Nghiên cứu định tính, định lượng đồng thời morphin và codein trong cao lỏng opi và viên nén opizoic bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

BỘ GIẢO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐAI HOC BỘ Y TÊ Dược HÀ NỘI NGUYỄN HẢI BÌNH NGHIÊN CỨU ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG ĐỔNG THỜI MORPHIN VÀ CODEIN TRONG CAO LỎNG OPI VÀ VIÊN NÉN OPIZOIC BANG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NÃNG CAO (HPLC) LUẬN VÃN THAC SỸ D c HOC Chuyên ngành: Kiểm nghiệm dược phẩm - Độc chất Mã số : 3.02.05 Người hướng dẫn: PGS TS TRẦN TỬ AN TS TRỊNH VÃN LẨU Hà Nội- 2001 Lời d m ơn Ị Tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới: PQS.TS Trần Tứ ỉĩn vá TS Trịnh Văn Lẩu người trực tiếp hướng dẫn suốt trinh thực luận văn tốt nghiệp Đồng thời chân thành cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình càn hộ Phòng Đơng dược Phòng nĩỹ phẩm - Viện Kiểm ĩlghiệm thầy, cô Bộ môn Phân tích Phòng Đào tạo sau đại học - Trường Đại học Được lịà nội tạo điều giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Được sỹ ĩĩguyễn ^ải Binh MỤC LỤC Trang PHẦN 1: ĐẶT VẤN ĐỂ PHẦN 2: TỔNG QUAN 2.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ THUỐC PHỆN 2 CAO LỎNG OPI VÀ VIÊN NÉN OPIZOIC 2.2.1 Cao lỏng O pi 2.2 V iên nén O pizoic ■ 2.3 MỘT SỐ ALCALOID CHÍNH CỬA THUỐC PHIỆN 5 2.3.1 N h ó m m orphinan 2.3.2 N h ó m benzylisoquinolin 2.3.3 N h ó m ptalitisoquinolin 2.3.4 N hóm protopin 2.4 MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP CHIÊT XUẤT MORPHIN VÀ CODEIN TỪ CAO LỎNG OPI VÀ VIÊN NÉN OPIZOIC 2.4.1 Phương pháp chiết theo S I.C anepskaya 10 B A K liaskinaya 2.4.2 Phương pháp chiết theo D ược điển V iệt N am II tập 3, 12 D ược điển T rung Q uốc 1997 D ược điển T hái L an 1987 2.4.3 Phương pháp chiếttheo TCCS X N D P T Ư I 13 2.4.4 Phương pháp theo TCCS C T D -V T Y T T rà V inh, X í 13 n g h iệp H oá dược TCN V V 2.4.5 Phương p h áp chiết theo BP 98 Dược điển Ấ n Đ ộ 1996 14 2.4.6 Phương p h áp ch iết theo U SP 23 15 U SP 24 2.5 MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG MORPHIN VÀ CODEIN TỪCAO LỎNG OPI 16 VÀ VIÊN NÉN OPIZOIC 2.5.1 Phương pháp tru ng hoà 16 2.5.2 Phương p h áp đo quang 16 M ột số phương pháp định lượng khác 17 2.5.4 Phưcỉng pháp H PLC 17 PHẦN 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 3.1 ĐỐI TƯỢNGNGHIÊNCÚU 24 24 3.2 DỰNG CỤ - HOÁ CHẤT 3.3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ú u 3.3.1 X ây dựng phương pháp chiết xuất M o rphin C odein từ ^2 26 26 cao lỏng O pi viên nén O pizoic 3.3.2 X ây dựng phương pháp H PL C để phân tích định tính, định 29 lượng đồng thời M orphin C odein cao lỏ n g O pi viên n én O pizoic 3.3.3 Phưcíng pháp xử lý đánh giá k ết PHẦN 4: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 4.1 KẾT QUẢ XÂY DỤNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾT MORPHIN VÀ CODEIN TỪCAO 31 32 33 LỎNG OPI VÀ VIÊN NÉN OPIZOIC 1 K hảo sát phưcỉng pháp chiết M orphin theo BP 98 33 4.1.2 K hảo sát phương p háp chiết theo T iêu ch u ẩn ngành 34 4.1.3 K hảo sát điều kiện chiết thích hợp 35 4.1.4 Tiến hành ch iết xuất th eo điều kiện chọn 42 1.5 M ột số nhận xét phương pháp k ết chiết xuất 42 4.2 PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH MORPHIN VÀ CODEIN BẰNG HPLC 43 4.2.1 K h ảo sát chọn đ iều kiện sắc ký 43 4.2.2 Phương pháp định tính định lư ọng đồng thời M oiphin 48 C odein cao lỏ n g O pi viên nén O pizoic 4.3 KẾT QUẢ ÁP DỤNG PHƯƠNG PHÁP ĐÃ XÂY DỰNG ĐỂ định LƯỢNG ĐỒNG thời 61 MORPHIN VÀ CODEIN TRONG MỘT số CHẾ PHẦM VÊN nén OPIZOIC ĐANG LĩAJ HÀNH TRÊN THỊ TRƯỜNG 4.4.BÀN LUẬN PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 64 5.1.KẾTLỦẬN 64 5.2 66 MỘT SỐ Ý KIẾN ĐỀ XUẤT TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 PHỤ LỤC 70 BẢNG VIẾT TẮT BP : British Pharmacopoeia - Dược điển Anh CTD-VTYT : Công ty Dược-Vật tư Y tế CTCPDP ; Công ty cổ phần dược phẩm HPLC High Perfomance Liquid Chromatography - : Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HSTQ : Hệ số tương quan Phương trình hồi qui PTHQ SLTK : Số liệu thống kê TKPT : Tinh khiết phân tích TCCS : Tiêu chuẩn sở TCN : Tiêu chuẩn nghành USP : United States Pharmacopoeia - Dược điển Mỹ XNDPTƯ : Xí nghiệp dược phẩm Trung ương Luận vãn thạc sỹ dược học PH Ầ N l ĐẶT VẤN ĐỂ Cây thuốc phiện (Papaver som niferum L.) thuộc họ Thuốc phiện (Papaveraceae) trồng lâu đời, có nhiều nước khí hậu nhiệt đới ơn đới N hựa thuốc phiện thường dùng phối hợp với vị thuốc khác dạng cao đơn hoàn tán dạng bột, cồn cao thuốc phiện (cao Opi) Cao Opi thành phần m ột số chế phẩm thuốc, có viên nén Opizoic, viên nén Paregoric m ột số xí nghiệp dược phẩm nước sản xuất, Bộ Y tế cấp số đăng ký lun hành thị trường T ro n g c h ế phẩm có cao O pi a acaloid thuốc phiện n h M orp h in , C odein h o ạt chất ch ín h ng độc tính cao, dễ gây ngộ đ ộc, g ây nghiện k h i dùng thuốc kéo dài VI vậy, việc xác định xác hàm lượng hoạt chất cao Opi ch ế phẩm có chứa cao Opi viên nén Opizoic m ột vấn đề cần quan tâm công tác kiểm tra giám sát chất lượng, nhằm đảm bảo thuốc đến người bệnh hiệu lực, an tồn có chất lượng cao H iện nay, th eo D ược điển V iệt N am , tiêu chuẩn ngành tiêu chuẩn sở c ủ a cao O pi viên n én O pizoic, việc đ ịn h lượng alcaloid m ới giới h ạn định lượng M orphin m k h ô n g đ ịn h lượng alcaloid khác C odein H ơn phương pháp định lượng đ ã áp dụng có độ xác chư a cao; th eo TCCS X í n g h iệp H oá dược, đ ịn h lượng M orphin viên nén O pizoic theo phương pháp ch u ẩn độ so m àu m thường, với viên nén Paregoric Công ty dược - vật tư y tế Trà V inh bán định lượng M orphin sắc ký lớp mỏng Luận văn thạc sỹ dược học Q ua th am k h ảo th ê m