Báo Cáo Thực Hành Vi Sinh Vật Học.docx

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ THỰC PHẨM −−−−−−−−−− NHẬT KÝ THÍ NGHIỆM MÔN VI SINH VẬT HỌC Tên đề tài PHÂN LẬP VÀ QUAN SÁT VI SINH VẬT Lớp GVHD NGUYỄN[.]

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ THỰC PHẨM −−−−−−−−−− NHẬT KÝ THÍ NGHIỆM MƠN : VI SINH VẬT HỌC Tên đề tài: PHÂN LẬP VÀ QUAN SÁT VI SINH VẬT Lớp : GVHD: NGUYỄN THỊ LAN HƯƠNG SVTH: Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 14 tháng 12 năm 2020 NHẬT KÝ THÍ NGHIỆM Tên vấn đề : Phân lập quan sát hình thái vi thể, đại thể vi sinh vật mẫu  Gồm :  Nấm mốc  Nấm men  Trực khuẩn gram âm  Trực khuẩn gram dương  Cầu khuẩn  Từ mẫu :  Mẫu có sẵn  Mẫu tự chọn + Nước mía + Điện thoại + Khơng khí + Tay + Nước dưa  Thành viên thực QUY TRÌNH THỰC HIỆN : Pha chế đổ mơi trường nuôi cấy vi sinh vật Nuôi cấy vi sinh vật Quan sát vi sinh vật kính hiển vi quang học Thu nhận báo cáo kết Phân lập vi sinh vật, cấy vi sinh vật vào ống thạch nghiêng Nhuộm mẫu vi sinh vật KẾ HOẠCH : Tuần ( 13/11/2020) : Tìm hiểu nghiên cứu công việc cần làm để phân lập quan sát vi sinh vật Tuần ( 20/11/2020) : Pha môi trường, đổ môi trường vào đĩa petri, cấy mẫu nghiên cứu lên môi trường dinh dưỡng Tuần (27/11/2020) : Quan sát vi sinh vật kính hiển vi, cấy truyền tạo dịng thuần, đổ thêm mơi trường Tuần (04/12/2020) : Tiếp tục cấy truyền, nhuộm màu quan sát vi sinh vật kính hiển vi để xem hình dạng ,màu sắc Tuần (11/12/2020) : Pha tiếp môi trường, đổ môi trường thạch nghiêng cấy ống nghiệm để lưu mẫu Tuần (18/12/2020) : Nộp kết thi vấn đáp Nhật ký thí nghiệm ngày 14 tháng 11 năm 2020 CƠNG VIỆC THỰC HIỆN : + Chuẩn bị dụng cụ, hóa chất để đổ môi trường + Pha chế đổ môi trường vào đĩa petri NGƯỜI THỰC HIỆN : nhóm + Cân hóa chất : + Chuẩn bị đĩa : + Pha môi trường : + Đổ môi trường : PHƯƠNG PHÁP THỰC HIỆN : Chuẩn bị đĩa petri để đổ môi trường  Vật dụng cần chuẩn bị : + Đĩa petri : 15 + Giấy báo  Thao tác thực : Bước : Rừa đĩa petri nước lau khô đĩa khăn cotton 100% Bước : Chuẩn bị giấy báo để gói đĩa petri Bước : Đặt đĩa petri vào giấy báo cách xếp chồng khoảng đĩa Bước : Gói giấy báo chứa đĩa cẩn thận chặt Bước : Đưa đĩa petri gói giấy báo vào tủ sấy nhiệt độ khoảng 180độ C vòng 30 phút Lưu ý : + Gói kĩ đĩa giấy báo (khơng cột dây cao su để tránh bị chảy tránh để giấy báo chạm vào thành tủ sấy gây cháy giấy báo) + Đợi tủ sấy lên 180℃ bắt đầu tính thời gian sấy ( sấy 30’ ) bắt đầu tính thời gian sấy ( sấy 30’ ) Hình ảnh đĩa petri gói Đĩa petri gói giấy báo đem sấy Pha chế đổ mơi trường Mỗi nhóm pha mơi trường chia cho tất nhóm cịn lại lớp sử dụng + Nhóm : Pha mơi trường Cao thịt – Peptone + Nhóm : Pha mơi trường PGA + Nhóm : Pha mơi trường Hansen + Nhóm : Pha mơi trường Cao thịt - Peptone Nhóm chúng em pha 100ml