Phương pháp sinh lý sinh hóa nuôi cấy,phân lập vi khuẩn : Các phương pháp dựa trên những đặc điểm dinh dưỡng, hô hấp, chuyển hoá và khả năng phản ứng với các chất hóa học để làm tăng số lượng,định danh vi khuẩn.
KHOA THỦY SẢN Đề tài: Phương pháp sinh lý sinh hóa nuôi cấy phân lập vi khuẩn. GVHD : Lê Văn Bảo Duy Lớp : Ngư Y 46 SVTH : Huỳnh Văn Lâm Nguyễn Phương Nam ĐẶT VẤN ĐỀ B nh vi khu n gây ra ngày càng ph c t p và nghiêm tr ng ệ ẩ ứ ạ ọ v i đ ng v t th y s nớ ộ ậ ủ ả N m đ c các quy trình ph ng pháp sinh lý sinh hóa trong ắ ượ ươ nuôi c y phân l p vi khu nấ ậ ẩ C s quan tr ng cho vi c nghiên c u đ đ nh danh vi khu nơ ở ọ ệ ứ ể ị ẩ tìm ra tác nhân gây b nh đ a ra nh ng bi n pháp phòng ch ngệ ư ữ ệ ố ĐỊNH NGHĨA Ph ng pháp sinh lý sinh hóa nuôi ươ c y,phân l p vi khu n : ấ ậ ẩ - Các ph ng pháp d a trên nh ng đ c ươ ự ữ ặ đi m dinh d ng, hô h p, chuy n hoá và ể ưỡ ấ ể kh năng ph n ng v i các ch t hóa h c ả ả ứ ớ ấ ọ đ làm tăng s l ng,đ nh danh vi khu n.ể ố ượ ị ẩ (*) Phân lo i môi tr ng:ạ ườ (*) Phân lo i môi tr ng:ạ ườ (+) Th :ể (+) Th :ể - L ng: Canh thang, n c peptonỏ ướ L ng: Canh thang, n c peptonỏ ướ - Đ c: Có 1-2% th ch nh th ch th ng, ặ ạ ư ạ ườ Đ c: Có 1-2% th ch nh th ch th ng, ặ ạ ư ạ ườ th ch máu…ạ th ch máu…ạ - Môi tr ng m m: Có 0,3-0,5% th ch ườ ề ạ Môi tr ng m m: Có 0,3-0,5% th ch ườ ề ạ PH NG PHÁP NUÔI C Y PHÂN L P VI KHU NƯƠ Ấ Ậ Ẩ (*) D ng c c yụ ụ ấ + Que c y : th ng, móc , vòng , trang.ấ ẳ + ng hút th y tinh.Ố ủ + Đĩa petri + Đèn c nồ + Hóa ch t (ch t ch th ,ch t ph n ng…… )ấ ấ ỉ ị ấ ả ứ (+) M c đích s d ng:ụ ử ụ (+) M c đích s d ng:ụ ử ụ - C b n: n c th t,canh thang th ng…ơ ả ướ ị ườ - C b n: n c th t,canh thang th ng…ơ ả ướ ị ườ - Phân l p:th ch máu,….ậ ạ - Phân l p:th ch máu,….ậ ạ -Tính ch t sinh hóa:KIA,OF,…. ấ -Tính ch t sinh hóa:KIA,OF,…. ấ (*) C y ria trên đĩa petriấ (*) C y ria trên đĩa petriấ Vô trùng que c y vòngấ L y vi khu nấ ẩ Ria que c y ấ trên môi tr ng ườ thích h pợ L t ng a đĩa ậ ử trong nhi t đ ủ ệ ộ th i gian thích h p ờ ợ (*) C y trang: ấ 0,1 ml d ch ị ch a vi khu nứ ẩ Tr i đ u d ch ả ề ị lên m t th chặ ạ Kh trùng ử thanh g t ạ Đ a vào c nư ồ và h qua l aơ ử L t ng a đĩa ậ ử trong nhi t đ ủ ệ ộ th i gian thích h p ờ ợ PH NG PHÁP NUÔI C Y PHÂN L P VI KHU NƯƠ Ấ Ậ Ẩ (*) nuôi c y phân l p.