Nghiên cứu một số chỉ tiêu sinh sản trên đàn chuột nhắt trắng giống swiss nuôi tại viện kiểm định quốc gia vắc xin và sinh phẩm y tế

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ************ NGUYỄN CHÍ HIẾU NGHIÊN CỨU MỘT SỐ CHỈ TIÊU SINH SẢN TRÊN ðÀN CHUỘT NHẮT TRẮNG GIỐNG SWISS NUÔI TẠI VIỆN KIỂM ðỊNH

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI

************

NGUYỄN CHÍ HIẾU

NGHIÊN CỨU MỘT SỐ CHỈ TIÊU SINH SẢN TRÊN ðÀN CHUỘT NHẮT TRẮNG GIỐNG SWISS NUÔI TẠI VIỆN KIỂM ðỊNH QUỐC GIA VẮC XIN

VÀ SINH PHẨM Y TẾ

LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP

Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Thị Hồng Linh

PGS TS Nguyễn Văn Thanh

HÀ NỘI - NĂM 2012

LỜI CAM ðOAN

Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu khoa học của riêng tôi Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn này là trung thực, chính xác và chưa ñược ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác

Mọi sự giúp ñỡ thực hiện luận văn này ñã ñược cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn này ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc

Hà Nội, ngày 25 tháng 06 năm 2012

Tác giả luận văn

Nguyễn Chí Hiếu

LỜI CẢM ƠN

Trong quá trình nghiên cứu ñể hoàn thành luận văn của mình, tôi ñã

nhận ñược sự chỉ bảo tận tình, sự giúp ñỡ quý báu của các thầy giáo, cô giáo,

các nhà khoa học, các nhà quản lý, cán bộ công nhân viên Viện Kiểm ñịnh

Quốc gia Vắc xin và Sinh phẩm y tế, khoa ðộng vật thực nghiệm

Nhân dịp này, cho phép tôi ñược bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới:

PGS.TS Nguyễn Văn Thanh - Trưởng Bộ môn Ngoại - Sản, Khoa Thú

y- Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội

PSG.TS Nguyễn Thị Hồng Linh - Phó viện trưởng, Ths Tạ Thị Gia

Sáu - Trưởng khoa ðộng vật thực nghiệm - Viện Kiểm ñịnh Quốc gia Vắc xin

và Sinh phẩm y tế ñã giúp ñỡ và tạo ñiều kiện tốt nhất cho tôi trong suốt quá

trình thực hiện ñề tài, ñánh giá kết quả và hoàn thành luận văn

Các thầy cô giáo, Viện ñào tạo sau ñại học, Bộ môn Ngoại - Sản, Khoa

Thú y - Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội

Tôi xin chân thành cảm ơn tới Ban lãnh ñạo, cán bộ công nhân viên

Viện Kiểm ñịnh Quốc gia Vắc xin và Sinh phẩm y tế, khoa ðộng vật thực

nghiệm

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn toàn thể gia ñình, bạn bè, anh em,

ñồng nghiệp ñã tạo mọi ñiều kiện thuận lợi và giúp ñỡ tôi về mọi mặt, ñộng

viện khuyến khích tôi hoàn thành luận văn này!

Hà Nội, ngày 25 tháng 06 năm 2012 Tác giả luận văn

Nguyễn Chí Hiếu

2.2 Lịch sử phát triển và vai trò của chuột thí nghiệm 4 2.3 Hiểu biết về chuột nhắt trắng 10

2.4.1 Cơ chế sinh lý ñiều tiết quá trình sinh sản 14 2.4.2 Chu kỳ tính ở ñộng vật có vú 15

2.4.4 Hiện tượng không sinh sản ở gia súc cái 18 2.5 Nhu cầu dinh dưỡng của gia súc sinh sản 19 2.5.1 Quan hệ giữa dinh dưỡng với ñộng dục 19 2.5.2 Quan hệ dinh dưỡng với tỉ lệ thụ thai ở gia súc cái 20 2.5.3 Quan hệ giữa dinh dưỡng với gia súc có thai 20 2.6 Sinh sản ở chuột nhắt trắng 21

2.6.3 Mang thai và sinh con 25 2.6.4 Dinh dưỡng và chế ñộ ăn cho chuột sinh sản 27

3.1 ðối tượng và ñịa ñiểm nghiên cứu 28

4.1 Kết quả theo dõi thời gian mang thai của chuột Swiss 31 4.2 Kết quả theo dõi khả năng sinh sản của chuột Swiss ở ñợt ghép số 1 33 4.3 Kết quả theo dõi khả năng sinh sản của chuột Swiss ở ñợt ghép số 2 34 4.4 Kết quả theo dõi khả năng sinh sản của chuột Swiss ở ñợt ghép số 3 35 4.5 Kết quả theo dõi khả năng sinh sản của chuột Swiss ở ñợt ghép số 4 36 4.6 Kết quả theo dõi khả năng sinh sản của chuột Swiss ở ñợt ghép số 5 40 4.7 Tổng hợp kết quả sinh sản của chuột theo số lượng chuột con sơ sinh 41 4.8 Trọng lượng của chuột hậu bị từ 8 ñến 14 tuần tuổi 50 4.9 So sánh khả năng sinh sản của chuột lứa 1 theo trọng lượng 54 4.10 So sánh khả năng sinh sản của chuột lứa 1 theo tuổi ghép 57 4.11 Biện pháp tăng năng suất sinh sản 60

DANH MỤC BẢNG

2.1 Chỉ tiêu sinh học của chuột nhắt trắng 12 2.2 Chỉ tiêu sinh sản của chuột nhắt trắng 13 4.1 Thời gian mang thai của chuột Swiss 31 4.2 Kết quả theo dõi khả năng sinh sản của chuột Swiss ở ñợt ghép số 1 34 4.3 Kết quả theo dõi khả năng sinh sản của chuột Swiss ở ñợt ghép số 2 35 4.4 Kết quả theo dõi khả năng sinh sản của chuột Swiss ở ñợt ghép số 3 36 4.5 Kết quả theo dõi khả năng sinh sản của chuột Swiss ở ñợt ghép số 4 37 4.6 Kết quả theo dõi khả năng sinh sản của chuột Swiss ở ñợt ghép số 5 40 4.7 Kết quả phân loại chuột sinh sản theo số lượng con ñẻ ra còn

DANH MỤC BIỂU ðỒ

4.1 Tỉ lệ phần trăm theo thời gian mang thai của chuột Swiss 32 4.2 Tỉ lệ chửa của chuột Swiss qua 5 lần ghép 41 4.3 Kết quả phân loại chuột mẹ theo số chuột con ñẻ ra 45 4.4 Tỉ lệ chửa của chuột Swiss theo lứa ghép 46 4.5 Biểu ñồ số con sinh ra và số con dứt sữa ở các lứa ghép của chuột

4.6 ðồ thị trọng lượng của chuột Swiss từ 8-14 tuần tuổi 54 4.7 Kết quả sinh sản của chuột lứa 1 theo trọng lượng 56 4.8 Kết quả sinh sản của chuột lứa 1 theo tuổi ghép 58

DANH MỤC HÌNH

Hình 1: Chuột lứa 3 chửa, tăng rất nhiều về kích thước 37 Hình 2: Ổ chuột có số lượng con lớn, chuột con ñồng ñều, khỏe mạnh 38 Hình 3: Ổ chuột có chất lượng tốt 39 Hình 4: Ổ chuột 20 ngày tuổi, ñảm bảo chất lượng giao thí nghiệm 39

Hình 6: Ổ chuột ñẻ lứa 3, chuột con kích thước lớn , ñồng ñều 50 Hình 7: Ổ chuột ñẻ lứa 3, chuột con phát triển tốt 50

1 ðẶT VẤN ðỀ

1.1 Tính cấp thiết của ñề tài

Nói ñến loài chuột người ta thường nghĩ ngay ñến chuột phá hoại mùa màng, truyền dịch bệnh gây hại cho con người Tuy vậy, ngoài những tác hại

do chúng gây ra, loài chuột cũng có những ñiểm có ích ñối với khoa học

Từ năm 1889, loài chuột bắt ñầu ñược sử dụng làm vật nghiên cứu trong phòng thí nghiệm Chuột ñược dùng làm thí nghiệm do thời gian mang thai, sinh trưởng và vòng ñời ngắn nên các nhà khoa học có thể sớm thấy những gì diễn biến trong nghiên cứu Hơn nữa, chuột ở nấc thang tiến hóa cao gần với người Vì vậy, chuột ñược dùng ñể nghiên cứu các chứng bệnh, sản xuất và kiểm ñịnh ñộng vật với các vắc xin sử dụng phòng bệnh cho con người

Nhu cầu của các phòng thí nghiệm y sinh học có sử dụng ñộng vật thí nghiệm ñối với ñối tượng chuột nhắt trắng là rất lớn

Trung tâm chăn nuôi ñộng vật thí nghiệm - Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương Hà Nội mỗi tuần cung cấp cho các viện nghiên cứu khu vực miền Bắc khoảng 7 – 8 nghìn con chuột

Trại chăn nuôi Suối Dầu – Viện Vắc xin và Sinh phẩm Nha Trang mỗi năm cung cấp cho công tác thí nghiệm khoảng 100000 con chuột từ 11- 23g

và 150000- 200000 chuột con 1-2 ngày tuổi

Tại Viện Kiểm ñịnh Quốc gia Vắc xin và Sinh phẩm y tế, sử dụng nhiều chuột nhắt trắng, hàng năm cần trên 10000 con phục vụ công tác kiểm ñịnh chất lượng vắc xin và sinh phẩm y tế

