Nhóm 16 chẩn Đoán bệnh thực vật bằng shpt thứ 5 ca 3

Hiện nay, việc chẩn đoán bệnh virus trên cây dâu tây chủ yếu dựa vào các phương pháp quan sát triệu chứng lâm sàng và xét nghiệm PCR thông thường, tuy nhiên những phương pháp này có độ n

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

BÁO CÁO MÔN HỌC

CHẨN ĐOÁN BỆNH THỰC VẬT BẰNG SINH HỌC

PHÂN TỬ

TP Thủ Đức, 11/2024

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

BÁO CÁO THỰC HÀNH

CHẨN ĐOÁN BỆNH THỰC VẬT BẰNG SINH HỌC

PHÂN TỬ

PGS.TS Nguyễn Bảo Quốc Nhóm 16

TP Thủ Đức, 11/2024

MỤC LỤC

Trang

MỤC LỤC 3

DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT 5

DANH SÁCH CÁC HÌNH 6

DANH SÁCH CÁC BẢNG 7

CHƯƠNG 1 ĐẶT VẤN ĐỀ 8

CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 9

2.1 Giới thiệu về cây dâu tây 9

2.1.1 Nguồn gốc cây dâu tây 9

2.1.2 Đặc điểm thực vật 10

2.2 Bệnh vius xoắn lá dâu tây (SCV) 10

2.3 Bệnh virus vàng mép lá dây tây (SMYEV) 12

CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14

3.1 Vật liệu 14

3.2 Phương pháp nghiên cứu 15

3.2.1 Hệ thống nuôi cấy 15

3.2.2 Điều kiện nuôi cấy 15

3.2.3 Chẩn đoán bệnh SCV và bệnh SMYEV 15

3.2.3.1 Thu mẫu 15

3.2.3.2 Tách chiết RNA 16

3.2.3.3 Quy trình chẩn đoán bệnh SCV và bệnh SMYEV bằng kỹ thuật RT-PCR 16

CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17

4.1 Kết quả 17

4.2 Thảo luận 19

CHƯƠNG 5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 19

5.1 Kết luận 19 5.2 Kiến nghị 20

DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT

SMYEV Virus Strawberry Mild Yellow Edge

RT-PCR Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction SCV Strawberry Crinkle Virus

Bp Base pair

DANH SÁCH CÁC HÌNH

Trang Hình 1.1 Cây dâu tây

DANH SÁCH CÁC BẢNG

Trang Bảng 1 Tỷ lệ mẫu cây Dâu tây in vitro bị nghiễm và sạch bệnh SCV và bệnh SMYEV Bảng 2 Tỷ lệ mẫu bị nhiễm bệnh SCV và bệnh SMYEV của từng giống dâu tây

CHƯƠNG 1 ĐẶT VẤN ĐỀ

Cây dâu tây (Fragaria × ananassa) là một trong những cây ăn quả có giá trị kinh tế cao, được trồng phổ biến ở các khu vực ôn đới và cận ôn đới Tuy nhiên, cây dâu tây đối mặt với nhiều loại bệnh, trong đó bệnh virus xoăn lá và vàng mẹp là những bệnh lý nguy hiểm, gây ảnh hưởng lớn đến năng suất và chất lượng quả Các triệu chứng của bệnh bao gồm lá xoăn, vết vàng và sự phát triển kém của cây, dẫn đến giảm khả năng quang hợp và năng suất quả

Hiện nay, việc chẩn đoán bệnh virus trên cây dâu tây chủ yếu dựa vào các phương pháp quan sát triệu chứng lâm sàng và xét nghiệm PCR thông thường, tuy nhiên những phương pháp này có độ nhạy và tính chính xác không cao, đặc biệt trong giai đoạn sớm của bệnh Do đó, việc ứng dụng kỹ thuật RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) – một phương pháp phân tử tiên tiến, có thể giúp phát hiện virus ngay khi cây chưa biểu hiện triệu chứng rõ rệt, từ đó hỗ trợ trong việc phòng ngừa và kiểm soát bệnh kịp thời

