Nghiên cứu cơ chế viêm của cá giò (rachycentron canadum) sau khi tiêm vắc xin phòng bệnh vi khuẩn bằng phương pháp mô bệnh học

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG NGUYỄN THỊ PHƯƠNG HUYỀN NGHIÊN CỨU CƠ CHẾ VIÊM CỦA CÁ GIÒ (RACHYCENTRON CANADUM) SAU KHI TIÊM VẮC XIN PHÒNG BỆNH VI KHUẨN BẰNG PHƯƠNG PHÁP MÔ BỆNH HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ Khánh Hòa - 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG NGUYỄN THỊ PHƯƠNG HUYỀN NGHIÊN CỨU CƠ CHẾ VIÊM CỦA CÁ GIÒ (RACHYCENTRON CANADUM) SAU KHI TIÊM VẮC XIN PHÒNG BỆNH VI KHUẨN BẰNG PHƯƠNG PHÁP MÔ BỆNH HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ Ngành: Nuôi trồng Thủy sản Mã số: 60 62 03 01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS PHAN THỊ VÂN CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG KHOA SAU ĐẠI HỌC TS LỤC MINH DIỆP HOÀNG HÀ GIANG Khánh Hòa - 2015 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thông tin thích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Quảng Ninh, 25 tháng 11 năm 2014 Tác giả Nguyễn Thị Phương Huyền ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp, nhận giúp đỡ nhiệt tình thầy cô, gia đình bạn bè Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến thầy cô trường Đại học Nha Trang, Ban lãnh đạo Viện nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản 1, Trung tâm Nghiên cứu Quan trắc Cảnh báo môi trường dịch bệnh Thủy sản khu vực miền Bắc Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi suốt trình học tập thực luận văn tốt nghiệp Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Phan Thị Vân, Ths Võ Anh Tú, Ths.Cung Thị Lý tận tình hướng dẫn, hỗ trợ giúp đỡ bố trí thí nghiệm, thu mẫu xử lý mẫu suốt trình thực tập tốt nghiệp hoàn thành khóa luận Cuối cùng, lời cảm ơn chân thành xin gửi tới gia đình tập thể lớp anh chị đồng nghiệp bên cạnh động viên, đóng góp cho thành công luận văn Trong thời gian thực đề tài tốt nghiệp, có nhiều cố gắng, nhiên thời gian kiến thức hạn chế nên tránh khỏi sai sót định Tôi mong quan tâm, góp ý của Hội đồng khoa học, quí thầy cô bạn Tôi xin chân thành cảm ơn! Quảng Ninh, 25 tháng 11 năm 2014 Học viên thực Nguyễn Thị Phương Huyền iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC HÌNH v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT .vii MỞ ĐẦU CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược tình hình nuôi cá giò giới 1.2 Tình hình nuôi cá giò Việt Nam 1.3 Tình hình bệnh Vibriosis cá giò 1.3.1 Tình hình bệnh Vibriosis cá giò giới 1.3.2 Tình hình bệnh Vibriosis cá giò Việt Nam 1.4 Sử dụng vắc xin nuôi trồng thủy sản 1.4.1 Tình hình sử dụng vắc xin NTTS giới 1.4.2 Tình hình triển vọng sử dụng vắc xin NTTS Việt Nam 1.5 Biến đổi mô tế bào vùng tiêm vắc xin 11 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 14 2.2 Đối tượng nghiên cứu 14 2.3 Phương pháp nghiên cứu 14 2.3.1 Các nội dung thực 14 2.3.