1)

Bảng 2.1: Các loại đĩa giấy thấm kháng sinh đã sử dụng

2.4 Phương pháp nghiên cứu:

2.4.1 Phương pháp điều tra tình hình bệnh streptococcosis ở cá rô phi

- Điều tra số liệu thứ cấp: Tìm hiểu các thông tin về vùng nuôi, diện tích và sảnlượng nuôi cá rô phi tại địa phương, mùa vụ nuôi và tình hình bệnh ở cá rô phi nuôi tạiHải Phòng thông qua các báo cáo tổng kết của cơ quan quản lý địa phương như trung tâmkhuyến ngư, chi cục thú y, phòng Nông nghiệp các huyện Các số liệu thứ cấp làm cơ sởcho việc xác định vùng điều tra, số lượng phiếu điều tra và phân bố số phiếu điều tra

- Điều tra số liệu sơ cấp: Xây dựng phiếu điều tra với các câu hỏi nhằm đạt cácmục đích cần thiết, rồi trực tiếp phỏng vấn các cán bộ kỹ thuật, các chủ đìa, chủ trạinuôi cá rô phi (Phụ lục IV) Việc chọn mẫu điều tra được thực hiện ngẫu nhiên

- Có 50 hộ nuôi cá rô phi ở Hải Phòng đã được phỏng vấn điều tra, phân bố củacác mẫu điều tra ở các huyện được thể hiện ở bảng 2.2

Bảng 2.2 Phân bố số mẫu điều tra (N=50)

Số hộđiều tra

Số hộnuôicá

Số hộđiềutra

Số hộnuôi cá

Số hộđiều tra %

Các mẫu cá bệnh được thu theo nguyên tắc lựa chọn những con cá đã bộc lộ cácdấu hiệu đặc trưng của bệnh streptococcosis: Trạng thái bất thường kết hợp với cácdấu hiệu bộc lộ ra bên ngoài: xuất huyết trên bề mặt cơ thể, mắt cá đục và lồi Nếu trại

cá ở gần phòng thí nghiệm thì cá được chuyển sống về phòng theo cách vận chuyểnkín Nếu ở xa, mỗi con cá bệnh được đưa vào 1 túi nilon nhỏ, buộc lại bằng thun rồiđặt trong 1 phích đá lạnh và đưa về phòng trong vòng 24h

Các mẫu cá khỏe được bắt từ những ao đầm có cá bắt mồi và hoạt đồng bìnhthường, trên cơ thể của cá không xuất hiện bất cứ dấu hiệu bất thường nào Những con

cá này được chuyển về cơ sở thực nghiệm bằng phương pháp vận chuyển kín, về đếnnơi, cá này được thuần dưỡng trong 5-7 ngày cho thích nghi với điều kiện nuôi mới rồimới dùng cho thí nghiệm

2.4.2 Phương pháp kiểm tra độ nhạy với kháng sinh của chủng vi khuẩn

Streptococcus agalactiae

Độ nhạy với kháng sinh của chủng vi khuẩn Streptococcus agalactiae được kiểm

tra bằng phương pháp khuếch tán trên đĩa thạch (Kirby Bauer) và độ nhạy này được

đánh giá dựa vào độ lớn của đường kính vòng vô khuẩn so với bảng quy định về 3 độnhạy chuẩn: độ nhạy trung bình (I), độ nhạy cao (S) và kháng (R) của Hội đồng quốcgia Hoa Kỳ (National Committee of clinical laboratory standards – NCCLS, 1999)(Bảng 2.3.).

Bảng 2.3: Đánh giá đường kính vòng vô khuẩn chuẩn

(µg)

R(≤) (mm)

I (mm)

S (≥) (mm)

Chủng vi khuẩn Streptococcus agalactiae được phân lập và định danh từ cá rô

phi bị bệnh tại phòng thí nghiệm của trung tâm thú y vùng II, Hải Phòng, được lấy rakhỏi tủ đông sâu, để trong thời gian 1h ở nhiệt độ phòng, sau đó cấy lên môi trườngBHIA, ủ ở nhiệt độ 30oC, sau 24 - 48h các khuẩn lạc được tách ra khỏi đĩa thạch bằngmột que cấy vô trùng, đưa vi khuẩn vào trong tube chứa nước muối sinh lý (0,85%) đãtiệt trùng, cần khuấy để vi khuẩn phân bố đều trong nước muối sinh lý tạo nên huyềndịch có độ đục đồng đều Xác định mật độ vi khuẩn của huyền dịch bằng cách so độđục trên máy McFland, điều chỉnh để đạt mật độ quang (OD) là 0,56 tương ứng vớihuyền dịch vi khuẩn có mật độ 108 tế bào/ml

