định lượng vitamin a

Có vai trò đối với sự phát triển xương, thiếu vitamin A =>xương mềm và mảnh, quá trình vôi hóa bị rối loạn Hệ thống miễn dịch: do hoạt động đặc hiệu của các tế bào vitamin A tham gia t

Trường Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh

Môn: Phương pháp phân tích thành phần hóa-lý thực phẩm

Nhóm thực hiện:

Nguyễn Thị Diễm My Nguyễn Thị Kim Oanh Phạm Thị Kim Chi Nguyễn Mỹ Xuân Nguyễn Thị Thanh Thủy

Võ Thị Trâm

GVGD: TRẦN VŨ HUY

Mục lục

I Giới thiệu

1 Cấu tạo, tính chất và chức năng của vitamin A

2 Một số phương pháp phân tích Vitamin A trong thực phẩm

II Tìm hiểu một số phương pháp phân tích vitamin A

Vitamin A còn có tên gọi khác là retinol , axerophthol… Tồn tại trong tự nhiên gồm 2 dạng:

Retinol : dạng hoạt động của vitamin A, nó đồng hóa trực tiếp bởi cơ thể.

Tiền vitamin A: là một tiền chất của vitamin A được biết nhiều dưới dạng beta-carotene được chuyển hóa thành vitamin A mà cơ thể có thể sử dụng được

Ngoài ra còn có anpha, gama caroten

I Giới Thiệu

1 Cấu tạo, tính chất và chức năng của vitamin A

a Cấu tạo

Vitamin A dễ bị oxi hóa.

Trong cơ thể dưới tác dụng enzyme, retanol chuyển thành anđehyt retanal.

Trong gan tồn tại dạng este với acid acetic và

palmitic.

Bị thủy phân bởi không khí, khá bền với acid, kiềm

và nhiệt độ

b Tính chất

Vitamin A có nhiều chức năng quan trọng đối với cơ thể con người:

Thị giác: giúp cho tế bào trong của mắt luôn khỏe

Ảnh hưởng đặc biệt đến da, kích thích sự liền sẹo và phòng ngừa các chứng bệnh của da như trứng cá.

Sự sinh trưởng: vitamin A là yếu tố không thể thiếu cho sự phát triển phôi thai và trẻ em

Có vai trò đối với sự phát triển xương, thiếu vitamin A =>xương mềm và mảnh, quá trình vôi hóa bị rối loạn

Hệ thống miễn dịch: do hoạt động đặc hiệu của các tế bào

vitamin A tham gia tích cực vào sự chống chịu bệnh tật

Chống lão hóa: vitamin A kéo dài quá trình

lão hóa do làm ngăn chặn sự phát triển các gốc

tự do.

Chống ung thư: hoạt động kìm hãm của nó

với các gốc tự do cũng dẫn đến ngăn chặn

được một số bệnh ung thư.

Sinh sản: vitamin A ảnh hưởng lên chức năng

và sự phát triển của tinh trùng, buồng trứng và nhau thai=> cần thiết cho chức năng sinh sản

d Các nguồn thực phẩm giàu vitamin A

Phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao năng

Phương pháp sắc kí khí

Phương pháp định tính

Phương pháp chuẩn độ Iod

Phương pháp đo quang trực tiếp và sau triết tách vitamin A.

Phương pháp sắc kí lỏng

Phương pháp so màu

2 Một số phương pháp phân tích Vitamin A trong thực phẩm

1 Phương pháp so màu

Tiêu chuẩn này qui định phương pháp so màu để

xác định vitamin A trong sữa bột giày chứa ít nhất

10 IU (đơn vị quốc tế) vitamin A trên gam.

II Tìm hiểu một số phương pháp phân

tích vitamin A

a Nguyên tắc.

Mẫu thử được xà phòng hóa và được chiết,

chất không thể xà phòng hóa được thì cho

phản ứng với axit trifloaxetic đo độ hấp thụ ở bước song 620 nm.

TCVN 7081 – 1 : 2010

b Thuốc thử

• Chỉ sử dụng thuốc thử đạt chất lượng tinh khiết phân tích, trừ khi có qui định khác và chỉ sử dụng nước cất hoặc nước

đã khử hoặc nước có độ tinh khiết tương đương.