ðể chủ ñộng cho việc cung cấp ñộng vật thí nghiệm nói chung và chuột nhắt trắng nói riêng ñảm bảo số lượng và chất lượng, các cơ sở chăn nuôi ñộng vật thí nghiệm cần biết ñược nhu cầu sử dụng ðặc biệt phải có sự hiểu biết rất rõ về các ñặc tính sinh lý sinh sản của loài ñộng vật ñược nghiên cứu

Cũng như các loài ựộng vật có vú khác, sinh sản ở chuột nhắt trắng chịu ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố như: ựộ tuổi sinh sản, lứa ựẻ, ựiều kiện nuôi dưỡng, Những yếu tố trên ảnh hưởng rất lớn tới tỉ lệ ựộng dục, khả năng thụ thai, số con ựẻ ra và số con thu ựược sau quá trình nuôi theo mẹ

Vì vậy, chúng tôi tiến hành nghiên cứu ựề tài: ỘNghiên cứu một số chỉ tiêu sinh sản trên ựàn chuột nhắt trắng giống Swiss nuôi tại Viện Kiểm ựịnh Quốc gia Vắc xin và Sinh phẩm Y tếỢ

1.2 Mục tiêu nghiên cứu:

- Xác ựịnh một số chỉ tiêu sinh sản (thời gian mang thai, tỉ lệ chửa, số con sinh ra còn sống, số con thu ựược sau dứt sữa) của loài chuột nhắt trắng giống Swiss đánh giá khả năng sinh sản của chuột ở các lứa

ghép

- Theo dõi trọng lượng của chuột nhắt Swiss từ 8 ựến 14 tuần tuổi

- Bước ựầu thử nghiệm biện pháp kắch thắch nhằm tăng năng suất sinh

sản của chuột nhắt trắng

1.3 Ý nghĩa của ựề tài:

- Kết quả của ựề tài sẽ là nguồn tài liệu ựể phục vụ công tác chăm sóc, nuôi dưỡng, quản lý, khai thác chuột nhắt trắng sinh sản

- Bổ sung thêm thông tin vào nguồn tài liệu phục vụ học tập và nghiên cứu

- Nhằm tăng số lượng chuột nhắt trắng cung cấp phục vụ thắ nghiệm

2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Sự thuần dưỡng vật nuôi

Theo ðặng Vũ Bình, 2006, [2] tất cả những loài gia súc, gia cầm hiện nay ñều có nguồn gốc là ñộng vật hoang dã và ñã ñược thuần dưỡng do bàn tay và trí óc của con người Trước khi trở thành những vật nuôi như hiện nay, ñộng vật hoang dã ñã phải trải qua một quá trình chọn lọc, huấn luyện, cải tiến nuôi dưỡng lâu dài

Sự thuần dưỡng vật nuôi lúc ñầu chỉ là một việc không có ý thức rõ rệt, sau dần mới trở thành một công việc hoàn toàn có mục ñích, có kế hoạch, có phương pháp, có kỹ thuật và trải qua nhiều ñời ñã trở thành một việc chọn lọc

có ý nghĩa lớn trong ñời sống của con người Sự thuần dưỡng bắt ñầu bằng việc bắt thú hoang huấn luyện, khai thác nó, biến ñổi nó thành gia súc, gia cầm và ngày nay ñã ñến một giai ñoạn cao là tạo nên những phẩm giống gia súc, gia cầm cao sản có hướng sản xuất nhất ñịnh

Trải qua một quá trình thuần dưỡng lâu dài ñó, vật nuôi bắt nguồn từ ñộng vật hoang dã ñã có những thay ñổi như sau:

+ Thay ñổi về khả năng sản xuất: ñây là sự thay ñổi quan trọng và có ích nhất ñối với ñời sống con người

+ Sức sản xuất của vật nuôi tiến theo hướng nhất ñịnh: không những sức sản xuất của vật nuôi so với ñộng vật hoang dã ñã ñược thay ñổi, ñược nâng cao rõ rệt mà còn ñi vào những hướng nhất ñịnh theo nhu cầu ñời sống của con người

Ngoài những thay ñổi cơ bản trên vật nuôi còn có những thay ñổi về ngoại hình, tính tình và chức năng của các bộ phận: như hoạt ñộng của bộ máy sinh dục của gia súc cũng khác thú hoang Thú hoang thường sinh sản theo mùa còn gia súc có thể sinh sản quanh năm, có các chu kỳ ñộng dục ñều ñặn

Một số ñặc tính mới của gia súc là thành thục sớm, mức ñộ vỗ béo nhanh, khả năng sử dụng và tiêu hóa các chất dinh dưỡng tăng, thời kỳ có chửa ngắn nhưng khả năng miễn dịch kém

2.2 Lịch sử phát triển và vai trò của chuột thí nghiệm

Không biết chính xác con người bắt ñầu nuôi chuột thành vật nuôi từ khi nào nhưng hầu như mọi người ñều tin rằng người Trung Quốc là những người ñầu tiên nuôi chúng Người ta thấy có những bản ghi chép về giống chuột ñốm và chuột trắng ở Trung Quốc từ 1100 năm trước công nguyên Chuột nhắt trắng cũng ñược các nhà viết sử thời Hy Lạp và La Mã nhắc ñến Vào những năm 1700, ñã có chuột nuôi, buôn bán làm vật cảnh ở Trung Quốc, Nhật Bản và châu Âu Vào thời Nữ hoàng Anh Victorya, ñã có giải thưởng cho chuột cảnh “fancy” Năm 1895, Walter Maxey khởi xướng, người Anh sáng lập ra “Câu lạc bộ Chuột quốc gia” ðến thế kỷ XX ñã có rất nhiều con chuột cảnh có màu lông khác nhau do lai tạo ñột biến

Vào thời kỳ này, học thuyết di truyền của Gregor Mendel người Hà Lan

ñã tác ñộng mạnh lên giới khoa học, chuột nuôi ñã ñược chọn là ñộng vật thí nghiệm nghiên cứu di truyền Năm 1902, chuột là ñộng vật có vú ñầu tiên dùng ñể chứng minh ðịnh luật Mendel Người ta cũng nhanh chóng nhận ra cần phải có dòng chuột nuôi thuần chủng ñể nghiên cứu

Các chương trình lai tạo giống chuột ñã ñược thực hiện tạo ra các chủng chuột dùng trong các mô hình nghiên cứu khác nhau phục vụ nghiên cứu sinh y học.(http://www.dietmoikhutrung.vn/view/277_chuot-dac-tinh-sinh-vat-hoc.htm ñăng ngày 23/11/2009).[8]

Theo Nguyễn Bá Tiếp,[11] có viết: Chuột và chuột nhắt là những loài

có ñóng góp rất nhiều cho nghiên cứu khoa học Nói ñúng hơn, con người ñang cậy thế của mình ñể bắt buột chuột và nhiều loài ñộng vật khác phải chịu thiệt thòi, chịu chết vì sự tồn tại và cái ñược gọi là "chất lượng cuộc sống" của loài người Vì cần protein, người ñã ăn thịt nhiều loại ñộng vật trong ñó có

thịt chuột Trong các thử nghiệm thuộc nhiều lĩnh vực khoa học khác nhau người ta lại cần ựến ựộng vật (trong ựó chuột chiếm tỷ lệ cao nhất)

Với khả năng sinh sản nhanh chóng, không ựòi hỏi mặt bằng rộng và không cầu kỳ về thức ăn, chuột ựược nuôi và nhân ựàn một cách dễ dàng Hơn nữa, do tắnh tương ựồng cao trong bộ gen của chuộc và bộ gen của người nên hiện nay chuột ựược coi là ựối tượng số 1 cho các nghiên cứu Y sinh học

Y sinh học cũng là lĩnh vực nghiên cứu sử dụng chuột làm mẫu thắ nghiệm nhiều nhất Nếu ựiểm qua các nghiên cứu từ cơ bản ựến ứng dụng trong y dược học, nông nghiệp, môi trường v.v ta lại thấy ựâu ựâu cũng có

"bóng dáng của chuột" Các gen của chuột và chuột nhắt lần lượt ựược giải

mã ựể làm giàu ngân hàng gen nhưng với mục ựắch chắnh là phục vụ cho con người Chuột ựược dùng ựể thử tác dụng bảo hộ và tác dụng phụ của vắc xin, thử tác dụng chữa bệnh của thuốc, của các tia xạ, tác dụng và ảnh hưởng của một loại thức ăn v.v

Theo tác giả Nguyễn đình Nguyên, 2008 [10] giới thiệu: Chuột là một loài ựộng vật gắn liền với sinh hoạt văn hoá của con người khá lâu ựời, ựặc biệt với nền văn hoá lúa nước như Việt nam Sự hoà nhập giữa loài chuột với con người trong một quần thể ựịnh cư ựược xác ựịnh từ thời kỳ ựồ ựá mới (neolithic) ở Thổ Nhĩ Kỳ khoảng 6500-5650 trước Công Nguyên Chuột nhà

ựã chứng tỏ là loại ựộng vật có vú có khả năng thắch nghi cao nhất với các quần thể ựịnh cư ựa dạng của con người Tuy nhiên, mối quan hệ giữa chuột

và người lại mang những ý nghĩa khác nhau, chuột luôn là ựối tượng ựể con người Ộtìm và diệtỢ vì ựặc tắnh sinh thái và tác hại của loài chuột Qua hàng thế kỷ nay, một số loài chuột lại rất có ắch ựối với con người, chuột ựã trở thành Ộân nhânỢ bất ựắc dĩ của con người

Việc sử dụng ựộng vật trong nghiên cứu y học ựã ựóng góp cho nhân loại một kho tàng tri thức vô giá về các mặt cơ thể giải phẫu, sinh lý hoc, bệnh lý học và sau này là mô hình thử nghiệm và di truyền học