ấ ậ L y b nhấ ệ ph mẩ B ngằ que c yấ vô trùng C yấ Vùng 1 H que c yơ ấ =>Vùng 2 H que c yơ ấ => Vùng 3 nuôi 30 – 37 0 C 24 h Căn cứ Màu s c, hình d ng,kích th cắ ạ ướ khu n l c => ẩ ạ Ch n Khu n l c nghi ngọ ẩ ạ ờ ( u th s l ng) ư ế ố ượ PH NG PHÁP NUÔI C Y PHÂN L P VI KHU NƯƠ Ấ Ậ Ẩ (*) (*) C y chuy nấ ể C y chuy nấ ể C y gi ngấ ố t ng nghi mừ ố ệ môi tr ng l ngườ ỏ sang Môi tr ng l ngườ ỏ ng th ch nghiêngố ạ C y b m t nghiêng b ng cách ấ ề ặ ằ c y t đáy ng lên đ u trênấ ừ ố ầ theo đ ng zic z cươ ắ PH NG PHÁP NUÔI C Y PHÂN L P VI KHU NƯƠ Ấ Ậ Ẩ M đĩa có khu n l c ở ẩ ạ nghi ng d i ng n ờ ướ ọ đèn c n ho c phòng ồ ặ vô trùng Que c y vô trùngấ L y khu n l cấ ẩ ạ Nghi ngờ (th ng vùng 3)ườ Đĩa th ch m iạ ớ ho c th ch nghiêngặ ạ 30- 37 o C trong 24 gi ờ (*) (*) Nuôi c y thu n ch ng:ấ ầ ủ Nuôi c y thu n ch ng:ấ ầ ủ C yấ (*) Nhu m vi khu n ộ ẩ (*) Nhu m vi khu n ộ ẩ Que vô trùng L y vi khu nấ ẩ T m u b nhừ ẫ ệ dàn m t ộ l p m ngớ ỏ trên t mấ lam s ch ạ T khô nhi t đ phòng r iự ở ệ ộ ồ h trên ng n l a đèn c n ơ ọ ử ồ đ di t khu n g n Vk vàoể ệ ẩ ắ lam kính Nhu mộ Gram Dd Crystal, 30-60 giây Dd Lugol 1 phút C n-Acetoneồ Nghiêng lam Đ ch y quaể ả Ch ph tỗ ế Đê t y màu ả R a nhanhử V y khôẩ R a nhanhử V y khôẩ R a nhanhử V y khôẩ Dd Fuchsin 1-2 phút R a n cử ướ Khô t nhiênự Quan sát D i kính ướ Hi n viể (+)Xanh tím (-) đ h ngỏ ồ PH NG PHÁP NUÔI C Y PHÂN L P VI KHU NƯƠ Ấ Ậ Ẩ Th các ph n ng hóa h cử ả ứ ọ Th các ph n ng hóa h cử ả ứ ọ QUE C YẤ VÔ TRÙNG L YẤ VI KHU NẨ TÁC D NGỤ V IỚ gi y t m ấ ẩ Tetramethyl Phenylenediamine Edihydrochloride 1%. Vk có Enzyme Cytochrom-Oxydase H 2 0 2 - oxy già (đ c vk)ộ KL Xanh tím 2 ng ch a mt OF(xanh)ố ứ 1 ng ph d u parafin ố ủ ầ môi tr ng Tryptoneườ KL có enzyme Catalase B tọ khí O 2 30-37 0 C, 24 h có kn lên men 2 vàng acid lactic Có kn oxy hóa Ph d u xanhủ ầ Còn l i vàngạ sinh Indol (C8H5-NH2) Vòng tròn đ s m bên trênỏ ẫ 30-37 0 C, 24 h Mt KIA Mt KIA (1)Rìa trênth ch nghêngạ (2)Đâm th ng không ẳ ch m đáy th ch đ ngạ ạ ứ 30-37 0 C, 24 h - Th ch đ ng => vàng ạ ứ =>Lên men glucose Th ch nghiêng => vàngạ =>lên men lactose - C ng => vàngả ố => Lên men c haiả Sinh h iơ (+) n t ho c ứ ặ đ y lênẩ (+ H 2 S) màu đen Th các ph n ng hóa h cử ả ứ ọ Th các ph n ng hóa h cử ả ứ ọ QUE C YẤ VÔ TRÙNG C YẤ VI KHU NẨ C y th ng đ ngấ ẳ ứ mt Manitol di đ ngộ Mt màu vàng =>Lên men đ ng Mantiolườ Di đ ng => m c thành đ ng th ngộ ọ ườ ẳ môi tr ngườ Nitrate môi tr ngườ Simoms Citrate