•Gồm các loại thuốc thử sau:

•Etanol (CH3CH2OH) 95% (tính theo thể tích) không chứa aldehyt.

•Dung dịch Natri ascocbat 200 g/l

•Dung dịch Kali hydroxit (KOH) 50%

•Dung dịch nước cồn Kali hydroxit 30 g/l

Bồn hơi, bếp cách thủy hoặc bếp cách khí dung điện

Nồi cách thủy: có thể duy trì nhiệt độ 400C

Phiễu chiết: dung tích 50 ml

Bể siêu âm

Giấy lọc: đường kính 9 cm

Máy quang phổ Máy so màu quang điện

bình nón Cốc có mỏ

Pipet tự động Bình định mức

Phiễu chiết Bể siêu âm

d Lấy mẫu

Lấy mẫu theo TCVN 6400: 1998 (ISO 707)

Tính tỷ lệ Am/An đối với từng bước song nối

trên Nếu tỷ lệ không vượt quá các giá trị 0,593

ở bước sóng 300 nm, 0,537 ở bước sóng 370 nm tương ứng thì tính hàm lượng Vitamin A, W, theo đơn vị quốc tế trên gam.

Bằng công thức:

W=(Am.V.d)/(10.m)

Trong đó:

Am: là giá trị số học của độ hấp thụ cực đại

thu được ở bước sóng 326 nm.

V: là tổng thể tích Vitamin A dạng este đã pha

loãng có nồng độ từ 10 IU/ml đến 15 IU/ml.

d: là hệ số chuyển đổi từ độ hấp thụ cụ thể của

Vitamin A dạng este thành đơn vị quốc tế trên gam (d=1900).

2 Xác định Vitamin A trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

b.Chuẩn bị hóa chất

Hóa chất phải là loại tinh khiết được sử dụng để phân

tích , gồm:

- Nước cất loại dùng cho HPLC

- Dietyl ete tinh khiết không có Peroxit

ra thể tự do rồi mới tiến hành phân tích bằng

HPLC.

- Quá trình xà phòng hóa

• Cân 18.32 mg vitamin A palmitat tương ứng với

10mg vitamin A cho vào bình cầu có cổ nhám, thêm 20-40ml dung dịch KOH 2M trong etanol và

0.5natri ascorbat.

• Lắp ống sinh hàn hồi lưu

• Đặt trên nồi cách thủy, xà phòng hóa ở nhiệt độ

700C trong 30 phút.

• Chuyển dung dịch còn nóng vào một bình lóng, rửa bình cầu nhiều lần bằng H2O cất và tập trung nước rửa vào bình lóng.

Chú ý: Lượng nước không được quá 3 lần lượng KOH 2M Vitamin A từ dung dịch đã

xà phòng hóa được chiết 3 lần bằng dietyl ete không có peroxit 3 lần, mỗi lần 40ml

Tập trung lớp ete chiết được vào một bình lóng Rửa lớp ete nhiều lần với nước cất

(mỗi lần 50ml) cho đến khi không còn vết kiềm (thử với phenolphtalein).Loại nước

trong dịch chiết etebằng cách lọc qua lớp

Na2SO4 khan, rửa lớp Na2SO4 ba lần, mỗi lần với 10ml ete.

• Gộp tất cả lốp ete vào bình quả lê.Cô quay đến cạn Cặn còn lại hòa tan trong

acetonitrile, chuyển sang bình định mức

10ml Định mức đến vạch bằng acetonitrile Dung dịch này dùng để làm dung dịch

vitamin A chuẩn gốc (1000mg/l).

• Dung dịch chuẩn 100ug/ml: hút chính xác 1ml dung dịch vitamin A chuẩn gốc

1000ug/ml vào bình định mức 10ml Định mức tới vạch bằng ACN.

d.Chuẩn bị mẫu thử

- Cân khoảng 10g mẫu thử đã được nghiền nhỏ ( nếu cần) cho vào bình cầu thuỷ tinh có cổ nhám và tiến hành xà phòng hoá như đã ghi ở phần trên.

