Báo cáo Thực hành Hóa sinh học IUH

Báo cáo Hóa sinh học Lưu Thảo Nguyên Trường đại học công nghiệp Hồ Chí Minh IUH. Hy vọng báo cáo này sẽ giúp các bạn vượt qua được môn học này. Goodluck to you. Các bạn chỉ cần cố gắng nghe thầy hướng dẫn là oke thôi nhé, thầy dễ thương và tận tình lắm nè

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHIỆP TP HỒ CHÍ MINH VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC – THỰC PHẨM -o0o - BÁO CÁO THỰC HÀNH HÓA SINH HỌC GVHD: LƯU THẢO NGUYÊN LỚP: DHTP15B NHÓM: TỔ SVTH: HUỲNH THỊ KIM NGỌC NGUYỄN THỊ BÍCH NGỌC NGUYỄN VÕ THÙY LINH HÀ KIM PHỤNG Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 18 tháng 12 năm 2020 BÁO CÁO THÍ NGHIỆM BÀI THỰC HÀNH PHÂN TÁCH VÀ NHẬN DẠNG CASEIN I QUY TRÌNH THỰC NGHIỆM Phân tách casein sữa 50g sữa vào erlen 250ml lọc lấy kết tủa giấy lọc sấy lượng casein vừa thu 105°C 30 phút gia nhiệt 40°C + 10 giọt CH3COOH thêm 25ml hh diethyl ether- ethanol 1:1 cân lượng casein thô kết tủa để yên, bỏ lớp nước, thu kết tủa lọc vải thu kết tủa vào becher thêm 25ml ethanol 95% khuấy phút Phản ứng biuret cho giọt NAOH 10% cho 15 giọt albumin 2% cho 15 giọt gelatin 2% cho 15 giọt glycine 2% cho giọt CuSO4 1% cho giọt NAOH 10% ống cho giọt CuSO4 1% cho giọt NAOH 10% ống cho 15 giọt casein + pha nước cất cho giọt NAOH 10% cho giọt CuSO4 1% ống cho giọt CuSO4 1% ống cho 15 giọt tyrosine 1% cho giọt NAOH 10% cho giọt CuSO4 1% ống Phản ứng ninhyrin gia nhiệt sôi phút cho 15 giọt glysice 2% gia nhiệt sôi phút cho giọt ninhydrin 0,1% cho giọt ninhydrin 0,1% ống gia nhiệt sôi phút cho 15 giọt albumin 2% cho giọt ninhydrin 0,1% ống cho 15 giọt gelatin 2% ống gia nhiệt sôi phút cho 15 giọt casein +pha nước cất cho giọt ninhydrin 0,1% ống gia nhiệt sôi phút cho 15 giọt tyrosine 1% cho giọt ninhydrin 0,1% ống II.KẾT QUẢ 1.Phân tách casein sữa 1.1 Trọng lượng sữa : 50g 1.2 Trọng lượng khô casein: Giấy lọc chứa casein sấy khô - giấy lọc ban đầu sấy khô = trọng lượng khô casein 4.776 - 1.276 = 3.5 (g) 1.3 Hiệu suất thi hồi casein (%): ( trọng lượng casein : trọng lượng sữa ) * 100 = % Casein ( 3.5 : 50) * 100 = % Phân tích thành phần hóa học protein 2.1 Phản ứng Biuret Substance 2% Glycine Color Formed -NAOH: tím nhạt -CuSO4: xanh da trời nhạt 2% Gelatin -NAOH: suốt -CuSO4: tím 2% Albumin -NAOH: trắng ngà -CuSO4: tím nho Casein + H2O -NAOH: trắng sữa nhạt -CuSO4: tím sữa 1% Tyrosine -NAOH: suốt pha tím nhạt -CuSO4: xanh nhạt Hóa chất cho kết dương tính với thuốc thử: Gelatin, Albumin, Casein+H2O 2.2 Phản ứng Ninhydrin Substance 2% Glycine Color Formed -Ninhydrin: tím nhạt đổi sang tím đậm -sau gia nhiệt : xanh đậm 2% Gelatin -Ninhydrin: suốt -sau gia nhiệt: không đổi màu 2% Albumin -Ninhydrin: xám xanh nhạt đổi sang xanh tím nhạt -sau gia nhiệt: xanh đậm Casein + H2O -Ninhydrin: trắng đục -sau gia nhiệt: tím nhạt 1% Tyrosine -Ninhydrin: suốt -sau gia nhiệt: khơng đổi màu Hóa chất cho kết dương tính với thuốc thử: Glycine, Albumin BÁO CÁO THÍ NGHIỆM BÀI THỰC HÀNH XÁC ĐỊNH NITO