1. Trang chủ
  2. » Luận Văn - Báo Cáo

nghiên cứu xây dựng thang alen chỉ thị huỳnh quang cho 05 locus penta e, d18s51, d21s11, th01 và d3s1358 phục vụ giám định

69 405 0

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 69
Dung lượng 1,89 MB

Nội dung

           TRƢỜNG ĐA ̣ I HO ̣ C KHOA HO ̣ C TƢ ̣ NHIÊN Bi Nguyên Hi NGHIÊN CƢ ́ U XÂY DƢ ̣ NG THANG ALEN CHI ̉ THI ̣ HUNH QUANG CHO 05 LOCUS PENTA E, D18S51, D21S11, TH01 V D3S1358 PHC V GIM ĐNH                    TRƢỜNG ĐA ̣ I HO ̣ C KHOA HO ̣ C TƢ ̣ NHIÊN Bi Nguyên Hi NGHIÊN CƢ ́ U XÂY DƢ ̣ NG THANG ALEN CHI ̉ THI ̣ HUNH QUANG CHO 05 LOCUS PENTA E, D18S51, D21S11, TH01 V D3S1358 PHC V GIM ĐNH   :    : 60.42.70                : PGS.TS.     BNG CC TỪ VIT TẮT Từ/ chữ viết tắt Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt ADN Acid Deoxyribonucleic APS Amonium persulfate LD Allelic ladder      bp Base pair  dNTP Deoxynucleoside triphosphate dATP Deoxyadenine triphosphate dTTP Deoxythymidine triphosphate dGTP Deoxyguanine triphosphate dCTP Deoxycytozine triphosphate FL Fluorescein  Fluorescein M50 Marker 50bp  OD Optical density  PCR Polymerase chain reaction  PBS Phosphate buffer saline RFLP Restriction fragment length polymophism   STR Short Tandem Repeat  Taq Thermus aquaticus TBE Tris-Boric acid-EDTA TE Tris-EDTA TEMED -tetramethyl- ethylenediamine VNTR Variable number of tandem repeat  au w/v Weight/volume  MC LC Mở đầu 1 Chƣơng 1. Tổng quan tài liệu 3 1.1  3 1.1.1 Cơ sở khoa học của phân tích ADN xác định cá thể 3 1.1.2 Các kỹ thuật xác định tính đa hình của ADN 5 1.1.2.1  5 1.1.2.2  6 1.2   6 1.2.3 Các locus STR ứng dụng trong phân tích cá thể người. 8 1.2.4 Các locus sử dụng trong nghiên cứu. 9 1.3  10 1.3.1 Phương pháp nhuộm Ethidum bromide 12 1.3.2 Phương pháp đánh dấu phóng xạ 12 1.3.3 Phương pháp nhuộm bạc 12 1.3.4 Phương pháp đánh dấu huỳnh quang 13 1.4   15 1.4.1 Khỏi niệm về chất huỳnh quang 15 1.4.2 Ứng dụng chất huỳnh quang trong phõn tớch ADN 17 1.5  18 1.5.1 Tỡnh hỡnh nghiờn cứu trờn thế giới 18 1.5.2 Tỡnh hỡnh nghiờn cứu trong nước 19 CHƢƠNG 2. NGUYÊN LIỆU V PHƢƠNG PHP NGHIÊN CỨU 21 2.1  21 2.1.1  21 2.1.2  21 2.1.3  21 2.1.4  22 2.2  24 2.2.1  25 2.2.2  25 2.2.3  26 2.2.4  27 2.2.5  29 2.2.5.1  29 2.2.5.2  30 2.2.6  31 2.2.7  34 CHƢƠNG 3: KT QU V THO LUẬN 35 3.1  35 3.2  36 3.3  39 3.4  44 3.5  47 3.6  50 CHƢƠNG 4: KT LUẬN V KIN NGH 55 4.1  55 4.2  55 TI LIỆU THAM KHO 56 PH LC  1 MỞ ĐẦU                                        -                   --  2                               Nam.                                 