Phương pháp định lượng vitamin a trong thực phẩm

Định lượng vitamin a

Trường ĐH Công Nghiệp Thực PhẩmTp. HCM Khoa Công Nghệ Thực Phẩm  Bài Tiểu Luận Đề tài:  ! "# $"%&'()(%&! *++,$*+$-* *".((% *++,$*+*-/ -0(%)(1 *++,$*+$22 3%45627!,89 Bảng Phụ Lục 2 Phương Pháp Định Lượng Vitamin A Trong Thực Phẩm. 1. Tổng Quan Về Vitamin A 1.1 Lịch sử phát triển ":$;+;8<=>%?:>@1!)@A@BC =5=D%3B&%?@5EF#G!8!%HG &!%I>@1J?GKLE56MN=G!EO <=>KPABQ(#&!%IR)@A S!T?5IUOV&!%I85%&V# W ":$;$-8X5GG5!P%)Y@GRN 6 ":$;*+8Z5@GX=[=\?5I]M>^)&# ?5I)_GKG5%#`a=b$;*;c8X%b$;-+c> dM!B)#8e=fgFU &RVG ":$;*hD$;-+8i=[%5jMdOFO^ )%1UGe= ":$;2/8k5=^l%J4 ":$;,;8g%MV##i=4.)m De=?5I-[TLFl%VU 1.2 Cấu tạo Vitamin A được gọi là chất chống lồi mắt hay axerophtol gồm có 3 đồng phân Al, A2, A3 và chất provitamin (tiền vitamin) có màu vàng gọi là carotene. 3 J$$e)%T$8*G (#8#*[TLFl%V$G* $nog%_`o8#HMp= ?@K?#.6Fqe *+  -+ Zp=['[@ZP#%&O [T[=&[=#Hp=b=[=&[=coP#!%&O [T[b[p=c J$*e)%&O#Yp= *nog%_`V8#.6Fq e *+  *h ZMG`$#H?I._Gfe - Ge 2 UGR8 TfT)$Y*7-Se.6)%T#- [TS$ 4 J$-e)%&O#Y* "8$#l%4)%I_@`5I9$+!9*+ 8*#@`5#Y9;*!9;9(#O[\l%4O  Gần đây người ta đã phân lập được vitamin A3 ở gan cá voi (công thức còn nghiên cứu). Tiền chất β – caroten: có 3 loại caroten α, β, γ khác nhau ở cấu tại vòng ionnon, β - caroten có 2 vòng β - ionnon nên khi thuỷ phân cho 2 vitamin A còn α và γ (caroten chỉ có 1 vòng β - ionon (ngoài ra là α - ionon) nên chỉ cho một phân tử vitamin. Hình 1.4 Một phân tử β – caroten sẽ chuyển hóa thành 2 phân tử Vitamin A. 1.3 Tính chất − i.`8I[%.U8==8=r − 3gg%M^&!Mf8@gG`[GMg_^?M.l% − '@P&#@_P&M.Mf85:l%JP&#G  5 − `[EU=s&=[=&=5=J=%&O5[T= − ]6G`<@e - 6)%P − ]6G` * <Z 2 6)%F% 1.4 Vai trò ?TG[S%8)S!IG`Oe Ig%l%&J5dUO8#OV?#6: [TU5% − 3]G^)%1U[HO − Ol%&JF@^G\5G@#I − t15#fMfI5[EG)l%JE − OU5:_U%G@ − )l%&JM!TPU& − u!?I5%GF&P6!@ − (:nM]:gMU!@ #GRo@^l%IG`5OUvNG Ew 3I6:@]UIG`On: - Đối với mắt: Giúp cho các tế bào trong một loạt cấu trúc của mắt luôn khỏe mạnh. Ngoài ra, nó còn rất quan trọng đối với sự biến đổi ánh sáng thành các tín hiệu thần kinh trong võng mạc8 %G[`[T=5x%&O= (@#I8=M!G`5b?=cO[55jI T&]G`5_G0Tj81G0TKJ] g%M^!%5<%#8M5[5T@F%y 5G57=8L57=G%O_T57= Nhờ quá trình này giúp võng mạc nhận biết được các hình ảnh khi thiếu ánh sáng. Nếu thiếu vitamin A, khả năng nhìn của mắt lúc ánh sáng yếu sẽ bị giảm. Hiện tượng này thường xuất hiện vào lúc trời nhá nhem tối, được gọi là chứng “quáng gà”. Hình 1.5 Cơ chế phát sinh bệnh quáng gà. - Đối với mô và tổ chức da: Vitamin A cần thiết cho sự bảo vệ toàn vẹn của biểu mô giác mạc và các tổ chức biểu mô dưới da, khí quản, các tuyến nước bọt, ruột non, tinh hoàn Khi thiếu vitamin A, sự sản xuất các niêm dịch bị giảm, da bị khô và xuất hiện 6 sừng hóa, biểu hiện này thường thấy ở mắt, lúc đầu là khô kết mạc rồi tổn thương đến giác mạc, nặng hơn sẽ làm thủng giác mạc và dẫn đến mù lòa. - Đối với sự tăng trưởng và phát triển của thai nhi và trẻ nhỏ: Vitamin A có ảnh hưởng tới những gen quyết định sự phát triển liên tiếp của một số cơ quan trong quá trình phát triển phôi thai. Với