Báo cáo thực hành vi sinh bệnh pha môi trường

Bước 4: Cho các đĩa môi trường vào máy sấy 37ºC, sấy cho môi trường ráo nước.. Môi trường đã pha nước cất Môi trường sau khi hấp Các đĩa môi trường MSA... - Đợi 30p cho môi trường đong l

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HCM

KHOA THÚ Y VÀ CHĂN NUÔI

BÁO CÁO Thực Hành Vi Sinh Bệnh

Giảng viên hướng dẫn: TRƯƠNG ANH THY

Sinh viên: Trương Bảo Ngọc MSSV: 2187500753

Nguyễn Huỳnh Trúc Linh : 2187501192

Nguyễn Ngọc Nhi : 2187500178

Nguyễn Tiến Đức : 2187500816

Tạ Quang Khải Hoàn : 2187501876

Lớp: 21DTYB2

TP Hồ Chí Minh, 2022 Mục lục

I PHA MÔI TRƯỜNG

Dụng cụ, thiết bị

- Đĩa petri

- Ống nghiệm (có nắp và không nắp)

- Micropipette

- Kéo

- Đèn cồn

- Tủ ủ

- Bình duran

- Cân điện tử

- Ống đong nước

- Autoclave

1 Pha môi trường MSA ( Mannitol Salt Agar)

Gồm các chất

- Mannitol Salt Agar Base

- Nước chất

Hình lọ Mannitol Salt Agar Base

Các bước : pha 15 đĩa petri mội trường MSA

- Tính toán : 111,02g Mannitol Salt Agar Base được 1000ml môi trường

 Để pha 350ml môi trường MSA cần: (350*111,02)/1000 = 38,875g

Bước 1:

- Đong 350ml nước cất vào bình

- Cân 38,875g Mannitol Salt Agar Base và đổ vào bình ( chia nhỏ thành nhiều lần cân)

- Bỏ cục cá từ vào bình và cho bình lên cân điện tử khuấy và đun môi trường ở 100ºC

- Sau khi khuấy, bỏ bình môi trường vào máy autoclave hấp

Bước 2:

- Sau khi hấp để bình môi trường hạ thấp xuống 50ºC

Bước 3:

- Đốt đèn cồn, mở nắp bình môi trường

- Đổ từ từ 20ml môi trường vào các đĩa petri (hơ cổ bình trước khi đổ) làm cho đến khi đủ 15 đĩa

- Đợi 30p cho môi trường đong lại

Bước 4: Cho các đĩa môi trường vào máy sấy 37ºC, sấy cho môi trường ráo nước

Môi trường đã pha nước cất Môi trường sau khi hấp

Các đĩa môi trường MSA

2 Pha môi trường BA (bloos agar)

Gồm các chất:

- Blood Agar Base

- Nước cất

- Máu cừu

Các bước: pha 15 đĩa môi trường BA

Tính toán: 40g bloos agar base pha được 950ml môi trường

 Để pha 350ml môi trường BA cần: (350*40)/950 = 14,7g

Để pha 350ml môi trường cần máu cừu: (350*50)/18,5ml máu cừu

Bước 1:

- Đong 350ml nước cất vào bình

- Cân 14,7g Blood Agar Base và đổ vào bình ( chia nhỏ thành nhiều lần cân)

- Bỏ cục cá từ vào bình và cho bình lên cân điện tử khuấy và đun môi trường ở 100ºC

- Sau khi khuấy, bỏ bình môi trường vào máy autoclave hấp

Bước 2:

- Sau khi hấp để bình môi trường hạ thấp xuống 50ºC

- Đốt đèn cồn, mở nắp bình môi trường và cho 18,5 máu cừu vào bình đóng nắp và xoay đáy bình

- Đổ từ từ 20ml môi trường vào các đĩa petri (hơ cổ bình trước khi đổ) làm cho đến khi đủ 15 đĩa

- Đợi 30p cho môi trường đong lại

Bước 3:

- Đốt đèn cồn, mở nắp bình môi trường

- Đổ từ từ 20ml môi trường vào các đĩa petri (hơ cổ bình trước khi đổ) làm cho đến khi đủ 15 đĩa

