Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol trong viên đặt aphaneten bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI ĩỉí;ỉ< :ỉíĩíí^ĩỉí;ỉí:íí> fí:íí:íí; ỉí: í:;íc ;ỉí; fí:íí> !í^* ;ỉí/^ NGÔ THANH THƯỶ NGHIÊN CỨU DỊNH LƯỢNG DỒNG THỜI CLOTRIMAZOL VÀ METRONIDAZOL TRONG VIÊN ĐẶT APHANETEN BẰNG PHƯ0NG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ KHOÁ 2001 - 2005) Người hướng dẫn: PGS.TS THÁI PHAN QUỲNH NHƯ TS THÁI DUY THÌN Nơi thực hiện: PHÒNG HOÁ LÝ I - VIỆN KIỂM n g h iệ m Thời gian thực hiện: 8/2004 ĐÊN 5/2005 HÀ NÔI 5 - 2005 \ ^ Ị ■ V'.' 1^ ' "■ > y f l w Nó''Oc^ LỜI CÁM ƠN Khoá luận này được thực hiện và hoàn thành tại phòng Hoá lý I - Viện Kiểm nghiệm Bộ Y tế và Bộ môn Hoá dược - Trường đại học Dược - Hà Nội. Trong quá trình thực hiện khoá luận tốt nghiệp tôi đã nhận được sự giúp đỡ tận tình của các thầy, cô hướng dẫn, các giảng viên của bộ môn Hoá dược và các cán bộ của phòng Hoá lý I Viện Kiểm nghiệm - Bộ Y tế. Tôi xin chân thành cám ơn sự hưófng dẫn chỉ bảo tận tình của; - Tiến sĩ: Thái Duy Thìn - Phó chủ nhiệm bộ môn Hoá dược - Trường đại học Dược - Hà Nội - Phó giáo sư - Tiến sĩ; Thái Phan Quỳnh Như - Trưởng phòng Hoá lý I - Viện Kiểm nghiệm - Bộ Y tế Đã giúp đỡ tôi những tài liệu và kỹ năng cần thiết trong quá trình thực hành khóa luận. Tôi xin cám ơn sự giũp đỡ của các thầy, các cô, các kỹ thuật viên trong bộ môn Hoá dược và các cán bộ phòng Hoá lý I Viện Kiểm nghiệm - Bộ Y tế. Đã giúp đỡ tôi hoàn thành tốt khoá luận tốt nghiệp của mình. Tôi xin cám 0fn sự quan tâm của Ban giám hiệu, Phòng đào tạo nhà trưòng và các thầy giáo, cô giáo đã truyền đạt kiến thức cho tôi trong suốt thời gian tôi học tập tại trường. Tôi xin tỏ lòng biết ơn với gia đình, bạn bè và những người luôn sát cánh bên tôi trong suốt quá trình học tập cũng như thực hiện đề tài. Sinh viên Ngô Thanh Thuỷ MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN ĐỂ 1 PHẦN 1- TỔNG QUAN 3 1.1- Clotrimazol 3 1.1.1- Đại cương 3 1.1.2- Các phương pháp định lượng 3 1.1.3- Tác dụng dược lý 4 1.2- Metronidazol 5 1.2.1- Đại cương 5 1.2.2- Các phương pháp định lượng 5 1.2.3- Tác dụng dược lý 6 1.3- Các phưoìig pháp định lượng clotrimazol, metronidazol trong chê phẩm hỗn hợp 7 1.3-1- Định lượng Clotrimazol 7 1.3-2- Định lượng Metronidazol 7 1.3-3- Nhận x ét 8 1.4- Phương pháp sác ký lỏng hiệu năng cao 8 1.4.1- Khái niệm 8 1.4.2- Các đại lượng đặc trưng 9 1.4.3-Hệ thống HPLC 12 1.4.4- Pha tính trong HPLC 13 1.4.5- Pha động trong HPLC 1.4.6- Cách đánh giá pic 17 1.4.7- Cách tính kết quả 1 ^ PHẦN 2- NGUYÊN LIỆU, NỘI DƯNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 19 2 .1- Đối tượng nghiên cứu 19 2.2- Thiết bị và hoá chất 19 2.2.1- Hoá chất 19 2.2.2- Thiết bị, dụng c ụ 19 2.3- Nội dung, phương pháp nghiên cứu 20 2 .3 .1- Nội dung 20 2.3.2- Phương pháp nghiên cứu 20 2.3.3- Các đặc trưng thống kê để xử lý kết quả phân tích 20 2.3.4- Cách đánh giá kết quả 21 PHẦN 3- THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 22 3.1- Xây dựng điều kiện sác ký để định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol 22 3.1.1- Khảo sát tính thích hợp của hệ thống sắc k ý 26 3.1.2- Khảo sát độ tuyến tính của phương pháp 27 3.1.3- Khảo sát độ chính xác của phưofng pháp 30 3.1.4- Khảo sát độ đúng của phương pháp 34 3.1.5- Khảo sát giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng 37 3.2- ứng dụng định lượng chê phẩm "Aphaneten" do xí nghiệp dưực phẩm 120 sản xuất đã và đang lưu hành 39 3.3- Bàn luận về kết quả 41 KẾT LUẬN 43 TÀI LIÊU THAM KHẢO ĐẬT VẤN ĐỀ Trong xu hướng sản xuất thuốc đa thành phần nhằm phối hợp tác dụng dược lý của các dược chất người ta đã sản xuất thuốc viên nén đặt trong phụ khoa gồm clotrimazol phối hợp với metronidazol. Trong đó: Clotrimazol là một loại thuốe chống nấm phổ rộng, do ức chế các enzym chuyển hoá màng tế bào nấm [1]. Metronidazol là một loại thuốc có tác dụng rất mạnh trong điều trị nhiễm động vật nguyên sinh như: Trichomonas vaginalis, Trichomonas buccalis, Trichomonas intestinalis. Trichomonas là loại động vật đơn bào, thuộc lớp trùng roi sống ở âm đạo gây viêm âm đạo, âm hộ. Thuốc có tác dụng chọn lọc trên thể đã gây bệnh, còn ít có tác dụng trên thể chưa gây bệnh, do đó cần phải phối hợp với các thuốc kháng khuẩn khác, để đạt được hiệu quả tối ưu trong điều trị [1]. Do đó viên thuốc hỗn hợp clotrimazol và metronidazol vừa có tác dụng kháng khuẩn, vừa có tác dụng chống nấm nên thuốc được sử dụng rộng rãi cho các trường hợp viêm nhiễm tạp khuẩn và nấm trong phụ khoa. Xí nghiệp Dược phẩm 120 có sản xuất viên nén đặt phụ khoa ở dạng phối hợp với tên “Aphaneten”. Khi sản phẩm này ra đời thì vấn đề đặt ra ở đây là phải kiểm tra chất lượng thành phẩm trước khi thuốc đến tay người dùng. Mặt khác trong các Dược điển hiện hành [5], [15], [16], [17], [18], [19], [20], [21] chỉ có chuyên luận viên đơn thành phần chứa clotrimazol hoặc metronidazol, vì vậy để kiểm tra chất lượng sản phẩm cần nghiên cứu phương pháp định tính và định lượng hai hợp chất này trong cùng một dạng bào chế. Ngày nay khoa học kỹ thuật đã phát triển vượt bậc, đã có nhiều thành tựu được đưa vào ứng dụng và đã mang lại cho chúng ta những phương pháp kiểm nghiệm nhanh, đạt độ chính xác cao. Một trong những phương pháp đó là sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Phương pháp này đã được nghiên cứu và ứng dụng để định tính và định lượng có kết quả, các hợp chất trong nhiều loại thuốc đa thành phần [8 ], [13], [14], Vì vậy chúng tôi đặt vấn đề nghiên cứu định lượng đồng thời các hoạt chất trong viên thuốc đặt phụ khoa “Aphaneten” bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao với mục tiêu cụ thể sau: - Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời clotrimazol và metronidazol bằng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao, đóng góp cho ngành Dược một phương pháp kiểm nghiệm ngoài Dược điển nhằm mục đích rút ngắn thời gian tiến hành định lượng, tăng độ chọn lọc và nâng cao hiệu quả phân tích. - Góp phần xây dựng tiêu chuẩn để tiêu chuẩn hoá thuốc mới trước khi đưa ra thị trường. - Áp dụng các phương pháp đã xây dựng để kiểm nghiệm nhanh và chính xác một số thuốc có thành phần tưcmg tự như trên đang lưu hành trên thị trường. PHẦN 1 - TỔNG QUAN 1.1- CLOTRIMAZOL 1.1.1- Đại cương: [1] * Công thức: / \ ^C1 c / \ -N C,2Hi7CIN, Ptl: 344, 8 * khác: Lotrimin; Gyne-lotrimin; Myclo; Canesten; Mycelex. * Tên khoa học: l-[(2 -chlorophenyl) diphenylmethyl] - IH- imidazol * Tính chất: Bột kết tinh trắng hoặc hơi vàng, thực tế không tan trong nước, tan trong methanol và dicloromethan, khó tan trong ether. Điểm chảy khoảng 141°c - 