Khóa luận tốt nghiệp Hóa học: Khảo sát thành phần hóa học phân đoạn EC2.2 cao N-hexane: Ethyl acetate của cây Đơn lá đỏ Excoecaria cochinchinensis

LOI CAM DOAN Tôi cam đoan dé tài “Khảo sát thành phan hóa học phân đoạn EC2.2 cao hexane: ethyl acetate của cây Don lá đỏ Excoecaria cochinchinensis” là công trình n-nghiên cứu của tôi đ

BỘ GIÁO DỤC VÀO ĐÀO TẠO

TRUONG ĐẠI HỌC SƯ PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH

KHOA HÓA HỌC

Chuyên ngành: Hóa học hữu cơ

Lê Đỗ Huỳnh

KHẢO SÁT THÀNH PHẢN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN

EC2.2 CAO N-HEXANE: ETHYL ACETATE CUA CAY

DON LA DO EXCOECARIA COCHINCHINENSIS

TP Hồ Chí Minh, năm 2024

BỘ GIÁO DỤC VÀO ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHAM TP HO CHÍ MINH

KHOA HÓA HỌC

KHAO SÁT THÀNH PHAN HÓA HOC PHAN DOAN EC2.2 CAO N-HEXANE: ETHYL ACETATE CUA CAY

DON LA DO EXCOECARIA COCHINCHINENSIS

Sinh viên thực hiện: Lê Đỗ Huỳnh

Mã số sinh viên: 46.01.201.048

Giảng viên hướng dẫn khoa học: TS Lê Thị Thu Hương

TP Hồ Chí Minh, năm 2024

LOI CAM DOAN

Tôi cam đoan dé tài “Khảo sát thành phan hóa học phân đoạn EC2.2 cao hexane: ethyl acetate của cây Don lá đỏ Excoecaria cochinchinensis” là công trình

n-nghiên cứu của tôi đưới sự hướng dẫn của TS Lê Thị Thu Hương.

Kết quả trình bay trong dé tài là trung thực Các trích dẫn vẻ bảng biêu, kết quả

nghiên cứu của những tác giả khác; tài liệu tham khảo trong dé tài đều có nguồn gốc rõrang va theo đúng quy định.

Thanh phó Hỗ Chí Minh, ngày 01 tháng 05 năm 2024

TÁC GIÁ ĐÈ TÀI

Lê Đỗ Huỳnh

LOI CAM ON

Lời dau tiên, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thay cô khoa Hóa học nói

chung và tô Hóa học hữu cơ nói riêng của trường Đại học sư phạm thành phô Hỗ Chí

Minh đã chỉ dạy những kiến thức cần thiết cũng như đã tạo điều kiện dé tôi có thé thực

hiện đề tài lần này.

Dac biệt là cô Lê Thị Thu Hương đã luôn tận tình hướng dẫn và chỉ day trong

suốt quá trình thực hiện khóa luận tốt nghiệp Nhờ vay, không chỉ hoàn thành được

khóa luận mà đồng thời gặt hái được cho mình những hành trang quý báu dé học tập

và làm việc trong tương lai.

Xin cảm ơn các bạn và các anh chị khóa trước đã đồng hành cùng trong quá trình thực nghiệm đã hỗ trợ và góp ¥ đề em hoàn thành bài khóa luận này.

Mặc dù đã có gắng hoàn thành khóa luận trong phạm vi và khả năng cho phépnhưng chắc chắn sẽ không tránh khỏi những thiếu sót Rất mong nhận được sự thông

cảm, góp ý và tận tình chỉ bảo của quý thây cô và các bạn.

Xin chân thành cảm ơn!

Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 01 tháng 05 năm 2024

TÁC GIA ĐÈ TÀI

Lê Đỗ Huỳnh

MỤC LỤC

BI CAMĐDAN «sẽ ao oẻ accesses messiness iBOTAN siscscsscccssszcasasassasecssevaessnasa eesaseoasavasassccesssauaseauosa euassvasssnasssssecassacatasacssien iiMUG LU DI G0 00 GD Tô HN HH PMNDUSZuựu Ụ iii

ĐANH MUG VIỆT DA Gaieeikectiiieeeiiicoietoctittototoiciictitiot02002102200002102000026026202160560ã06an656 Y

DANH MỤC HÌNH AND ssssssssesscssssssnssscsssansssossscssssassasssssesssssassnvsssanssssassosssssssasssaseosais vi

DANH MỤC BẰNG BI DU | ssssssssssssssssssssssssscsssssssssssesssansssnsseasssasssnsssssssasssaesssanssaessass vii

DANHMUGEHUPUE ssssssisscsssscsssccsassssicsscssvecsavsasancesssannemananiancanaacses viiiMOIDA sca cczscscuconscsasseassctssa ccauasnzecsnzsessacassomsssctces oasaspvadsnctesa acascnncsesuassssasssssnvcssinsaioas 1

WEA 00h00 lề acc an nên |2.IMtic:H6iinEhiôñ:GỨU:¿;;:-:::¿:::2s::4:ii:1ii:20:6255012112215221063116411545066546983563332815645353555535548309361 2

3 Đối tượng nghiên cứu 2: 2= s42 £EEEEEEEEE2212222211271121112112211221122112-11 cv 2

4.IPhamViIRBHIÔTGỨN::::::::::::::2:iscii22ig221021122211123112011533123116515533539535935383358835533323555235253E 2

CHƯƠNGI.TÔNG QUAN wssssissssssssssssscscssncsencssnssensssnssscsssasssnsssassannnnennaanaiaanes 3

I.Í MG tô tHỰC VỆ(coccoiiciocoiiseiiosiinsiiosti2301025126611640105152580546856589585665588585858488503588550 3

1.2 Các nghiên cứu về thành phần hóa học 5+5 csccvzstvzcrrrcee 4

1.3 Các nghiên cứu về hoạt tính sinh học - 2: 2 22222222112811 2151111221122 12

12311.116gbfShchống AG TG ¡onanhe ha ho anh I1 00041034116214048348808) 12

1.3.2 Hoạt tính kháng khuẩn và chống oxi hóa - 2-2 z5 13

1.3.3 Hoạt tính kháng viêm 2222 E222E2222222732271222171211222 2e 14

13:4 Hoạtitnhikháng ung tŨV::-:: ::: :-::: ::s:::c:<6 005622 02<020S206022512-ã8255 15

CHƯƠNG? THỰC NGHIÊN sscssscsssscsscssscsssassscssscssssssssasssasssassssssesisssasesssasanasiaasss 16

2.1 Nguyên liệu 1n HH ng HH tr l6

2.2 Thiết bị - dụng cụ - hóa chất - tt 2100 1111111111 kktzsrree 16

2:51, TEU bị = (HE CAs svascsiscsicassssssasssscsescsiosssssasssnssansssesasussseossvsssnsissssvesiies 16 20) Hôn HA sisesessssssss ceansazesaavasancassezaaccansanssanseassovsseesssussesssnsasssstnesesvessoes l6

2.5.IPhươngiDH5BHEHIöHGEN: .:-:-: -:-:-:-:-:-:::::::z2::22222222120202502223222035228722623565E 17

2.3.1 Kỹ thuật ngâm, chiết 22222 222EEz£CEE2EEEE2EEeCEEevExvvkrvrrcrrrc 17

2.3.2 0n g6 dị n dảệộỘộịỘỌỘỪỪỪẠỪỪỪỪỲV 17 2.3.3 Kỹ thuật sắc kí bản mỏng -. 22222222 2222112 211221121 c1 ve 17 2.3.4 Kỹ thuật xác định cầu trúc hóa học s12 1c 0 17 2.4 Cô lập va tinh chế các chấtL - s22 SE 112111 211 11211 11x 1x cty, 17