- Sau khi rửa dịch chiết ete bằng 15ml KOH 2% và nhiều lần với nước cất ( mỗi lần 50ml) cho đến khi không còn vết kiềm ( thử với phenoltalein) Loại nước trong dung dịch chiết ete bằng cách lọc qua lớp Na2SO4 khan , rửa lớp Na2SO4 ba lần, mỗi lần với 10ml ete.

- Gộp tất cả lớp ete vào bình quả lê Cô quay đến cạn Hoà tan phần còn lại bằng chính xác 1ml dung dịch pha động ( vortex 15giây và siêu âm 3 phút) Lọc dịch đục qua màng lọc 13mm, 0.45um và thu dịch lọc và tiến hành phân tích trên HPLC.

e.Tiến hành phân tích trên HPLC

Điều kiện phân tích

- Pha động

- Tốc độ dòng

- Detector UV, λ= 325nm tiêm các dung dịch mẫu thử nghiệm theo thứ

tự sau:

+ Các dịch chuẩn Dựng đừơng chuẩn giữa nồng độ các chuẩn vitamin

A và diện tích của các chuẩn Vitamin A Tính toán hệ số tương quan hồi quy tuyến tính

+ Dung dịch mẫu trắng

+ Dung dịch mẫu kiểm soát tính hàm lượng các vitamin A trong dịch chiết và trong mẫu thông qua đường chuẩn xây dựng ở bước trên Tính

độ thu hồi mẫu kiểm soát (R)

+ Các dung dịch mẫu thử nghiệm tính hàm lượng vitamin A trong dịch chiết thông qua đường chuẩn xây dựng ở bước trên

- Co là hàm lượng Vatamin A trong dịch chiết (Co)

thông qua đường chuẩn, mg/L

- m : Khối lượng (g)

3 Phân tích xác định hàm lượng vitamin A trong nguyên liệu để sản xuất thuốc thú y bằng phương

pháp đo quang phổ của dung dịch.

-Lượng mẫu: 0.1g nguyên liệu đã được nghiền mịn.

Dụng cụ

Quy trình:

- Cân 0,1g nguyên liệu đã được nghiền mịn cho vào bình nón 250ml; cho 40ml ethanol tuyệt đối vào; thêm 2g KOH khan; gắn vào ống sinh hàn đun cách thủy 30 phút; để nguội tráng ống sinh hàn bằng 30ml nước cất; sau

đó chuyển vào phểu chiết; chiết 4 lần; mỗi lần bằng 30ml dietyl ether (lấy phần dung dịch trên; phần dung dịch dưới đem chiết tiếp)

- Dung dịch giữ lại thêm nước cất, lắc, chiết tiếp

đồng thời đo pH dung dịch đạt đến 7; thu dung dịch vào bình định mức 100ml; định mức bằng dietyl

ether vừa đủ 100ml; lấy 50ml cho vào bình định

mức 50ml có chứa 2g Na2SO4 lắc đều, để lắng hút 1ml cho vào bình định mức 50ml, định mức bằng

iso-propanol đo ở 3 bước sóng 310, 320, 325 với

mẫu trắng là iso-propanol.

So màu HPLC Đo quang phổ

Ưu điểm Dụng cụ thông

thường của phòng thí nghiêm

định tính và định lượng Kết quả nhanh chính xác.

Dịnh lượng đa số ion vô

cơ và hợp chất hữu cơ nhờ phản ứng tạo màu phức hợp.

Có thể phân tích cấu tử

vi lượng ( độ nhạy cao)

Nhược điểm Thuốc thử tinh khiết

Nước cất ( hoặc đã qua khử trùng)

Pha tĩnh thường sử dụng silosan hoặc alumino có thể gây độc

Hóa chất tinh khiết Dung môi hòa tan tốt với cấu tử cần phân tích

Thiết bị đắt tiền.

Người sử dụng phải có trình độ cao.

