C Thời gian Số chu kỳ
3.5.Kết quả chế tạo thang alen dạng đơn lẻ
Sau khi tinh sạch, các mẫu sản phẩm mỗi locus đƣợc trộn lẫn để làm khuôn cho nhân bội chế tạo thang. Do các mẫu có hàm lƣợng ADN – sản phẩm PCR khác nhau nên để đảm bảo hàm lƣợng đầu vào của mỗi mẫu là nhƣ nhau và không quá nhiều dẫn đến ức chế phản ứng PCR, các mẫu sản phẩm sau tinh sạch phải đƣợc pha loãng về một nồng độ nhất định. Trong nghiên cứu, chúng tôi tiến hành pha loãng tất cả các mẫu xuống nồng độ 10ng/ul. Nhƣ vậy, theo tính toán, mỗi phản ứng PCR nhân bội hỗn hợp alen đều có hàm lƣợng khuôn đầu vào khoảng 50 ng cho một phản ứng 25ul.
Kết quả chế tạo thang alen đơn cho từng locus nhƣ sau:
Locus Penta E
Kết quả cho thấy, thang alen chế tạo từ các mẫu đƣợc lựa chọn mang đầy đủ các alen có thể có trong bƣớc khảo sát. Việc điều chỉnh hàm lƣợng
Hình 20. Kết quả chế tạo thang alen locus Penta E LD: Thang alen đơn đƣợc chế tạo hoàn chỉnh
K562: Mẫu chuẩn; Giếng 7,10,22,1,12,16: Các mẫu lựa chọn cho chế tạo thang 5, 9-20: Các alen thu đƣợc sau khảo sát
K562 7 10 22 1 LD 12 165 5 14 9 11 10 12 13 16 17 15 18 19 20
khuôn đầu vào trong quá trình nhân bội cho kết quả thang có các alen tƣơng đồng, không có alen nào đƣợc nhân bội nhiều hơn những alen còn lại. Thang alen thu đƣợc sử dụng phƣơng pháp trộn mẫu bao gồm các alen 5-9-10-11-12- 13-14-15-16-17-18-19-20.
Locus D18S51
Thang alen locus D18S51 thu đƣợc bao gồm các alen 12 đến 21. Thang alen thu đƣợc có tỷ lệ các alen thành phần phù hợp, thể hiện ở các băng ADN đồng đều, không có sai khác.
Locus D21S11
Hình 21. Kết quả chế tạo thang alen locus D18S51 LD: Thang alen đơn đƣợc chế tạo hoàn chỉnh
K562: Mẫu chuẩn; Giếng 25,17,12,11,9,4: Các mẫu lựa chọn cho chế tạo thang 12-21: Các alen thu đƣợc sau khảo sát
25 17 12 11 9 LD 4 K56212 13 12 13 17 17 18 15 19 15 20 21 14 16 15 9 11 4 LD 21 7 3 K562 29 30 31 29 32.2 29.2 30 29.2 30.2 31.2 33 30.2 33.2 32 34
Sử dụng các mẫu đã lựa chọn để chế tạo thang alen locus D21S11, chúng tôi thu đƣợc thang alen bao gồm các alen từ 29 đến 34. Kết quả cho thấy thang alen thu đƣợc có chất lƣợng tốt, các alen đồng đều, không có sự chênh lệch tỷ lệ
Locus TH01
Thang alen locus TH01 thu đƣợc bao gồm các alen từ 5 đến 11, bao gồm một alen lẻ 9.3. Các băng ADN (các alen) của thang sau chế tạo có sự tƣơng đồng cao cho thấy tỷ lệ trộn mẫu phù hợp.
Locus D3S1358
Hình 23. Kết quả chế tạo thang alen locus TH01 LD: Thang alen đơn đƣợc chế tạo hoàn chỉnh
K562: Mẫu chuẩn; Giếng 3,22,7,15: Các mẫu lựa chọn cho chế tạo thang 5-11: Các alen thu đƣợc sau khảo sát
K562 3 LD 22 7 156 6 9.3 9 11 10 7 8 5 6 12 18 LD 4 K562 16 14 13 15 17 18 19 16
Thang alen locus D3S1358 thu đƣợc bao gồm các alen từ 13 đến 19. Tỷ lệ trộn mẫu trong quá trình chế tạo thang phù hợp nên thang alen thu đƣợc có các băng (các alen) đồng đều, có thể sử dụng cho các nghiên cứu tiếp theo.