Với sự phát triển mạnh mẽ của khoa học kỹ thuật, trong những thập niên cuối của thế kỷ XX, có nhiều mô hình nghiên cứu phi ựộng vật (quan sát

và giải phẫu tử thi và sử dụng dòng tế bào người) ựể thay thế mô hình ựộng vật, nhưng cũng chỉ ựem lại giá trị khoa học nhất ựịnh, ựộng vật vẫn là một trong những mô hình ựược sử dụng ưu thế nhất trong nghiên cứu y sinh học Mỗi năm có khoảng 17 ựến 23 triệu con vật ựược sử dụng ựể nghiên cứu Trong số ựó, chuột chiếm ựến 95% các nghiên cứu trên mô hình ựộng vật Sở

dĩ chuột ựược sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu y khoa là do kắch thước nhỏ, giá thành rẻ, dễ nuôi, sinh sản nhanh, ựặc biệt ựời sống ngắn (2 - 3 năm) nên

có thể theo dõi ựược hết ựời sống và có thể theo dõi ựược cả vài thế hệ điểm quan trọng và quý giá nhất là ựặc ựiểm sinh lý và di truyền học của chuột rất gần với con người Trên thực tế, mặc dù tinh tinh (chimpanzee) có cấu trúc di truyền DNA 99% giống với con người, chuột có tỉ lệ thấp hơn và gần với nấc thang tiến hóa của con người nhưng chuột vẫn luôn luôn là mẫu hình nghiên cứu ựược ưu tiên hàng ựầu trong nghiên cứu y học Trong một thập niên gần ựây, các nhà khoa học còn nâng cấp mô hình nghiên cứu chuột lên một tầm cao mới là có thể làm thay ựổi cấu trúc gen trong chuột ựể gây ra các bệnh lý giống như bệnh lý ở người

Cũng tác giả Nguyễn đình Nguyên sưu tập: ở châu Âu, Robert Hook ựược coi là người ựầu tiên sử dụng chuột ựể nghiên cứu thực nghiệm về oxy trong cơ thể sống vào năm 1614 Từ ựó, việc sử dụng chuột với các chủng ựặc biệt trở nên ngày càng phổ biến đáng ghi nhận nhất ở Mỹ là bà Abbie Lathrop, một giáo viên nghỉ hưu, thắch chuột và nuôi chúng trong một trang trại của mình ở Massachusetts vào ựầu thế kỷ XX Năm 1902, các dòng chuột nuôi của bà trở thành những con vật ựầu tiên ựược Giáo sư Ernest Castle ựưa vào phòng thắ nghiệm của đại học Harvard và sau ựó là đại học Pennsylvania, khi chúng ựược phát hiện thấy có mọc các khối u Sau ựó, học trò của Ernest là Clarence Cook Little (1888-1971) là người có công ựầu

trong việc tạo các giống chuột lai thuần chủng, lần ñầu tiên ñược dùng trong nghiên cứu các bệnh ung thư có tính di truyền Ông ñã tạo ra giống chuột DBA (Dilute, Brown, Agouti), tạm gọi là chuột thí nghiệm; các chủng chuột ñầu tiên do Little lai tạo và vẫn thông dụng cho ñến hiện nay là CBA, C3H, C57BL/6 và BALB/c Little cũng chính là người ñã thành lập Phòng thí nghiệm Jackson năm 1929, cho ñến nay vẫn là một trong những nơi cung cấp các giống chuột thí nghiệm lớn nhất thế giới

Theo RIVM, 2000, [18] chuột nhắt trắng ñược biết ñến từ thế kỷ thứ

18, ban ñầu nó chỉ ñược biết như một loài ñộng vật cảnh, ít ñược sử dụng trong nghiên cứu và bước ñầu chỉ là khảo sát ðến thế kỷ 19, chúng bắt ñầu ñược sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu gen, sinh sản Thế kỷ 20, chuột nhắt trắng ñược

sử dụng trong nghiên cứu di truyền, dinh dưỡng và nghiên cứu phôi, từ ñây vai trò của chuột nhắt trắng trong khoa học ñược nâng dần và sử dụng rộng rãi hơn Cho tới nay, chuột nhắt trắng là loài ñược sử dụng rộng rãi nhất ñặc biệt trong nghiên cứu sinh - y học, nghiên cứu các tính năng, ñộc tính của thuốc, hiệu quả

và ñộ an toàn của vắc xin và sinh phẩm y học, sản xuất vắc xin

* Chuột thí nghiệm tại Việt Nam

Tại Việt Nam có một số nơi nuôi chuột thí nghiệm lớn như: Khu vực chăn nuôi chuột thí nghiệm tại Viện Vệ sinh dịch tễ học Trung ương, Viện Pasteur TP HCM, trại Suối Dầu thuộc Viện Vắc xin và sinh phẩm y tế Nha Trang…

Trung tâm nghiên cứu và sản xuất ñộng vật thí nghiệm chuẩn thức (CIMADE) - Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương là một cơ sở chăn nuôi ñộng vật thí nghiệm lớn tại khu vực miền Bắc cũng như trên cả nước ñã ñược chuẩn thức hóa, mỗi tuần sản xuất và cung cấp cho các viện nghiên cứu khu vực miền Bắc khoảng 7 – 8 nghìn con chuột

Trại Chăn nuôi Suối Dầu hàng năm cung cấp cho công tác thí nghiệm, kiểm ñịnh vắc xin, sinh phẩm y tế, sinh phẩm sử dụng trong thú y gần 100000

con chuột nhắt trắng (11g-23g); 3000 - 5000 con chuột lang (250g trở lên) và

150000 -200000 chuột nhắt 1- 2 ngày tuổi Tại ñây nuôi dưỡng chuột nhắt trắng giống Swiss, chuột DDY của Nhật ðể tránh phối giống ñồng huyết, chuột thường ñược luân chuyển và ñổi giống với các trại chăn nuôi khác ở Hà Nội hay TP.HCM ( Hồ Thị Hồng Nhung, 2008)[12;13]

Tại Viện Kiểm ñịnh quốc gia Vắc xin và Sinh phẩm y tế, hai dòng chuột nhắt trắng ñược nuôi phục vụ thí nghiệm là chuột Swiss, chuột nhắt trắng thuần chủng Bal B/c và chuột lang, hàng năm sản xuất và sử dụng lên ñến hơn 15000 con chuột Swiss, 1000 con chuột Bal B/c và 1000 con chuột lang Tuy nhiên, nhu cầu chuột nhắt trắng ñối với công tác kiểm ñịnh chất lượng các loại vắc xin và sinh phẩm y tế không ổn ñịnh, không cố ñịnh về thời gian cũng như số lượng mẫu yêu cầu kiểm tra chất lượng tại cùng một thời ñiểm Trong một số trường hợp lượng chuột sản xuất ra không ñược sử dụng do lượng mẫu ít nhưng cũng có thời gian chuột sản xuất rất nhiều vẫn không ñủ cung cấp cho thí nghiệm từ ñó buộc phải ñi mua từ cơ sở khác ñể ñảm bảo cung cấp kịp thời

* Những tiến bộ trong việc tạo giống chuột trong phòng thí nghiệm

Mặc dù chuột ñược sử dụng nhiều nhất trong nghiên cứu y sinh học nhưng không phải tất cả các loại chuột ñều dùng ñược Các chủng chuột dùng trong nghiên cứu y sinh hiện ñại ñều phải có cấu trúc di truyền xác ñịnh rõ Các chủng chuột ñã xác ñịnh về mặt di truyền ñều phải có cấu trúc giống hệt hoặc rất sát nhau ñể có thể tái sinh sản theo cách cho lai thuần chủng các thế

hệ trong thực nghiệm và ñể cho có thể biết ñược kiểu hình và kiểu gen Những thập niên gần ñây, các nhà khoa học ñã có thể tạo ra những con chuột thí nghiệm có cấu trúc di truyền hoặc có kiểu hình bệnh lý theo ý muốn qua các phương thức chuyển hoặc tách gen Chuyển và tách bỏ gen trong chuột ñể phục vụ cho mục ñích nghiên cứu là một cuộc cách mạng trong công nghệ sinh học Chuột chuyển gen là chuột ñược cấy vào cơ thể một gen ngoại lai và chuột

tách gen là tách bỏ hoặc bất hoạt một hay một ñoạn gen ñặc hiệu nào ñó

Chuột nhắt trắng, tên khoa học là Mus musculus, ñược lựa chọn là mô

hình nghiên cứu chuẩn trong phòng thí nghiệm y sinh do khả năng thích nghi cao và khả năng có thể lai tạo các dòng gen thuần chủng tiện lợi cho nghiên cứu các bệnh có liên quan mật thiết với bệnh lý ở người ðặc biệt từ khi công nghệ chuyển và tách gen kỹ thuật cao ra ñời, chuột càng chứng tỏ là một sự lựa chọn ñúng ñắn của con người trong nghiên cứu khoa học Chẳng hạn một chủng chuột ñặc hiệu, chủng 129 và các chủng phụ của nó ñược coi là ñặc biệt giá trị do chúng có thể tạo các bào gốc phôi có khả năng thay ñổi ñược cấu trúc di truyền trong quá trình nuôi cấy và rồi ñược ñưa trở lại vào trong tử cung của chuột vật chủ Các nghiên cứu sử dụng biện pháp biến ñổi gen trực tiếp của các chủng phụ nhóm 129 ñã cho phép công nghệ tạo ñột biến gen theo ý muốn ñể tạo ra các giống chuột có các ñặc tính bệnh lý ñặc hiệu, hay còn gọi là chuột chuyển gen (transgenic mouse) hoặc chuột tách bỏ gen (knockout mouse) cũng như các giống chuột có mang gen bệnh lý của người (chuột chuyển gen người, humanized mouse) Ngày nay việc sử dụng chuột chuyển gen trong phòng thí nghiệm y sinh ñã trở nên phổ biến (http://www.dietmoikhutrung.vn/view/277_chuot-dac-tinh-sinh-vat-hoc.htm ñăng ngày 23/11/2009).[8]