RT-PCR có khả năng phát hiện virus với độ chính xác và độ nhạy cao, cho phép xác định các loại virus gây bệnh và mức độ lây nhiễm chính xác, giúp nông dân và nhà nghiên cứu đưa ra các biện pháp canh tác phù hợp Tuy nhiên, kỹ thuật này vẫn gặp phải một số thách thức, bao gồm chi phí đầu tư thiết bị, yêu cầu chuyên môn cao và điều kiện phòng thí nghiệm đặc biệt

Việc nghiên cứu và ứng dụng RT-PCR trong chẩn đoán bệnh virus xoăn lá và vàng mẹp trên cây dâu tây không chỉ giúp nâng cao hiệu quả phòng chống bệnh mà còn tạo cơ hội phát triển giống dâu tây kháng bệnh, từ đó nâng cao năng suất và bảo vệ ngành trồng dâu tây trước các nguy cơ dịch bệnh

CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 Giới thiệu về cây dâu tây

2.1.1 Ngu n g c cây dâu tây ồ ố

Cây dâu tây (Fragaria × ananassa) có hệ thống phân loại khoa học như sau:

Giới : Thực vật

Ngành : Thực vật hạt kín

Lớp : Nhị thập

Bộ : Hoa hồng

Họ : Hoa hồng

Chi : Fragaria

Loài : Fragaria × ananassa

Hình 1.1 Cây dâu tây

2.1.2 Đ c đi m th c v t ặ ể ự ậ

Dâu Tây thuộc dạng cây thảo, cây có khả năng sống qua nhiều năm Thân cây mảnh,

có màu xanh lục Cây mọc bò trên mặt đất, tại các mấu có bén rễ

Lá kép, mọc so le, có 3 lá chét, mép lá chét có khía răng cưa, lá kèm nhỏ Cuống lá rất dài Hoa có màu trắng Mỗi lá noãn chứa 1 noãn Quả bế tụ, có màu đỏ, quả mọng nước Thời gian ra hoa rơi vào khoảng tháng 2 đến tháng 4 Thời gian quả chín rơi khoảng vào tháng 5 đến tháng 7

Dâu tây thuộc chi Fragaria L trên thế giới có khoảng 10 loài, được tìm thấy chủ yếu ở

các vùng ôn đới và vùng cận nhiệt đới Có bản chất là cây ưa sáng, thích hợp trồng trong những khu vực có khí hậu mát mẻ Nhiệt độ để cây sinh trưởng và phát triển tốt nhất là từ 15°C đến 20°C Khi nhiệt độ xuống quá thấp (dưới 0°C), cây sẽ có dấu hiệu kém phát triển, quả bị đen Chính vì lý do này, tại các nước như Thái Lan, Malaysia, Việt Nam, Indonesia, cây chỉ được trồng ở những vùng núi có độ cao trên 1000 mét với thời tiết mát mẻ quanh năm

Tại Việt Nam, dâu tây chủ yếu được trồng ở các vùng có khí hậu mát mẻ như Đà Lạt Sapa…Đà Lạt nổi tiếng với khí hậu ôn đới quanh năm, là điều kiện lý tưởng để dâu tây phát triển mạnh mẽ và cho năng suất cao

2.2 Bệnh vius xoắn lá dâu tây (SCV)

Bệnh Strawberry Crinkle Virus (SCV) là một căn bệnh do một loại virus thuộc họ Cytorhabdoviridae gây ra, ảnh hưởng chủ yếu đến cây dâu tây, làm giảm năng suất và chất lượng quả Thường gây ra các triệu chứng như nhăn lá, vàng lá, và làm giảm độ cứng của cây, ảnh hưởng trực tiếp đến sự phát triển và sản lượng dâu tây

Đặc điểm của virus Strawberry Crinkle:

Virus Strawberry Crinkle là một loại virus RNA đơn chuỗi, có tính chất âm (negative-sense) và thuộc nhóm Cytorhabdovirus, một chi virus trong họ Rhabdoviridae Loại virus này có khả năng tấn công cây dâu tây và các loài cây thuộc họ Rosaceae, đặc biệt là những cây giống dâu tây dễ bị nhiễm bệnh

Virus này có thể được truyền qua môi trường hoặc qua côn trùng, như là rệp, khiến việc kiểm soát trở nên khó khăn hơn