Nghiên cứu xây dựng thang alen chỉ thị huỳnh quang cho 05 locus Penta E, D18S51, D21S11, TH01 và D3S1358 phục vụ giám định.     3 CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN TI LIỆU 1.1. Phƣơng pháp xác định cá thể dựa trên chỉ thị ADN 1.1.1. Cơ sở khoa học của phân tích ADN xác định cá thể            ADN (axit               Hình 1. Cấu trúc phân tử ADN 4    , 23]:     - AGACTGCTAG -  - AGCCTGCGAG-       - ATAT ATAT ATAT-    - ATAT ATAT ATAT ATAT ATAT -        nhau.     1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 [...]... sử dụng cho chế tạo thang alen 20 3 Chế tạo thang alen đơn cho mỗi locus Penta E, D18S51, D21S11, TH01, D3S1358 4 Chế tạo thang alen phức hợp 05 locus trong cùng một phản ứng PCR 21 CHƢƠNG 2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tƣợng nghiên cứu sử dụng trong đề tài bao gồm các mẫu máu (khoảng 50 mẫu), 05 locus Penta E, D18S51, D21S11, TH01, D3S1358. .. sử dụng các cặp mồi huỳnh quang trong chế tạo thang alen chỉ thị tại Việt Nam chƣa có một cơ sở nghiên cứu nào tiến hành Trên cơ sở đó, chúng tôi tiến hành nghiên cứu xây dựng thang alen chỉ thị huỳnh quang với mục đích nâng cao năng lực phân tích cho các phòng thí nghiệm ở địa phƣơng có nhu cầu Nội dung nghiên cứu gồm có: 1 Tách chiết, định lƣợng ADN trong các mẫu nghiên cứu 2 Nhân bội và kiểm... Đánh dấu đồng vị phóng xạ tự ghi Gắn huỳnh quang/ Bechman CE Nhuộm bạc Gắn huỳnh quang/ Scaner Gắn huỳnh quang/ mao quản Gắn huỳnh quang/ LICOR Gắn huỳnh quang/ ALF Sequencer Gắn huỳnh quang/ FMBIO Scaner Gắn huỳnh quang/ ABI 310 Gắn huỳnh quang/ ABI 3100 và ABI 3100 advant Thành phần Sản phẩm PCR đƣợc đánh dấu với 04 màu huỳnh quang khác nhau Các băng ADN đƣợc đọc tự động trong quá trình điện di khi... 615 497 520 Mỗi bộ thuốc nhuộm huỳnh quang đƣợc sử dụng phải phù hợp với các thiết bị quang học, nguồn kích thích đi kèm Vì vậy, không linh động nhƣ phƣơng pháp nhuộm bạc, các bộ KIT phân tích STR sử dụng mồi gắn huỳnh quang có yêu cầu chặt chẽ về các thiết bị sử dụng đi kèm hơn 1.5 Tình hình nghiên cứu chế tạo thang alen chỉ thị huỳnh quang 1.5.1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới Budowle et al... scan huỳnh quang Pharos FXTM Plus Molecular Imager - Micropipette các loại: 1-10 l, 10 -100 l, 20- 200 l, 100 - 1000 l - ống eppendorf chuyên dùng cho PCR các loại: 1,5 ml; 0,5 ml và 0,2 ml - Đầu tip các loại: 10 l, 200 l, 1000 l và đầu tip có lọc 200 l 2.1.3 Mồ i cho các locus nghiên cưu ́ Trong đề tài , chúng tôi sử dụng các bộ mồi cho 05 locus Penta E, D18S51, D21S11, TH01 và D3S1358. .. ADN trong xác định cá thể ngƣời và huyết thống đã có nhiều bƣớc phát triển và thành tựu Tại trung tâm công nghệ Sinh học Đại học Quốc gia Hà Nội [13, 17], các tác giả đã nghiên cứu việc sử dụng xét nghiệm chỉ thị phân tử dựa trên PCR để nghiên cứu tần suất alen của hai locus D1S80 và D17S5, đồng thời với các nghiên cứu về locus gen đa hình nằm trên NST giới tính Y Các nghiên cứu của trƣờng... Promega để làm mẫu đối chứng dƣơng trong các thí nghiệm và để xác định các alen của thang alen sau khi chế tạo hoàn chỉnh Mẫu khuôn K562 có hàm lƣợng 10ng/µl, có độ tính sạch cao, có kiểu gen đã đƣợc xác định ở tất cả các locus, kể cả 05 locus sử dụng trong nghiên cứu 2.1.2 Thiết bị, vật tư nghiên cứu - Các máy móc cần thiết cho pha hóa chất, Tách chiết, PCR và điện di - Hệ thống điện di Sequi-Gen... gồm 6 locus là TH01, vWA, FGA, D8S1179, D18S51 và D21S11 với xác suất hai cá thể trùng nhau là 1/50.000.000 Những locus nêu trên đều sử dụng các phƣơng pháp huỳnh quang để phát hiện Từ năm 1996 phòng thí nghiệm của FBI đã đỡ đầu cho việc nghiên cứu và xây dựng cơ sở dữ liệu từ 13 đoạn FGA, TH01, TPOX, vWA, D3S1358, D5S818, D7S820, D13S317, D16S539, D18S51, CSF1PO, D8S1179 và D21S11 13 locus đánh... tích Thang alen chỉ thị để định danh alen khi điện di Trình tự mồi và thang chỉ thị alen thuộc bản quyền của hãng sản xuất, chúng đƣợc giữ bí mật và đƣợc bán kèm với bộ KIT khuếch đại PCR Sử dụng các bộ KIT phân tích cá thể, trên thế giới có hàng triệu các phân tích STR đƣợc tiến hành hàng năm tại các viện nghiên cứu trực thuộc chính phủ, các trƣờng đại học, các phòng xét nghiệm tƣ nhân phục. .. thứ hai: Một vài trình tự có những alen không đồng nhất: TH01, D18S51, D7S820 - Nhóm thứ ba: Cấu trúc kép với các alen khác nhau:vWA, FGA, D3S1358, D8S1179 - Nhóm thứ tƣ: Cấu trúc dạng lặp dạng phức: D21S11 1.2.2 Cỏc locus sử dụng trong nghiên cứu Bảng 1 Thông tin về các locus trong nghiên cứu TT Locus Vị trớ Đơn vị lặp Số đoạn lặp Kích thƣớc sản phẩm PCR 1 Penta E Cỏnh dài NST số 15 [AAAGA] 5 .        Nghiên cứu xây dựng thang alen chỉ thị huỳnh quang cho 05 locus Penta E, D18S51, D21S11, TH01 và D3S1358 phục vụ giám định.    . TƢ ̣ NHIÊN Bi Nguyên Hi NGHIÊN CƢ ́ U XÂY DƢ ̣ NG THANG ALEN CHI ̉ THI ̣ HUNH QUANG CHO 05 LOCUS PENTA E, D18S51, D21S11, TH01 V D3S1358 PHC V GIM ĐNH   :. TƢ ̣ NHIÊN Bi Nguyên Hi NGHIÊN CƢ ́ U XÂY DƢ ̣ NG THANG ALEN CHI ̉ THI ̣ HUNH QUANG CHO 05 LOCUS PENTA E, D18S51, D21S11, TH01 V D3S1358 PHC V GIM ĐNH       