m ộ t số tài liệu có được, chưa thấy tác g iả đề x u ất qui trìn h ch iết x u ất định lượng đồng thời M orphin C o d ein tro n g cao O pi cũ n g n h tro n g viên nén O pizoic phương pháp sắc k ý lỏng h iệu n ăn g cao ( H PL C ) Đ ể x ây dự ng m ộ t phư ơng p h áp chiết, định tính định lượng đồng thời M o rp h in C o d ein đủ tin cậy n h ằm góp phần vào công tác tiêu chuẩn h o đ án h giá đ ú n g c h ất lượng củ a cao O pi viên nén O pizoic, tiế n h n h đề tài: “N ghiên cứu định tính, định lượng đồng thời M orphm Codein cao lỏng Opi viên nén O pizoic phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC)” , với m ục tiêu sau; 1/ X ây dựng phư ơng p h áp xác địn];i M orp h in C odein cao lỏng Opi v iên nén O pizoic b ằn g H PLC / ứ n g d ụ n g phư ơng p háp n g h iên cứu để định tính, định lượng đồng thời M o rp h in , C odein tro n g m ột số viên nén O pizoic lưu hành thị trư ng V iệt N am Luận vãn thạc sỹ dược học PH Ầ N TỔNG QUAN 2.1 ĐẠI CƯƠNG VỂ THUỐC PHIỆN 2.1.1 Nguồn gốc đặc điểm: T h u ố c p (O p iu m ) nhựa m ủ trích từ q u ả cò n x anh thuốc p h iện (P apaver so m n iferu m L.), họ T huốc phiện (P ap av eraceae)[2 ], [7], [ \ - M ô tả b ên ngồi; B ánh hình tròn hay vng, có k h i h ìn h chữ nhật M ặt n g o ài m àu n âu đen đơi k hi sót m ảnh h ay vỏ thuốc phiện M ặt cắt m ịn h ay lổn nhổn K hi m ới th ì m ềm dẻo, để lâu cứng, dòn M ùi đặc b iệt, vị đắng {J_ - Soi k ín h h iển vi: N g h iền bột thuốc p h iện dung dịch cloral h y d t %, soi k ín h h iển vi thấy: nhữ ng h ạt n h ỏ m àu nâu, đứng riêng lẻ h ay tụ th àn h đ ám , to nhỏ k hông ( nhựa m ủ ) M ản h vỏ ngồi gồm tế bào h ìn h n h iều cạn h , có th àn h dày m àu trắng nhạt K h o an g ( lum en ) hình tro n g a m ộ t ch ất m àu nâu [7] 2.1.2 Thành phần hoá học: H oạt ch ất ch ín h tro n g nhựa thuốc phiện alcalo id (20 - 30% ), d ạn g m uối, tới n ay phân lập k h o ản g alcaloid Các acaloid c ủ a th u ố c p h iện n h M orphin, C odein, P apaverin thành phần có tác d ụ n g chữ a b ện h độc tính cao, dễ gây n g ộ độc, gây nghiện d ù n g th u ố c k éo dài [9] N goài nhựa th u ố c p h iện có acid hữu cơ, nước, ch ất vô cơ, đường, chất nhầy, pectin, p ro tit, acid am in tự do, lipit, ta n in T ro n g acid hữu có acid m ecoiiic cho m àu đỏ với m uối sắt (III), p h ản ứng d ù n g để định tính nhựa thuốc p [2 ], [A Liiậìì văìỉ tliạc sỹ dược học 2.1.3 Tác dụng công dụng: - Đ ố i với hệ th ần k in h trung ương, thuốc phiện có tác dụng lên vỏ não tru n g tâm gây đau D ù n g liều nhỏ lúc đầu kích thích gây cảm giác dễ chịu, sau làm m ất cảm g iác đ au, với liều cao gây ngủ Có tác dụng trung tâm h h ấ p h àn h tuỷ làm cho nhịp th đầu nhanh, nông, sau chậm lại K hi bị n g ộ độc có th ể ngừ ng thở Có tác dụng làm giảm kích th ích ho - Đ ối với m áy tiêu hoá, liều nhỏ thuốc phiện kích thích co bóp dày , có th ể g ây