mơi trường Cao thịt – Peptone - Chuẩn bị : +Dụng cụ : + Hóa chất : cốc thủy tinh Nước cất : 100ml ống đong Cao thịt : 0.3g đũa thủy tinh Peptone : 1g ca nhựa NaCl : 0.5g cân kỹ thuật Agar : 2g a Pha hóa chất - Cân cao thịt (0.3g), peptone(1g), NaCl(0.5g), Agar(2g), nước cất (100ml) bỏ riêng lẻ chất - Pha lỗng hóa chất phối trộn thành phần theo trình tự định tránh tương tác trực tiếp thành phần phản ứng tạo kết tủa với nhau.Phối trộn theo nguyên tắc thể tích tăng dần, khuấy đều, sau thêm nước cất đến cho đủ 100ml, tiếp tục khuấy, đổ sang ca nhựa - Đem vào lị vi sóng nấu sơi nhẹ để agar tan hết tồn (cách phút lấy kiểm tra lần, thấy sơi set 30s tránh để bị sơi tràn ngồi ) b Phân phối môi trường vào dụng cụ chứa - Lấy mơi trường khỏi lị vi sóng, nhanh tay đổ mơi trường vào bình thủy tinh - Dùng bơng gịn khơng thấm đậy kín nắp bình lấy giấy báo bọc ngoài, cột dây su lại cho chắn - Hấp tiệt trùng môi trường nồi hấp cao áp vòng 30 phút, nhiệt độ 121 độ C, atm Hình ảnh mơi trường sau đổ vào bình chứa Sử dụng nồi hấp cao áp Bước 1: Kiểm tra nồi hấp, khóa van thơng nồi van xả khí Kiểm tra mực nước, mực nước phải đạt từ 1/2 đến 2/3 ống nước Bước 2: Bật cầu giao Bước 3: Đợi đồng hồ lên atm cho dụng cụ môi trường cần hấp vào nồi Khóa nắp theo nguyên tắc đối xứng bên, mở van thông nồi ( cho khí nồi bên ngồi tràn vào nồi bên ) Bước : Chờ đồng hồ lên atm, mở van xả khí ( 3-5 phút ) sau đóng van xả khí chờ đồng hồ lên 1atm bắt đầu tính Hấp vịng 30 phút ( thời gian hấp phụ thuộc vào thể tích mơi trường ni cấy) Bước 5: Sau 30 phút đóng van thơng nồi , tắt cầu giao, xả khí để đồng hồ xuống atm, mở nắp lấy môi trường khỏi nồi hấp Hình ảnh nồi hấp cao áp c Đổ mơi trường vào đĩa petri Tắt quạt Chọn bề mặt thích hợp trống trãi, khơng có vật dễ cháy xung quanh để tránh cháy, nổ Bước : Khử trùng tay xung quanh mặt bàn cồn 70 độ Bước : Chuẩn bị sấy tiệt trùng hấp tiệt trùng, đèn đĩa petri bình mơi trường cồn Bước : Tay phải trường, tháo nút ngắn vào tránh bị nhiễm vi miệng bình xung cầm bình mơi bơng ( đặt miệng giấy báo để sinh vật khác) , hơ quanh đèn cồn Bước : Tay trái xung quanh 10cm cầm đĩa petri hơ đĩa lửa bán kính Bước : Mở nắp đĩa, đổ từ từ môi trường vào đĩa lớp thạch trải (thể tích môi trường khoảng 12-15ml đĩa độ dày khoảng 2mm) Cầm đĩa petri song song với mặt bàn khéo léo đặt nhẹ xuống bàn tránh đụng vào đĩa đổ môi trường Lưu ý : thực thao tác phải vịng vơ trùng lửa đèn cồn, bán kính khoảng 10cm Hình ảnh đổ môi trường vào đĩa petri - Đợi môi trường đĩa đông lại , ta tiến hành viết nhãn đĩa gồm : tên môi trường, người đổ, ngày đổ KẾT QUẢ : - Thu 15 đĩa môi trường ( Cao thịt, Hansen, PGA ) Có đĩa ( cao thịt, Hansen, 1PGA) môi trường bị dính nắp - Thảo luận với giảng viên : số đĩa lại đủ để tiến hành nuôi vi sinh vật 10