Phương thức lây lan:

Quá trình lây nhiễm của SCV bắt đầu khi virus xâm nhập vào các tế bào của cây dâu tây Glycoprotein G của virus gắn vào thụ thể trên bề mặt tế bào vật chủ, kích hoạt quá trình nội thực bào, cho phép virus thâm nhập vào trong tế bào Sau khi xâm nhập vào tế bào vật chủ SCV sẽ tiếp tục sao chép và sản xuất các bản sao của RNA virus Điều này dẫn đến việc nhân lên nhanh chóng của virus trong cây, gây tổn hại đến các mô tế bào và làm suy yếu cây

Triệu chứng của bệnh:

- Nhăn nheo và biến dạng lá: Các lá cây bị xoăn, nhăn nheo và giảm độ cứng Cây trở nên yếu và dễ bị gãy

- Vàng lá và chấm vàng: Các lá bắt đầu chuyển sang màu vàng và xuất hiện các đốm chấm nhỏ

- Giảm kích thước quả: Quả dâu tây bị nhỏ lại và năng suất giảm sút nghiêm trọng

- Cây giảm sức sống: Virus làm giảm sự phát triển của cây, hạn chế khả năng sinh trưởng và ra hoa của cây dâu tây, dẫn đến sản lượng thấp

Phương pháp phát hiện và chẩn đoán:

Việc phát hiện và chẩn đoán SCV chủ yếu dựa vào các phương pháp sinh học phân tử, đặc biệt là kỹ thuật RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) Phương

pháp này cho phép phát hiện sự hiện diện của RNA virus trong mẫu mô cây dâu tây, từ đó xác định chính xác sự nhiễm bệnh

Việc quan sát các triệu chứng như lá bị nhăn và vàng lá có thể giúp phát hiện sớm bệnh ban đầu

Phòng ngừa và kiểm soát bệnh:

Hiện tại, không có phương pháp điều trị đặc hiệu cho bệnh SCV Tuy nhiên, một số biện pháp phòng ngừa có thể được áp dụng để kiểm soát sự lây lan của bệnh như:

- Quản lý cây giống Sử dụng các giống dâu tây có khả năng chống chịu hoặc không bị nhiễm SCV

- Kiểm soát côn trùng: Loại bỏ cây bị nhiễm và kiểm soát côn trùng, đặc biệt là các loài côn trùng hút nhựa có thể là tác nhân truyền bệnh

- Cắt tỉa cây bị nhiễm bệnh: Những cây bị nhiễm bệnh cần được cắt bỏ để tránh lây lan cho các cây khỏe mạnh khác trong vườn

- Sử dụng thuốc bảo vệ thực vật: Mặc dù không có thuốc đặc trị, nhưng việc sử dụng thuốc chống côn trùng và thuốc kháng virus có thể giúp giảm thiểu tác động của bệnh

2.3 Bệnh virus vàng mép lá dây tây (SMYEV)

Bệnh virus vàng mép lá dây tây (SMYEV) là một bệnh do virus ảnh hưởng đến cây dâu tây, được biết đến với những triệu chứng đặc trưng và có thể gây tổn hại nghiêm trọng đến sản lượng cũng như chất lượng quả dâu tây SMYEV là một trong những bệnh virus gây ra các vấn đề lớn cho ngành trồng dâu tây, đặc biệt là ở các khu vực trồng dâu tây thương mại

SMYEV thuộc nhóm virus thực vật có thể truyền nhiễm thông qua các côn trùng, đặc biệt là nhện đỏ và các loài côn trùng khác Bệnh này ảnh hưởng đến các giống dâu tây khác nhau và có thể gây ra những thiệt hại lớn về mặt năng suất nếu không được kiểm soát kịp thời

Đặc điểm của Virus Strawberry Mild Yellow Edge:

Virus vàng mép lá dây tây (SMYEV) là một trong những tác nhân gây bệnh ảnh hưởng đến cây dâu tây, gây ra hiện tượng vàng lá nhẹ và rìa lá trở nên vàng Loại virus này được xếp vào nhóm các virus RNA thuộc họ Secoviridae và giống Comovirus SMYEV có thể lây lan qua các phương tiện khác nhau và gây thiệt hại lớn cho năng suất và chất lượng của cây trồng