trẻ em, vitamin A giúp phát triển chiều cao và cân nặng, thiếu vitamin A làm xương mềm và mảnh hơn bình thường, quá trình vôi hóa bị rối loạn. Thiếu vitamin A, trẻ sẽ chậm phát triển về thể chất hơn so với trẻ bình thường cùng lứa tuổi. - Đối với hệ miễn dịch: Vitamin A cần cho chức năng của tế bào võng mạc, biểu mô - hàng rào quan trọng bảo vệ cơ thể khỏi sự xâm nhập của vi khuẩn từ bên ngoài. Hai hệ thống đáp ứng miễn dịch của cơ thể con người (miễn dịch dịch thể và miễn dịch tế bào) đều chịu ảnh hưởng của vitamin A và các chất chuyển hóa của chúng. Ngoài ra, vitamin A còn cần thiết cho chức năng sinh sản, vì nó gây ảnh hưởng lên chức năng và sự phát triển của tinh trùng, buồng trứng và nhau thai. Như vậy với mọi lứa tuổi, đặc biệt với phụ nữ có thai và trẻ em thì vitamin A là rất cần thiết. 1.5 Nhu cầu Thiếu hay thừa vitamin A đều gây bệnh − Trẻ em dưới 3 tuổi: 600 mcg/ngày (2000 IU/ngày) − Trẻ em từ 4-8 tuổi: 900 mcg/ngày (3000 IU/ngày) − Trẻ em từ 9-14 tuổi: 1700 mcg/ngày(5666 IU/ngày) − Người lớn: 3000 mcg/ngày (10000 IU/ngày) − Phụ nữ có thai hoặc đang cho con bú: 3000 mcg/ngày. Thiếu Vitamin A: X?w@O%S%HU!%EG5%&]8 EO5%&]zVl%bM]:J]TM? !%5)c(!%EHE5x5?T&48#f)U& Tg%)['_je&4GgV%@^M. j{S%H5M.UM![@O%.U%&!!`jG` S&@&!@B@O%.M=#(!=5fE]GE M=]nNbI3cG%I\5:R@go 5Y.G`5#GU&UTbM=cG\ Se&4MR#5%&]'[8]g%[&`G]&_[ 7 b@`%N%j_#c8@^[bi=555cG5l%%5 =5U@O%._@goUIGfHU^.)G@l%8 G``@O%.@M=# Thừa Vitamin A: GR)@A8G^][Y>)EGY :%IM#M:5G`GR`G3G ebG`M[YJO]l%@! oH%cGK&8l%g%#O[|`??G"##OF&@%L .8G[8[686@!:8.q8Jn8%S%84G @E8%O]G&4fJ. (nMH8E#8M. S&85I8)U8^N8]F8>&P8!%%GH%]&# O^%6S%jgG`??fHV 1.6 Nguồn gốc Từ động vật: có nhiều trong gan, trong cơ thịt có màu sẫm (thịt bò), trong lòng đỏ trứng. Tên thực phẩm VitaminA (Retinol tương đương mcg) Tên thực phẩm VitaminA (Retinol tương đương mcg) 1. Gan gà 6960 8. Cật bò 330 2. Gan heo 6000 9.Sữa bột toàn phần 318 3. Gan bò 5000 10. Thịt ngỗng 270 4. Gan vịt 2960 11. Thịt vịt 270 5. Lươn 1800 12. Cá chép 181 6. Trứng vịt lộn 875 13. Phó mát 275 7. Trứng gà 700 14. Cật heo 150 Bảng 1.1 Hàm lượng vitamin A trong 100g thực phẩm ở một số thực phẩm. Từ thực vật: có chứa nhiều tiền vitamin A là carotene có nhiều ở cà rốt, đu đủ, gấc, bí đỏ… 8 Hình 1.6 Các thực phẩm chứa nhiều Vitamin A Ngoài ra, hiện nay có rất nhiều sản phẩm vitamin A ở dạng thuốc hay thực phẩm chức năng được tổng hợp từ thiên nhiên hay hóa học. Hình 1.7 Một số sản phẩm Vitamin A ở dạng thuốc (hay thực phẩm chức năng). 2.Các phương pháp định lượng Vitamin A trong thực phẩm. TUGf=Gl%I!bMd^%k}c$k}G       G`  +8-++~  =•  +8-22  ~  =&  =•  +8-,;  ~  =& o+8,,+~=& )['@P&Hg%M^!