Pha loãng các nồng độ theo cơ số 10 (mỗi nồng độ lặp lại 3 lần) Đặt các đĩa thạchvào tủ ấm ở 30oC/24h Kết thúc thời gian ủ, tiến hành lấy đĩa thạch đếm khuẩn lạc.Mật độ tế bào trung bình cộng MI trong mẫu ban đầu là trung bình cộng của các

Mi ở các nồng độ pha loãng khác nhau

Dùng tăm bông tiệt trùng nhúng vào huyền dịch vi khuẩn rồi trang đều trên mặtmôi trường thạch BHIA của 3 đĩa lồng, để khô mặt thạch khoảng 1 phút rồi dùng panhtiệt trùng gắp các đĩa giấy thấm kháng sinh đặt vào đĩa lồng, khoảng 3 - 5 đĩa khángsinh/hộp lồng Sau đó, đậy hộp lồng và ủ ở nhiệt độ 30oC Đường kính vòng vô khuẩnđược kiểm tra ở mỗi đĩa kháng sinh tại thời điểm 24 h và 48 giờ sau nuôi cấy Đườngkính vòng vô khuẩn được đo bằng thước (mm), dùng để so sánh với 3 độ nhạy chuẩn

để xác định: độ nhạy cao (S), nhạy ở mức trung bình (I) và kháng (R) của chủng

Streptococcus agalactiae với từng loại kháng sinh theo Bảng 2.3.

2.4.3 Xác định khả năng gây bệnh ở cá rô phi của chủng S agalactiae

Để đánh giá khả năng gây bệnh ở cá rô phi vằn (Oreochromis niloticus) của chủng vi khuẩn Streptococcus agalactiae, thí nghiệm cảm nhiễm vào đàn cá khỏe

được thực hiện

Cá được chia ngẫu nhiên vào 5 nghiệm thức gồm: 4 nghiệm thức (NT) thí nghiệm

và 1 NT đối chứng, thí nghiệm được lặp lại 2 lần, 10 con cá/ thùng có thể tích 200 lít,chứa 150 lít nước sạch

Chủng vi khuẩn Streptococcus agalactiae được tạo thành các huyền dịch có mật

độ khác nhau: 103, 104, 105 và 106 tb/ml, cảm nhiễm các huyền dịch vi khuẩn này vào

cá khỏe bằng phương pháp tiêm vào xoang bụng, với liều 0,1ml/cá thể, tương tươngvới liều tiêm từ 102 – 105 tế bào vi khuẩn/cá thể Nghiệm thức đối chứng, cá được tiêm0,1 ml nước muối sinh lý vô trùng/cá thể Cá trước khi tiêm được gây mê bằng cáchgiảm nhiệt độ nước xuống 20 – 22oC, sục khí liên tục ngày đêm, theo dõi nhiệt độ và

pH nước hàng ngày Cá thí nghiệm được cho ăn thức bằng ăn tổng hợp Cargill vớikhẩu phần ăn 5 - 7% khối lượng thân cá Các dấu hiệu bất thường và số lượng cá chếthàng ngày sau cảm nhiễm ở các nghiệm thức được quan sát và ghi nhận Thí nghiệmkết thúc sau 12 ngày (Bảng 2.4.)

Bảng 2.4: Bố trí thí nghiệm để xác định khả năng gây bệnh ở cá rô phi của chủng

2.4.4 Phương pháp bố trí trị bệnh cho cá rô phi trong điều kiện thí nghiệm

Những con cá khỏe mạnh, có khối lượng từ 100-150g/con được vận chuyển vềphòng thí nghiệm bằng phương pháp vận chuyển kín, thuần dưỡng trong 5 - 7 ngàytrước khi phân chia ngẫu nhiên vào 5 bể có thể tích 200 lít, chứa 150 lít nước sạch, thả