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm 15 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu mô học 16 2.3.4 Phương pháp xác định loại tế bào 18 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 20 3.1 Kết nghiên cứu 20 3.1.1 Đặc điểm mô học cá giò khỏe 20 3.1.2 Mô cá giò ngày sau tiêm loại vắc xin nhũ dầu 21 3.1.3 Mô cá giò 14 ngày sau tiêm loại vắc xin nhũ dầu 30 3.1.4 Mô cá giò 21 ngày sau tiêm loại vắc xin nhũ dầu 40 iv 3.2 Thảo luận 46 3.2.1 Quá trình viêm 46 3.2.2 Bước đầu đánh giá hiệu loại vắc xin nhũ dầu 48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 50 Kết luận 50 Kiến nghị 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 v DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Cá giò (Rachycentron canadum) 14 Hình 2.2 Sơ đồ khối nội dung thực đề tài .15 Hình 2.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 15 Hình 2.4 Các bước thực phương pháp mô bệnh học 16 Hình 2.5 Tế bào hồng cầu .18 Hình 2.6 Tế bào bạch cầu 19 Hình 2.7 Tế bào đại thực bào 19 Hình 2.8 Tế bào Lympho 19 Hình 3.1 Mô cá giò bình thường 20 Hình 3.2 Mô cá giò ngày sau tiêm nhũ dầu, x100 21 Hình 3.3 Mô cá giò ngày sau tiêm vắc xin V1, V6, V4-1, V4-2, x100 22 Hình 3.4 Mô cá giò sau ngày tiêm nhũ dầu, x400 23 Hình 3.5 Biến đổi mô sau ngày tiêm vắc xin V1, x400 23 Hình 3.6 Biến đổi mô sau ngày tiêm vắc xin V6, x400 24 Hình 3.7 Biến đổi mô sau ngày tiêm vắc xin V4-1, x400 24 Hình 3.8 Biến đổi mô sau ngày tiêm vắc xin V4-2, x400 25 Hình 3.9 Lớp tế bào sau ngày tiêm nhũ dầu, x1000 25 Hình 3.10 Lớp tế bào sau ngày tiêm vắc xin V1, x1000 26 Hình 3.11 Lớp tế bào sau ngày tiêm vắc xin V6, x1000 27 Hình 3.12 Lớp tế bào sau ngày tiêm vắc xin V4-1, x1000 28 Hình 3.13 Lớp tế bào ổ viêm sau ngày tiêm vắc xin V4-2, x1000 30 Hình 3.14 Mô cá giò sau 14 ngày tiêm nhũ dầu, x100 .30 Hình 3.15 Mô cá giò 14 ngày sau tiêm vắc xin V1, V6, V4-1, V4-2 .31 Hình 3.16 Mô cá giò 14 ngày sau tiêm nhũ dầu (đối chứng) .32 Hình 3.17 Biến đổi mô 14 ngày sau tiêm vắc xin V1, x400 32 Hình 3.18 Biến đổi mô 14 ngày sau tiêm vắc xin V6, x400 33 Hình 3.19 Biến đổi mô 14 ngày sau tiêm vắc xin V4-1, x400 .33 Hình 3.20 Biến đổi mô 14 ngày sau tiêm vắc xin V4-2, x400 .33 Hình 3.21 Lớp tế bào mô sau 14 ngày tiêm nhũ dầu, x1000 34 Hình 3.22 Lớp tế bào ổ viêm sau 14 ngày tiêm vắc xin V1, x1000 .35 vi Hình 3.23 Các lớp tế bào ổ viêm sau 14 ngày tiêm vắc xin V6, x1000 36 Hình 3.24 Ba lớp tế bào ổ viêm sau 14 ngày tiêm vắc xin V4-1, x1000 37 Hình 3.25 Lớp tế bào ổ viêm sau 14 ngày tiêm vắc xin V4-1, x1000 38 Hình 3.26 Các lớp tế bào ổ viêm sau 14 ngày tiêm vắc xin V4-2, x1000 .39 Hình 3.27 Mô cá giò 21 ngày sau tiêm nhũ dầu, x100 40 Hình 3.28 Mô cá giò 21 ngày sau tiêm vắc xin V1, V6, V4-1, V4-2, x100 .40 Hình 3.29 Mô cá giò 21 ngày sau tiêm nhũ dầu, x400 41 Hình 3.30 Mô cá giò 21 ngày sau tiêm vắc xin V1, x400 41 Hình 3.31 Mô cá giò 21 ngày sau tiêm vắc xin V6, x400 42 Hình 3.32 Mô cá giò 21 ngày sau tiêm vắc xin V4-1, x400 42 Hình 3.33 Mô cá giò 21 ngày sau tiêm vắc xin V4-2, x400 42 