Theo Hồ Thị Hồng Nhung, 2008, [13] 2 loại ñộng vật dùng thí nghiệm nhiều nhất là chuột nhắt (mice) và chuột cống (rat)

Từ 2 loài thuần chủng này, người ta tạo ra hàng ngàn chủng chuột khác nhau tuỳ theo mục ñích thí nghiệm Phân loại theo tính năng, chia ra 2 loại chuột thí nghiệm: chuột thuần chủng và chuột biến ñổi gene

Chuột thuần chủng là các loại chuột dùng cho các kiểm nghiệm an toàn thuốc, thực phẩm, mỹ phẩm, cung cấp các nguồn tế bào phôi, tế bào gốc, cung cấp tế bào lai, sản xuất các chế phẩm sinh y học, nghiên cứu hoá chất gây ung thư… hay trong giảng dạy

Chuột chuyển gen dùng ñể nghiên cứu cơ bản: gen, làm mô hình nghiên cứu các bệnh tật nan y Một số hướng nghiên cứu hiện nay thí nghiệm trên các chủng chuột chuyển gene là: Hội chứng Down dùng dòng chuột - Ts65Dn; bệnh xơ cứng Cystic Fibrosis (CF) – dùng chuột The Cftr knockout; ung thư: p53 knockout; tăng nhãn áp gây mù (Glaucoma): DBA/2J; tiểu ñường týp 1 bệnh tự miễn; tiểu ñường týp 2 do rối loạn chuyển hoá sau 40 tuổi; bệnh ñộng kinh ở trẻ em; bệnh tim mạch; bệnh mất dinh dưỡng cơ; ung thư cổ tử cung; HIV-AIDS cứ mỗi loại bệnh sẽ tương ứng một ñến vài dòng chuột chuyển gen

2.3 Hiểu biết về chuột nhắt trắng

Theo RIVM, 2000, [18] chuột nhắt trắng là một loài ñộng vật ñược sử

dụng rất phổ biến Chúng là thành viên bộ gặm nhấm, họ Muridae, chi Mus Các nhà khoa học gọi chuột thí nghiệm là Mus dometicus dometicus (hay Mus musculus domesticus) Chúng có vóc dáng nhỏ, sinh sản nhanh tạo ra số

lượng lớn trong thời gian ngắn, dễ chăm sóc, giá thành rẻ và có vị trí quan hệ cao trong thang tiến hóa cùng với nhiều ñặc ñiểm thuận lợi khác, chuột nhắt trắng ngày càng ñược sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu

Chuột nhắt trắng là loài gặm nhấm với bộ răng mọc dài liên tục, vì thế thức ăn phải có ñộ cứng chắc nhất ñịnh Chúng là loài ưa hoạt ñộng về ñêm,

ăn nhiều hơn vào thời gian chuyển từ tối sang sáng và từ sáng sang tối Chuột nhắt trắng có kích thước nhỏ, khi trưởng thành chiều dài chỉ ñạt 12-15cm tính

từ mũi tới ñuôi, chiều dài của ñuôi dài tương ñương chiều dài của cơ thể Chuột ñực thường có kích thước lớn hơn so với chuột cái Tuy nhiên, kích thước và trọng lượng của chuột phụ thuộc nhiều vào giới tính, giống và tuổi của chuột, chế ñộ ăn, số lượng chuột ñược nuôi trong mỗi lồng và ñặc biệt là ñiều kiện môi trường nuôi dưỡng

Chuột nhắt trắng ñộng dục sớm từ khoảng 5-7 tuần tuổi ở chuột ñực và 4-6 tuần tuổi ở chuột cái, tuổi thành thục sinh dục ở chuột ñực là 10 tuần và

chuột cái khoảng 8-10 tuần, chuột cái có thể có chu kỳ ñộng dục lần ñầu khi mới 25-28 ngày tuổi Thời gian mang thai của chuột ngắn khoảng 20 ngày, số lượng con sinh ra mỗi lứa từ 4-15 con, ñây là ñặc ñiểm rất thuận lợi ñể tạo ra một số lượng ñộng vật thí nghiệm lớn trong một khoảng thời gian ngắn[18] Cũng bởi vì kích thước nhỏ cho nên các ñặc tính sinh lý của chuột nhắt trắng dễ bị ảnh hưởng và thay ñổi rất nhanh khi ñiều kiện môi trường xung quanh thay ñổi (nhiều nhất là nhịp tim và hô hấp) Nếu nhiệt ñộ phòng nuôi tăng hoặc giảm ñi 2 - 30C có thể làm thay ñổi ñặc tính sinh lý của con vật Chuột nhắt trắng rất nhạy cảm với mùi, tiếng ñộng và thay ñổi thời tiết Tuy nhiên, loài vật này lại kém nhạy cảm với màu sắc ñặc biệt là màu ñỏ Vì thế, ñối với phòng nuôi chuột nhắt trắng cần ñảm bảo luôn sạch sẽ, thoáng mát và tránh tiếng ñộng mạnh

Nhiệt ñộ thích hợp nuôi chuột nhắt trắng tốt nhất trong khoảng 20 -

240C, ñộ ẩm trong khoảng 45 - 75% Chuột nhắt trắng khi mới sinh có trọng lượng trung bình khoảng 0,5 - 1,5g Tuy rất nhỏ nhưng chúng phát triển rất nhanh, dứt sữa sau 18 - 21 ngày tuổi, lúc ñó chuột có thể ñạt trọng lượng từ 8 -12g Chúng phát triển nhanh trong khoảng 3 - 8 tuần tuổi và chậm dần cho tới khi ñạt 6 tháng tuổi thì gần như không phát triển

Theo các số liệu từ RIVM, 2000,[18] Johan van der Gim, 1990,[16] và J.P Bennet and B.H.Vickey, 1970, [17] mô tả một số chỉ tiêu theo dõi trên chuột nhắt trắng như sau:

Bảng 2.1: Chỉ tiêu sinh học của chuột nhắt trắng

Chuột ñực: 20 - 40g Trọng lượng trưởng

Về các chỉ tiêu sản ñược giới thiệu ở các tài liệu có sự khác nhau thể hiện ở bảng sau:

Bảng 2.2: Chỉ tiêu sinh sản của chuột nhắt trắng

Chuột cái:

8-10 tuần

35 - 60 ngày (20 - 30g)

56 - 70 ngày

Chu kì ñộng dục 4 - 5 ngày 4 - 5 ngày 4 - 5 ngày

Thời gian ñộng

10 giờ Rụng trứng 2 - 3

Theo các tài liệu khác nhau, có sự khác nhau ở một số chỉ tiêu sinh lí cũng như sinh sản chửa chuột

Các nhà khoa học cũng cho rằng: vòng ñời của chuột chịu ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố như di truyền, môi trường nuôi dưỡng bao gồm chế ñộ ăn, số lượng chuột nuôi trong một lồng, sự nhiễm trùng, quy trình chăm sóc, giống

và giới tính Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu ñể khẳng ñịnh có sự khác nhau về thời gian sống của chuột thuần chủng và chuột không thuần chủng

Chuột nhắt trắng giống Swiss là một dòng không thuần chủng ñược dùng rất phổ biến trong các thí nghiệm trong các nghiên cứu sinh và y học

2.4 Hiểu biết về sinh sản

Bản chất của sinh sản là một quá trình hết sức phức tạp của cơ thể ñộng vật ñồng thời là chức năng tái sản xuất của ñộng vật

ðể tăng cường chức năng này nhằm nâng cao sức sản xuất của ñàn gia súc, trên cơ sở thực tiễn công tác chọn giống mới, hoàn thiện những giống chủ yếu, nuôi dưỡng tốt những ñàn gia súc non cao sản, phòng và trị các bệnh

về sinh sản, cần có sự hiểu biết ñầy ñủ về sinh lý sinh sản gia súc

2.4.1 Cơ chế sinh lý ñiều tiết quá trình sinh sản

Cơ thể ñộng vật có cấu tạo hết sức phức tạp Sự ñiều hòa hoạt ñộng của

cơ thể có mối quan hệ qua lại chặt chẽ với ngoại cảnh

I.P Paplôp là người ñầu tiên chỉ ra mối quan hệ qua lại và phụ thuộc lẫn nhau tồn tại giữa cơ thể và ngoại cảnh Mối quan hệ này cho phép xác ñịnh các quy luật sống chủ yếu của cơ thể ñộng vật

Học thuyết của Paplop về phản xạ không ñiều kiện và có ñiều kiện cũng như sự hình thành kiểu hình thần kinh ở ñộng vật ñã tạo ra cơ sở khoa học ñể tìm cách tăng khả năng sinh sản của ñàn gia súc và tăng sản phẩm của chúng

Nghiên cứu sinh học sinh sản từ nguyên sinh ñộng vật ñến ñộng vật bậc cao ñã chỉ ra sự thống nhất của phôi từ hai tế bào tính khác nhau ñể sinh ra một cơ thể sống mới

Phản xạ sinh dục bẩm sinh tác ñộng khi ñộng vật bắt ñầu thành thục về tính, nó quyết ñịnh hoạt tính sinh dục, mang thai và chăm sóc, nuôi dưỡng ñời sau, ñảm bảo sự duy trì nòi giống ñã ñược hình thành và tiếp thu những ñặc ñiểm tốt

Những tín hiệu bên ngoài như mùi, tiếng kêu, màu sắc… ñược thu nhận thông qua các cơ quan cảm thụ của con vật bằng mũi, tai, mắt… cũng có tác ñộng trong quá trình sinh sản