nơn L iều cao có tác dụng chống nôn, k h i uống làm giảm nhu đ ộ n g ru ộ t nên d ù n g chữ a ỉa chảy [2], [3], [11] N h ự a th u ố c p h iện thường dùng phối hợp với vị thuốc khác dạng cao n hoàn tán với dạng: + Bột th u ố c p h iện (10% M orphin ); uống liều 0,05 g/lần 0,20 g/24h + C ao th u ố c p h iện (20% M orphin), uống liều 0,05 - 0,10g/24h + C ồn th u ố c p h iện (1% M orphin), uống liều - 3g/24h (56 giọt = Ig) 2.2 CAO LỎNG OPI VÀ VIÊN NÉN OPIZOIC 2.2.1 Cao lỏng Opi 20% có cơng thức điều c h ế : T h u ố c p h iện lOOOg N ớc 12.000 ml Đ iều c h ế b ằn g phư ơng pháp ngâm lạnh, chất độn glucose lactose T ính ch ất ; C ao m àu đỏ nâu, sánh, m ùi đặc biệt thuốc phiện, vị đắng [6 ],[7], Luận vãn thạc sỹ dược học 65 / Đ ã xây dựng chương trìn h sắc ký cho phép định tính, định lượng đ n g thời M o rp h in C odein cao lỏng O pi viên nén O pizoic, với đ iều k iện sau: * C ột L iC h ro so rb R P (lO ịim ; 250m m X 4m m ) * D etecto r u v , Ả=285 nm * P động : C ân 1,0 g natri heptan sulphonat m o n ohydrat, pha m l nước, ch ỉn h pH =3.2 dung dịch acid photphoric ( 4.9 g/1) ( k h o ản g m l ), th êm 180 m l acetonitril * T ốc độ dòng: 1,0 m l/phút * T hể tích tiêm : 20 ịú , * N h iệt độ p h ân tích: nhiệt độ phòng P hép th có giá trị độ phân giải giữ a pic M orphin pic C o d ein tro n g d u n g d ịch h ỗ n hợp chuẩn 2.5 V ới d etecto r d iode array phần m ềm xử lý phổ cho phép xác định độ tin h k h iết đ ịnh tín h pic sắc đồ m ột cách xác nhanh chóng -/T rong k h o ản g n n g độ M orphin từ 0,0255 m g/m l đến 0,255 m g/m l C o d ein từ 0,0159 m g /m l đến 0,159 m g/m l có tưcíng quan tuyến tính n n g độ d iện tích pic tương ứng Sự phụ thuộc n ày chặt chẽ thể qua đư ờng th ẳn g hồi qui hệ số tương quan r = 0.9997 (M orphin) r = 0.9999 (C odein) -/ P hương p h áp có độ lặp lại cao với sai số tưcmg đối dao động từ 1.60% đến 2.45% -/ Đ ộ đ ú n g với k h ả thu hồi 98.83% (M orphin) 98.20% (C odein) cao lỏng O pi; 98.67% (M orphin) 98.11% (C odein) viên O pizoic tự tạo, có th ể ch ấp nhận phân tích đơng dược -/ Các thành phần khác có viên nén O pizoic k h ông gây ảnh hưởng tới q u trìn h địn h lượng thơng qua việc so sánh k ết định lượng cao lỏng O pi viên O pizoic tự tạo 66 Luận văn thạc sỹ dược học / Đ ã áp dụng phương p háp n g h iên cứu để định lượng M orphin C o d ein tro n g lô c h ế phẩm viên nén O pizoic h iện lưu hành thị trư ng K ết q u ả địn h lượng g iú p cho đcfn vị sản xuất tham khảo, so sán h với k ế t q u ả đ ịnh lượng theo TCCS / P hương p h áp H PL C xây dựng nhằm định tính định lượng đ n g th i M orphin C odein cao lỏng O pi viên nén O pizoic thuận tiệ n ch o nhữ ng sở trang bị m áy HPLC Phương pháp góp phần triể n k h áp dụng m ộ t phưcmg p háp k h o a học có sử dụng k ỹ th u ật tiên tiến vào việc tiêu ch u ẩn h ó a quản lý, k iểm tra chất lượng thuốc