Nghiên cứu vai trò của trực khuẩn e coli gây viêm ruột ỉa chảy trên đàn gà lôi trắng nuôi tại vườn quốc gia cúc phương và biện pháp điều trị

B GIÁO D C VÀ ðÀO T O TRƯ NG ð I H C NÔNG NGHI P HÀ N I ………………………………………… NGUY N TH PHƯƠNG NGHIÊN C U VAI TRÒ C A TR C KHU N E.COLI GÂY VIÊM RU T A CH Y TRÊN ðÀN GÀ LÔI TR NG NUÔI T I VƯ N QU C GIA CÚC PHƯƠNG VÀ BI N PHÁP ðI U TR LU N VĂN TH C SĨ NÔNG NGHI P Chuyên ngành : Thú y Mã s : 60.64.01.01 Ngư i hư ng d n khoa h c : PGS TS Ph m Ng c Th ch Hà N i, 2012 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… i L I CAM ðOAN Tôi xin cam đoan r ng, cơng trình nghiên c u c a riêng tôi, s li u k t qu nghiên c u lu n văn trung th c chưa t ng ñư c s d ng ñ b o v m t h c v Tơi xin cam đoan, m i s giúp ñ cho vi c th c hi n lu n văn ñã ñư c c m ơn thơng tin trích d n lu n văn ñư c ch rõ ngu n g c Hà n i, tháng 11 năm 2012 Tác gi lu n văn Nguy n Th Phương Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… ii L I C M ƠN ð hoàn thành Lu n văn s c g ng c a b n thân, tơi ln nh n đư c s quan tâm giúp ñ c a th y giáo, giáo b n bè đ ng nghi p Nhân d p này, trư c tiên xin chân thành c m ơn s giúp ñ quý báu c a th y, cô giáo khoa Thú y, Vi n ñào t o sau ñ i h c – Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i ñã dành nhi u th i gian cơng s c giúp đ tơi q trình h c t p th c hi n ñ tài Tơi xin bày t lịng bi t ơn chân thành sâu s c t i th y hư ng d n khoa h c: PGS TS Ph m Ng c Th ch ñã tr c ti p hư ng d n, t n tình giúp đ t o ñi u ki n thu n l i cho su t q trình nghiên c u hồn thành lu n văn Tôi xin chân thành c m ơn th y giáo, cô giáo B môn N i – Ch n – Dư c, khoa Thú y giúp đ tơi q trình h c t p th c hi n đ tài Tơi xin chân thành g i l i c m ơn t i BSTY Hồng Xn Th y - Phó giám đ c Trung tâm c u h b o t n ñ ng v t hoang dã, r ng Qu c gia Cúc Phương, t p th cán b t i trung tâm ñã t o ñi u ki n giúp đ tơi su t th i gian th c t p ð ng th i, xin ñư c c m ơn PGS.TS Cù H u Phú cán b B môn Vi trùng – vi n Thú y Qu c gia ñã t o ñi u ki n t t nhi t tình giúp đ tơi su t q trình nghiên c u Tôi vô bi t ơn b n bè, ñ ng nghi p nh ng ngư i thân gia đình, b , m , ch ng, anh ch , em trai tơi ln đ ng viên khích l giúp đ tơi vư t qua m i khó khăn đ hồn thành lu n văn Hà n i, tháng 11 năm 2012 Tác gi lu n văn Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… iii Nguy n Th Phương Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… iv M CL C L I CAM ðOAN ii L I C M ƠN iii M C L C v DANH M C CÁC CH VI T T T viii DANH M C B NG BI U ix DANH M C CÁC HÌNH x PH N I M ð U 1.1 Tính c p thi t c a ñ tài 1.2 M c đích c a đ tài 1.3 Ý nghĩa khoa h c th c ti n PH N II T NG QUAN TÀI LI U 2.1 ði u ki n t nhiên c a vư n qu c gia Cúc Phương 2.1.1 ði u ki n t nhiên, đ a hình 2.1.2 ð t đai, khí h