CHUONG 3 KET QUA VÀ THẢO LUẬN -cscccscesecesese 20

iv3.1 Xác định cấu trúc hóa học của hợp chất 1 -s-5s+estczEEczezrkcxrree 203.2 Xác định cấu trúc hóa học của hợp chất 2 -2-22s2s 22211242223 csczee 22KETLUAN VÀ KIEN NG beneninkonooioniioanoiaioaiiaỷaronioia.ina a -ang 25

ñ‹ nh 25

2 Kiến nghị S0 2c 210 10021102112211121111110111011 111102 TH HH 2 cư 25

SE UDB OA ME HÀ lo ẪO CO C GOGỔO ẪŸÝŸÝÝýŸnäẳÝẽãẳẳỶẳẰẳŸ“Ỷ=Ÿ= 26

Correlation liên kêt

Proton Nuclear Magnetic Pho cộng hưởng từ hạt nhân

CƯ TT NV 270V 002.

Quantum Correlation liên kêt

concentration hoạt động cua enzyme

Coupling constant Hang số ghép spin

Thin Layer Chromatography Sac ki ban mong

a T TgỢO 7 MO

cổ | Chemical shift Độ chuyên dịch hoá học

DANH MỤC HÌNH ẢNH

Hình 1.1 Cây Don lá do (Excoecaria cochinChineHSES) sách 4

Hình 3.1 Cau trúc hóa học của hợp Oe 21

Hình 3.2 Cau trúc hóa học của hợp chất 2 cccssscssssssssssssssesssesssesssessessssssssesssssssesssenn 23

DANH MUC BANG BIEU

Bang 3.1 Số liệu phé 'H NMR và 'C NMR của hợp chat 1 và hợp chat so sánh

7/-HydrGXYSitOsIErGÏ, Ô (DDITÌ) ccc.ccccn no An c S212 <8111611841144142148444448364648644584388268 548 21Bang 3.2 Số liệu phô !H NMR va °C NMR của hợp chất 2 và hợp chat so sánh 7a-

ly0df0XYSi00siSroll ỗ (HOM): tuaaoaaoaoaiaiooaioiinooiitiiitiiiiti11410131331348363813183888322888830 23

DANH MỤC PHỤ LỤC

Piri Lise ¡ Phố SELINA của hợp chất ica sssasssssicacsaacasnsssrcaiacasacasncssacsarsasncasssassaansaaasaannas 2

Phụ lục La Phô giãn rộng !H NMR của hợp chất I -.2 5c5cccccccccsecee-.-3

Ehui 3 Phố CS NMR của hợp CHAE Ds ssssssssssssssssssssssssesssnsssessisnsseaieessvassassssosssesasosssenii 4

Phụ lục 2a Phô giãn rộng !*C NMR của hợp chất l 2- 22 ©zs222z22zxecrvrcee 5

Phụ lục 3 Phd HSQC của hợp chất l 5-22 222222222222122312211221172112272272e 2e 6

Phụ lục 4 (Phi HMBC của hợp chất Ì cc con 2 20222002602201.sã.0 7

Phụ lục 5 Phé "H NMR của hop li tiêmaaŸÝ 8

Phy lục 5a Phé giãn rộng !H NMR của hợp chất 2 cscccssccessssesssesssesssesssseesseesseeeene 9

Phụ lục 6 Pho !3C NMR của hợp chất 2 522222222 22122112211221221212ee.crev 10

Phụ lục 6a Phé giãn rộng °C NMR của hợp chất 2 -56c2cvc 22tr, 11

MO DAU

1 Lí do chọn dé tài

Việt Nam là một nước nằm trong vùng nhiệt đới gió mùa nên được thiên nhiên

ưu đãi, có một hệ sinh thái phong phú và đa dạng dẫn tới một tiềm năng to lớn vẻ tàinguyên cây thuốc Từ rất lâu, nhân dân đã biết tận dụng những thực vật có sẵn tại