10 cá thể/bể và thí nghiệm này được lặp lại 2 lần Những bể cá này sẽ được cảm nhiễm

chủng vi khuẩn Streptococcus agalactiae với liều khác nhau bằng phương pháp tiêm

gốc vây bụng, khi các dấu hiệu bệnh xuất hiện là thời điểm bắt đầu dùng thuốc để trịbệnh cho cá

Có 4 loại huyền dịch được làm từ các khuẩn lạc của vi khuẩn Streptococcus agalactiae trong nước muối sinh lý vô trùng để có các mật độ 102, 103, 104 và 105

tb/ml

0,1 ml của các huyền dịch có mật độ khác nhau được tiêm cho cá ở các nghiệmthức (NT) lần lượt tương là: NT1, NT2, NT3 và NT4 Cá ở NT5 được tiêm 0,1ml nướcmuối sinh lý vô trùng/cá thể được coi như ĐC

Loại kháng sinh dùng trong thí nghiệm trị bệnh là loại có độ nhạy cao nhất ởnội dung xác định độ nhạy kháng sinh, đó là Doxycyline (của hãng thuốc Hanvet),dùng với liều: 0,25, 0,5 và 1,0 g/kg cá/ngày

Cách trộn kháng sinh vào thức ăn (Cargill, Mỹ): Dựa vào khối lượng của cá đưavào thí nghiệm để tính toán lượng thức ăn hàng ngày và xác định lượng kháng sinh cầndùng hàng ngày và trong 7 ngày Dùng cân điện tử để cân các liều thuốc theo yêu cầu,hòa loãng thuốc với một lượng nước nhỏ, sau đó phun tẩm kháng sinh vào thức ăn, tảimỏng và để vào tủ lạnh có thể làm khô thức ăn ở nhiệt độ thấp, sau đó đóng túi giữ ởnhiệt độ 4-5oC Trước mỗi bữa ăn, thêm 1 thìa dầu ăn nhỏ để bao viên thức ăn Cho cá

ăn 2 lần /ngày vào 8 – 9 giờ và 15-16 giờ

Khi cá trong các nghiệm thức thí nghiệm bắt đầu xuất hiện các dấu hiệu bệnh đầutiên (khoảng 24h sau cảm nhiễm), thì kháng sinh được trộn với thức ăn tổng hợp ở cácliều: 0,25, 0,5 và 1,0 g/kgcá/ngày được đưa vào cơ thể cá theo đường miệng ở cácnghiệm thức tương ứng: NT1, NT2 và NT4 Riêng cá ở NT3 và nghiệm thức NT5(ĐC) không được dùng thuốc, cho cá ăn thức ăn bình thường NT3 được coi nhưnghiệm thức ĐC dương

Theo dõi các hoạt động sống, dấu hiệu bệnh lý và số lượng cá chết hàng ngày

để xác định tỷ lệ sống của cá ở các nghiệm thức Qua đó đánh giá hiệu quả trị bệnh củakháng sinh và liều thuốc có hiệu quả trị bệnh (Hình 2.2)

NT3

(ĐC dương)

- 10cá/150 lít

- Tiêm 0,1 ml (104 tb/cá thể)

ĐC âm

- 10cá/150 lít

- Tiêm 0,1 ml (NaCl 0,85%)

NT4

- 10cá/150 lít

- Tiêm 0,1 ml (105 tb/cá thể)

Cá rô phi kích thước từ 100-150g, không bộc lộ các dấu hiệu bất thường;

chủng vi khuẩn Streptococcus agalactiae được cảm nhiễm vào cá bằng cách

tiêm vào gốc vây bụng; Nước muối sinh lý 0,85%

- Cá thí nghiệm được tiêm 0,1 ml huyền dịch vi khuẩn Streptococcus

agalactiae với các mật độ khác nhau: 103, 104, 105, và 106 tế bào/ml tương ứng với các nghiệm thức: NT1, NT2, NT3 và NT4 Cá ở ĐC âm tiêm 0,1 ml NaCl 0,85%

- Cá thí nghiệm được cho ăn thức ăn tổng hợp Cargill với 5-7% khối lượng thân, 2 lần/ngày

- Khi cá xuất hiện các dấu hiệu bệnh đầu tiên, kháng sinh Doxycyline được dùng để trị bệnh cho cá ở các NT1, NT2 và NT4 với liều thuốc tương ứng: 0,25g, 0,5g và 1,0g/kg cá, trong 7 ngày liên tục