u, h ñ ng v t 2.1.3 ði u ki n xã h i 2 M t vài nét khái quát v gà Lôi tr ng 2.2.1 Ngu n g c phân lo i 2.2.2 ð c ñi m hình thái 10 2.2.3 T p tính 10 2.2.4 Sinh trư ng phát tri n 11 2.2.5 Kh sinh s n 11 2.2.6 Kh i lư ng tr ng ch tiêu hình thái tr ng 11 2.2.7 ð c ñi m phân b 12 2.2.8 B nh t t chăn nuôi 12 2.3 Tình hình nghiên c u nư c v E coli gây b nh gia c m 13 2.3.1 Tình hình nghiên c u nư c 13 2.3.2 Tình hình nghiên c u th gi i 14 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… v 2.4 M t s đ c tính c a tr c khu n E coli 16 2.4.1 ð c ñi m hình thái 16 2.4.2 ð c tính ni c y 16 2.4.3 ð c tính sinh hố 18 2.4.4 S c ñ kháng 18 2.4.5 C u trúc kháng nguyên c a vi khu n E coli 18 2.5.6 Các y u t ñ c l c quan tr ng ñ c tính gây b nh c a vi khu n E coli gây b nh gia c m 21 2.5.7 ð c tính gây b nh c a vi khu n E coli 30 2.5.8 B nh E coli gây gia c m 32 2.5.9 Hư ng phòng tr b nh E coli hi n 33 PH N III 35 ð I TƯ NG, ð A ðI M, 35 N I DUNG, NGUYÊN LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 35 3.1 Ð i tư ng ph m vi nghiên c u 35 3.2 Ð a ñi m nghiên c u 35 3.3 N i dung nghiên c u 35 3.4 Nguyên li u nghiên c u 36 3.4.1 M u b nh ph m s d ng nghiên c u 36 3.4.2 Mơi trư ng hóa ch t 36 3.4.3 ð ng v t thí nghi m 36 3.5 Phương pháp nghiên c u 37 3.5.1 Phương pháp l y m u 37 3.5.2 Phương pháp phân l p vi khu n E coli 38 3.5.3 Phương pháp xác ñ nh vi khu n E coli phân l p ñư c 39 3.5.4 Phương pháp xác ñ nh m t s y u t có liên quan đ n đ c l c c a vi khu n E coli 40 3.5.5 Ki m tra ñ c l c c a ch ng vi khu n E coli phân l p ñư c chu t b ch 43 3.5.6 Xác ñ nh serotype kháng nguyên O c a ch ng vi khu n E coli phân l p b ng ph n ng ngưng k t nhanh phi n kính 44 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… vi 3.5.7 Phương pháp xác ñ nh kh m n c m v i kháng sinh c a ch ng vi khu n E coli phân l p ñư c 45 3.5.8 Th nghi m m t s phác ñ tr b nh tiêu ch y E coli gây gà Lôi tr ng 46 3.5.9 X lý s li u 49 PH N IV 50 K T QU VÀ TH O LU N 50 4.1 Tình hình d ch b nh đàn gà Lôi tr ng nuôi t i Trung tâm c u h b o t n ñ ng v t hoang dã, vư n Qu c gia Cúc Phương 50 4.4.1 Th c tr ng gà Lôi tr ng b viêm ru t tiêu ch y 50 4.1.2 Th c tr ng gà Lôi tr ng b r i lo n hô h p ch n thương 53 4.2 Các bi u hi n lâm sàng gà Lôi tr ng b tiêu ch y nghi nhi m E coli 55 4.3 K t qu phân l p E coli t phân gà Lôi tr ng b tiêu ch y nghi nhi m E coli gà Lôi tr ng kh e 57 4.4 K t qu xác ñ nh m t s ñ c tính sinh h c c a ch ng vi khu n E coli phân l p t phân gà Lôi tr ng b tiêu ch y gà Lôi tr ng kh e 59 4.5 K t qu ki m tra ñ c l c c a ch ng E coli phân l p đư c chu t thí nghi m 61 4.6 K t qu xác ñ nh serotype m t s y u t ñ c l c c a ch ng E coli phân l p đư c t gà Lơi tr ng kh e m nh gà Lôi tr ng b tiêu ch y 64 4.6.1 K t qu xác ñ nh serotype