Hình 3.34 Mô cá giò 21 ngày sau tiêm nhũ dầu, x1000 43 Hình 3.35 Lớp tế bào sau 21 ngày tiêm vắc xin V1, x1000 43 Hình 3.36 Lớp tế bào sau 21 ngày tiêm vắc xin V6, x1000 44 Hình 3.37 Lớp tế bào sau 21 ngày tiêm vắc xin V4-1, x1000 45 Hình 3.38 Lớp tế bào sau 21 ngày tiêm vắc xin V4-2, x1000 46 vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BKD Bệnh vi khuẩn thận (Bacteria Kiney Disease) BSA Anbumin huyết bò (Bovine Serum Anbumin) CFA Chất bổ trợ hoàn chỉnh (Complete Freund’s Adjuvant) E Tế bào hồng cầu (Erythrocyte) ERM Bệnh xuất huyết đường tiêu hóa (Enteric Redmouth) FAO Tổ chức Nông lương Liên hợp quốc (Food and Agriculture Organization) H&E Hematocylin Eosin L Lympho bào M Đại thực bào (Macrophage) NTTS Nuôi trồng thủy sản O Giọt dầu (Drop oil) SRBC Hồng cầu cừu (Sheep Red Blood Cells) WBC Tế bào bạch cầu (White blood cell) MỞ ĐẦU Cá giò (Rachycentron canadum) loài cá dữ, ăn thịt động vật có tốc độ sinh trưởng nhanh Trong tự nhiên, cá giò sống vùng nước mặn, nước lợ ven biển, rặng san hô vùng biển khơi thuộc vùng biển nhiệt đới, cận nhiệt đới vùng nước ấm biển ôn đới (Shaffer, 1989) Do có tốc độ sinh trưởng nhanh (có thể đạt 6-8 kg sau năm nuôi), chất lượng thịt cá ngon có tiềm sản lượng lớn, giá trị cao thị trường nên cá giò nuôi phổ biến nhiều nước giới, có Việt Nam (Su ctv, 2000) Tại Việt Nam, cá giò nuôi lồng biển tỉnh thành Hải Phòng, Quảng Ninh, Nghệ An, Khánh Hòa Vũng Tàu (Svennevig Nguyễn Quang Huy, 2005) Dịch bệnh yếu tố có ảnh hưởng lớn tới sụt giảm suất loài nuôi thủy sản, có cá giò Đối với cá giò, vi rút tác nhân gây tỷ lệ chết cao giai đoạn cá giống vi khuẩn Vibrio (gây bệnh Vibriosis) lại tác nhân gây bệnh chủ yếu giai đoạn cá thương phẩm (Lopez ctv, 2002) Cá giò bị bệnh Vibriosis thường có tỷ lệ chết 80% (Liu ctv, 2004) cá tháng tuổi, [...]...2 tiêm vắc xin phòng bệnh vi khuẩn bằng phương pháp mô bệnh học được thực hiện và là một phần của đề tài nghiên cứu cấp nhà nước nói trên Mục tiêu nghiên cứu  Nghiên cứu sự biến đổi mô học tại vùng tiêm vắc xin  Bước đầu nghiên cứu khả năng gây đáp ứng miễn dịch của các loại vắc xin khác nhau Nội dung nghiên cứu  So sánh sự biến đổi mô cơ cá giò tại vị trí tiêm ở 7, 14, 21 ngày sau khi tiêm các... nhau và ít bắt gặp các tế bào máu (Hình 3.1D) 3.1.2 Mô cơ cá giò 7 ngày sau khi tiêm các loại vắc xin và nhũ dầu 3.1.2.1 Mô cơ cá giò 7 ngày sau khi tiêm các loại vắc xin và nhũ dầu, x100 Hình 3.2 Mô cơ cá giò 7 ngày sau khi tiêm nhũ dầu, x100 Quan sát trên tiêu bản mô cơ 7 ngày sau khi tiêm nhũ dầu (Hình 3.2), nhận thấy mô cơ có sự biến đổi Mô cơ bắt màu hồng của Eosin, các sợi cơ xếp song song, một... chứng vi m nào của cơ thể sinh vật cũng xảy ra 3 quá trình nêu trên và có quan hệ mật thiết với nhau Đây cũng là một trong nhiều bản năng tự vệ của cơ thể trước sự xâm nhập của tác nhân lạ Đến nay, trên thế giới đã có một số nghiên cứu về biến đổi mô học của cá sau khi tiêm vắc xin nhằm nâng cao hiệu quả của vắc xin trong phòng bệnh