Hocmon của các tuyến nội tiết và các yếu tố thể dịch khác cũng như hệ thống thần kinh tham gia vào quá trình ñiều tiết ñảm bảo cho chức năng sinh sản Tuyến nội tiết và chức năng nội tiết của nó ñược hình thành trong thời gian bào thai Hocmon của thai gây ảnh hưởng nhất ñịnh ñến các tổ chức của

cơ quan của thai và của cơ thể mẹ Tác dụng của nó là trực tiếp hoặc gián tiếp qua hệ thống thần kinh, hệ thống này cũng ñược hình thành sớm trong thời kỳ phát triển của thai.(Nguyễn Tấn Anh và Nguyễn Duy Hoan, 1998)[1]

2.4.2 Chu kỳ tính ở ñộng vật có vú

- Sự thành thục về tính: một cơ thể thành thục về tính khi bộ máy sinh dục của cơ thể ñã phát triển căn bản hoàn thiện, con vật bắt ñầu có phản xạ sinh dục và có khả năng sinh sản Tuổi thành thục về tính ñược ghi nhận bằng các biểu hiện:

• Bộ máy sinh dục ñã phát triển tương ñối hoàn chỉnh, con cái rụng trứng (lần ñầu) con ñực sinh tinh Tinh trùng và trứng gặp nhau có thể thụ thai

• Các ñặc tính sinh dục thứ cấp phát triển

• Xuất hiện các phản xạ sinh dục: con cái ñộng dục, con ñực có phản xạ giao phối

Thời gian thành thục về tính phụ thuộc vào nhiều yếu tố:

+ Giới tính: con cái thường thành thục sớm hơn con ñực Trong ñiều kiện chăn thả, nuôi dưỡng chung giữa con ñực và con cái cũng ảnh hưởng tới

tính thành thục sớm của gia súc

+ Thời tiết khí hậu: khí hậu và nhiệt ñộ cũng ảnh hưởng tới tính thành thục của gia súc Khí hậu nóng ẩm có thể làm cho gia súc thành thục sớm Gia súc nhiệt ñới thành thục sớm hơn gia súc ôn ñới và hàn ñới

+ Giống khác nhau thì thời gian thành thục về tính khác nhau Sự thành thục về tính của gia súc nhỏ thường xuất hiện sớm hơn gia súc lớn

+ Chế ñộ dinh dưỡng: trong ñiều kiện nuôi dưỡng, chăm sóc, quản lý tốt, chế ñộ sử dụng ñúng, sức khỏe của gia súc tăng lên thì tính thành thục của gia súc xuất hiện sớm Ngược lại, nếu không ñược chăm sóc nuôi dưỡng tốt thì tính thành thục của gia súc xuất hiện muộn, dù ñó cùng là một giống gia súc

- Thành thục về thể vóc: thành thục về thể vóc là tuổi có sự phát triển

về ngoại hình và thể vóc ñạt tới mức ñộ hoàn chỉnh, xương ñã cốt hóa hoàn toàn, tầm vóc ổn ñịnh Thời gian thành thục về thể vóc thường chậm hơn thời gian thành thục về tính, nghĩa là sau khi thành thục về tính thì vẫn tiếp tục sinh trưởng lớn lên ðây là ñặc ñiểm cần chú ý, trong chăn nuôi không nên cho con vật sinh sản quá sớm ðể ñảm bảo sự sinh trưởng, phát dục của cơ thể

mẹ tốt, ñảm bảo phẩm giống ở thế hệ sau, nên cho gia súc giao phối và sinh sản sau khi ñã hoàn toàn thành thục về tính Tất nhiên, không nên ñể quá muộn, vì nó sẽ ảnh hưởng ñến hoạt ñộng sinh lý sinh dục bình thường của gia súc cái (Nguyễn Tấn Anh và cs, 1998, Trần Tiến Dũng và cs, 2002, Nguyễn Xuân Tịnh và cs, 1996)[1;3;7]

* ðối với con cái: nếu cho sinh sản quá sớm khi cơ thể con mẹ mới thành thục về tính mà chưa thành thục về thể vóc sẽ có ảnh hưởng xấu như: trong thời gian có chửa có sự phân tán chất dinh dưỡng, ưu tiên cho sự phát triển bào thai, ảnh hưởng xấu tới sinh trưởng của cơ thể mẹ do ñó sự phát triển của bào thai cũng bị ảnh hưởng Kết quả mẹ yếu con nhỏ, mặt khác khung xương chậu chưa phát triển hoàn toàn, nhỏ hẹp làm con vật ñẻ khó

* ðối với con ñực: nếu cho sinh sản quá sớm chất lượng tinh trùng

kém, ảnh hưởng tới tỉ lệ thụ thai

Khi con vật có biểu hiện về tính dục thì phải nhốt riêng con ñực và con cái tránh giao phối tự do, ảnh hưởng tới sự phát triển thể vóc

Trong công tác nuôi chuột nhắt sinh sản, do tuổi thành thục về tính của chuột là rất sớm nên cần phải tách riêng chuột con trước 28 ngày tuổi và nhốt riêng ñực, cái tránh tình trạng giao phối ñồng huyết

Theo Hoàng Toàn Thắng, Cao Văn, 2006 [6] ở các nước có ngành chăn nuôi phát triển, do có ñiều kiện thức ăn tốt, nên người ta ñã áp dụng nhiều biện pháp ñể rút ngắn thời gian thành thục về tính, cho con cái gặp con ñực thường xuyên, tiêm hormon kích thích, cũng như các biện pháp phân lô phân ñàn khác Tuy nhiên, phải phụ thuộc vào ñộ thành thục về thể vóc của con vật

2.4.3 Chu kỳ sinh dục

Theo Nguyễn Tấn Anh và Nguyễn Duy Hoan, 1998,[1] cho biết:

- Chu kỳ sinh dục ñược bắt ñầu từ khi gia súc thành thục về tính, nó tiếp tục và chấm dứt hoàn toàn khi cơ thể ñã già yếu

- Chu kỳ sinh dục là một quá trình sinh lý phức tạp sau khi toàn bộ cơ thể ñã phát triển hoàn hảo, cơ quan sinh dục không có bào thai và không có hiện tượng bệnh lý thì ở bên trong buồng trứng có quá trình noãn bao thành thục, trứng chín và thải trứng

- Chu kỳ sinh dục của gia súc là một hiện tượng sinh vật học có tính quy luật, nó tạo ra hàng loạt ñiều kiện cần thiết ñể tiến hành giao phối, thụ tinh và phát triển bào thai

- Nắm vững quy luật chu kỳ sinh dục sẽ có nhiều lợi ích quan trọng trong công tác chăn nuôi

Có thể phát hiện kịp thời hiện tượng hưng phấn và rụng trứng, tránh ñược việc bỏ qua một số chu kỳ, nâng cao tỉ lệ thụ thai, góp phần phát triển số lượng ñàn

Có thể ñiều khiển và chủ ñộng kế hoạch sinh sản, kế hoạch thức ăn, nuôi dưỡng và khai thác sản phẩm của toàn ñàn gia súc

- Chu kỳ tính của ñộng vật ñược chia làm 4 giai ñoạn:

+ Giai ñoạn trước ñộng dục: là giai ñoạn từ khi thể vàng tiêu hủy tới lần ñộng dục tiếp theo, chuẩn bị ñiều kiện cho ñường sinh dục cái và trứng ñể tiếp nhận tinh trùng, ñón trứng rụng và thụ tinh

+ Giai ñoạn ñộng dục: gồm 3 thời kỳ liên tiếp là: hưng phấn, chịu ñực

và hết chịu ñực

+ Giai ñoạn sau ñộng dục

+ Giai ñoạn yên tĩnh

Chu kỳ ñộng dục, thời gian ñộng dục cũng như các biểu hiện của hành

vi sinh dục ở các loài có sự khác nhau, ngoài ra còn có nhiều nhân tố ảnh hưởng ñến chu kỳ như chế ñộ chiếu sáng, nhiệt ñộ, feromon, tiếng kêu của con ñực, sự tiếp xúc giữa con ñực và con cái và nhất là dinh dưỡng

2.4.4 Hiện tượng không sinh sản ở gia súc cái

Gia súc cái ñã ñến tuổi sinh sản hoặc sau khi ñẻ xong, ñến thời kỳ hưng phấn và ñộng dục lại nhưng không xuất hiện chu kỳ sinh dục sinh lý hoặc gia súc biểu hiện các trạng thái bệnh lý trong quá trình sinh lý sinh dục ñược gọi

là hiện tượng không sinh sản

Hiện tượng này gây nhiều tổn thất về mặt kinh tế cho nên cần phải ñược quan tâm, chú ý ñề phòng và ñiều trị thích hợp

Các nguyên nhân có thể gây nên hiện tượng không sinh sản:

+ Quá trình nuôi dưỡng, chăm sóc kém, chế ñộ sử dụng và khai thác không thích hợp làm cho gia súc gầy yếu hoặc bị bệnh Do ñó chức năng sinh

lí sinh dục bị rối loạn, làm giảm hay mất hoàn toàn khả năng sinh sản

+ Những gia súc sinh ñẻ nhiều lứa ñã ñến tuổi già yếu, chức năng sinh

lí của toàn bộ cơ thể nói chung bị giảm sút cho nên cơ năng hoạt ñộng sinh dục cũng bị giảm, ngừng trệ hoặc hoàn toàn mất khả năng sinh ñẻ Hiện tượng

này là trạng thái sinh lý bình thường Những gia súc ựã già yếu ựược phối giống nhiều lần mà không kết quả thì nên loại thải