TỔNG SỐ THRO PP KJELDAHL (XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN THƠ) I.QUY TRÌNH THỰC NGHIỆM Hút 25ml H2SO4 0,01N vào erlen + giọt PP 0,1% lắp erlen vào ống sinh hàn ngập dung dịch bật nước lạnh chảy vào ống sinh hàn tráng phễu lần nước cất mở khóa từ từ cho dung dịch chảy vào bình c (mẫu thật) cho 10ml (NH4)2SO4 (mẫu không) cho 10ml H2O vào phễu b cho vào phễu giọt PP0,1% cho 10ml NaOH 30% vào phễu (mở khóa từ từ cho dd chảy vào bình c tráng phễu) cho nước ngập 2/3 bình đun ( chờ nướ sơi bắt đầu tính giờ) lấy erlen định phân với NaOH 0,1N đến có màu hồng nhạt hạ erlen để thêm phút (rửa đầu vịi nước cất) để hỗn hợp bình c lơi 15 phút II.KẾT QUẢ Kết chuẩn độ mẫu thử thật: Thể tích NaOH chuẩn độ Trung bình lượng NaOH chuẩn độ Lần Lần 12.5 14 13.25 Kết chuẩn độ mẫu thử khơng: Thể tích NaOH chuẩn độ Lần Trung bình lượng NaOH chuẩn độ 28 Hàm lượng Nito có mẫu: Số gam Nito 100ml đ vô hóa (g/100ml) Nồng độ Protein nguyên liệu với m=1ml (g/1000ml) 14 x ΔV x 10-4 = 14 x 14,75 x 10-4 = 0,02065 ( 1,4 x ΔV x F ) / m = ( 1,4 x 14,75 x 6,25 ) /1 = 129,0625 BÁO CÁO THÍ NGHIỆM BÀI THỰC HÀNH KHẢO SÁT HOẠT TÍNH CỦA ENZYME PROTEASE I.QUY TRÌNH THỰC HIỆN Cắt, nghiền Cân 10g thơm Dịch lọc định mức với 100ml nước cất Lọc qua vải vắt nước Li tâm 6000v/p 10 phút Lấy dịch bên có chứa enzyme bromeline 1.Dựng đường chuẩn Tyrosine 0,5ml Tyrosin chuẩn 4,5ml dd HCl 0,2N 10ml NaOH 0,5N ống 1 1ml Tyrosin chuẩn 4ml dd HCl 0,2N 10ml NaOH 0,5N ống 1,5ml Tyrosin chuẩn 10ml NaOH 0,5N 3,5ml dd HCl 0,2N ống 2ml Tyrosin chuẩn 10ml NaOH 0,5N 3ml dd HCl 0,2N ống 2,5ml Tyrosin chuẩn 2,5ml dd HCl 0,2N 10ml NaOH 0,5N 0ml Tyrosin chuẩn 5ml dd HCl 0,2N ống 10ml NaOH 0,5N ống Lắc hút từ ống nghiệm 3ml cho vào ống nghiệm Thêm vào ống 1ml thuốc thử Folin Lắc mạnh, sau 10 phút Đo OD bước sóng 660nm 2.Xác định lượng Tyrosin dung dịch nghiên cứu ỐNG THỬ THẬT (1) ỐNG THỬ KHÔNG (2) 5ml Casein 1% 5ml casein 1% để yên 30', li tâm 0ml TCA 5% để yên 30', li tâm 10ml TCA 5% 10ml TCA 5% 1ml enzyme mẫu 0ml TCA 5% 1ml enzyme mẫu lắc đều, giữ 35 độC/30' 5ml dịch lọctừ ống 10ml NaOH 0,5N lắc đều, giữ 35 độC/30' 5ml dịch lọc từ ống ỐNG A 3ml từ ống A 1ml Folin 10ml NaOH 0,5N ỐNG B 3ml từ ống B ỐNG C Lắc mạnh, sau 10’ đo OD bước sóng 660nm 1ml Folin ỐNG D II.KẾT QUẢ * ỐNG NGHIỆM OD (λ:660nm) -0.041 -0.03 0.062 0.113 0.124 ΔOD = ODTT – ODTK = 0,180 – 0,162 = 0,018 Phương trình: y = 0,0671x – 0,0459 Thay y = 0,018 ➔ x = 0,9523 ( microTyrosin ) * Hoạt độ Enzyme Protease tính theo cơng thức: Hđ Protease = 0,9523*(10+5)*100 = = 2,8569 10*10 * Phương pháp dựa thủy phân protein enzym Bromelin có dịch nghiên cứu, tiếp làm vơ hoạt hóa enzym kết protein chưa bị thủy phân TCA Định lượng sản phẩm tạo thành phản ứng thủy phân phản ứng màu với thuốc thử Folin Từ kết ta thu đường chuẩn Tyrosin để định lượng sản phẩm enzym xúc tác tạo thành BÁO CÁO THÍ NGHIỆM BÀI THỰC HÀNH ĐỊNH LƯỢNG ĐƯỜNG KHỬ BẰNG PHƯƠNG PHÁP DNS I.QUY TRÌNH THỰC HIỆN Cân 1g nho 1)Cắt, nghiền Cho 20ml Chưng cách