Ngày đăng: 08/01/2015, 08:32

Nguồn tham khảo

Tài liệu tham khảo Loại Chi tiết
1. Nghiêm Xuân Dũng, (2004), “Nghiên cứu sử dụng kỹ thuật ADN trong nhận dạng cá thể người“, Báo cáo tổng kết đề tài khoa học kỹ thuật cấp Nhà nước, KC 04.05 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Nghiên cứu sử dụng kỹ thuật ADN trong nhận dạng cá thể người“
Tác giả: Nghiêm Xuân Dũng
Năm: 2004
2. Nghiêm Xuân Dũng, (2007), “Nghiên cứu ứng dụng và phát triển kỹ thuật phân tích ADN phục vụ chuẩn đoán hình sự’’, Báo cáo tổng kết đề tài khoa học kỹ thuật cấp Nhà nước, KC 04.31 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Nghiên cứu ứng dụng và phát triển kỹ thuật phân tích ADN phục vụ chuẩn đoán hình sự’’
Tác giả: Nghiêm Xuân Dũng
Năm: 2007
3. Nghiêm Xuân Dũng, Lê Đức Đào, Trần Minh Đôn, Nguyễn Thị Phương Thảo, Lương Thị Yến, Trần Công Tước, Trần Thị Quỳnh Hoa, Phạm Thị Thu Hương, Nguyễn Thị Lợi, Nguyễn Thị Hồng Hạnh, (2000), “Tạo dòng phân tử hai allen dị hợp tử THO1 A và THO1 B’’, Hội nghị sinh học Quốc gia, trang 35-38 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Tạo dòng phân tử hai allen dị hợp tử THO1 A và THO1 B’’, "Hội nghị sinh học Quốc gia
Tác giả: Nghiêm Xuân Dũng, Lê Đức Đào, Trần Minh Đôn, Nguyễn Thị Phương Thảo, Lương Thị Yến, Trần Công Tước, Trần Thị Quỳnh Hoa, Phạm Thị Thu Hương, Nguyễn Thị Lợi, Nguyễn Thị Hồng Hạnh
Năm: 2000
4. Nghiêm Xuân Dũng, Trần Minh Đôn, Lương Thị Yến, Lê Bích Trâm, Ngô Thị Kim, Quyền Đình Thi, Đào Thị Tuyết, (2003), “Bước đầu nghiên cứu đặc trưng cá thể người qua locus PENTA E, D18S51 bằng kỹ thuật PCR’’, Tạp chí Di truyền và ứng dụng số 2, trang 25-29 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Bước đầu nghiên cứu đặc trưng cá thể người qua locus PENTA E, D18S51 bằng kỹ thuật PCR’’, "Tạp chí Di truyền và ứng dụng số
Tác giả: Nghiêm Xuân Dũng, Trần Minh Đôn, Lương Thị Yến, Lê Bích Trâm, Ngô Thị Kim, Quyền Đình Thi, Đào Thị Tuyết
Năm: 2003
5. Nghiêm Xuân Dũng, Trần Minh Đôn, Lương Thị Yến, (2003), “Bước đầu khảo sát tần số phân bố alen của gen D21S11’’, Tạp chí nghiên cứu Y học Số 3, trang 81-85 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Bước đầu khảo sát tần số phân bố alen của gen D21S11’’, "Tạp chí nghiên cứu Y học
Tác giả: Nghiêm Xuân Dũng, Trần Minh Đôn, Lương Thị Yến
Năm: 2003
6. Nghiêm Xuân Dũng, Trần Minh Đôn, Lương Thị Yến, Lê Đức Đào, (2003), “Nghiên cứu sử dụng các phương pháp sinh học phân tử xác định các kiểu gen hệ nhóm máu ABO cá thể’’, Tạp chí nghiên cứu Y học. Tập 23, Số 3, trang 74-80 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Nghiên cứu sử dụng các phương pháp sinh học phân tử xác định các kiểu gen hệ nhóm máu ABO cá thể’’, "Tạp chí nghiên cứu Y học
Tác giả: Nghiêm Xuân Dũng, Trần Minh Đôn, Lương Thị Yến, Lê Đức Đào
Năm: 2003
8. Nghiêm Xuân Dũng, Trần Minh Đôn, Lương Thị Yến, Lê Thị Bích Trâm, (2004), “ứng dụng kỹ thuật PCR khảo sát sơ bộ tần suất phân bố các alen của locus D18S51 ở người Việt Nam’’, Tạp chí Di truyền học và ứng dụng, Số 1, trang 41-45 Sách, tạp chí
Tiêu đề: ứng dụng kỹ thuật PCR khảo sát sơ bộ tần suất phân bố các alen của locus D18S51 ở người Việt Nam’’, "Tạp chí Di truyền học và ứng dụng
Tác giả: Nghiêm Xuân Dũng, Trần Minh Đôn, Lương Thị Yến, Lê Thị Bích Trâm
Năm: 2004
10. Trần Minh Đôn, Nghiêm Xuân Dũng, Lương Thị Yến, Lê Thị Bích Trâm, (2003), “Nghiên cứu chế tạo và ứng dụng thang alen chỉ thị của locus D18S51”, Báo cáo Khoa học Hội nghị Công nghệ Sinh học toàn quốc, trang 1170-1172 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Nghiên cứu chế tạo và ứng dụng thang alen chỉ thị của locus D18S51”, "Báo cáo Khoa học Hội nghị Công nghệ Sinh học toàn quốc
Tác giả: Trần Minh Đôn, Nghiêm Xuân Dũng, Lương Thị Yến, Lê Thị Bích Trâm
Năm: 2003
11. Bùi Diệu Hồng, Hà Quốc Khanh, Đinh Thị Nga, (2003), “Tần suất các gen D3S1358, vWA, FGA của người Việt ứng dụng trong giám định gen”, Tạp chí nghiên cứu y học, trang 86-89 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Tần suất các gen D3S1358, vWA, FGA của người Việt ứng dụng trong giám định gen”, "Tạp chí nghiên cứu y học
