Nuôi trồng thủy sản là ngành kinh tế mũi nhọn Dịch bệnh bùng phát gây ảnh hưởng lớn đến ngành Một số phương pháp chẩn đoán bệnh: PCR, RTPCR, ELISA, hóa mô miễn dịch, lai tại chỗ, miễn dịch huỳnh quang, ... Bệnh mới, có tác nhân gây bệnh mới chưa biết được cấu trúc di truyền, không tạo được đoạn mồi, kháng thể,… Phương pháp mô bệnh học truyền thống là phương pháp rất hiệu quả trong chẩn đoán mầm bệnh
GVHD: Ths.Lê Văn Bảo Duy SVTH: Nguyễn thị hiền nguyễn Nhật phong Lớp: Ngư Y 46 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HUẾ KHOA THỦY SẢN ĐỀ TÀI: PHƯƠNG PHÁP MÔ BỆNH HỌC TRUYỀN THỐNG ĐẶT VẤN ĐỀ Nuôi trồng thủy sản là ngành kinh tế mũi nhọn Dịch bệnh bùng phát gây ảnh hưởng lớn đến ngành Một số phương pháp chẩn đoán bệnh: PCR, RT-PCR, ELISA, hóa mô miễn dịch, lai tại chỗ, miễn dịch huỳnh quang, Bệnh mới, có tác nhân gây bệnh mới chưa biết được cấu trúc di truyền, không tạo được đoạn mồi, kháng thể,… Phương pháp mô bệnh học truyền thống là phương pháp rất hiệu quả trong chẩn đoán mầm bệnh NỘI DUNG ĐỊNH NGHĨA Mô bệnh học (Histopathology) là phương pháp xác định các tổn thương ở các mô tế bào dựa trên các thủ thuật nhuộm tế bào và quan sát bằng kính hiển vi Phương pháp này cho phép người phân tích kết luận tính chất của các vùng tổn thương Thiết bị máy móc: Máy cắt lát mô tế bào Microtom, máy xử lý mẫu tự động, máy đổ parafin, máy sấy slide, kính hiển vi Thiết bị máy móc: Máy cắt lát mô tế bào Microtom, máy xử lý mẫu tự động, máy đổ parafin, máy sấy slide, kính hiển vi Dụng cụ : Bộ nhuộm mô, khay nhuộm ,bộ giải phẫu, lam và lamel sạch, chai lọ, khay men và thùng đựng mẫu Dụng cụ : Bộ nhuộm mô, khay nhuộm ,bộ giải phẫu, lam và lamel sạch, chai lọ, khay men và thùng đựng mẫu Hóa chất : Dung dịch cố định: dung dịch Davidson, Buffered Formalin, Bouin; Hóa chất dùng để nhuộm: Hematocylin-Mayer, Hematocylin- Harris, thuốc nhuộm Eosin Hóa chất : Dung dịch cố định: dung dịch Davidson, Buffered Formalin, Bouin; Hóa chất dùng để nhuộm: Hematocylin-Mayer, Hematocylin- Harris, thuốc nhuộm Eosin DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT Thu mẫu Thu mẫu Cố định và bảo quản mẫu Cố định và bảo quản mẫu Vận chuyển mẫu đến nơi xử lý Vận chuyển mẫu đến nơi xử lý Phương pháp xử lý mẫu Phương pháp xử lý mẫu Đúc parafin Đúc parafin Cắt lát mẫu Cắt lát mẫu Nhuộm Hematoxylin và Eosin Nhuộm Hematoxylin và Eosin Đọc kết quả mô bệnh Đọc kết quả mô bệnh CÁCH TIẾN HÀNH Lấy mẫu Lấy mẫu Cắt mẫu Cắt mẫu Cất mẫu Cất mẫu Etanol 70% Etanol 70% Etanol 95% 3 lần, 30-60 phút Etanol 95% 3 lần, 30-60 phút Etanol 100% 3 lần, 30-60 phút Etanol 100% 3 lần, 30-60 phút Xilen I 60 phút Xilen I 60 phút Xilen II 60 phút Xilen II 60 phút Parafin + Xilen 1/1, 2-12 giờ Parafin + Xilen 1/1, 2-12 giờ Parafin nóng chảy 58- 60 o C, 4 giờ Parafin