Đặc trưng của biến đổi mô học sau khi tiêm vắc xin chính là phản ứng vi m. .. có 35 loại vắc xin phòng bệnh vi khuẩn và 2 loại vắc xin phòng bệnh vi rút được đăng ký bản quyền và sử dụng cho 6 đối tượng nuôi phổ biến trên 41 quốc gia trên thế giới bao gồm cá hồi, cá chẽm châu Âu, cá chẽm châu Á, cá rô phi và cá Bơn đuôi vàng Tại Na Uy, vi c sử dụng vắc xin phòng bệnh do vi khuẩn rất có hiệu quả Những nghiên cứu trước đây cho thấy phòng bệnh cho cá bằng vắc xin ở quy mô thương... nhau Sợi cơ bị hoại tử hoàn toàn, không còn cấu trúc bình thường Vùng vi m bắt màu đậm của thuốc nhuộm Hematocylin So với khi tiêm nhũ dầu thì tiêm các loại vắc xin nhũ dầu gây biến đổi mô học rõ rệt, sợi cơ hoại tử nghiêm trong Nhận thấy khi tiêm vắc xin V4-1,V4-2 xuất hiện vùng vi m rộng nhất 3.1.2.2 Biến đổi mô cơ sau 7 ngày tiêm các loại vắc xin, x400 Hình 3.4 Mô cơ cá giò sau 7 ngày tiêm nhũ dầu,... Tên tiếng Vi t: Cá Giò, cá Bớp, cá Bóp Tên tiếng Anh: Cobia, Black Kingfish, lemonfish 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Các nội dung thực hiện 15 Vắc xin thử nghiệm phòng bệnh Vibriosis Tiêm 0,1ml vắc xin vào cơ lưng cá giò (15-25gam) Thu mẫu mô ở 7, 14, 21 ngày sau khi tiêm Xử lý mẫu mô Đọc kết quả Kết luận và đề xuất ý kiến Hình 2.2 Sơ đồ các nội dung thực hiện của đề tài 2.3.2 Phương pháp bố trí... tiêm 3.1.1 Đặc điểm mô học cơ cá giò khỏe Tiến hành phân tích mẫu mô cơ cá giò tại vị trí cơ lưng, cấu tạo chủ yếu là mô cơ vân Hình 3.1 Mô cơ cá giò bình thường (Sợi vân dọc (A); sợi vân ngang (B), A(x40), B(x100), C(x400), D(x1000)) Do vắc xin được tiêm ở vị trí cơ lưng, chính vì vậy để nghiên cứu sự biến đổi mô tại vị trí tiêm, cần phải có hình ảnh cơ cá khỏe để so sánh Hình 3.1 là tiêu bản mô cơ. .. Kết quả nghiên cứu Sau khi tiêm 4 loại vắc xin và tiến hành thu mẫu mô ở 7, 14, 21 ngày (tổng thu 60 mẫu) thì tất cả các mẫu mô đều có biến đổi tế bào tại vị trí tiêm, có xuất hiện vùng vi m và phản ứng vi m xảy ra, xuất hiện ổ vi m bên trong vùng vi m Sau khi tiêm đối chứng nhũ dầu và tiến hành thu mẫu mô sau 7, 14, 21 ngày (tổng thu 15 mẫu) thi trong tất cả các mẫu mô đều thể hiện biến đổi mô học giống... Nghiên cứu sản xuất vắc xin phòng bệnh nhiễm khuẩn cho cá tra, basa, cá giò, cá Hồng Mỹ nuôi công nghiệp” Từ đầu năm 2006, PHARMAQ- công ty dược phẩm thủy sản hàng đầu thế giới của Na Uy đã chọn cá tra Vi t Nam là đối tượng đầu tiên để nghiên cứu sản xuất vắc xin phòng bệnh gan thận mủ (do vi khuẩn Edwardsiella ictaluri gây ra) cho cá tra Từ cuối năm 2009, bước đầu thử nghiệm tiêm vắc xin phòng bệnh. .. loại vắc xin trên thì bé hơn Quan sát tiêu bản mô cơ cá giò cắt ngang sau 7 ngày tiêm vắc xin V4-1 ở độ phóng đại x100 thấy vùng vi m gây hoại tử nghiêm trọng một vùng cơ lớn Vùng vi m bắt màu tím của thuốc nhuộm Hematocylin khác với vùng mô bình thường bên cạnh chưa bị biến đổi Vùng vi m xuất hiện rất nhiều giọt dầu có kích thước bé, rải rác có giọt dầu kích thước lớn hơn Vùng vi m khi tiêm vắc xin