Tác giả: Bùi Diệu Hồng, Hà Quốc Khanh, Đinh Thị Nga
Năm: 2003
12. Hồ Quang Huy, Vũ Triệu An, Văn Đình Hoa, Nghiêm Xuân Dũng, Trần Minh Đôn, Lương Thị Yến, (2004), “Tần suất alen STR PENTA E, D18S51, D18S51 và D21S11 của 107 người Mường Việt Nam”, Tạp chí Y-Dược học quân sự, trang 280-283 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Tần suất alen STR PENTA E, D18S51, D18S51 và D21S11 của 107 người Mường Việt Nam”, "Tạp chí Y-Dược học quân sự
Tác giả: Hồ Quang Huy, Vũ Triệu An, Văn Đình Hoa, Nghiêm Xuân Dũng, Trần Minh Đôn, Lương Thị Yến
Năm: 2004
13. Ngô Thu Hường, Nguyễn Văn Mùi, (2001), “Bước đầu khảo sát một số locus gen bằng các cặp mồi đơn để xác định huyết thống ở người’’, Tạp chí Di truyền học và ứng dụng, Số 2, trang 45-50 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Bước đầu khảo sát một số locus gen bằng các cặp mồi đơn để xác định huyết thống ở người’’, "Tạp chí Di truyền học và ứng dụng
Tác giả: Ngô Thu Hường, Nguyễn Văn Mùi
Năm: 2001
14. Hà Quốc Khanh, Đinh Thị Nga, Bùi Diệu Hồng và cộng sự, (2003), “Tần suất các gen D8S1179, D21S11, D18S51 của người Việt ứng dụng trong giám định gen hình sự’’, Báo cáo khoa học Hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc năm 2003, trang 1102-1105 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Tần suất các gen D8S1179, D21S11, D18S51 của người Việt ứng dụng trong giám định gen hình sự’’, "Báo cáo khoa học Hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc năm 2003
Tác giả: Hà Quốc Khanh, Đinh Thị Nga, Bùi Diệu Hồng và cộng sự
Năm: 2003
16. Nguyễn Hoàng Lộc, Lê Việt Dũng, Trần Quốc Dung, (2005), Giáo trình Công nghệ ADN tái tổ hợp, NXB Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh Sách, tạp chí
Tiêu đề: Giáo trình Công nghệ ADN tái tổ hợp
Tác giả: Nguyễn Hoàng Lộc, Lê Việt Dũng, Trần Quốc Dung
Nhà XB: NXB Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh
Năm: 2005
17. Lê Đình Lương, (2001). “Nghiên cứu tính đặc trưng cá thể và tần số phân bố các alen của ba locus VNTR (D1S80, YNZ22, APOB) ở Việt Nam bằng kỹ thuËt PCR’’. Tạp chí Di truyền học và ứng dụng, số 4, trang 40-44TIẾNG ANH Sách, tạp chí
Tiêu đề: Nghiên cứu tính đặc trưng cá thể và tần số phân bố các alen của ba locus VNTR (D1S80, YNZ22, APOB) ở Việt Nam bằng kỹ thuËt PCR’’. "Tạp chí Di truyền học và ứng dụng
Tác giả: Lê Đình Lương
Năm: 2001
19. Budowle B., Adams D.E., and Allen R.C., Fragment Length Polymophisms for Forensic Science Applications, Methods in Nucleic Acid Research, 181-202 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Fragment Length Polymophisms for Forensic Science Applications
20. Budowle B, Safantila A, Hochmeister MN ADN Corney C T, (1994), The application of STR to Forensic Science, The PCR, pp. 244-256 Sách, tạp chí
Tiêu đề: The application of STR to Forensic Science
Tác giả: Budowle B, Safantila A, Hochmeister MN ADN Corney C T
Năm: 1994
23. Butler MJ, (2006), Genetics ADN Genomics of Core STR loci used in human identity testing, J. Forensic Sci, 51 (Mar 2006 issue) Sách, tạp chí
Tiêu đề: Genetics ADN Genomics of Core STR loci used in human identity testing
Tác giả: Butler MJ
Năm: 2006
24. Butler MJ, (2007), Mini-review: Short Tandem Repeat typing technologies used in human identity testing. Biotechniques, Vol.43, No.4, Sii-Sv Sách, tạp chí
Tiêu đề: Biotechniques, Vol.43, No.4
Tác giả: Butler MJ
Năm: 2007
7. Nghiêm Xuân Dũng, Trần Minh Đôn, Lương Thị Yến, Lê Thị Bích Trâm, (2003), “Tối ƣu điều kiện PCR sử dụng phức hợp mồi của 2 locus Khác
15. Đinh Đoàn Long, Đỗ Lê Thăng, (2009), Cơ sở di truyền học phân tử và tế bào, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội Khác

Xem thêm

TRÍCH ĐOẠN

Nguyên liệu Phương pháp nghiên cứu Kết quả kiểm tra sản phẩm nhân bội trên gel agarose Kết quả điện di khảo sát mẫu trên gel poly acrylamide Kết quả chế tạo thang alen dạng đơn lẻ Kết quả chế tạo thang alen dạng phức hợp 05 locus TIẾNG VIỆT BẢNG VÀ HÌNH ẢNH TRONG LUẬN VĂN

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w