nóng chảy 58- 60 o C, 4 giờ Chuẩn bị mẫu Xử lý mẫu Phương pháp xử lý mẫu Đổ Parafin đã nóng chảy vào khuôn Đặt khuôn lên dàn lạnh Cắt thành một khối hình thang cân hoặc hình chữ nhật Cắt lát mẫu Dùng máy cắt microtom, lát cắt dày 5-7micron Đưa lát cắt vào nước ấm (40-45 o C, 1-2 phút) Dùng slide (lam) sạch lấy lát cắt ra khỏi nước Đặt lên máy sấy slide (45-60 o C, 1-4h) Đúc paraffin Xilen I 5 phút Xilen I 5 phút Xilen II 5 phút Xilen II 5 phút Etanol 100% 2-3 phút Etanol 100% 2-3 phút Etanol 95% 2-3 phút Etanol 95% 2-3 phút Etanol 80% 2-3 phút Etanol 80% 2-3 phút Etanol 50% 2-3 phút Etanol 50% 2-3 phút Nước cất 3-6 lần Nước cất 3-6 lần Hematoxylin- Mayer 4-6 phút Hematoxylin- Mayer 4-6 phút Nước cất 4-6 phút Nước cất 4-6 phút Eosin 2 phút Eosin 2 phút Etanol 95% 10 lần Etanol 95% 10 lần Etanol 100% 10 lần Etanol 100% 10 lần Xilen I 2-3 phút Xilen I 2-3 phút Xilen II 2-3 phút Xilen II 2-3 phút Keo Bomcanada Keo Bomcanada Nhuộm Hematoxylin và Eosin Hematoxylin - Mayer Xilen I 5 phút Xilen I 5 phút Xilen II 5 phút Xilen II 5 phút Etanol 100% 2-3 phút Etanol 100% 2-3 phút Etanol 95% 2-3 phút Etanol 95% 2-3 phút Etanol 80% 2-3 phút Etanol 80% 2-3 phút Etanol 50% 2-3 phút Etanol 50% 2-3 phút Nước 3-6 lần Nước 3-6 lần Hematoxylin- Harris 10-15 phút Hematoxylin- Harris 10-15 phút Nước 4-6 phút Nước 4-6 phút Cồn axit 3-10 lần Cồn axit 3-10 lần Nước Nước Amoniac 3-5 lần Amoniac 3-5 lần Nước cất 10-20 phút Nước cất 10-20 phút Eosin 2-5 phút Eosin 2-5 phút Etanol 95% 2 phút Etanol 95% 2 phút Etanol 100% 3 phút Etanol 100% 3 phút Xilen I 2 phút Xilen I 2 phút Xilen II 2 phút Xilen II 2 phút Hematoxylin - Harris Nghiên cứu các tổn thương ở các mô và tế bào (vi thể) Phát hiện ra các vùng mô bị thương tổn: hoại tử, trương phù, Phát hiện các tác nhân gây bệnh Đưa ra các phương pháp điều trị bệnh phù hợp ỨNG DỤNG [...]...ƯU, NHƯỢC ĐIỂM Ưu điểm: Chẩn đoán chính xác nhiều loại bệnh khác nhau Phát hiện ra một số bệnh mà phương pháp khác không tìm ra được Rẻ tiền và dễ thực hiện Nhược điểm: Rất khó phát hiện giai đoạn xâm nhập đầu tiên của bệnh Thao tác tương đối chậm Sử dụng kết hợp với các dữ liệu: môi trường, sức khỏe . thể,… Phương pháp mô bệnh học truyền thống là phương pháp rất hiệu quả trong chẩn đoán mầm bệnh NỘI DUNG ĐỊNH NGHĨA Mô bệnh học (Histopathology) là phương pháp xác định các tổn thương ở các mô tế bào. phong Lớp: Ngư Y 46 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HUẾ KHOA THỦY SẢN ĐỀ TÀI: PHƯƠNG PHÁP MÔ BỆNH HỌC TRUYỀN THỐNG ĐẶT VẤN ĐỀ Nuôi trồng thủy sản là ngành kinh tế mũi nhọn Dịch bệnh bùng phát gây ảnh hưởng. phương pháp chẩn đoán bệnh: PCR, RT-PCR, ELISA, hóa mô miễn dịch, lai tại chỗ, miễn dịch huỳnh quang, Bệnh mới, có tác nhân gây bệnh mới chưa biết được cấu trúc di truyền, không tạo được