4 So sánh các phương pháp

III Các hãng sản xuất máy phân tích

Hiện nay có rất nhiều loại máy để phân tích thực phẩm nhưng chúng ta sẽ giới thiệu sơ lược một

số loại máy sau đây :

1.Máy phân tích kích thước hạt

a Tên thiết bị : máy phân tích kích thước hạt

b Ký mã hiệu : SALD-2101

c Hãng sản xuất :Shimadzu-Nhật Bản

a Các thông số kĩ thuật chủ yếu là :

 Máy chính phân tích cỡ hạt bằng laze

 Nguồn đèn laze bán dẫn có tuổi thọ trung bình cao

 Dễ dàng kiểm tra hiệu năng nhờ chức năng của phần cứng

 Đơn vị đo: Nguồn laze bán dẫn (vạch đo 680nm)

 Cảm biến quang học: 81 nguyên tố

 Nguồn đáp ứng: 100, 110, 120, 200, 220, hoặc 240 VAC

 Kích thước: dài – rộng – cao: 46x75x28cm Nặng 51kg

e Nguyên lí hoạt động : Sự tương tác của năng lượng của tia laze với vật chất được phân tán trong dung dịch trong bình khuấy sẽ làm thay đổi tính chất nhiễu xạ của chùm tia đó Theo dõi sự thay đổi để xác

định kích thước của vật liệu cần đo cỡ hạt

f Yêu cầu cơ bản đối với mẫu đo : Mẫu bột, mẫu rắn phải có bề mặt sạch, không bay hơi, bền Các mẫu phải không bị phân hủy hay bị phá

vỡ cấu trúc bởi tia laze.

g Phạm vi ứng dụng và giới hạn :

* Phạm vi ứng dụng : Công nghiệp vật liệu, ngành địa chất,

nông nghiệp và thực phẩm, ngành Hoá học, năng lượng hạt nhân

và Điện lực, Y học, Dược và Sinh học, Phân tích môi trường,…

* Giới hạn : Xác định được kích thước vật liệu rắn hoặc huyền

phù Không xác định được các phân tử chất lỏng và chất khí.

h Năm đưa vào sử dụng : 2006

k Ảnh chụp toàn bộ của thiết bị

2 Máy quang phổ UV-Vis

Tên thiết bị : thiết bị đo trắc quang UV-Vis

a Ký mã hiệu : UV-vis Spectrophotometer 2800

b Hãng sản xuất : Cole Palmer Instruments - Trung Quốc.

c Các thông số kĩ thuật chủ yếu:

+ Dải bước sóng 200 ÷ 1100 nm

+ Độ chính xác bước sóng: ± 1 nm

+ Độ lặp lại bước sóng: ± 0,1 nm

+ Độ phân giải: 0,1 nm

+ Nguồn đèn: Tungsten và Deuterium

+ Vùng giá trị đo quang: ABS = 0 ÷ 5

+Chế độ: đo điểm và quét phổ

+ Cuvet: 1 cm, 2 cm, 5 cm

+Đo theo sự biến đổi nhiệt độ: Tphòng đến 600C

+ Kết nối máy tính và phần mềm đo xử lý

d Nguyên lí hoạt động : Thiết bị hoạt động dựa trên khả năng hấp thụ ánh sáng của mẫu

f Các thông số của mẫu mà thiết bị có thể đọc được :

+ Mẫu lỏng

+ Mẫu rắn được phân tán trong dung dịch

g Các kết quả chính :

+ Xác định nồng độ chất tan trong dung dịch

+ Xác định đỉnh hấp thụ cực đại của mẫu ở dạng dung dịch

+ Xác định năng lượng vùng cấm (Eg)

h Yêu cầu cơ bản đối với mẫu đo :

+ Mẫu ở dạng lỏng : không chứa cặn lơ lửng, bước sóng cần đo không chịu ảnh hưởng bởi tạp chất

+ Mẫu ở dạng rắn, kích thước hạt nanomét (hoặc không bị lắng đọng khi phân tán trong pha lỏng)

i Lĩnh vực áp dụng và giới hạn của thiết bị :

+ Phân tích định lượng chất tan

CẢM ƠN THẦY VÀ CÁC BẠN ĐÃ LẮNG NGHE