c a ch ng E coli phân l p ñư c 64 4.6.2 K t qu xác ñ nh m t s y u t ñ c l c t h p y u t ñ c l c c a ch ng E coli phân l p ñư c 67 4.7 K t qu ki m tra m c ñ m n c m c a ch ng E coli phân l p đư c t gà Lơi tr ng b tiêu ch y v i m t s lo i thu c kháng sinh thư ng dùng 71 4.8 K t qu th nghi m c a m t s phác ñ ñi u tr gà Lôi tr ng b tiêu ch y E coli gây 78 PH N V 81 K T LU N VÀ ð NGH 81 5.1 K t lu n 81 5.2 ð ngh 83 TÀI LI U THAM KH O 84 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… vii DANH M C CÁC CH VI T T T APEC : Avian Pathogennic Escherichia coli BG : Brilliant Green BHI : Brain Heart Infusion Colv : Y u t kháng khu n Colicin V CRD : Chronic Respiratory Disease cs : C ng s DNA : Deoxyribonucleic Acid E coli : Escherichia coli EMB : Eosin Methylen Blue EPEC : Entero pathogenic Escherichia coli ETEC : Enterotoxigenic Escherichia coli F : Fimbriae L.n : Lophura nycthemera LT : Labile Heat Toxin NCCLS : National Committee of Clinical Laboratory Standards Nð- CP : Ngh đ nh – Chính ph NXB : Nhà xu t b n PBS : Phophate Buffered Saline PCR : Polymerase Chain Reaction ST : Stable Heat Toxin TAE : Tris – Acetic – EDTA TSB : Tryptose Soy Broth TT&BTðTV : Trung tâm b o t n ñ ng th c v t VQG Vư n qu c gia : Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… viii DANH M C B NG BI U B ng 2.1 Phân lồi gà Lơi B ng 3.1 Khái qt qui trình xác đ nh m t s y u t ñ c l c c a E coli 40 B ng 3.2 Tiêu chu n ñánh giá m c ñ m n c m kháng kháng sinh theo NCCLS (2010) 43 B ng 3.3 B trí thí nghi m u tr b nh viêm ru t a ch y gà Lôi tr ng E coli gây 45 B ng 4.1 Th c tr ng gà Lôi tr ng nuôi t i trung tâm c u h ñ ng v t - r ng Qu c gia Cúc Phương b tiêu ch y 48 B ng 4.2 T l b r i lo n hô h p ch n thương gà Lôi tr ng giai ño n t tháng 6/2011 ñ n tháng 6/2012 54 B ng 4.3 Bi u hi n lâm sàng gà Lôi tr ng b tiêu ch y nghi nhi m E coli 53 B ng 4.4 K t qu phân l p E coli t d ch ngoáy tr c tràng c a gà Lôi tr ng 55 B ng 4.5 M t s đ c tính sinh hóa c a ch ng vi khu n E coli phân l p t phân gà Lôi tr ng b viêm ru t tiêu ch y 56 B ng 4.6 K t qu ki m tra ñ c l c c a ch ng E coli chu t b ch 59 B ng 4.7 K t qu ki m tra y u t gây b nh c a vi khu n E coli phân l p t gà Lôi tr ng b tiêu ch y .61 B ng 4.8 T h p serotype y u t gây b nh ch ng E coli phân l p t gà Lôi kh e gà Lôi tr ng b tiêu ch y 63 B ng 4.9 K t qu ki m tra ñ m n c m c a ch ng E coli phân l p ñư c t gà Lôi tr ng b tiêu ch y v i m t s lo i kháng sinh thông thư ng .68 B ng 4.10 Hi u qu c a m t s phác ñ ñi u tr th nghi m đàn gà Lơi tr ng b tiêu ch y E coli gây 70 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… ix DANH M C CÁC HÌNH Hình 2.1 Gà Lơi tr ng ngày tu i 10 Hình 2.2 Gà Lơi tr ng tu n tu i 10 Hình 2.3 Gà Lơi trư ng thành 10 Hình 2.4 tr ng c a gà Lôi tr ng 10 Hình 