khu vực sinh sống đề trị bệnh, lưu truyền lại các bài thuốc dân gian, phát triển nên V học cô truyền Ngày nay, các nhà khoa học đã nghiên cứu sâu hơn vào thành phần

của các cây thuốc và tác dụng hay được tính sinh học của các chất tìm được thôngqua vIỆc tiền hành tách chiết, phân lap, khảo sát các loài thực vật Đặc biệt các hợp

chất thiên nhiên có các hoạt tính sinh học cao được chú ý hơn cả Trong đó có cây

Don lá đỏ, được tìm thay rat nhiều ở nước ta hầu như có mặt khắp cả nước, thườngđược trong dé làm cảnh do đáng cây đẹp va màu sắc bắt mắt và được người dândùng dé trị các bệnh ngoài đa Cây còn được tìm thay ở Lào và Campuchia [1] Cây

mọc hoang và được trồng nhiều nơi đề lấy 14, cành non làm thuốc.

Don lá đỏ (Excoecaria cochinchinensis Lour) thuộc họ Thầu dầu(Euphorbiaceae) là loại cây nhỏ, cao chừng Im Cảnh vươn dai, mau do tia, lá mọc

đối, mặt trên xanh sam bóng, mặt dưới đó tia, mép khía răng; lá kèm hình mác nhọn Cây ưa sáng, ưa âm Cây thường được dùng trong phạm vi nhân gian làm thuốc

chữa mụn nhot, man ngứa, tiêu chảy lâu ngày không khỏi [2] Ở Trung Quốc, Don

lá đỏ thường được ding chữa sởi, quai bị, viêm amidan, đau thắt ngực, đau cơ [1] Một số nghiên cứu cho thấy cây Đơn lá đỏ là một trong những nguyên liệu thực vật

có công dụng như kháng ung thư vú ở người [3]; ức chế sự phát triển của một số

chủng vi khuân và nam thé hiện hoạt tính kháng các vi sinh vật kiêm định tốt hơn

[4].

Vé khảo sát thành phan hóa học, Don lá đỏ chứa flavonoid 1,5%, saponin, coumarin, anthranoid, tanin và đường khử Một số tác giả cho rằng nhựa cây màu trắng sữa có độc đối với cá [1], [4].

Sau khi tham khảo một số tài liệu ở trong và ngoài nước, tôi nhận thấy cây

Don lá đỏ có nhiều công dụng chữa trị hoặc hỗ trợ làm giảm các triệu chứng bat

thường ve sức khỏe thường gặp ngày nay Cây có thé xanh tốt quanh năm, thuận lợi

cho việc thu hái lá Qua quá trình tìm hiểu vé thành phần hóa học và những hoạttính sinh học được các tác giả thử nghiệm từ các chất đã cô lập được thì nhận thấy

đây là một cây có tiềm năng phân lập được những chất mới với những hoạt tính sinh học có giá trị Từ đó có thé thay, việc cô lập thêm các hợp chất dé đóng góp cho

ngành hóa học hợp chất thiên nhiên là điều cần thiết Vì thể, chúng tôi chọn đẻ tài:

“Khao sát thành phần hóa học phân đoạn EC2.2 cao n-hexane: ethyl acetate của câyDon lá do Excoecaria cochinchinensis” trong nghiên cứu này.

2 Mục tiêu nghiên cứu

- Phân lập và xác định cấu trúc của 1 - 3 hợp chất trong phân đoạn EC2.2 tir

cao n-hexane: ethyl acetate của cây Đơn lá đỏ Excoecaria cochinchinensis.

3 Đối tượng nghiên cứu

- Cây Don lá đỏ Excoecaria cochinchinensis.

4 Phạm vi nghiên cứu

- Phân đoạn EC2.2 cao n-hexane: ethyl acetate của cây Don lá đỏ Excoecaria

cochinchinensis.