- Cá ở NT3 (ĐCdương) và ĐC âm cho ăn thức ăn bình thường, không có

2.4.5 Trị bệnh streptococcosis cho cá rô phi ở ao nuôi

Kết quả của thí nghiệm trị bệnh trong điều kiện thí nghiệm đã được ứng dụng đểchữa bệnh streptococcosis cho cá rô phi nuôi trong ao của 2 hộ dân nuôi cá và cũngtheo dõi để so sánh diễn biến của bệnh này ở 2-3 ao nuôi khác không được chữa trị tạihuyện Kiến Thụy, Hải Phòng

Khi cá rô phi nuôi của dân địa phương xuất hiện các dấu hiệu tương tự như đã mô

tả của bệnh streptococcosis, 2 - 3 mẫu cá bệnh được thu để giải phẫu kiểm tra các dấuhiệu bộc lộ trong nội tạng và làm các tiêu bản phết mô não và thận của cá, nhuộmgram và kiểm tra bằng kính hiển vi quang học ở độ phóng đại >/= 400x để phát hiệncác cầu khuẩn gram (+) Khi có kết quả dương tính, tiến hành kết hợp với người nuôi

để trị bệnh cho cá tại các ao

- Doxycycline là kháng sinh được lựa chọn để dùng chữa bệnh cho cá nuôi ở aobằng cách trộn thuốc vào thức ăn tổng hợp, cho cá ăn trong 7 ngày với liều kháng sinhgiảm dần:

+ Ở ao thứ nhất ước tính có 1300 kg cá trong ao nên dùng 600 g kháng sinh/ ngày(dùng trong 3 ngày đầu), 400 g/ngày (dùng trong 2 ngày tiếp theo) và 330 g/ngày (dùngtrong 2 ngày cuối), tương ứng với các liều dùng là: 0,46g, 0,30g và 0,25 g/kg cá/ ngày.+ Ở ao thứ 2 ước tính có 1000 kg cá đang nuôi trong ao, nên dùng 500g khángsinh/ngày (trong 3 ngày đầu) và 250g/ngày (dùng trong 4 ngày tiếp theo), tương ứngvới liều thuốc dùng là : 0,5 g và 0,25 g/kg cá /ngày

Kháng sinh được thẩm trộn vào thức ăn hàng ngày và trước khi cho cá ăn, lượngthức ăn của từng bữa cũng được bao bởi dầu thực vật nhằm tăng cường sự hấp thuthuốc của cá từ thức ăn

Ngoài việc dùng kháng sinh đưa vào cơ thể cá để diệt khuẩn, còn kết hợp dùngvôi bột với 50 kg/ao để diệt vi khuẩn tồn tại ngoài môi trường nước

Theo dõi trạng thái hoạt động, bắt mồi và số lượng cá chết hàng ngày để đánhgiá hiệu quả trị bệnh (Bảng 2.5)

Bảng 2.5 Liều kháng sinh dùng để trị bệnh streptococcosis cho cá rô phi nuôi ở

2 ao nuôi thương phẩm tại Hải Phòng Ngày trị bệnh Ngày 1 Ngày 2 Ngày 3 Ngày 4 Ngày 5 Ngày 6 Ngày 7

- Công thức tính tỷ lệ sống S (%)= Số cá còn sống /Số cá thả ban đầu x 100

- Công thức Tính số lượng tế bào vi khuẩn trong 1ml mẫu:

Mi (cfu/ml) = Ai x Di/V Trong đó: Ai là số khuẩn lạc trung bình / đĩa

Di: Độ pha loãng V: Dung tích huyền phù tế bào cho vào trong đĩa thạch

- Công thức tính LD50 (Reed & Muench, 1938):

LD50 = a x – pd

pd = L% - 50

L% - H%

Trong đó:

a: Là hệ số pha loãng của vi khuẩn

x: Số lũy thừa của liều vi khuẩn gây chết cá lớn hơn 50% thấp nhất

H%: Tỷ lệ cá chết cao nhất dưới 50%

L%: Tỷ lệ cá chết lớn hơn 50% thấp nhất

- Số liệu điều tra tình hình bệnh ở cá rô phi được mã hóa và xử lý bằng phầnmềm Excel 2003 để phân tích số liệu

