Đánh giá khả năng đối kháng với vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus phân lập từ mẫu tôm bệnh hoại tử gan tụy (AHPNS) của một số chủng Bacillus.

B GIÁO DC VÀ ÀO TO TRNG I HC M TP. H CHÍ MINH  BÁO CÁO KHÓA LUN TT NGHIP Tên đ tài: ÁNH GIÁ KH NNG I KHÁNG VI VI KHUN Vibrio paraheamolyticus PHÂN LP T MU TÔM BNH HOI T GAN TY (AHPNS) CA MT S CHNG Bacillus KHOA CÔNG NGH SINH HC CHUYÊN NGHÀNH: VI SINH – SINH HC PHÂN T GVHD : Ths. NGUYN THANH THUN Ths. NGUYN VN MINH SVTH : LÊ ANH TUN MSSV : 1053010888 KHÓA : 2010 – 2014 Tp. H Chí Minh, tháng 5 nm 2014 LI CM N  hoàn thành đ tài này, ngoài s c gng ca bn thân còn có s hng dn ca thy cô, anh ch và s giúp đ ca bn bè. u tiên, em xin chân thành cm n tt c các thy cô Khoa Công ngh Sinh Hc trng i Hc M Tp. H Chí Minh đã truyn đt cho em nhng kin thc nn tng nht, em xin cm n thy Nguyn Thanh Thun, thy Nguyn Vn Minh, cô Dng Nh t Linh và thy an Duy Pháp luôn bên cnh đnh hng, truyn đt kinh nghim, đng viên em hoàn thành đ tài. Con cm n ba m, cm n gia đình đã luôn bên con, to mi điu kin tt nht đ con hoàn thành vic hc ca mình. Em xin chân thành cm n ch Võ Ngc Yn Nhi, ch Nguyn Th M Linh và anh oàn Vit Phi nhng ngi anh, ngi ch luôn ng h, giúp đ em trong lúc làm đ tài. Bên cnh đó, em xin cm n các bn, các em trong phòng thí nghim Công ngh Vi sinh Trng i hc M Thành ph H Chí Minh đã luôn quan tâm, giúp đ em trong quá trình thc hin đ tài này. Mt ln na, em xin gi đn tt c các thy cô, anh ch, bn bè li bit n và kính chúc sc khe, may mn, gt hái nhiu thành công trong tng lai. Tp. H Chí Minh, Ngày 26 tháng 05 nm 2014 LÊ ANH TUN  SVTH: Lê Anh Tun  i MC LC T VN  1 CHNG 1. TNG QUAN TÀI LIU 5 1.1 TÌNH HÌNH NUÔI TÔM TH CHÂN TRNG TRÊN TH GII VÀ  VIT NAM 6 1.1.1 Tình hình nuôi tôm trng trên th gii 6 1.1.2 Tình hình nuôi tôm th chân trng  Vit Nam 7 1.2 TÌNH HÌNH DCH BNH 8 1.2.1 Mt s bnh do Vibrio gây ra trong nuôi trng thy sn 8 1.2.2 Tình hình dùng hóa cht, kháng sinh điu tr bnh  tôm 9 1.3 BNH HOI T GAN TY EMS/AHPNS TRÊN TÔM TH 11 1.3.1 Tình hình dch bnh 11 1.3.2 Tác nhân gây bnh 13 1.3.3 Mt s đc đim ca Vibrio parahaemolyticus 14 1.4 GII THIU PROBIOTIC VÀ VIC NG DNG TRONG NUÔI TRNG THY SN 15 1.4.1 nh ngha probiotic 15 1.4.2 iu kin yêu cu cho probiotic 16 1.4.3 Vai trò ca probiotic trong nuôi trng thy sn 16 1.5 GII THIU V Bacillus 19 1.5.1 c đim chung ca chi Bacillus 19 1.5.2 ng dng ca Bacillus trong nuôi trng thy sn 21 1.5.3 S dng ch phm sinh hc t Bacillus đ kim soát mm bnh do Vibrio 21 CHNG 2. VT LIU VÀ PHNG PHÁP NGHIÊN CU 24 2.1 