CHƯƠNG 1 TONG QUAN

1.1 Mô ta thực vật Cây Don lá đỏ có tên khoa học là Excoecaria cochinchinensis Lour, còn một

tên đồng nghĩa khác là Excorcaria bicolor Hassk, họ Thau dầu hay Đại kích

(Euphorbiaceae) O Việt Nam, cây Don lá đỏ còn được gọi bởi da dạng các cái tên

như: Don tướng quân, Don mặt trời, Don tia, liễu đỏ, liễu hai da, hồng bối qué hoa [1] Don lá đỏ là loài thực vật nhỏ có chiều cao trung bình từ 0,5 m đến 1 m, có cành nhỏ, gay, đài, màu tia Lá mọc đối, hình trái xoan thuôn đài, phía cuồng nhọn

ngắn dai 6 — 12 cm, rộng 1,2 - 4 cm, cuống ngắn 0.5 — | cm, mặt trên có màu xanh

đậm, mặt dưới màu đỏ tía và phiến lá nguyên, mép có răng cưa, có 10 đến 12 cặp

gân lông chim nôi rõ ở mặt đưới lá, lõm ở mặt trên lá [5] Theo khảo sát vào năm

2018, loài cây này có vùng phân bo rất rộng, được ghi nhận xuất hiện ở các quốc

gia như Trung Quốc, Malaysia, Myanmar, Thái Lan, Việt Nam [6] Tại Việt Nam

cây Đơn lá đỏ mọc nhiều nơi như Long An, Tiền Giang, Hậu Giang, Đồng Tháp, Đồng Nai [7] và có vài nghiên cứu ma lá được thu hái tại các tinh như Hà Nội,

Tuyên Quang, Thái Nguyên [4] [8] [9] Có thé thấy cây phân bố từ bắc đến nam

có cả mọc hoang và được người dân trồng với mục đích làm cảnh đo dáng cây và

màu sắc bắt mắt, và với mục đích làm thuốc trong các bài thuốc nhân gian Lá được

thu hái quanh năm, nhưng tốt nhất vào mùa hè Đơn lá đỏ có vị cay, hơi đẳng, có ít

độc và tính mat [1], [2].

Mùa hoa của cây vào các tháng 4 — 6 Hoa mọc ở kẽ lá va đầu cành gôm nhiều

hoa đơn tính, cùng gốc hoặc khác gốc; hoa đực nhỏ, đài 2 cm, có 3 lá đài hình mac

nhọn: 3 nhị; hoa cái to hơn, ngắn hon hoa đực, có 3 lá dài hình trái xoan nhọn hơi

khía răng ở méo, bau hình trứng Quả nang 3 mảnh, có cạnh, đường kính khoảng 1

em, khi chín nứt thành 3 mảnh vỏ: hạt hình cầu, màu nâu nhạt, đường kính 0,4 cm

[1] [2] Cây don lá đỏ được miêu tả ở hình 1.1.

Hình 1.1 Cay Don lá đỏ (Excoecaria cochinchinensis)

1.2 Các nghiên cứu về thành phần hóa học

Vào năm 1999, Nguyễn Thái An và Phạm Xuân Sinh thu hái lá cây Don lá đỏ

từ lang Đại Yên — Ba Đình — Hà Nội nghiên cứu đã chỉ ra rằng dịch chiết của lá cây

có chứa flavonoid (1), saponin (2), coumarin (3), anthraglycoside (4), tannin (5),đường khử, với hàm lượng flavonoid toàn phan là 1,5% Bang sắc ký lớp mỏng va

sắc ký giấy thấy flavonoid trong lá Đơn lá đỏ có 6 vết có Rf khác nhau, sơ bộ xác định trong 6 chất đó có một chất thuộc nhóm flavonol [1] [10].