đông dược, m ột loại th u ố c có th àn h phần phức tạp 5.2 M ộ t s ố ý k iế n đ ề x u ấ t: H iện tại, tro n g tiêu chuẩn n gành định lượng M orphin viên nén O p izo ic b ằn g phương pháp so m àu có độ tin cậy thấp Đ ể góp phần kiểm sốt ch ấ t lượng c h ế phẩm này, xin đề xuất m ột số ý kiến sau: 1/ C ần tiếp tục n g h iên cứu k h ảo sát phương pháp H PL C xây dựng ch o ph ù hợ p với điều k iện sẵn có củ a sở sản xuất cao lỏng Opi viên n én O p izo ic, từ có th ể áp dụng tiêu chuẩn ngành tiêu chuẩn sở, g iú p ch o việc k iểm tra chất lượng thuốc nhanh chóng xác / Đ ề nghị h ộ i đ n g D ược Đ iển sớm nghiên cứu, áp dụng phương pháp H P L C đ ể địn h lượng M orphin C odein chuyên luận T huốc phiện D ược đ iển V iệt N am T ro n g ch u y ên luận nên qui định rõ giới hạn cho phép h àm lư ợng C odein b ên cạnh việc qui định hàm lượng M orphin nhằm ổn định ch ất lư ợng nguyên liệu đầu vào / T hường qui đ ịn h lượng M orphin C odein viên nén O pizoic: D ự a kết k h ảo sát luận văn này, xây dựng thường qui k iể m n g h iệ m c h ế phẩm viên nén O pizoic ( X em Phụ lục 1, tr 71) 67 Luận văn thạc sỹ dược học T À I L IỆ U T H A M K H Ả O Tài liêu tiến s Viêt T rần Tử A n, T rịn h V ăn Q uì, Bùi X uân Đ n g , C hu T hị L ộ c (1997), C c p h n g p h p kiểm ng hiệm thuốc độc chất, T ài liệu học tập sau đại h ọ c, T rường đại học D ược H N ội Tr 29-31 Bộ Y tế - Bộ G iáo dục Đ tạo (1998), B ài g iả n g dược liệu tập 2, H N ội T r.70-79 Bộ m ôn Dược lực (1994), Trường đại học D ược H N ội, D ược lực học T ĩ 30-31 Bộ m ô n H oá dược (1998), Trường đại học D ược H N ội, H o dược, tập l ĩ 70- 76 C T D -V T Y T T rà V inh V iên nén P aregoric - TCCS: 52-68 T C 81-95 D ược điển V iệ t n a m I tập (1971), N hà xuất b ản Y học T r.l3 D ược điển V iệ t n a m II tập (1994), N hà xuất Y học T r.l3 , 277­ ,558 - 560 P hạm Thị G iản g (1999), N g h iên cứu định tính, định lượng đồng thời S trych n in B n ic in tro n g b ộ t M ã tiền c h ế hoàn H ydan phương pháp sắc kỷ lỏng hiệu cao Cơng trình tốt nghiệp thạc sỹ dược học T rần N g u y ên H ữu, Phan X uân Lễ, V ũ N gọc Thuý, Phan V ăn Tm, Đoàn Y ên (1982), T huốc cách s d ụ n g , N hà xuất Y học Tr 348-350 10 P hạm L u ận (1989) C sở lý th u yết sắc ký lỏ n g cao áp G iáo trình đ tạo sau đại học - cao học 11 Đ ỗ T ất Lợi (2 001), N h ữ n g thuốc vị th u ố c V iệ t N a m , N hà xuất b ản Y hoc T r.699 68 Luận vân thạc sỹ dược học 12 T iêu ch u ẩ n n g àn h W é/ /2é /2 ỡ p /zớ ỉc -T C N -236- 88 13 V iện dược liệu (1 90), C â y thuốc V iệ t nam , N h x u ất khoa học- kỹ th u ật.T r 301 14 X í n g h iệp H o dược, C ao lỏng O pi - TCCS: 52 TC Z 23-69 15 X í n g h iệp H o dược, V iên nén O pizoic - TCCS; 52 TC Z 09-96 16 X í n g h iệp H o dược, V iên nén O pizoic - TCCS: 04 - Z 7-005-00 17.X í n g h iệp dược p h ẩm tru n g ương I, V iên nén O pizoic - TCCS; 04 - z -002-2001 Tài liêu tiếns A n h 18 Brian A B id lin g m ey er (1995) P ctica l H P L C m etìiodoìogy and a p p ly cation.