- Đợi 30p cho môi trường đong lại

Bước 4: Cho các đĩa môi trường vào máy sấy 37ºC, sấy cho môi trường ráo nước

Môi trường sau hấp

Các đĩa môi trường BA

3 Pha môi trường BGA (Brilliant Green Agar)

Gồm các chất:

- Brilliant Green Agar Base

- Nước cất

Chai Brilliant Green Agar Base Các bước : pha 15 đĩa petri mội trường BGA

- Tính toán : 29,05g Brilliant Green Agar Base được 1000ml môi trường

 Để pha 350ml môi trường MSA cần: (350*29,5)/500= 20,65g

Bước 1:

- Đong 350ml nước cất vào bình

- Cân 20,65g Brilliant Green Agar Base và đổ vào bình ( chia nhỏ thành nhiều lần cân)

- Bỏ cục cá từ vào bình và cho bình lên cân điện tử khuấy và đun môi trường ở 100ºC

- Sau khi khuấy, bỏ bình môi trường vào máy autoclave hấp

Bước 2:

- Sau khi hấp để bình môi trường hạ thấp xuống 50ºC

Bước 3:

- Đốt đèn cồn, mở nắp bình môi trường

- Đổ từ từ 20ml môi trường vào các đĩa petri (hơ cổ bình trước khi đổ) làm cho đến khi đủ 15 đĩa

- Đợi 30p cho môi trường đong lại

Bước 4: Cho các đĩa môi trường vào máy sấy 37ºC, sấy cho môi trường ráo nước

Môi trường sau khi hấp Các dĩa môi trường BGA

4 Pha môi trường MC (Macconkey)

Gồm các chất:

- Macconkey Agar

- Nước cất

Chai Macconkey Agar

Các bước : pha 15 đĩa petri mội trường MC

- Tính toán : 51,53g Macconkey Agar được 1000ml môi trường

 Để pha 350ml môi trường MC cần: (350*51,53)/1000= 18,03g

Bước 1:

- Đong 350ml nước cất vào bình

- Cân 18,03g Macconkey Agar và đổ vào bình ( chia nhỏ thành nhiều lần cân)

- Bỏ cục cá từ vào bình và cho bình lên cân điện tử khuấy và đun môi trường ở 100ºC

- Sau khi khuấy, bỏ bình môi trường vào máy autoclave hấp

Bước 2:

- Sau khi hấp để bình môi trường hạ thấp xuống 50ºC

Bước 3:

- Đốt đèn cồn, mở nắp bình môi trường

- Đổ từ từ 20ml môi trường vào các đĩa petri (hơ cổ bình trước khi đổ) làm cho đến khi đủ 15 đĩa

- Đợi 30p cho môi trường đong lại

Bước 4: Cho các đĩa môi trường vào máy sấy 37ºC, sấy cho môi trường ráo nước

5 Pha môi trường MHA( Mueller Hinton )

Gồm các chất

- Mueller Hinton Agar

- Nước cất

Các bước : pha 15 đĩa petri mội trường MHA

- Tính toán : 38g Mueller Hinton được 1000ml môi trường

 Để pha 350ml môi trường MHA cần: (350*38)/1000= 13,3g

Bước 1:

- Đong 350ml nước cất vào bình

- Cân 13,3g Mueller Hinton và đổ vào bình ( chia nhỏ thành nhiều lần cân)

- Bỏ cục cá từ vào bình và cho bình lên cân điện tử khuấy và đun môi trường ở 100ºC

- Sau khi khuấy, bỏ bình môi trường vào máy autoclave hấp

Bước 2:

- Sau khi hấp để bình môi trường hạ thấp xuống 50ºC

Bước 3:

- Đốt đèn cồn, mở nắp bình môi trường

- Đổ từ từ 20ml môi trường vào các đĩa petri (hơ cổ bình trước khi đổ) làm cho đến khi đủ 15 đĩa