thủy hh 20 phút 2)𝐻2 𝑆𝑂4 10% Dùng quỳ tím so bảng màu nước cất ngập mẫu 1)NaOH 20% nhỏ giọt 2)pH=6,5-7,5 (trung hòa) Chưng cách thủy đến từ vàng =>nâu đỏ Cho 0,5ml Li tâm Lấy 0,5ml dd đường bỏ vô ống nghiệm DNS Định mức hh thành 100ml 10 phút 1)Để nguội 2)Cho 4ml nước cất Đo mật độ quang 540nm Chuẩn bị 12 ống nghiệm Ống Ống Ống Ống Ống Ống Dd Glucose(0,5mg/ml) Nước cất (ml) Lần 1: ống Lắc hút 0,5 ml từ ống nghiệm cho vào ống nghiệm Lần 2: ống Hỗn hợp (ml) DNS (ml) Ống Ống Ống Ống Ống Ống 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Đo mật độ quang bước sóng 540nm II.KẾT QUẢ ỐNG NGHIỆM Nho OD (λ:540nm) 0,005 0,055 0,058 0,073 0,088 0,055 * Phương trình: y = 0,0002x + 0,0003 Thay y = 0,055 ➔ x = 273,5 (ug/g) * Lượng đường khử 1g mẫu: Cmẫu = x.K = x V n m = 273,5 100 100 = 273500 (ug/g) = 273,5 (mg/g) 10 - Ta tìm x (ug/g) đường khử nhân hệ số pha loãng - Ta hàm lượng đường - Ta thấy Cmẫu > x , Cmẫu = 273500 => Cmẫu = 1000x x 273,5  Hàm lượng glucozo mẫu lớn 1000 lần so với hàm lượng glucozo thực tế BÁO CÁO THÍ NGHIỆM BÀI THỰC HÀNH ĐỊNH LƯỢNG MỌT SỐ CHỈ SỐ DẦU MỠ I.QUY TRÌNH THỰC HIỆN Xác định số acid 3giọt PP 25ml cồn 5g dầu 3giọt PP 25ml cồn 5g dầu Chuẩn độ NaOH 0,1N đến có màu hồng bền vững *Thể tích NaOH dùng để chuẩn độ Mẫu thử Thể tích NaOH 0,9 0,8 Chỉ số xà phịng hóa mẫu vật A= 5,61.a = 5,61 0,85 = 0,9537 b Trong đó: 5,61:số mg NaOH tương ứng với 1ml NaOH 0,1N a:số ml NaOH 0,1N sử dụng định lượng b:trọng lượng chất thử để định lượng (g) Trung bình thể tích NaOH V=0,85ml Chỉ số Peroxide Erlen thử thật 1)1,5g dầu Erlen thử thật 2)10ml hh Cloroform& Acid acetid 1)1,5g dầu 2)10ml hh Cloroform& Acid acetid 3)1ml KI 3)1ml KI Erlen thử không 1)0g dầu 2)10ml hh Cloroform& Acid acetid 3)1ml KI Đậy nắp erlen, lắc 1phút Để yên bóng tối 5phút Thêm vào 50ml nước cất, giọt hồ tinh bột 1% Lắc Chuẩn độ 𝑁𝑎2𝑆2 𝑂3 0,1N màu Thể tích 𝑵𝒂𝟐 𝑺𝟐 𝑶𝟑 0,1N cần thiết để chuẩn độ mẫu thử Mẫu thử Thật Thật Thử không Trọng lượng béo (g) 1,5 1,5 𝑉𝑁𝑎2 𝑆2 𝑂3 (𝑚𝑙) 4,2 4,1 0,5 Trọng lượng nước cất (ml) 50 50 50 Chỉ số peroxide mẫu vật : V= 4,2+4,1 = 4,15 PoV= 0,05×(V-v)×1000 = 0,05×(4,15-0,5)×1000 = 12,167 p×10 1,5×10 Trong đó: 0,05 số milimol peroxide tương ứng với 1ml 𝑁𝑎2𝑆2 𝑂3 chuẩn V:Số mL 𝑁𝑎2𝑆2 𝑂3 0,1N dùng để chuẩn độ mẫu thử thật v: Số mL 𝑁𝑎2𝑆2 𝑂3 0,1N dùng để chuẩn độ mẫu thử trắng p:Trọng lượng mẫu thử dùng để định lượng ... đổi màu Hóa chất cho kết dương tính với thuốc thử: Glycine, Albumin BÁO CÁO THÍ NGHIỆM BÀI THỰC HÀNH XÁC ĐỊNH NITO TỔNG SỐ THRO PP KJELDAHL (XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN THƠ) I.QUY TRÌNH THỰC NGHIỆM... Tyrosin để định lượng sản phẩm enzym xúc tác tạo thành BÁO CÁO THÍ NGHIỆM BÀI THỰC HÀNH ĐỊNH LƯỢNG ĐƯỜNG KHỬ BẰNG PHƯƠNG PHÁP DNS I.QUY TRÌNH THỰC HIỆN Cân 1g nho 1)Cắt, nghiền Cho 20ml Chưng... lượng glucozo mẫu lớn 1000 lần so với hàm lượng glucozo thực tế BÁO CÁO THÍ NGHIỆM BÀI THỰC HÀNH ĐỊNH LƯỢNG MỌT SỐ CHỈ SỐ DẦU MỠ I.QUY TRÌNH THỰC HIỆN Xác định số acid 3giọt PP 25ml cồn 5g dầu 3giọt