Ỹ.?) 19 B ritish P h a rm a c o p o eia (1998) V ol I P 970-972 20 C aute B., M o n sa a t B et al (1988) J.P h a rm P rm a co l 40: 644 21 C la rke s iso la tio n a n d identification o f drugs (1986) L ondon- The P h arm a ceu tical Press P 490, 790 22 L Huber (1989) Applications o f diode-array detection in high pei-form ance liquid chrom atography Hewlett-Packard Co p 90 23 H u n g C.T., Y o u n g M and G upta P.K (1988) / P harm Sci 77:719 24 Id ia n P h a rm a co p o eia (1996) V ol I P 520, 534-535 25 P h a rm a c o p o eia o f the P e o p le s R ep u b lic o f C hina (1997) E nglish E d itio n V ol.II P 421, - 433 26 Sm ith R M an d R a b u o r J o (1989), / C hrom atogr 464:117 27 T eb b ett I.R (1 987) C h ro m a to g p h ia 23:377 69 Luận văn thạc sy dược học 28 T h e M e rc k In d e x (1996) 12'"’ E dition P 416- 417 29 T h a i P h a rm a co p o eia (1 ),V ol I p 159-160 30 T h e U n ited State P h a rm a co p o eia 23 (1995), V ol.III P 1115 - 1116, 1038-1039 31 T h e U nited State P h a rm a co p o eia 24 (2000), V ol.III p 1898 - 1900, 1220- 1221 32 T u n er C.A and M urphy R (1988), J C h ro m a to g r B iom ed :3 A ppl 71 Luận văn thạc sỹ dược học PHỤ LỤC THƯỜNG QUI ĐỊNH LƯỢNG MORPHIN VÀ CODEIN CỦA VIÊN NÉN OPIZOIC 1- Chuẩn bị dung dịch thử: L viên nén O pizoic đ em cân, tính k h ố i lượng trung bình m ột viên , n g h iề n th àn h b ột m ịn Cân ch ín h xác m ột lượng b ộ t viên b ộ t viên ( tương đư ng với k h ố i lượng củ a 10 viên), thêm 0.8g calci hydro x y t, nghiền với k h o ả n g 10 m l nước th àn h bột n hão cối T hêm 10 m l nước, khuấy kỹ k h o ản g 10 phút, ch u y ển vào b ìn h nón dung tích 100 m l T ráng cối 20 m l nước ( ch ia làm lần ), gộ p nước rửa cối vào b ìn h nón trên, đem lắc siêu âm tro n g 30 phút L ọc q u a g iấy lọc thường^ thu lấy phần dịch lọc Phần cắn tiếp tụ c ch iế t lần X 25 m l nước, m ỗi lần lắc siêu âm 30 phút G ộp tất d ịch c h iế t vào m ột b ìn h địn h m ức 100 ml Đ ể nguội, thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc L ch ín h xác 25 m l dịch chiết, ch ỉn h pH 8.5 dung dịch am o n i clo rid 10% (kh o ản g m l) ch u y ển vào bình gạn, tráng cốc 10 m l nước C hiết hỗ n h ợ p dung m ôi isopropanol - cloroform ( 30 : 70 ), chiết lần, m ỗi lần dùng 40 m l h ỗ n hợ p d u n g m ôi trên, m ỗi lần lắc 10 phút T ập tru n g dịch chiết (p h ần h ỗ n hợ p dung m ôi hữu cơ), cồ cách thuỷ cắn pha tro n g vừa đủ 25 m l pha động L ắc đều, lọc qua giấy lọc cỡ 0.45 fim, dung d ịch thử 2- Chuẩn bị dung dịch chuẩn: H o SO.Omg M o rp h in (chuẩn) 20.0m g C odein (chuẩn), vừa đủ 0 m l p h a động, lấy lO.Oml d u n g dịch pha loãng vừa đủ lOO.Oml p h a đ ộ ng L ắc đều, lọc q u a giấy lọc cỡ 