%]#8 5G5q[EM€=)IP& X?5I[\OP • Phương pháp Sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC) • Phương pháp so màu • Phương pháp hóa học 9 2.1 Phương pháp sắc kí lỏng HPLC Sắc ký là một nhóm các phương pháp hóa lý dùng để tách và phân tích các thành phần cấu tử của một hỗn hợp cấu tử dựa vào tính chất hóa học, vật lý, hóa lý của các chất cần phân tích với pha động và pha tĩnh. 2.1.1 Pha tĩnh trong HPLC • Sắc ký pha thường: − pha tĩnh có bề mặt là các chất phân cực − pha động:các dung môi hữu cơ không phân cực như  tách các chất không phân cực hay ít phân cực. • Sắc ký pha ngược: − pha tĩnh là các silica đã được ankyl hoá, không phân cực, loại thông dụng nhất là –C 18 H 37 − pha động phân cực: nước, methanol, axetonitril  tách các chất có độ phân cực rất đa dạng: từ rất phân cực, ít phân cực tới không phân cực. 2.1.2 Pha động trong HPLC − Pha động có độ phân cực thấp: xyclopentan, n-pentan, n-heptan, n-hexan, 2- chloropropan, cacbondisulfua (CS 2 ), chlorobutan, CCl 4 , toluen. − Pha động có độ phân cực cao: nước(MeOH, ACN). 2.1.3 Detector (hệ thống chuyển tính hiệu quang sang tín hiệu điện) trong HPLC. − Detector quang phổ hấp thụ phân tử UV-VIS − Detector huỳnh quang RF − Detector độ dẫn 2.1.4 Chuẩn bi. • Nguyên tắc: Mẫu được xà phòng hóa với dung dịch kali hydroxit trong etanol và vitamin A được tách chiết trong dầu nhẹ. Loại bỏ dầu nhẹ bằng cách cho bay hơi và phần cặn được hòa tan trong 2-propanol. Nồng độ vitamin A trong dịch chiết 2-propanol được xác định bằng sắc ký lỏng pha đảo dưới các điều kiện cho pic đơn lẻ đối với tất cả các đồng phân retinol. • Thiết bị: 10 [...]... Nam TCVN:7081-1:2002 S a bột gầy,xác định hàm lượng vitamin A 2 Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 8674:2011 Thức ăn chăn nuôi - xác định hàm lượng vitamin a - phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao 3 Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN:6400:1998 ISO 707:1997 Hướng dẫn lấy mẫu s a 4 Các phương pháp xác định hàm lượng Vitamin trong thực phẩm (Tiểu Luận Phân tích dụng cụ - ĐH Bách Khoa Tp HCM) 5 Phương Pháp định lượng Vitamin. .. h a tan phần còn lại (V 3=10ml) − V4 là tổng thể tích dung dịch thử (V 4=100ml) − V5 là phần thể tích phần dung dịch thử(V 5=25ml) − m là khối lượng phần mẫu thử tính bằng gam Ứng Dụng Định lượng hàm lượng vitamin A trong nhiều loại thực phẩm khác nhau: − Vitamin A trong s a tươi, s a bột… − Vitamin A trong các loại rau quả, trái cây… − Vitamin A trong các loại thực phẩm chức năng… 19 Tài Liệu Tham... đã metyl h a công nghiệp tương đương 2-propanol (C3H7OH) Dầu nhẹ, có điểm sôi trong khoảng từ 400C đến 600C Lượng cặn còn lại sau khi bay hơi phải nhỏ hơn 20 mg/l Chất chuẩn vitamin A All-trans-retinyl axetat, vitamin A axetat (C22H32O2) 328,5 g/mol, có độ tinh khiết ít nhất 90% All-trans-retinol, ancol vitamin A (C20H30O), 286,5 g/mol, có độ tinh khiết ít nhất 90% Metanol, dùng cho HPLC Pha động dùng... dịch Vitamin A tiêu chuẩn: Sử dụng dung dịch Vitamin A theo tiêu chuẩn US Pharmacopeia được pha chế từ crystalin all trans – retinal acetat trong dầu hạt bông, tương đương với 30mg retinol ( Vitamin A ở dạng rượu C20H30O) trên gam dầu, hoặc theo công bố khi bán Có thể sử dụng dung dịch tiêu chuẩn thứ nếu chuẩn h a dung dịch đối chứng tiêu chuẩn đầu hoặc bằng cách đo UV Cắt một đầu c a vỏ ống ch a dung... lỏng HPLC: + H a tan cặn bằng một lượng tối thiểu 2-propanol và chuyển định