+ Hiện tượng không sinh sản do bẩm sinh xuất hiện chủ yếu khi các bộ phận của cơ quan sinh dục gia súc không phát triển hay phát triển không bình thường, bị dị dạng Ầ dẫn ựến trạng thái hoàn toàn mất khả năng sinh sản

+ Khi gia súc xuất hiện quá trình bệnh lý ở các bộ phận của cơ quan sinh dục hoặc các hệ khác như tiêu hóa, hô hấp, tuần hoàn thần kinh, nội tiết, suy nhược toàn thân Ầ ựều có thể làm rối loạn ựến chức năng sinh sản Hoạt ựộng chu kỳ sinh dục thay ựổi, trạng thái hưng phấn, ựộng dục và cơ năng buồng trứng bị giảm sútẦ dẫn ựến hiện tượng không sinh ựẻ Những gia súc sau khi ựẻ xong do bị bệnh ở cơ quan sinh dục nên làm giảm thấp tỉ lệ thụ thai, phối giống nhiều lần không kết quả, thời gian ựộng dục lại sau ựẻ kéo dài

và dần dần dẫn ựến trạng thái mất hoàn toàn khả năng sinh sản

+ đối với con ựực cũng có các nguyên nhân gây hiện tượng không sinh sản tương tự, có thể do chế ựộ chăm sóc, nuôi dưỡng, khai thác, ựộ tuổi của con vật, các bệnh lý ở cơ quan sinh sản v.v (Trần Tiến Dũng, Dương đình Long, Nguyễn Văn Thanh, 2002).[3]

2.5 Nhu cầu dinh dưỡng của gia súc sinh sản

2.5.1 Quan hệ giữa dinh dưỡng với ựộng dục

+ Chu kỳ tắnh: sự thay ựổi về tắnh có tắnh chất chu kỳ gọi là chu kỳ tắnh Chu kỳ tắnh ựược xác ựịnh bằng khoảng cách giữa hai lần ựộng dục Quy luật của chu kỳ tắnh thường chịu sự khống chế của hệ thần kinh trung ương qua phương thức phản xạ thần kinh Ờ thể dịch Các kắch thắch sau khi tác dụng vào thụ quan thông qua hệ thần kinh trung ương ựã ảnh hưởng ựến hoạt ựộng nội tiết của thùy trước tuyến yên, từ ựó làm thay ựổi quy luật của chu kỳ tắnh Trong ựiều kiện thức ăn thiếu protein giá trị hoàn toàn, vitamin, khoáng, chu kỳ tắnh kéo dài, bao noãn thành thục chậm, thậm chắ có bao noãn quắt lại

Chu kỳ tắnh phụ thuộc vào rất nhiều yếu tố, trong ựó dinh dưỡng giữ

vai trò quan trọng Nếu dinh dưỡng ñầy ñủ, chu kỳ tính ổn ñịnh, con vật biểu hiện ñộng dục ñều ñặn Nếu dinh dưỡng kém, chu kỳ tính kéo dài, ñộng dục gián ñoạn

2.5.2 Quan hệ dinh dưỡng với tỉ lệ thụ thai ở gia súc cái

Tỉ lệ thụ thai ở gia súc cái phụ thuộc vào rất nhiều yếu tố: kỹ thuật phối giống, thời ñiểm phối giống, phẩm chất tinh dịch, số lượng trứng rụng trong một lần ñộng dục Trong các yếu tố trên, phẩm chất tinh dịch và số lượng trứng rụng phụ thuộc chủ yếu và chế ñộ dinh dưỡng Nếu khẩu phần của con ñực ñược cung cấp ñầy ñủ cả về số lượng và chất lượng protein, ñủ các chất khoáng và vitamin, phẩm chất tinh dịch sẽ tốt, nâng cao tỉ lệ thụ thai và sức sống ñời con Ngoài ra số lượng trứng rụng trong mỗi lần ñộng dục cũng phụ thuộc vào chế ñộ dinh dưỡng Qua nhiều lần thí nghiệm, người ta ñã kết luận rằng: số trứng rụng trong lần ñộng dục ñầu tiên trung bình là 9,8 trứng, nếu nuôi dưỡng tốt sẽ tăng thêm 2,9 trứng; số trứng rụng ở lứa ñẻ thứ 2 trung bình

là 11,8 trứng, nếu nuôi dưỡng tốt sẽ tăng thêm 1,2 trứng

2.5.3 Quan hệ giữa dinh dưỡng với gia súc có thai

+ Thay ñổi về khối lượng: khối lượng của con mẹ tăng lên trong giai ñoạn có chửa, ngoài việc tăng trọng của bản thân con mẹ là sự tăng lên của các bộ phận của thai, các sản phẩm thai, tử cung và mô vú Tốc ñộ phát triển của bào thai rất nhanh, ñặc biệt là thời kỳ chửa cuối

+ Tăng tích lũy của bản thân con mẹ và thai: trong thời kỳ có chửa, cường ñộ trao ñổi chất của con mẹ tăng lên rõ rệt Nói chung quá trình ñồng hóa mạnh hơn dị hóa, kể cả những con cái ñã ñẻ nhiều lứa khi có thai quá trình ñồng hóa vẫn mạnh hơn

Trao ñổi năng lượng của con mẹ khi có chửa tăng mạnh so với bình thường, chủ yếu ở thời kỳ chửa cuối tăng tới 15-20%, trước lúc ñẻ tăng tới 40% so với bình thường Trao ñổi protein còn mạnh hơn so với trao ñổi năng lượng Protein tích lũy của con mẹ ở thời kỳ chửa cuối tăng tới 60% so với

bình thường Trao ñổi kháng cũng tăng mạnh ở thời kì chửa cuối, khoáng tích lũy trong bào thai cũng tăng lên theo giai ñoạn chửa của con mẹ

2.6 Sinh sản ở chuột nhắt trắng

2.6.1 Lứa tuổi sinh sản

Có thể xác ñịnh giới tính của chuột bằng cách so sánh khoảng cách giữa bộ phận sinh dục và hậu môn Khoảng cách này ở chuột ñực lớn hơn so với chuột cái Ở chuột cái vị trí giữa bộ phận sinh dục và hậu môn thường không có lông Ngoài ra, có thể quan sát thấy ở chuột cái có 5 ñôi núm vú, hai ñôi ở bụng và 3 ñôi ở ngực (RIVM, 2000)[18]

Có nhiều ý kiến khác nhau khi nhận ñịnh về lứa tuổi sinh sản của chuột Chuột có thể có bắt ñầu có thai sớm nhất khi 4 tuần tuổi Tuy nhiên, ñể cho chuột sinh sản tại thời ñiểm ñó sẽ rất khó khăn Các nhà khoa học khuyến cáo chỉ nên cho chuột sinh sản khi ñạt 12 tuần tuổi trở lên, cho sinh sản quá sớm sẽ ảnh hưởng tới chất lượng cả chuột mẹ và chuột con Chuột mẹ và chuột con sẽ có sức sống yếu và vòng ñời của chuột sẽ rút ngắn

Tùy thuộc vào dòng chuột, một con cái không nên nhân giống qua 8 tháng tuổi, sau 8 tháng tuổi chuột trở nên già hiệu quả sinh sản sẽ giảm Tuy nhiên, có một số dòng chuột có thể nhân giống lâu hơn

Theo Ruth Robinson, 1995, [19] chuột cái thành thục về tính từ rất sớm Lần ñộng dục ñầu tiên có thể xuất hiện khi chuột ñạt 24 ngày tuổi Tuy nhiên, chuột cần phải ñạt 7 - 9 tuần tuổi ñể ñạt thành thục về thể vóc Chuột cái có chu kỳ ñộng dục 4-6 ngày ðộ dài chu kỳ ñộng dục của chuột chịu ảnh hưởng bởi số lượng chuột nuôi trong mỗi lồng Nếu nuôi nhốt riêng lẻ, có thể chuột phát triển chu kỳ ñộng dục bất thường, có thể rất dài hoặc ñộng dục liên tục Nếu nhốt chuột cái với mật ñộ lớn, tất cả chúng sẽ không ñộng dục hoặc

có biểu hiện mang thai giả, việc mang thai giả ở chuột nuôi thành nhóm ñược biết ñến như hiệu ứng LEE- BOOT

Ở các chuột nhốt thành từng cặp hoặc nhóm nhỏ chu kỳ ñộng dục

thường ñều hơn Tuy nhiên, có một số trường hợp chuột không ñộng dục nhưng sau khi cho tiếp xúc với nước tiểu chuột ñực, chúng sẽ ñộng dục sau khoảng 72 giờ Chuột cái ñồng loạt ñộng dục và ñạt ñỉnh vào khoảng ñêm thứ

3 sau khi tiếp xúc với chuột ñực ñược biết ñến như hiệu ứng Whitten

Chuột có thể bắt ñầu sinh sản ở ñộ tuổi rất sớm Cả 2 giới ñều có thể bắt ñầu sinh sản ở 6 tuần tuổi và tiếp tục cho ñến khi chúng khoảng 12 tháng tuổi Chuột cái ñẻ lứa ñầu và chuột cái sau 9 tháng tuổi có số lượng con sinh

ra ít hơn so với các chuột ở các ñộ tuổi sinh sản khác [23]

Chuột sinh sản nên có thời gian nghỉ giữa mỗi lứa ñẻ, không nên cho chuột sinh sản liên tiếp Một con chuột có thể thụ thai ngay sau khi sinh (ñộng dục sau ñẻ) Vì thế, không nên nhốt chung một con ñực với một con cái khi chuột cái sinh con Một chuột mẹ nên có 3 - 4 tuần phục hồi sau mỗi lứa ñẻ Nếu không có thời gian nghỉ, ở chu kỳ sinh sản sau dễ xảy ra biến chứng, các biến chứng có thể bao gồm như: khó sinh, chuột con sinh ra có trọng lượng nhỏ, chuột con và chuột mẹ không khỏe, tuổi thọ của con mẹ ngắn hơn có khi

cả chuột mẹ và chuột con bị chết và nhiều vấn ñề khác

Một con cái không nên có nhiều hơn 3 lứa trong quá trình sinh sản Nếu cho sinh sản quá dài sẽ ảnh hưởng tới chất lượng chuột con.[21]