- Đợi 30p cho môi trường đong lại

Bước 4: Cho các đĩa môi trường vào máy sấy 37ºC, sấy cho môi trường ráo nước

Môi trường MHA sau khi hấp

6 Pha môi trường RVS

Gồm các chất

- RVS

- Nước cất

Các bước thực hiện: pha 15 ống môi trường RVS

Tính toán: 26,6g RVS pha được 1000ml môi trường RVS

 Pha 150ml RVS cần( 150*26,6)/1000=3,99g

Bước 1:

- Đong 350ml nước cất vào bình

- Cân 3,99g RVS và đổ vào bình ( chia nhỏ nhiều lần cân)

- Bỏ cục cá từ vào bình và cho bình lên cân điện tử khuấy và đun môi trường ở 100ºC

- Sau khi khuấy, bỏ bình môi trường vào máy autoclave hấp

Bước 2:

- Sau khi hấp để bình môi trường hạ thấp xuống 50ºC

Bước 3: Dùng micropipette bơm vào mỗi ống nghiệm 9ml môi trường RVS đóng nắp bằng bông gòn

7 Pha nước muối

Gồm các chất

- Muối

- Nước cất

Các bước: pha 15 ống nước muối

Tính toán: 9g muối pha được 1000ml nước muối

Để pha 45ml nước muối cần:

 (45*9)/1000=0.4g

Bước 1:

- Đong 45ml nước cất và đổ vào bình

- Cân 0,4g muối và đổ vào bình lắc đều

Bước 2

- Dùng micropipette bơm vào mỗi ống nghiệm 3ml nước muối, đậy nắp lại

- Bỏ ống nghiệm nước muối vào máy autoclave hấp

II Nuôi cấy vi sinh vật

1 Mục đích:

- Phát hiện sự có mặt của vi sinh vật trong các nguyên liệu vật phẩm cần nghiên cứu

- Tiến hành việc phân giống các vi sinh vật một cách nhanh chóng

- Bảo tồn các giống vi sinh vật thuần khiết

- Nghiên cứu các đặc tính sinh học và sự phát triển từng loại của vi sinh vật

2 Nguyên tắc

- Mọi thao tác nuôi cấy đều phải thực hiện trong điều kiện vô trùng để tránh tiếp xúc các vi sinh vật không mong muốn từ môi trường ngoài

- Môi trường và dụng cụ đều phải khử trùng

- Duy trì điều kiện nuôi cấy để vi sinh vật phát triển tốt nhất

3 Phương pháp nuôi cấy vi sinh vật

3.1 Dụng cụ, môi trường và vật mẫu

Dụng cụ gồm

- Đĩa petri

- Ống nghiệm

- Que cấy

- Đèn cồn

- Tủ ủ

- Kéo

- Kẹp

- Cốc thủy tinh

Môi trường gồm: MA,BA,MSA,RVS

Vật mẫu: phổi 2, phổi 3, phân, ruột, thịt

3.2 Tiến hành thí nghiệm

Cấy mẫu ruột, phân, thịt vào môi trường RVS

Bước 1: Hơ nóng que cấy, kéo, kẹp đạt đến độ vô trùng tuyệt đối, để không làm thay đổi chất lượng vật mẫu

Bước 2: Dùng kéo hơ nóng ấn lên bề mặt vật mẫu, cắt bỏ phần đó, lấy phần vật mẫu phía bên dưới ( lấy mẫu nhỏ vừa đủ )

Bước 3: Cho vào môi trường RVS, đậy bông gòn lại Đem đi ủ với nhiệt độ 37ºC trong 24h

Bước 4: lấy ra quan sát và đọc kết quả

Cấy mẫu ruột, phân, thịt vào môi trường MC và phổi 2, phổi 3, da vào môi trường BA,MSA

Bước 1: Hơ nóng que cấy, kéo, kẹp đạt đến độ vô trùng tuyệt đối, để không làm thay đổi chất lượng vật mẫu

Bước 2: Dùng kéo hơ nóng ấn lên bề mặt vật mẫu, cắt bỏ phần đó, lấy phần vật mẫu phía bên dưới ( lấy mẫu nhỏ vừa đủ )

Bước 3: Dùng que cấy tròn thực hiện cấy trên môi trường thạch

Bước 4: Ủ trong tủ ủ trong 24h ở nhiệt độ 37ºC

Bước 5: lấy ra quan sát và đọc kết quả