Virus SMYEV là một virus RNA, có cấu trúc di truyền đơn sợi (ssRNA) Tính chất di truyền của virus này giúp nó dễ dàng sao chép và phát tán trong cây trồng, khiến việc kiểm soát trở nên khó khăn hơn

Virus SMYEV có các hạt virus hình dạng dài, uốn cong, với kích thước khoảng 482

nm Bộ gen của virus là RNA đơn sợi, một đặc điểm chung của các loại virus nhóm Potexvirus

Phương thức lây lan của bệnh SMYEV:

Virus SMYEV chủ yếu được truyền qua côn trùng, đặc biệt là các loại côn trùng chích hút như nhện đỏ, các loài bọ ve, và côn trùng gây hại khác Chúng có thể mang virus từ cây

bị nhiễm sang cây khỏe mạnh khi tiếp xúc với lá hoặc nhựa cây

Ngoài côn trùng, virus cũng có thể lây lan qua việc di chuyển cây giống, đặc biệt là trong các khu vực trồng dâu tây thương mại Việc không kiểm soát tốt nguồn giống cây hoặc không vệ sinh các thiết bị trồng trọt cũng có thể góp phần vào sự lây lan của virus Triệu chứng của bệnh SMYEV:

- Vàng lá: Triệu chứng nổi bật nhất là các vệt vàng nhạt xuất hiện trên các lá, đặc biệt

là ở các cạnh lá, tạo thành các đường viền vàng quanh lá Các vệt này có thể lan rộng và ảnh hưởng đến nhiều lá khác trên cây

- Lá quăn và biến dạng: Các lá dâu tây bị nhiễm virus có thể bị biến dạng, cong vẹo, không phát triển bình thường, dẫn đến việc cây không thể quang hợp hiệu quả Điều này ảnh hưởng lớn đến sự phát triển của cây và năng suất

- Chứng thối đen và hoại tử: Một số lá và mô cây có thể bị hoại tử, dẫn đến việc lá bị rụng sớm Các mô bị chết có thể làm giảm khả năng hấp thụ nước và dưỡng chất của cây dâu tây

- Chậm phát triển: Cây dâu tây bị nhiễm SMYEV sẽ có tốc độ phát triển chậm hơn so với cây khỏe mạnh, và đôi khi sẽ không ra quả hoặc quả không phát triển bình thường

- Giảm năng suất: Cây bị nhiễm SMYEV sẽ cho năng suất quả thấp, quả nhỏ và kém chất lượng Các triệu chứng này làm giảm giá trị thương mại của cây dâu tây, đặc biệt khi bị nhiễm nặng trong suốt mùa thu hoạch

- Chứng rụng lá non và thối rễ: Bệnh có thể dẫn đến hiện tượng rụng lá non, đặc biệt là

ở các cây dâu tây non, làm cây suy yếu dần Một số nghiên cứu cho thấy cây dâu tây có thể không phát triển được rễ khỏe mạnh, gây ảnh hưởng đến sự sinh trưởng của cây

Phương pháp phát hiện và chuẩn đoán bệnh SMYEV:

Có nhiều phương pháp khác nhau để chuẩn đoán và phát hiện bệnh SMYEV, nhưng phổ biến nhất là hai phương pháp quan sát triệu chứng bệnh trên cây và thử nghiệm sinh học phân tử

Quan sát triệu chứng thực vật: Các dấu hiệu nhận biết SMYEV bao gồm lá có màu vàng nhạt ở mép, cây yếu và giảm sản lượng quả Dấu hiệu này có thể được quan sát trực tiếp trên cây dâu tây

Thử nghiệm sinh học phân tử:

- RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction): Đây là phương pháp phổ biến và chính xác để phát hiện SMYEV RT-PCR sử dụng các mồi đặc hiệu để khuếch đại RNA của virus, cho phép xác định sự hiện diện của virus trong mẫu cây

- ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay): Sử dụng các kháng thể đặc hiệu để phát hiện virus trong mẫu cây ELISA thường được sử dụng vì độ nhạy và độ đặc hiệu cao Phòng ngừa và kiểm soát bệnh SMYEV:

Việc phòng ngừa và kiểm soát bệnh SMYEV là rất quan trọng để bảo vệ và đảm bảo chất lượng của dâu tây khỏi sự tàn phá của virus Trong đó có một số phương pháp được áp dụng để phòng ngừa và kiểm soát bệnh như:

Sử dụng giống cây sạch: Chọn lựa giống cây dâu tây đã được kiểm tra và chứng nhận không nhiễm virus SMYEV là một bước quan trọng Điều này giúp giảm thiểu nguy cơ lây nhiễm

từ nguồn giống

Kiểm soát côn trùng truyền bệnh: Việc quản lý côn trùng gây hại, đặc biệt là các loài côn trùng truyền bệnh, là một biện pháp quan trọng Sử dụng thuốc trừ sâu và các biện pháp sinh học để giảm số lượng côn trùng trong khu vực trồng trọt

Vệ sinh khu vực trồng trọt: Đảm bảo khu vực trồng trọt luôn sạch sẽ, không có cỏ dại hay các cây bị nhiễm bệnh, để hạn chế môi trường sống của các côn trùng truyền virus

Cách ly cây bị nhiễm bệnh: Khi phát hiện cây dâu tây bị nhiễm SMYEV, cần phải cách ly và tiêu hủy chúng để ngăn chặn sự lây lan của virus sang các cây khác

CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 Vật liệu

Cây dâu tây in vitro thuộc 3 giống: Mỹ Đá, Mỹ Hương va Pháp Mẫu lá Dâu tây in

vitro được cắt nhỏ với kích thước khoảng 7,7 mm và được nuôi cấy trên môi trường hình thành mô sẹo Sau 30 ngày nuôi cấy, các cụm mô sẹo được tách ra và nuôi cấy trên môi trường tái sinh chồi Sau 45 ngày nuôi cấy, các chồi được nuôi cấy trên môi trường tạo rễ Sai 30 ngày nuôi cấy, các cây Dâu tây con hình thành, có bộ lá và rễ phát triển hoàn chỉnh Chúng được dùng làm nguồn mẫu để tiến hành chẩn đoán virus

Cây Dâu tây in vitro sạch bệnh virus, được dùng làm nguyên liệu cho quá trình nhân giống Dâu tây sạch bệnh Quá trình nhân giống này tương tự như trên; mẫu lá in vitro được

cắt nhỏ với kích thước khoảng 7 x 7 mm, được nuôi cấy trên môi trường hình thành mô sẹo

Mô sẹo thu được sau 30 ngày nuôi cấy được chuyển sang môi trường tạo chồi Các chồi thu được sau 45 ngày nuôi cấy được cấy chuyền sang môi trường tạo rễ Sau 30 ngày nuôi cấy trên môi trường ra rễ, cây con hoàn chỉnh được đưa ra ngoài vườn ươm

3.2 Phương pháp nghiên cứu

3.2.1 H th ng nuôi c y ệ ố ấ

Hệ thống nuôi cấy sử dụng trong giai đoạn tạo nguồn mẫu để chẩn đoán virus là các chai thủy tinh 250 ml (30 ml môi trường/chai) Ở giai đoạn tạo mô sẹo, cấy 3 mẫu lá/chai; ở giai đoạn tạo chồi, cấy 3 cụm mô sẹo/chai và ở giai đoạn tạo rễ, cấy 1 chồi/chai

Hệ thống nuôi cấy được sử dụng trong giai đoạn nhân giống Dâu tây sạch bệnh virus

là các túi nylon được làm từ polyethylene Các túi này được gấp lại trước khi được đem hấp khử trùng Ở giai đoạn tạo mô sẹo, cấy 3 mẫu lá/túi; ở giai đoạn tạo chồi, cấy 3 cụm mô sẹo/túi và ở giai đoạn tạo rễ, cấy 3 cụm chồi/túi