0.45 |Lim, dung dịch chuẩn Luận vân thạc sỹ dược học 72 3- Đ iề u k iệ n sắc ký: * C ột L iC hrosorb R P (lOị-im; 50m m X 4m m ) * D etecto r u v , X = 285 nm * P động : Cân 1,0 g natri hep tan sulphonat m o n o h y d rat, pha m l nước, ch ỉn h pH = 3.2 dung dịch acid photphoric (4.9 gA ) ( k h o ản g m l ), th êm 180 m l acetonitril * T ốc độ dòng: 1,0 m l/phút * T h ể tích tiêm : 20 |il * N h iệt độ phân tích: n h iệt độ phòng 4- Tiến hành: T iêm dung dịch th dung dịch chuẩn vào hệ thống sắc ký C hạy sắc ký theo nhữ ng điều k iện Phép thử có g iá trị hệ số p h ân giải ( R s ) pic M orphin pic C odein k hông nhỏ hơ n 2.5 5- K ết quả: H àm lượng M orphin C odein viên nén O pizoic tính theo n g thứ c sau: Sr X Cc X mv x io o X (m g/ viên)= -S c X rrij T rong đó: Sj-, S c : D iện tích pic củ a m ẫu thử m ẫu chuẩn Cc : N ng độ dung dịch chuẩn (m g/m l) ĩĩìy : L ượng cân m ẫu thử (m g) 1% : K hối lượng tru n g bình viên (m g) 73 Luận văn thạc sy dược học PHỤ LỤC Sắc đồ dịch chiết lần nước vôi theo phương pháp xây dựng Channel K rom aS y stem 2000 V e rsio n FR EE - B IN H S M P : DL M o r p h in N o 4: C h ie t I a n 4= nuoc C h a n n e l : CHANNEL No T e x t P ro g m W o rk sh e e P eak T a b P a m e te R e p o rt F D ocum ent N o F ile t l e r T ab le ile F ile R e t.T im e Type BINH BINH BINH P la te s - RESULT REPORT: INTEG R A TIO N C o d ein A c q u ire d : P ro c e s s e d : C a n 't H e ig h t mV O.OOOOe+000 o p en 0 1 1 :3 :3 :1 f i l e S kew ness A rea O.OOOOe+000 H a lf-W id th m in O.OOOOe+000 74 Luận văn thạc sỹ dược học PHỤ LỤC Sắc đồ dịch chiết lần hỗn hợp dung môi isopropanol-cloroform (30:70) Channel K rom aS ystém 2000 V e rsio n FR EE - B IN H S M P : DL M o r p h in N o : H H h e M y CO R P C h a n n e l : CHANNEL No T ex t - RESULT REPORT: INTEG RA TIO N C o d ein A c q u ire d : P ro c e s s e d : 0 1 1 :0 :2 13:14 Area mV*min Half-Width Program File W o r i c s h e e t P e a k T a b l e Parameter Table Report File Document File No Ret.Time Type BINH BINH BINH Plates C a n 't Height mV O.OOOOe+000 open f i l e Skewness O.OOOOe+000 O.OOOOe+000 75 Luận vãn thạc sỹ dược học PHỤ LỤC Sắc đồ dung dịch chuẩn Morphin Codein ( Khảo sát khoảng tuyến tính ) D u n g d ịc h c h u ẩ n K rom aS ystem 2000 V e rsio n FREE - B IN H l.S M P : N o 43: Tuyen t in h C h a n n e l : CHANNEL No T ex t P ro g ram W o rk sh ee P eak T a b P a m e te R e p o rt F D ocum ent N o F ile t l e r T ab le i l e F ile R et.T im e m in 5 Type MLR MLR RESULT REPORT: INTEG RA TIO N A c q u ire d : P ro c e s s e d : BINHl BINHl BIN H l P la te s 4765 4525 C a n 't H eig h t mv 6 e+ 0 8 e+ 0 e+ 0 open 0 1 1 :1 :4 :3 f i l e S kew ness 3 1 5 A rea m V *m in H a lf-W id th e+ 0 e+ 0 e-0 1 00G -001 4 e+ 0 1 e-0 76 Liiận văn thạc sỹ dược học D u n g d ịc h c h u ẩ n K rom aS ystem 2000 