145°c. 1.1.2- Các phương pháp định ỉượng: *Phương pháp chuẩn độ trong môi trường khan: - Hoà tan clotrimazol trong acid acetic khan. Chuẩn độ bằng acid pecloric 0,1N, xác định điểm kết thúc bằng phương pháp chuẩn độ đo điện thế. Song song tiến hành làm mẫu trắng [15], [20]. Hoặc dùng chỉ thị tím tinh thể rồi chuẩn độ bằng acid pecloric 0,1M đến khi xất hiện mầu xanh [19]. Hoặc dùng chỉ thị naphtolbenzein rồi chuẩn độ cho đến khi mầu chuyển từ nâu vàng sang xanh[17], [21]. * Phương pháp HPLC: [16] - Pha động là hỗn hợp: Methanol - Dung dịch K2HPO4 (3:1) (Dung dịch K2HPO4: Hoà tan 4,35g K2HPO4 trong lOOOml nước cất). - Điều kiện sắc ký: Cột RP8 có kích thước (250 X 4,6mm; lOịim) Detector UV: 250nm Tốc độ dòng: l,5ml/phút Thể tích tiêm: 20|Lil 1.1.3- Tác dụng dược lý: [2]; [6] * rác dụng: Clotrimazol là thuốc kháng nấm phổ rộng, tác dụng trên nhiều loại nấm gây bệnh, gồm các loại nấm trên bề mặt da, niêm mạc và nấm nội tạng. Ngoài ra thuốc còn có tác dụng trên vi khuẩn gram (+). * Cơ chế tác dụng: Clotrimazol có tác dụng ức chế alphademethylase (enzym tham gia vào quá trình tổng hợp ergosterol) do đó clotrimazol ngăn cản tổng hợp ergosterol và lipid của màng tế bào nấm. Kết quả là làm thay đổi tính thấm của màng tế bào, ức chế chức năng màng và ức chế sự phát triển của nấm. Liều thấp thuốc có tác dùng kìm nấm, liều cao thì diệt nấm. 1. 2- METRONIDAZOL 1.2.1- Đại cưong: Ị 1 ]; [ 5 ] * Công thức: O2N' C6H9N3O: CH2 -C H 2 -O H ^ N ^ C H 3 — N Rl: 171,16 * Tên khác: Flagyl; Klion; Protostat; Metro IV; Novomidazol trikacide. * Tên khoa học: 1 - (P - hydroxyetyl) - 2 - metyl - 5 - nitroimidazol * Tính chất: Tinh thể hay bột kết tinh trắng hoặc hơi vàng, không mùi, vững bền ngoài không khí, song sẫm màu dần khi tiếp xúc với ánh sáng. Khó tan trong nước, aceton, dicloromethan và ethanol 96%, rất khó tan trong ether. 1.2.2- Các phương pháp định lượng: * Phương pháp chuẩn độ trong môi trường khan: - Hoà tan metronidazol trong acid acetic khan, chuẩn độ bằng dung dịch acid pecloric 0,1N. Xác định điểm kết thúc bằng phương pháp chuẩn độ đo điện thế [1]; [5]; [18]; [21]. Hoặc dùng chỉ thị naphtobenzein, rồi chuẩn độ đến khi màu chuyển từ vàng da cam đến xanh[15]; [19]; [20]. Hoặc dùng chỉ thị malachit xanh, rồi chuẩn độ đến khi xuất hiện màu vàng xanh. Song song tiến hành làm mẫu trắng [15]; [19]; [20]. * Phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại: - Hoà tan một lượng metronidazol trong acid hydrocloric 0,1M để được dung dịch có nồng độ 0,002% metronidazol. Đo độ hấp thụ tử ngoại của dung [...]... tinh khit cao - Phi nhanh t cõn bng trong quỏ trỡnh sc ký - Phự hp vi loi detector c la chn phỏt hin cỏc cht phõn tớch - Cú tớnh kinh t, d kim Trong sc ký pha thun : Pha ng phi l cỏc dung mụi hu c khụng phõn cc hoc ớt phõn cc nh n-hexan, n-heptan, cloroform, tetraclorcarbon Trong quỏ trỡnh chy sc ký, cho quỏ trỡnh tỏch c n nh lp li cao, phi bóo ho pha ng trc khi chy sc ký bng nc Trong sc ký pha... nghim Vi iu kin sc ký nh trờn, hai cht c tỏch hon ton, cỏc pic cõn i v gn, thi gian lu ca cotrimazol l 11,6 phỳt ca metronidazol l 3,06 phỳt Hỡnh 3.3 v hỡnh 3.4 di õy trỡnh by sc ký ca dung dch hn hp chun v dung dch hn hp th khi chy sc ký vi chng trỡnh nh ó chn: Hỡnh 3.3 - Sc ký ca dung dch hn hp chun clotrimazol v metronidazol Hỡnh 3.4 - Sc ký ca dung dch hn hp th clotrimazol v metronidazol 3.1.1-... hp Detector hay c s dng nht l detector uv Sau mt qỳa trỡnh sc ký ta thu c mt sc ký , sc ký phn ỏnh quỏ trỡnh tỏch sc ký trong ct tt hay khụng Trong quỏ trỡnh sc ký cht no c lu gi mnh nht trong pha tnh s c pha ng ra gii ra khi ct sau cựng, cht no b lu gi kộm nht s c ra gii ra trc tiờn Thi gian cht tan b pha tnh lu gi c quyt nh bi bn cht sc ký ca pha tnh cng nh tớnh cht hoỏ lý ca cht tan 1.4.2- Cỏc i... NG THI CLOTRIMAZOL V METRONIDAZOL Qua tham kho ti liu v da trờn iu kin sn cú ca c s nghiờn cu (phũng Hoỏ lý I - Vin kim nghim), do clotrimzol v metronidazol l hai cht u cú cha cỏc nhúm chc phõn cc, nờn chỳng tụi la chn kiu sc ký pha o, s dng ct sc ký lichrosorb RP8 (250 X 4mm; lOLim) trong quỏ trỡnh kho sỏt cỏc iu kin sc ký nh pha ng, tc dũng, bc súng phỏt hin cho phộp tỏch c cỏc thnh phn trong hn... ta cú mt loi sc ký riờng trong k thut tỏch HPLC - Cn c vo trng thỏi l rn hay lng thỡ pha tnh c chia lm hai loi; Nu pha tnh l cht rn, ngi ta cú sc ký lng rn LSC (Liquid solid chromatography), nu pha tnh l cht lng thỡ ngũi ta cú sc ký lng lng LLC (Liquid liquid chromatography) - Cn c theo phõn cc ca pha tnh v pha ng, cú cỏc loi; sc ký pha thun, sc ký pha o, sc ký pha o to cp ion v sc ký trao i ion -... li l thnh phn chớnh trong pha ng vớ d nh methanol, acetonitril Ta cú th to ra nhng pha ng cú phõn cc khỏc nhau bng cỏch thờm vo ú nhng t l nc nht nh, do ú h pha ny tr nờn linh ng v c ng dng nhiu Ngoi ra, trong nhiu trng hp, thnh phn pha ng cũn cú thờm cỏc cht m pH n nh pH cho quỏ trỡnh sc ký, cht to phc to ra s ra gii chn lc, cht to cp ion s dng trong sc ký cp ion Trong sc ký trao i on: Pha ng... thu c ca c hai dung dch mu th v mu th thờm cht chun phi c o trong cựng mt iu kin sc ký 1.4.8- Nhn xột: Phng phỏp sc ký lng hiu nng cao ó c ng dng rng rói trong vic nh lng cỏc thuc n thnh phn cng nh a thnh phn Phng phỏp ny cú chớnh xỏc v nhy cao, tn ớt mu, cú tớnh c hiu, thc hin tng i nhanh v thun tin, c bit l nh lng ng thi c cỏc thnh phn trong hn hp m khụng qua quỏ trỡnh chit tỏch, cú th thc hin c... PHNG PHP NGHIấN c u 2.3.1- Ni dung: * Kho sỏt cỏc iu kin sc ký: Xõy dng chng trỡnh sc ký nh tớnh v nh lng ng thi clotrimazol v metronidazol trong thuc hn hp bao gm; - Chn ct sc ký - Chn pha ng (thnh phn, t l) - Detector UV, chn bc súng o - Tc dũng - Th tớch tiờm - Cỏch x lý mu *- ỏnh giỏ phng phỏp: - Tin hnh xỏc nh tớnh thớch hp ca h thng sc ký - Xỏc nh tuyờn tớnh gia nng v din tớch pic - Xỏc nh ... phc Núi chung mi loi sc ký s cú cỏc h dung mụi ra gii riờng cú c hiu qu phõn tỏch tt nht Pha ng l mt trong nhng yu t quyt nh hiu qu v hiu sut tỏch sc ký ca mt hn hp mu Nú quyt nh thi gian lu gi cỏc cht mu v hiu qu s tỏch sc ký Pha ng cú th nh hng n: - chn lc ca h pha - Thi gian lu gi ca cht tan - Hiu lc ca ct tỏch - phõn gii cỏc cht trong mt pha tnh - rng ca pic sc ký Trong HPLC pha ng phi tho... chn tc dũng l l,Oml/phỳt * La chn bc súng phỏt hin : Da vo hp th ca clotrimazol v metronidazol, da vo nng ca hai cht cú trong hn hp, chỳng tụi ó tin hnh thc nghim v chn ra bc súng nh lng ng thi hai cht ú trong hn hp l 215nm Ti bc súng ny clotrimazol l cht cú hm lng thp nhng cú hp th ỏng k, cũn i vi metronidazol l cht cú hm lng cao li cú hp th gn cc tiu Kt qu thu c t ph t ngoi ca hai cht cng cho