3.1 Phân l p giám đ nh E coli t phân b nh ph m .36 Hình 4.1 T l gà Lơi tr ng b tiêu ch y nghi nhi m E coli tiêu ch y nghi m c c u trùng giai ño n t 6/2011 ñ n 6/2012 48 Hình 4.2 T l t vong gà Lôi tr ng b tiêu ch y nghi nhi m E coli tiêu ch y nghi m c c u trùng giai ño n t 6/2011 ñ n 6/2012 49 Hình 4.3 T l b r i lo n hô h p ch n thương gà Lơi tr ng giai đo n t tháng 6/2011 ñ n tháng 6/2012 51 Hình 4.4 K t qu phân l p E coli t phân gà Lôi tr ng kh e gà Lôi tr ng b tiêu ch y 55 Hình 4.5 K t qu ki m tra ñ c l c c a ch ng E coli chu t 59 Hình 4.6 K t qu ñ nh lo i serotype c a ch ng E coli phân l p ñư c 61 Hình 4.7 T l xu t hi n t h p ñ c t ch ng E coli phân l p ñư c t phân gà Lôi tr ng kh e gà Lôi tr ng b tiêu ch y 64 Hình 4.8 K t qu ki m tra tính m n c m c a ch ng E coli v i m t s lo i thu c kháng sinh thư ng dùng lâm sàng thú y 69 Hình 4.9 T l kh i b nh c a phác ñ ñi u tr 71 Hình 4.10 Th i gian kh i b nh trung bình c a phác đ ñi u tr 72 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… x B ng 4.9 K t qu ki m tra ñ m n c m c a ch ng E coli phân l p ñư c t gà Lôi tr ng b tiêu ch y v i m t s lo i kháng sinh thông thư ng (n=23 ch ng) Ch tiêu ki m tra M nc m M nc m Kháng trung bình S T l S T l S T l ch ng (%) ch ng (%) ch ng (%) Ampicillin (Am) 39,13 8,70 12 52,17 Kanamicin (Km) 39,13 8,70 12 52,17 Streptomycin (Sm) 14 60,87 8,70 30,43 Sulfisoxazole (Su) 18 78,26 8,70 8,70 Tetracycline (Tc) 23 100,00 0 0 Gentamycin (Gm) 16 69,57 0 30,43 CiprOfloxacin (Cip) 21 91,30 0 8,70 Ofloxacin (Ofx) 21 91,30 8,70 0 Cephalothin (Cf) 21 91,30 0 8,70 Neomycin (Nm) 39,13 0 14 60,87 Colistin (Col) 18 78,26 0 21,74 Tên thu c KS Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 74 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 75 Ghi chú: Hình 4.8 bi u di n t l (%) m n c m c a 23 ch ng E coli n hình (phân l p đư c t d ch ngoáy tr c tràng c a gà Lôi tr ng b tiêu ch y) v i 11 lo i thu c kháng sinh Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… c p ñ : M n c m, 76 trung gian kháng thu c, c theo tiêu chu n c a H i ñ ng qu c gia Hoa Kỳ v tiêu chu n lâm sàng Phịng thí nghi m, năm 2010 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 77 4.8 K t qu th nghi m c a m t s phác đ u tr gà Lơi tr ng b tiêu ch y E coli gây Các cá th gà b tiêu ch y E coli ñư c chia thành nhóm ñ ñi u tr b ng phác đ mơ t ph n phương pháp nghiên c u Hi u qu c a phác ñ ñi u tr ñư c ñánh giá thông qua ch tiêu bao g m: t l kh i (%) th i gian kh i b nh trung bình (ngày) K t qu đư c trình bày B ng 4.10, Hình 4.9 Hình 4.10 T Hình 4.9, chúng tơi d dàng nh n th y c phác ñ phác ñ ñ u cho hi u qu ñi u tr r t cao, t l kh i c a m i phác đ đ u đ t 100% Trong lơ đ i ch ng, v i thành ph n Gentamycin sulphate, cho hi u qu u tr th p r t nhi u, (P