THI GIAN VÀ A IM NGHIÊN CU 25 2.2 VT LIU NGHIÊN CU 25  SVTH: Lê Anh Tun  ii 2.2.1 Chng vi sinh vt 25 2.2.2 Tôm dùng đ th nghim 25 2.2.3 Môi trng - hóa cht 25 2.2.4 Thit b - dng c 26 2.3 PHNG PHÁP NGHIÊN CU 27 2.3.1 Hot hóa ging 27 2.3.2 Phng pháp thu nhn và phân lp vi khun t mu tôm bnh 27 2.3.3 Th nghim kho sát LD 50 34 2.3.4 Phng pháp xác đnh kh nng đi kháng ca Bacillus vi Vibrio parahaemolyticus 35 2.3.5 Th tính an toàn ca chng Bacillus lên tôm ging 38 CHNG 3. KT QU VÀ THO LUN 40 3.1 KT QU TÁI PHÂN LP CÁC CHNG Bacillus 41 3.2 KT QU PHÂN LP CHNG Vibrio parahaemolyticus 44 3.3 KT QU LD 50 48 3.4 KT QU PHNG PHÁP XÁC NH KH NNG I KHÁNG CA Bacillus VI Vibrio parahaemolyticus 49 3.4.1 Kt qu th đi kháng bng phng pháp cy vch vuông góc . 49 3.4.2 Kt qu th đi kháng bng phng pháp đc l thch 51 3.5 KT QU TH NGHIM TÍNH AN TOÀN CA CHNG Bacillus LÊN TÔM GING 53 3.6 KT QU ÁNH GIÁ KH NNG BO V CA CHNG Bacillus LÊN TÔM GING 54 CHNG 4. KT LUN VÀ KIN NGH 58 4.1 KT LUN 59 4.2 KIN NGH 59 TÀI LIU THAM KHO 61 PH LC 1 69  SVTH: Lê Anh Tun  iii PH LC 2 74  SVTH: Lê Anh Tun  iv DANH MC CH VIT TT Ting Vit Cs. Cng s BSCL ng bng sông Cu Long NTTS Nuôi trng thy sn PTN Phòng thí nghim NN&PTNT Nông nghip và Phát trin nông thôn Ting Anh ANOVA One-way analysis of variance CFU Colony forming unit FAO Food and Agriculture Organization of the United Nations nm nanomet NB Nutrient Broth NA Nutrient Agar OD Optical Density WHO World Health Organization m micromet TCBS Thiosulphate Citrate Bile Salt Agar SVTH: Lê Anh Tun  v DANH MC CÁC BNG       Bng 1.1 Din tích, sn lng và nng sut tôm th chân trng qua các nm 8 Bng 3.1 Kt qu phân lp 41 Bng 3.2 Kt qu nhum Gram 7 chng phân lp đc t mu bnh 45 Bng 3.3 Kt qu đnh danh Vibrio sp. NT 7 45 Bng 3.4 Kt qu LD 50 ca chng Vibrio parahaemolyticus NT 7 48 Bng 3.5 Kt qu th đi kháng bng phng pháp cy vch vuông góc 49 Bng 3.6 Kt qu th kh nng đi kháng bng phng pháp đc l thch 51 Bng 3.7 Kt qu th nghim tính an toàn ca chng Bacillus sp. F 33 54 Bng 3.8 T l tôm sng sau khi cm nhim vi V. parahaemolyticus NT 7 (%) 54 SVTH: Lê Anh Tun  vi DANH MC CÁC HÌNH             Hình 1.1 Hình nh gan ty, rut và d dày ca tôm bnh (A, B) và tôm không b bnh (C, D) 13 Hình 3.1 c đim khun lc Bacillus sp. Q 16 và Bacillus sp. Q 111 trên môi trng NA sau 24 gi nuôi cy 44 Hình 3.2 Nhum Gram Bacillus sp. Q 16 và Bacillus sp. Q 111 44 Hình 3.3 c đim khun lc Vibrio parahaemolyticus trên môi trng TCBS 47 Hình 3.4 Hình thái nhum Gram Vibrio parahaemolyticus 48 Hình 3.5 Kt qu th đi kháng bng phng pháp