V e rs io n RESULT REPORT; INTEGRATION FREE - BINHl.SMP: N o 44: C h an n el No T e x t T uyen t i n h : CHANNEL A c q u ire d ; P ro c e s s e d : 0 1 1 :3 :3 :3 Program File W o rk sh e P eak T a P a m e t R e p o rt e b e F t l e r T ab le ile BIN H l BIN H l BIN H l C a n 't o p en f i l e Document File No R et.T im e Type P la te s H e ig h t S kew ness mV MLR MLR 5160 4972 3 0 e+ 0 1 9 e+ 0 5 e+ 0 1 7 A rea H a lf-W id th mV*min 4 e+ 0 3 e+ 0 e -0 1 e -0 e+ 0 e -0 77 Lỉtận vân thạc D u n g d ịc h c h u ẩ n KromaSystem 2000 Version 1.83 R E S U L T R E PORT: INTEGEiaTION FREE - BINHl.SMP: No 46: C h an n el T uyen t in h 5: CHANNEL A c q u ire d : P ro c e s s e d : 0 1 1 :0 2: 20 A rea m V *m in Half-Width 13:36 No Text Program File W o r k s h e e t P e a k T a b l e BINHl BINHl C a n 't o p en f i l e Parameter Table BINHl R e p o rt F ile Document File No R et.T im e m in Type 4.03 M L R 5.18 M L R P la te s 4975 4548 H eig h t mV 9 e+ 0 e+ 0 1 e+ 0 S kew ness 6 m in 9 e+ 0 2 e+ 0 3 e -0 1 8 e -0 1 e+ 0 e -0 dược học 78 Liiận văn thạc sỹ dược học D u n g d ịc h c h u ẩ n K rom aS ystem 2000 V e rs io n RESULT REPORT: IN TEG RA TIO N FREE - BINHl.SMP: No 48: C h an n el T u y en t in h : CHANNEL A c q u ire d : P ro c e s s e d : 0 1 1 :2 :0 :3 No Text P ro g ram F ile Worksheet BINHl P eak T a b le P a m e te r T a b le BIN H l BIN H l C a n 't open f i l e Report File D ocum ent N o F ile R e t.T im e m in Type MLR MLR P la te s 4677 4541 Height mV 9 5 e+ 0 2 e+ 0 1 9 e+ 0 S kew ness Area mV’m in 8 H a lf-W id th 1.4 e+ 0 1.0 e+ 0 1 e-0 1 3 e-0 4 e+ 0 e-0 79 Luận vãn thạc sỹ dược học D u n g d ịc h c h u ẩ n K rom aS y stem 2000 V e rs io n RESULT REPORT: INTEGRATION FREE - BINHl.SMP: No 51: C h an n el No T e x t T u y en t i n h : CHANNEL A c q u ire d : P ro c e s se d : 5 0 1 1 :5 :1 13:37 Program File W o rk sh P eak T P a m e R e p o rt D ocum e N o e e t a b l e te r T ab le F ile nt F ile R e t.T im e 9 Type MLR MLR BIN H l BINHl BINHl P la te s 4554 4383 C a n 't H eig h t mV e+ 0 e+ 0 0 e+ 0 ■V open f i l e S kew ness Area m V *m in 6 H a lf-W id th m in e+ 0 1 e+ 0 1 e-0 1 e-0 3 e+ 0 e-0 ... nén O pizoic, tiế n h n h đề tài: “N ghiên cứu định tính, định lượng đồng thời M orphm Codein cao lỏng Opi viên nén O pizoic phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC)” , với m ục tiêu sau; 1/ X ây... 14 2.4.6 Phương p h áp ch iết theo U SP 23 15 U SP 24 2.5 MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG MORPHIN VÀ CODEIN T CAO LỎNG OPI 16 VÀ VIÊN NÉN OPIZOIC 2.5.1 Phương pháp tru ng hoà 16 2.5.2 Phương p... N hóm protopin 2.4 MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP CHIÊT XUẤT MORPHIN VÀ CODEIN TỪ CAO LỎNG OPI VÀ VIÊN NÉN OPIZOIC 2.4.1 Phương pháp chiết theo S I.C anepskaya 10 B A K liaskinaya 2.4.2 Phương pháp chiết