lượng sang bình định mức 20 ml + R a sạch bình cầu làm bay hơi có ba phần nhỏ 2-propanol ,chuyển nước r a vào bình định mức Pha loãng đến vạch bằng 2-propanol và trộn Đối với vật liệu có ch a trên 100 000 IU/kg, thì có thể cần phải pha loãng tiếp + Chú thích: IU = Đơn vị quốc tế; 1 IU vitamin A = 0,300 µm c a all-transretinol +... trung bình tìm được c a các lần bơm lặp lại c a chuẩn retinol có nồng độ tương tự Thời gian lưu c a retinol là khoảng 5 phút Thực hiện các lần bơm thay thế c a dịch chiết mẫu và dung dịch chuẩn + Thủy phân all-trans-retinyl axetat để hiệu chuẩn + Chuẩn bị dung dịch c a all-trans-retinyl axetat trong etanol sao cho 1 ml ch a khoảng 15 000 IU vitamin A + Dùng buret 5 ml với vạch chia 0,02 ml, chuyển 2,5... phân giải cao (nhiều loại pha tĩnh) Độ nhạy cao (kết hợp nhiều loại Detector) Tái sử dung cột 15 − Mẫu dễ thu hồi Nhược điểm: − 2.2 Thiết bị đắc tiền đầu tư ban đầu cao Phương pháp so màu 2.2.1 Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn này qui định phương pháp so màu để xác định vitamin A trong s a bột gầy ch a ít nhất 10 IU (đơn vị quốc tế) Vitamin A trên gam 2.2.2 Nguyên tắc Mẫu thử được xà phòng h a và được chiết... kết quả: Tính hàm lượng vitamin A c a mẫu thử, bằng công thức sau: WA = 20 000 x Trong đó: wA là hàm lượng vitamin A c a mẫu thử, tính bằng đơn vị quốc tế trên kilogam (IU/kg); c là nồng độ retinol c a dịch chiết, tính bằng đơn vị quốc tế trên mililit (IU/ml); m là khối lượng c a mẫu thử, tính bằng gam (g) Ưu nhược điểm c a phương pháp + − − 2.1.6 2.1.7 Ưu điểm: − − − − Tốc độ nhanh (nhiều phân tích dưới... 2.2.8 2.3 là một đường thẳng, thì hệ số đối với hàm lượng vitamin A trong mẫu có thể tính được Tính và biểu thị kết quả Tính hàm lượng vitamin A, w, bằng mircogam retinal trên gam (hoặc hoạt độ vitamin A, biểu thị bằng đơn vị quốc tế trên gam), theo công thức: W = Trong đó: − c là nồng độ retinol, tính được từ đường chuẩn, tính bằng mircogam retinol trên ml trong dung dịch mẫu để so màu − V1 là thể tích... etanol Xoay bình để làm phân tán mẫu + Thêm 2 ml natri ascorbat và 50 ml dung dịch kali hydroxitvà xoay bình để trộn 12 Lắp bình ngưng hồi lưu vào bình cầu và nhúng bình cầu vào nồi cách thủy đun sôi + Để lượng ch a trong bình cầu hồi lưu trong 60 phút, thỉnh thoảng xoay bình + Tháo bình cầu ra và để nguội đến nhiệt độ phòng càng nhanh càng tốt dưới dòng nước lạnh Chiết xuất Vitamin A: + Chuyển lượng . Hàm lượng vitamin A trong 100g thực phẩm ở một số thực phẩm. Từ thực vật: có ch a nhiều tiền vitamin A là carotene có nhiều ở cà rốt, đu đủ, gấc, bí đỏ… 8 Hình 1.6 Các thực phẩm ch a nhiều Vitamin. Vitamin A Ngoài ra, hiện nay có rất nhiều sản phẩm vitamin A ở dạng thuốc hay thực phẩm chức năng được tổng hợp từ thiên nhiên hay h a học. Hình 1.7 Một số sản phẩm Vitamin A ở dạng thuốc (hay thực. h a với dung dịch kali hydroxit trong etanol và vitamin A được tách chiết trong dầu nhẹ. Loại bỏ dầu nhẹ bằng cách cho bay hơi và phần cặn được h a tan trong 2-propanol. Nồng độ vitamin A trong