Theo quy trình chuẩn hướng dẫn lai ghép chuột Swiss tại Viện Kiểm ñịnh Quốc gia Vắc xin và Sinh phẩm y tế, chuột nhắt trắng ñược ghép 3 lứa

ñẻ cho mỗi vòng ñời chuột, chuột ñực ñược sử dụng tối ña 9 tháng tuổi Trong quá trình nuôi sinh sản, các chuột không ñảm bảo sức khỏe, có các biểu hiện bệnh lí ñều ñược loại bỏ.[14]

Chuột ñực thường trưởng thành chậm hơn so với chuột cái khoảng 2 tuần

Theo RIVM, 2000, [18] ở loài chuột, feromones ñóng vai trò rất quan trọng ñối với quá trình sinh sản, chu kì ñộng dục cũng như thời gian ñộng dục chịu tác dụng rất nhiều bởi feromones của con ñực Chuột cái có thể không

ñộng dục khi không có mùi của con ñực Tuy nhiên, các nhà khoa học cũng cho rằng chuột cái trong vòng 48 giờ sau khi giao phối thành công nếu tiếp xúc với một con ñực lạ thứ 2, sự làm tổ của trứng sẽ không xảy ra, quá trình mang thai bị ngăn cản và con cái sẽ ñộng dục trở lại sau 4 - 5 ngày

ðiều này rất quan trọng trong quá trình chăm sóc chuột sinh sản, sự xuất hiện feromones của con ñực có khả năng gây ñộng dục hàng loạt cũng như ngăn cản mang thai trong quá trình vệ sinh, thay lồng chuột hàng ngày Theo John Van Der Gim, 1990, [16] trong thời gian mang thai 19 - 21 ngày, chuột cái sẽ không tiết sữa Nếu xảy ra quá trình giao phối ở lần ñộng dục ñầu tiên sau khi sinh, chuột có thể ñồng thời vừa tiết sữa vừa mang thai Quá trình tiết sữa có thể làm kéo dài thời gian mang thai tăng thêm 3-5 ngày ðộng dục sau sinh có thể xảy ra trong vòng 24 giờ

2.6.2 Giao phối và ghép ñôi

Tốt nhất là ghép thành cặp một ñực và một cái Tuy nhiên, phải ñảm bảo lồng chuồng ñủ rộng trong quá trình ghép ñôi, ngoài ra phải ñảm bảo chất lượng và số lượng chất lót chuồng.[21]

Các nhà khoa học tại ñại học California cho rằng: với 2 - 4 con cái ghép cùng một con ñực trong 1 lồng cho kết quả sinh sản tốt Nếu duy trì liên tục một con ñực và một con cái trong 1 cái lồng, chúng có thể sinh sản theo chu

kỳ liên tục 18 - 28 ngày.[22]

ðối với loài chuột từ khi thành thục về tính hoặc sau khi ghép ñôi, chuột ñực thường xảy ra hiện tượng ñánh nhau Nếu cho tiếp xúc với một cá thể lạ dễ gây ra hiện tượng cắn nhau Vì thế, khi ghép chuột phải ñúng cách

ñể tránh tình trạng cắn nhau Khi ghép chuột, chuột ñực và chuột cái nên ñược tiếp xúc một khoảng thời gian nhất ñịnh trước khi ghép ñôi thực sự Có một

số con ñực hung hăng sẽ cắn con cái nhưng sẽ không có vấn ñề gì xảy ra và trường hợp này thường hiếm gặp Cũng có khi con cái cắn lại con ñực, ñiều này thường xảy ra hơn vì một số trường hợp con ñực quá hung hăng trong khi

ñó con cái không trong chu kỳ ñộng dục, chúng sẽ cắn lại như một phản xạ phòng vệ ðiều này thường thấy sau quá trình ghép sinh sản có nhiều tiếng kêu và tiếng ñộng bất thường Tuy nhiên, nếu chuột vẫn tiếp tục cắn nhau, thì nên tách riêng các cặp sinh sản này, nếu không tách riêng có thể chuột sẽ cắn nhau ñến chết Trong quá trình chọn sinh sản không nên chọn những con có ñặc tính quá hung hăng ñể làm giống.[16; 19;21]

Chu kỳ ñộng dục của con cái khoảng 3 - 5 ngày Do ñó, một con cái thường mang thai trong vòng 1 - 5 ngày kể từ thời gian ghép ñực Có thể ñể con ñực và con cái cùng với nhau càng lâu càng tốt ñể tăng hiệu quả thụ thai nhưng không nên ñể quá 16 ngày kể từ ngày ñầu ghép Một con chuột có thể

có con sau sớm nhất là 19 ngày từ ngày ghép và muộn nhất là 24 ngày tính ñến ngày ghép cuối cùng

Việc theo dõi chu kỳ ñộng dục của chuột là rất khó, chuột chỉ chịu ñực trong vòng 12 giờ Khi cho sinh sản, biết chu kỳ ñộng dục sẽ giúp ta chủ ñộng ñược kết quả sinh sản, nó cũng giúp ta biết ñược chuột có thai Chuột có thai

sẽ không ñộng dục cho ñến sau khi sinh ðể biết chắc chắn chuột có thai có thể kiểm tra cơ quan sinh dục của con cái Nếu không có thai âm hộ sẽ mở cũng có khi sưng và ñỏ

Khi một con ñực giao phối với một con cái xong, sẽ tạo thành một màng mỏng chặn ở âm hộ con cái giúp ngăn cản con ñực khác giao phối tiếp theo Màng mỏng này ban ñầu là dạng nhày trắng sau ñó cứng lại, màng mỏng này có khi nhìn thấy có khi không do nó nằm sâu bên trong Việc quan sát thấy lớp màng mỏng này giúp ta có thể khẳng ñịnh con ñực ñã giao phối với con cái Tuy nhiên, ñiều này không có nghĩa là con cái ñã mang thai mà chỉ giúp khẳng ñịnh con ñực ñã giao phối với con cái tại thời ñiểm ñó

Có thể sử dụng quy trình kiểm soát cân nặng của chuột cái ñể ñánh giá chuột mang thai hay không nhưng nó không ñảm bảo hiệu quả 100% Con cái

sẽ giảm một vài gam trong vòng một hoặc 2 ngày sau khi giao phối, sau ñó

trọng lượng bắt ñầu tăng dần khi chuột mang thai Một số trường hợp sau khi ghép, chuột tăng trọng nhưng không phải do chuột mang thai (mang thai giả) hoặc ngược lại có một số chuột không tăng trọng nhiều trong suốt thời kỳ mang thai

Một số chuột có thể ăn con sơ sinh của mình nếu có mùi của con khác ðiều này là rất hiếm ñối với chuột nhà Tuy nhiên, các nghiên cứu cho thấy một con chuột cái có thể tự hủy bỏ và hấp thụ bào thai của mình bất cứ lúc nào sau khi mang thai 2 ngày nếu có mùi của con ñực khác so với con ñực ñã ghép Nguyên nhân của vấn ñề này là do kích thích tố, những kích thích tố này gửi tín hiệu ñến khi có con chuột ñực khác Trong trường hợp này là do con ñực mới

có sức sống mạnh hơn, có khả năng tốt hơn trong việc duy trì nòi giống, con cái có thể hủy bỏ thai ñể chuẩn bị cho một chu kỳ ñộng dục mới.[16;18]

2.6.3 Mang thai và sinh con

Chửa là quá trình hình thành và sinh trưởng của bào thai trong cơ thể

mẹ, do ñó có ảnh hưởng và quan hệ hữu cơ với những thay ñổi về trao ñổi chất và về tất cả các hoạt ñộng chức năng của cơ thể mẹ Trong thời gian có chửa cơ thể mẹ có những biến ñổi sinh lý sau ñây:

+ Duy trì thể vàng tiết progesteron → an thai và ức chế ñộng dục

+ Hình thành nhau thai ñảm bảo trao ñổi chất giữa mẹ và bào thai Nhau thai tiết hocmon góp phần vào cơ chế ñiều hòa thể dịch quá trình chửa + Tử cung phát triển, niêm mạc tăng sinh dày lên, máu ñến nhiều ñể cung cấp dinh dưỡng và năng lượng

+ Trao ñổi chất tăng nhanh, ñồng hóa tăng, dị hóa giảm

Chuột nhắt trắng có thời gian mang thai dao ñộng trong khoảng 19 - 21 ngày tối ña là 24 ngày sau khi ghép ngày cuối cùng Khi mang thai chuột tăng trọng lượng rất nhanh Chuột cái sắp ñẻ, bụng to quan sát giống như nuốt một quả bóng Tuy nhiên, một số trường hợp chuột không thay ñổi hình dạng trong suốt quá trình mang thai

Một số chuột cái khi mang thai bụng rất to nhưng khi sinh lại ñược ít con, một số khác nhìn nhỏ hơn nhưng lại mang thai với số lượng lớn Một

số mang thai số lượng ít nhưng kích thước con lớn và một số trường hợp mang thai với số lượng nhiều nhưng kích thước con nhỏ nên rất khó phân biệt Kích thước mang thai của chuột mẹ không quyết ñịnh số con chuột mẹ

có khả năng sinh ra

Theo Johan Van der Gim, 1990[16], số lượng chuột con ñẻ ra trong một lứa trong khoảng từ 6 ñến 12 con, thời gian mang thai trong khoảng