k vch vuông góc 50 Hình 3.6 Kt qu th nghim bng phng pháp đc l thch 53 SVTH: Lê Anh Tun  vi DANH MC S        S đ 2.1 Phng pháp thí nghim 27 S đ 2.2 S đ th đi kháng bng phng pháp đc l thch 37 SVTH: Lê Anh Tun  vi DANH MC BIU  VÀ  TH   Biu đ 3.1 Kh nng đi kháng ca Bacillus spp. đi vi Vibrio parahaemolyticus NT 7 52  th 3.2. T l tôm sng sau khi cm nhim Vibrio parahaemolyticus NT 7 55 [...]... hành th c hi n giá kh n ng tài “ ánh i kháng v i vi khu n Vibrio parahaemolyticus phân l p t m u tôm th b nh ho i t gan t y (AHPNS) c a m t s ch ng Bacillus. SVTH: Lê Anh Tu n 3 KHÓA LU N T T NGHI P TV N M c tiêu: Tuy n ch n và sàng l c nh ng ch ng Bacillus i kháng m nh v i vi khu n Vibrio parahaemolyticus phân l p t m u tôm th b nh ho i t gan t y (AHPNS) N i dung th c hi n: - Tái phân l p ch ng Bacillus.. . trên cá tôm nhi m b nh (Oanh và cs., 1999) 1.2.2 Tình hình dùng hóa ch t, kháng sinh i u tr b nh tôm Vibrio ã t ng là nguyên nhân chính gây ra d ch b nh trên tôm d ch b nh do vi khu n Vibrio gây ra, ng nhiên cho th p ki m soát i ta ã s d ng thu c kháng sinh, tuy n th i i m này, hi u qu c a vi c s d ng thu c kháng sinh là r t Philippines, b nh do vi khu n Vibrio ã gây ra t n th t l n v s n l tôm và gây... c gây ra b i m t lo i vi khu n (Vibrio parahaemolyticus) b nhi m phage (m t th th c khu n) làm cho c t c a vi khu n t ng lên Chúng xâm chi m ng tiêu hóa c a tôm và sinh ra c t gây phá h y mô và r i lo n ch c n ng c a gan t y, c quan tiêu hóa c a tôm (theo FAO); (Lightner và cs, 2012) Tác ng c a vi khu n Vibrio parahaemolyticus ã Vibrio parahaemolyticus ti p t c D a trên công vi c th c hi n SVTH: Lê... ngo i bào c a vi khu n Kamei và cs (1988) ã báo cáo r ng ch ng Pseudomonas sp., Vibrios sp phân l p t n i p tr ng cá h i có ho t tính kháng virus IHNV (infectious hematopoietic necrosis virus) v i t l gi m h n 50% Direkbusarakom và cs (1998) ã phân l p c 2 ch ng Vibrio spp NICA 1030 và NICA 1031 t n i p tr ng tôm sú, 2 ch ng này có ho t tính kháng virus IHNV và OMV (Oncorhynchus masou virus) v i t l... gây thi t h i kinh t trong nuôi tôm công nghi p cho th y vi c gi m sút s n l Philipines, n và Indonesia Các nghiên c u ng tôm nuôi có liên quan n b nh vi khu n do chính nhóm vi khu n phát sáng gây ra Hi n nay, ng i ta ã phân l p và nh danh c 172 ch ng vi khu n t tôm b nh và tìm th y kho ng 90% ch ng vi khu n thu c nhóm Vibrio ( Nguy n Th Ng c T nh và cs., 2010) Vi t Nam ã phân l p c các loài V alginolyticus... nhi u l n c phân l p t tôm b nhi m EMS / AHPNS Trung Qu