SS OH

fe)

(1)

Nguyễn Thái An và cộng sự trong lần nghiên cứu thành phan hóa học va tác

dụng sinh học của cây Đơn lá đỏ được thu hái tại Hà Nội và Thái Bình vào năm

2002, bằng phương pháp phé nghiệm, hai hợp chat là gallic acid (6) và ellagic acid(7) đã được xác định và tiễn hành thử tác dụng chống oxy hóa của các dịch chiết và

2 chất trên [11] Năm 2003, Nguyễn Thái An phân lập thêm 2 flavonol làkaempferol-7-O-glucosid (8) và kaempferol (9) [12].

megastigmane glucoside mới được gọi là excocarioside A (10) và B (11), cùng với 7

hợp chất đã biết là gallic acid (6), (-)-shikimic acid (12), p-hydroxybenzoic acid

(13), glochidionionoside B (14), kaempferol 3-Ó- Ø -D-glucopyranoside (15), kaempferol 3-O-8-D-galactopyranoside (16) , blumenol (17), kaempferol 3-O-a-L-

rhamnopyranoside (18) [13].

HO

HO

(12) (13) (14)

(18)Cũng vào năm 2005, Yang và cộng sự đã phân lập được ba hop chất

diterpenoid có ham lượng oxygen cao từ cây Don lá đỏ lần lượt là excolabdone A

(19), excolabdone B (20) và excolabdone C (21) [14].

(21)

Năm 2008, tác giả Bao — Wei Yin và cộng sự đã liệt kê các hop chất được

phân lập từ chi Excoecaria trong vài thâp ky cũng như là hoạt tính sinh học của các

hợp chất được phân lập trong những năm đó Trong danh sách liệt kê thì cây Đơn lá

đỏ có đến 19 hợp chất được ghi nhận trong đó có các chất chưa được dé cập ở các

công bố trước đây bao gồm:

5,4’-dihydroxy-7-methoxyflavone-3-O-f-D-glucopyranoside (22) quercetin-3-O D-5,4’-dihydroxy-7-methoxyflavone-3-O-f-D-glucopyranoside (23),

kaempferol-3-O-a-L-arabinopyranoside (24),

kaempferol-3-O-a-L-rhamnosopyranosyl-(1—6)-f-D-glucopyranoside (25), tetracosanoic acid (26), palmitic acid (27), stearic acid (28)

va hentriacontane (29) [15].

Trong bài nghiên cứu tìm ra một loại thuốc kháng nắm mới do sự lây nhiễm

ký sinh trùng Babesia gibsoni và B canis ở chó lan rộng, Yamada và cộng sự năm

2009 đã tiền hành phân lập các hợp chất kháng kí sinh trùng từ Brucea javanica,

Curcuma xanthorrhiza va Excoecaria cochinchinensis va cũng tách ra được (+) —

epiloliolide (30) từ 400 g lá cây Đơn lá đỏ phơi khô và được đánh giá hoạt tính sinh học [16].

đaucosterol (34), stigmasterol (35), palmitinic acid và stigmastane-3,6-diol (36) [17].

Năm 2014, nhóm nghiên cứu gồm Wang Ye-ling và các cộng sự đã phân lập

được các hợp chất: oleanolic acid (37) arjunolic acid (38), kaempferol (39),

quercetin (40), isoscutellarein (41), scopoletin (42), gallic acid, phloroglucinol (43),

f-sitostcrol và daucosterol [18].

là excocochinoside A (44) và B (45) và 11 hợp chất đã biết bằng cách phân tích chi

tiết các phương pháp phô: NMR ID và 2D, phô khối lượng MS và so sánh với dữ

liệu được báo cáo trước đó, đó là venenatine (46), glochionionol A (47),

(6R,9S)-roseoside (48), isofraxoside (49), pinoresinol 4-@ D-glucopyranoside (50), liriodendrin (51), rhamnocitrin 3-glucoside (52), 2,3-dihydroxypropyl-benzoate 3-

O-a-[4"-methoxy]glucuronide (53), sinapyl alcohol 4-O-/-D-glucopyranoside (54),

8-phenylethyl 6-O-a-L-rhamnopyranosy1-/-D-glucopyranoside (55) và

benzyl-O-a-L-rhamnopyranosyl(1—6) D-glucopyranoside (56) [19].