Môi trường và các hệ thống nuôi cấy được hấp khử trùng ở nhiệt độ 121 °C, 1 atm trong thời gian 20 phút Sau khi hấp khử trùng, các túi được mở ra và được rót môi trường nuôi cấy vào (100 ml môi trường/túi) Sau đó, đóng các nắp túi lại bằng kẹp giấy Các thao tác trên đều được thực hiện trong tủ cấy vô trùng

3.2.2 Đi u ki n nuôi c y ề ệ ấ

Các hệ thống được nuôi cấy trong điều kiện nhiệt độ phòng 25 °C ± 2 °C, với thời gian chiếu sáng 10 giờ/ngày và cường độ ánh sáng 3000 lux

3.2.3 Ch n đoán b nh SCV và b nh SMYEV ẩ ệ ệ

3.2.3.1 Thu mẫu

Việc chẩn đoán bệnh SCV và bệnh SMYEV được tiến hành trên 50 mẫu ở mỗi giống Dâu tây; các mẫu được ký hiệu như sau: giống Mỹ Đá từ DT1-1 đến DT1-50, giống Mỹ Hương từ DT2-1 đến DT2-50 và giống Pháp từ DT3-1 đến DT3-50

Tiến hàn hthu mẫu lá trong tủ cấy vô trùng: Các cây Dâu tây in vitro trong các chai có ký

hiệu như trên có chiều cao 4 – 5 cm, có 4 – 5 lá, lá rộng khoảng 1 cm; dùng kéo cắt 2 lá trên

mỗi cây, sau đó cho vào ống ly tâm 1,5 ml Mẫu lá Dâu tây in vitro trong các ống ly tâm

được sử dụng để tiến hành tách chiết RNA

3.2.3.2 Tách chiết RNA

Việc tách chiết RNA tổng số được tiến hành theo quy trình của Mazzara, James (2000): dùng 200 – 300 mg lá của mỗi mẫu cần chẩn đoán virus trong các ống ly tâm 1,5 ml đã được

ký hiệu Mẫu lá được nghiền với N2 lỏng, sau đó được cho vào lại các ống ly tâm và bổng sung 600 μl dung dịch đệm tách chiết (với các thành phần 50 mM Tris-HCl, có pH bằng 8,9;

150 mM LiCl; 5 mM EDTA và 5% SDS) và lắc đảo trong 2 phút Bổ sung vào dung dịch

600 μl hỗn hợp phenol: chloroform: isoamyl alcohol với tỷ lệ thể tích 25: 24: 1 và trộn đều trong 3 phút Dung dịch được đi ly tâm với tốc độ 9000 vòng/phút trong 15 phút ở 4 °C Chuyển phần dịch nổi ở phía trên sang một ống ly tâm mới và lặp lại bước ly trích bằng phenol:choloroform:isoamyl alcohol ở trên Phần dịch lỏng phía trên được chuyển sang một ống ly tâm mới và bổ sung 1/3 thẻ tích tương ứng của LiCl 8 M (pH = 9,2) để đạt được nồng độ cuối cùng là LiCl 2 M Dung dịch được ử ở - 80 °C qua đêm để kết tủa RNA và ly tâm ở tốc độ 11000 vòng/phút trong 30 phút ở 4 °C Kết tủa được thu lại và rửa 2 lần bằng bằng 300 μl EtOH 70%, 0,15 M NaCl, sau đó được ly tâm lại với tốc độ như trên trong 10 phút Thu và làm khô kết tủa ở nhiệt độ phòng trong 30 phút Sau đó, kết tủa được hòa lại vào 30 μl nước cất đã được xử lý DEPC và hấp khử trùng Ly tâm ở 13000 vòng/phút để cặn lắng xuống đáy ống và chuyển phần dịch nổi chứa RNA sang ống ly tâm mới Nồng độ RNA tổng số được xác định bằng máy quang phổ, sau đó RNA tổng số được kết tủa bằng 1/10 thể tích sodium acetate (pH = 5,2), 2,5 thể tích EtOH 100% và ủ ở 20 °C trong 1 h Kết tủa RNA được hòa lại vào một thể tích nước cất đã xử lý DEPC vừa đủ để tạo thành dung dịch RNA có nồng độ 5 μg/μl được sử dụng để chẩn đoán bệnh SCV và bệnh SMYEV