18 - 21 ngày, chuột con có thể cai sữa từ 18 - 21 ngày và có trọng lượng khoảng 8 - 12g

Chuột cái sinh sản khoảng 4 - 7 con mỗi lứa và giai ñoạn mang thai là

19 ngày Con con sinh ra chưa mở mắt và không có lông Con cái ñẻ khoảng 8 lứa trong suốt quãng ñời Mặc dù thế, nếu các ñiều kiện thuận lợi, chúng có khả năng cứ 24 - 28 ngày sẽ ñẻ một lứa Khoảng 5 - 8 tuần cơ quan sinh dục của con con phát triển hoàn chỉnh (thành thục về tính).[8]

Số lượng con con sinh ra phụ thuộc vào ñiều kiện môi trường, chế ñộ nuôi dưỡng và lứa sinh sản của chuột Thông thường chuột ñẻ khoảng 3 - 12 con con mỗi lứa Có một số chuột nuôi trong phòng thí nghiệm có thể ñẻ lên ñến 25 con con trong 28 ngày Tuy nhiên, những con chuột sinh sản trong phòng thí nghiệm làm ñược ñiều này là rất khó

Theo Cao Văn Sung, 1980,[5] thời gian chuột chửa khoảng 18 - 21 ngày, ñẻ 4 - 8 con và ñẻ 6 - 8 lần trong một năm

Theo thông tin trong bài viết “Mouse breeding suggestions”[22], chuột mang thai 19 - 21 ngày, tuổi tách mẹ là 3 tuần Tuổi thành thục 6 - 8 tuần, trọng lượng trung bình con non lúc sinh khoảng 1g, cai sữa ñạt 8 - 12g Trọng lượng trưởng thành khoảng 30 - 40g (con ñực thường lớn hơn con cái) Vòng ñời trong phòng thí nghiệm vào khoảng 1,5 - 2,5 năm Mỗi con cái trong cuộc ñời có thể ñẻ 6 - 8 lứa với số con giao ñộng từ 4 - 8 con mỗi lứa ðộ tuổi sinh

sản khoảng 6 - 8 tháng, con ñực có thể dùng tới 24 tháng

Chuột có thời gian mang thai vào khoảng 19 - 21 ngày, với chu kỳ ñộng dục 3-4 ngày, nếu sau ghép 1 tháng không có kết quả thì nên thay thế những con chuột mang ghép Nguyên nhân có thể do vô sinh hoặc do hậu quả của việc biến ñổi gen ở con cái hoặc con ñực.[21]

Số lượng con sinh ra mỗi lứa phụ thuộc vào số lượng trứng giải phóng

ở mỗi chu kỳ ñộng dục, số lượng, chất lượng tinh trùng của con ñực và tỉ lệ chết trước sinh ðiều này có thể thay ñổi phụ thuộc vào ñộ tuổi của chuột và ñiều kiện môi trường bên ngoài (chế ñộ ăn, stress, sự hiện diện của con ñực lạ

và dòng chuột (phản ánh các yếu tố di truyền) Tỉ lệ chết trước sinh ở các dòng cận giao có thể lên ñến 10 - 20%

Theo J.P.Bennet and B.H.Vickery, 1970, [17] số lượng con trung bình

ở những con chuột khác nhau là khác nhau ðối với mỗi con chuột thì lứa thứ

2 có số con sinh ra lớn nhất sau ñó giảm dần, khi ñến lứa 6 thì số lượng con sinh ra rất thấp, ít hơn so với lứa 1 Khả năng sinh sản của chuột tăng nhẹ từ ñầu năm ñến cuối mùa hè sau ñó giảm dần

2.6.4 Dinh dưỡng và chế ñộ ăn cho chuột sinh sản

Dinh dưỡng không chỉ tác ñộng lên tình trạng sức khỏe ñộng vật mà còn tác ñộng lên kết quả sinh sản và kết quả của các thử nghiệm Thành phần của thức ăn trong quá trình nuôi dưỡng có một tác ñộng lớn lên sức khỏe, hiệu xuất chuyển hóa của ñộng vật

Chuột nhắt trắng là loài gặm nhấm rất ñặc biệt với bộ răng mọc dài liên tục, chuột phải gặm nhấm ñể ñảm bảo kích thước của răng Vì thế, khi chế biến thức ăn phải tạo thành những viên lớn có ñộ cứng chắc nhất ñịnh

ðối với chuột nhắt trắng có thể cung cấp cùng một loại thức ăn không phân biệt ñộ tuổi, chuột có thai hoặc cho con bú.[18]

3 ðỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP

NGHIÊN CỨU

-

3.1 ðối tượng và ñịa ñiểm nghiên cứu

- ðối tượng nghiên cứu:

Chuột nhắt trắng giống Swiss trong ñộ tuổi ghép sinh sản

• Chuột lứa 1: từ 8 - 12 tuần tuổi, trọng lượng ≥ 30g, khỏe mạnh

• Chuột lứa 2: tách hết con lứa 1 sau 1-2 tuần, khỏe mạnh

• Chuột lứa 3: tách hết con lứa 2 sau 1-2 tuần, khỏe mạnh

• Chuột ñực ≥ 35g, khỏe mạnh, ñộ tuổi 10 tuần ñến 8 tháng tuổi,

ñã qua 1 - 2 lần ghép

Chuột nhắt trắng giống Swiss trong thời gian nuôi chờ ghép 8 – 14 tuần tuổi

- ðịa ñiểm nghiên cứu:

Khoa ðộng vật thực nghiệm, Viện Kiểm ñịnh Quốc gia Vắc xin và Sinh phẩm y tế

- Thời gian nghiên cứu:

Nghiên cứu ñược thực hiện từ tháng 10 năm 2010 ñến hết tháng 6 năm

2012

3.2 Vật liệu nghiên cứu

- Lồng nhựa, nắp, giá kê lồng, thức ăn viên tổng hợp, mầm thóc, chai, nút, ống hút, nước lọc khử trùng, ñiều hòa 2 chiều

- Cân ñiện tử, nhiệt kế, dụng cụ mổ ñộng vật

3.3 Nội dung nghiên cứu

- Nghiên cứu các chỉ tiêu sinh sản của chuột nhắt trắng:

+ Thời gian mang thai của chuột Swiss

+ Số chuột chửa, tỉ lệ chửa

+ Số con ñẻ ra còn sống

+ Số con thu ñược sau cai sữa ñạt chất lượng giao thí nghiệm

- Nghiên cứu tăng trọng của chuột nhắt trong ñộ tuổi hậu bị chờ ghép từ

8 - 14 tuần tuổi

- Nghiên cứu tìm biện pháp nâng cao năng suất sinh sản của chuột

3.4 Phương pháp nghiên cứu

- Thiết kế nghiên cứu:

Nuôi trong cùng một phòng, các ñiều kiện chăm sóc, nuôi dưỡng như nhau

+ Tiến hành khảo sát khả năng sinh sản của 5 ñợt ghép chuột sinh sản + Chuột hậu bị theo dõi trọng lượng 60 ñực và 60 cái, nuôi số lượng 15 con/lồng kích thước 30x40cm

+ Chuột lứa 1 theo dõi thí nghiệm sinh sản mỗi loại 60 con

+ Theo dõi thời gian mang thai trên 15 chuột chửa ở mỗi lứa ghép trong cùng một ñợt ghép

- Phương pháp:

• Theo dõi thời gian mang thai:

+ Ghép 01 chuột ñực và 01 chuột cái trong khoảng thời gian 1 ngày 1 ñêm (24 giờ) sau ñó tách riêng ñực, cái

+ Thống kê hàng ngày số chuột ñẻ bắt ñầu từ ngày con cái ñầu tiên ñẻ

và kết thúc khi con cái cuối cùng ñẻ

+ Thời gian mang thai ñược tính từ ngày ghép ñến ngày ñẻ

• Theo dõi trọng lượng chuột chờ ghép

+ Dùng cân ñiện tử cân trọng lượng chuột 8 tuần tuổi 1 tuần/lần vào cùng 1 thời gian cho tới khi ñạt 14 tuần

• Theo dõi các chỉ tiêu sinh sản:

+ Tiến hành theo các SOP của Viện Kiểm ñịnh Quốc gia Vắc xin và Sinh phẩm y tế

TN 03-01: Lai ghép chuột nhắt Swiss sinh sản

TN 02-08: Tiêu chuẩn ñộng vật thí nghiệm dùng cho kiểm ñịnh vắc xin

và sinh phẩm y tế

TN 03-23 Dứt sữa chuột nhắt trắng Swiss

+ Thống kê số lượng chuột chửa, ñẻ, tỉ lệ chửa

+ Thống kê số con sinh ra còn sống

Hàng ngày ñếm số con sinh ra còn sống của từng ổ vừa sinh con

Tác ñộng lên số con mỗi ổ bằng cách: những ổ có số con ñẻ ra > 8 con loại bỏ bớt, những ổ có số con < 8 con ghép bổ sung ñủ 8 con/ổ

+ Thống kê số con sau dứt sữa ñạt tiêu chuẩn giao thí nghiệm

+ Tác ñộng kích thích lên chuột cái bằng cách cho chuột ñực vận ñộng trên nắp lồng chuột cái trước 3 ngày hoặc cho chuột cái tiếp xúc với chất thải của chuột ñực trước khi ghép

• Thời gian theo dõi mỗi thí nghiệm tính từ khi ghép ñực ñến khi cai sữa chuột con hoàn toàn

- Số liệu trong quá trình nghiên cứu ñược tổng hợp và xử lý theo phương pháp thống kê sinh học bằng phần mềm Microsoft Excel