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN

3.1 Tình hình dịch bệnh streptoccocosis gây ra trên cá rô phi nuôi tại Hải Phòng.

3.1.1 Tình hình bệnh streptoccocosis ở cá rô phi nuôi trong giai đoạn 2011-2013

Từ các số liệu đã được theo dõi, ghi chép và tổng hợp của phòng khuyến nôngcác huyện Kiến Thụy, Thủy Nguyên và Vĩnh Bảo, các thiệt hại gây ra do bệnhstreptococcosis ở cá rô phi nuôi tại 3 huyện nuôi cá nước ngọt chủ yếu của Hải Phòngđược thể hiện ở Bảng 3.1

Bảng 3.1: Thông tin về bệnh streptococcosis ở cá rô phi nuôi tại Hải Phòng

Huyện

Mùa bệnh

Số hộ nuôi cá

rô phi

Tỉ lệ hộ nuôi cá gặp bệnh (%)

Thiệt hại ước tính (tấn)

Biện pháp hỗ trợ

Huyện Kiến Thụy

Huyện Thủy Nguyên

Năm 2013 Hè 32 25 10 Tư vấn sử dụng thuốc

Huyện Vĩnh Bảo

Nguồn: Phòng Nông nghiệp các huyện Thủy Nguyên, Vĩnh Bảo, Kiến Thụy

Số liệu ở Bảng 3.1 đã thể hiện rằng, bệnh streptococcosis vẫn thường xuyên xảy

ra trong các ao nuôi cá rô phi nuôi ở Hải Phòng trong vài năm gần đây, với tần xuất từ10,0 đến 33,3% tùy vào vùng nuôi và năm theo dõi, đã gây thất thu hàng chục tấn cámỗi năm cho các huyện ở địa phương Đặc biệt, số liệu ở bảng 3.1 cũng chỉ ra rằng,tần xuất xuất hiện của bênh streptococcosis ở năm sau lại có xu hướng tăng cao hơn sovới năm trước, nếu năm 2011 có 10,0% hộ nuôi ở Vĩnh Bảo, 18,3% ở Thủy Nguyên và20,5% ở Kiến Thụy gặp bệnh này thì đến năm 2013, tần xuất ở các huyện lần lượt là:24,1%, 25% và 33,3% Số liệu mà các cơ quan quản lý ghi nhận được đều cho rằngbệnh này xuất hiện vào mùa hè hoặc hè thu khi nhiệt độ nước ao cao

Tuy nhiên trong các năm qua, tại các Phòng Nông nghiệp Huyện còn thiếu vềtrang thiết bị máy móc hỗ trợ chẩn đoán bệnh thủy sản do đó việc xác định tác nhân và

tư vấn điều trị khi có bệnh xảy ra không thường xuyên, kịp thời Do đó đa số hiệu quảtrị bệnh còn hạn chế

3.1.2 Kết quả điều tra trực tiếp từ các nông hộ

Sau một số năm bệnh streptococcosis bùng phát và gây tác hại cho cá rô phi nuôitại tỉnh Hải Phòng, người nuôi cá đã được trải qua nhiều lớp tập huấn và thực tế để nhậnbiết khi bệnh này xảy ra ở ao nuôi của họ Do vậy, có 50 hộ nuôi đơn canh cá rô phi ở 3huyện trong tỉnh: Kiến Thụy (20 hộ), Thủy Nguyên (15 hộ) và Vĩnh Bảo (15 hộ) đãđược phỏng vấn trực tiếp về bệnh streptococcosis đã xảy ra trong 5 năm gần đây (từ2009-1013) tại các nông hộ theo một phiếu câu hỏi đã chuẩn bị sẵn (phụ lục IV) Kếtquả điều tra về tần số xuất hiện bệnh này đã được thống kê và thể hiện ở bảng 3.2, chothấy bệnh streptococcosis khá phổ biến tại vùng nuôi cá rô phi của địa phương Có tới82% số hộ được phỏng vấn trả lời rằng, họ đã có ít nhất 1 lần gặp bệnh này

Bảng 3.2: Tần số xuất hiện của bệnh streptococcosis tại các nông hộ

Kiến Thụy Thủy Nguyên Vĩnh Bảo Tần số %

Có gặp bệnh ít nhất