Agar (s d ng citrate mt) ử ụ C y các đi m khác nhauấ ể trên đĩa l ng ồ mt NA + 2% tinh b tộ thu c th ố ử 1ml Acid Sulffalinic 1ml Naphthyllamine 1-2 P 30 - <35 0 C 24 h 30-37 0 C 24 h 30-37 0 C, 24 h + S n ph m chuy n hóa ả ẩ ể Làm môi tr ng ki m hóaườ ề Thay đ i màu ch thổ ỉ ị 4 ng ch a mtố ứ Decarboxylase (s d ng a.a mt)ử ụ + - không thêm => đ i ch ngố ứ - 1% Arginine - 1% Lysine - 1% ornithin - ph 0,5ml parafin 4 ngủ ố 30-37 0 C 24 h -96 h (+) ng nghi m khác v i ố ệ ớ màu ng đ i ch ngố ố ứ 30-37 0 C, 24 h Đ dd lugol lênổ m t mtặ (+) có vùng sáng xung quanh đi m c yể ấ [...]... Đăt đĩa Huyền phù 1-2P Kháng sinh + vk Lên Lên mặt thach mặt thạch (+) mt đục đều 24h (+) Hồng => vàng (-) không đổi 30 - 370C 24h (+) vòng vô trùng quanh Đĩa k .sinh PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY PHÂN LẬP VI KHUẨN (*) Ưu điểm - Độ chính xác cao - Xác định hình dạng, cách sắp xếp và đặc điểm sinh lý sinh hóa của vi khuẩn (*) Hạn chế - Cần nhiều thời gian để đưa ra kết quả - Dễ bị sinh vật ngoại nhiễm - Qua nhiều... kiểu oxy hóa, lên men hay trơ 5) Nhiệt độ thời gian thích hợp của phương pháp nuôi cấy phân lập? Tùy thuộc vào loại vi khuẩn có khoảng nhiệt độ khác nhau Thông thường là từ 30 – 37 oC trong vòng 24h – 48h 6) Vì sao trong cấy thuần chủng lại thường lấy khuẩn lạc từ vùng cấy thứ 3? Vì ở vùng cấy thứ 3 sẽ có khuẩn lạc rời 7) Khi nào thì sử dụng que cấy vòng, móc,trang? Sử dụng que cấy phụ thuộc vào mục... dụng trong thủy sản - Định danh loài vi khuẩn nghiên cứu - Cơ sở cho vi c nghiên cứu sản xuất thuốc kháng sinh TRẢ LỜI CÂU HỎI 1) Môi trường và thành phần môi trường KIA? Kligler Iron Agar gồm 2 loại đường:Lactose và glucose, tỷ lệ 10/1 chỉ thị pH là đỏ phenol 2) Vì sao trong mt manitol dùng t0 30 - 6 , (±) Cam 4,2 < pH . ộ ậ ủ ả N m đ c các quy trình ph ng pháp sinh lý sinh hóa trong ắ ượ ươ nuôi c y phân l p vi khu nấ ậ ẩ C s quan tr ng cho vi c nghiên c u đ đ nh danh vi khu nơ ở ọ ệ ứ ể ị ẩ tìm ra tác nhân gây. ị ạ ắ ế Xác đ nh hình d ng, cách s p x p ị ạ ắ ế và đ c đi m sinh lý sinh hóa c a vi khu nặ ể ủ ẩ và đ c đi m sinh lý sinh hóa c a vi khu nặ ể ủ ẩ (*) H n chạ ế (*) H n chạ ế - C n nhi u th. ng pháp sinh lý sinh hóa nuôi ươ c y ,phân l p vi khu n : ấ ậ ẩ - Các ph ng pháp d a trên nh ng đ c ươ ự ữ ặ đi m dinh d ng, hô h p, chuy n hoá và ể ưỡ ấ ể kh năng ph n ng v i các ch t hóa h c