c, các nhà nghiên c u Trung Qu c ã báo 13 KHÓA LU N T T NGHI P cáo v T NG QUAN TÀI LI U c l c c a m t ch ng V parahaemolyticus phân l p t tôm th chân tr ng b b nh t vong s m trong n m 2010 t i t nh Qu ng Tây (Zhang và cs., 2012) 1.3.3 M ts 1.3.3.1 c i m c a Vibrio parahaemolyticus Phân lo i Theo phân lo i c a Bergey (1994) Vibrio parahaemolyticus. .. dòng vi khu n Vibrio ã kháng thu c Chlorine c s d ng r ng rãi trong các tr i gi ng và trong các ao nuôi Tuy nhiên, vi c s d ng này l i kích thích s phát tri n c a gen kháng thu c trong vi khu n M t s ng s d ng trong các ao nuôi di t i nuôi tôm Thái Lan cho bi t khi chlorine ng v t phù du tr c c khi th tôm, tuy nhiên sau khi d ng th chlorine thì khu n Vibrio l i phát tri n nhanh chóng Nh v y, Vibrio. .. u khác trên tôm sú, cho th y Bacillus subtilis BT23 ki m soát c s t ng tr ng c a V harveyi trong c 2 i u ki n in vitro và in vivo (Vaseeharan và cs., 2003) 1.5.3 S d ng ch ph m sinh h c t Bacillus ki m soát m m b nh do Vibrio V n t ra là n u ki m soát không có v t ch c Vibrio parahaemolyticus thì phage s t n t i c ng nh không có Vibrio parahaemolyticus gây c trên tôm Thêm vào ó, hi n nay kháng sinh... parahaemolyticus Phân lo i Theo phân lo i c a Bergey (1994) Vibrio parahaemolyticus thu c Ngành: Proteobacteria L p: Gammaproteobacteria B : Vibrionales H : Vibrionaceaae Chi: Vibrio Loài: Vibrio parahaemolyticus 1.3.3.2 c i m c i m chung các loài vi khu n thu c chi Vibrio: Gram âm, hình que th ng ho c h i u n cong, kích th bào t và chuy n c 0,3-0,5 x 1,4-2,6 m Chúng không hình thành ng nh m t tiên mao... b nh là do vi khu n Vibrio parahaemolyticus (Lightner và cs., 2012) N m 2013, m t nghiên c u c a Lingtner và cs cho th y Vibrio parahaemolyticus b nhi m phage (m t th th c khu n) làm cho c t c a vi khu n t ng lên Chúng xâm chi m c t gây phá h y ng tiêu hóa c a tôm và sinh ra mô và r i lo n ch c n ng c a gan t y, c quan tiêu hóa c a tôm (theo FAO) V n t ra là n u ki m soát có v t ch c V parahaemolyticus . lc nhng chng Bacillus đi kháng mnh vi vi khun Vibrio parahaemolyticus phân lp t mu tôm th bnh hoi t gan ty (AHPNS). Ni dung thc hin: - Tái phân lp chng Bacillus t b su. tin hành thc hin đ tài “ánh giá kh nng đi kháng vi vi khun Vibrio parahaemolyticus phân lp t mu tôm th bnh hoi t gan ty (AHPNS) ca mt s chng Bacillus. ” KHÓA LUN TT NGHIP. ngh vi sinh. - Phân lp Vibrio parahaemolyticus t mu tôm bnh. - Th nghim LD 50 . - Th đi kháng vi mt s chng Bacillus. - Th nghim tính an toàn và kh nng bo v ca chng Bacillus