BÀI THU HOẠCH THỰC HÀNH VI SINH THÚ Y I Thành viên nhóm STT Họ và Tên MSSV 1 Nguyễn Quốc Quyền 20112342 2 Huỳnh Vĩnh Phước 3 Nguyễn Âu Ngọc Phụng 201123 4 Lê Thanh Sang 20112344 5 Nguyễn Hoài Sang 201.
BÀI THU HOẠCH THỰC HÀNH VI SINH THÚ Y I II Thành viên nhóm STT Họ Tên MSSV Nguyễn Quốc Quyền 20112342 Huỳnh Vĩnh Phước Nguyễn Âu Ngọc Phụng 201123 Lê Thanh Sang 20112344 Nguyễn Hoài Sang 20112345 Nội dung học Ngày 1: Nuôi cấy mẫu môi trường tăng sinh môi trường chọn lọc, nhuộm Gram quan sát kính hiển vi - Nội dung 1: Mẫu cần phân lập + Mẫu trại 1, 2: nuôi cấy môi trường MCA XLD Môi trường XLD MCA Màu Mọc yếu/Không mọc Tâm đen viền hồng Hồng Vàng Nghi ngờ E coli Salmonella E coli Salmonella + Mẫu trại 3: nuôi cấy môi trường BA MSA + Mẫu phịng khám: ni cấy mơi trường MHA BA Môi trường MHA BA Màu Màu xanh Không đổi màu Dung huyết beta Nghi ngờ pseudomonas Staphylococcus aureus pseudomonas Staphylococcus aureus Cấy vi khuẩn: Dùng tăm quét lên đĩa đường góc nhỏ, sau bỏ tăm bông, tiệt trùng que cấy cách đốt thẳng đứng lửa đèn cồn để nguội sau kéo vi khuẩn, đốt que cấy lần để nguội kéo vi khuẩn đường cấy thứ Cấy để tạo khuẩn lạc rời Đem ủ 37 độ C 24h - Nội dung 2: nhuộm Gram quan sát kính hiển vi + Các bước thực Lấy tăm quét lên lam hong khơ, nhuộm Nhuộm dung dịch Crystal Violet 60s rửa nước Nhuộm dung dịch Lugol 30s để củng cố độ bám thuốc nhuộm Crystal Violet, rửa nước Tẩy cồn 3-5 giây, rửa nước Nhuộm dung dịch Saframin 60s, rửa nước để khơ Xem kính hiển vi Quan sát vật kính 100x với giọt dầu, vi khuẩn gram dương bắt màu tím, gram âm bắt màu hồng Ngày 2: Quan sát khuẩn lạc nhuộm Gram, quan sát kính hiển vi, cấy qua mơi trường thử phản ứng sinh hóa, thử phản ứng coagulase - Nội dung 1: Quan sát khuẩn lạc - Nội dung 2: Nhuộm Gram quan sát kính hiển vi + Các bước thực Dùng que cấy tròn hơ qua đèn cồn đến đỏ chấm vào ống đựng nước muối sinh lý sau chấm lên lam tiếp tục hơ que cấy qua đèn cồn đến nóng đỏ, để nguội sau lấy khuẩn lạc mẫu nuôi cấy chấm lên lame vị trí giọt nước muối sinh lý khuấy đều, hong khơ đèn cồn, nhuộm Nhuộm dung dịch Crystal Violet 60s rửa nước Nhuộm dung dịch Lugol 30s để củng cố độ bám thuốc nhuộm Crystal Violet, rửa nước Tẩy cồn 3-5 giây, rửa nước Nhuộm dung dịch Saframin 60s, rửa nước để khơ xem kính hiển vi Quan sát vật kính 100x với giọt dầu, vi khuẩn gram dương bắt màu tím, gram âm bắt màu hồng - Nội dung 3: Cho mẫu bệnh trại 1, cấy qua môi trường thử phản ứng sinh hóa + Các bước thực TSI: dùng que cấy thẳng hơ qua đèn cồn đến nống đỏ sau lấy khuẩn lạc mẫu bệnh ghim que cấy vào để tạo môi trường yếm khí sau gơ que cấy bề mặt thạch nghiêng Indol: dùng que cấy tròn hơ qua đèn cồn đến nống đỏ sau lấy khuẩn lạc mẫu bệnh cho que cấy vào môi trường khuấy MR: làm tương tự môi trường Indol VP: làm tương tự môi trường Indol Ci: dùng que cấy tròn hơ qua đèn cồn đến nống đỏ sau lấy khuẩn lạc mẫu bệnh gơ bề mặt thạch nghiêng Lưu ý sử dụng khuẩn lạc cho môi trường để đảm bảo xác - Nội dung 4: thử phản ứng coagulase mẫu bệnh trại + Các bước thực Lấy khuẩn lạc từ môi trường MSA BA Đốt que cấy sau để nguội khều nhẹ khuẩn lạc chấm que vào ống huyết tương (không xoay để tránh bị đứt gãy sợi huyết) Ngày 3: đọc phản ứng sinh hóa kết - Nội dung 1: đọc phản ứng sinh hóa + bước thực TSI: quan sát Đỏ/Vàng (kiềm/Acid) + H2S Vàng/Vàng (Acid/Acid) + sinh Indol: nhỏ vào giọt Kovac’s Đỏ (dương tính) Vàng (âm tính) MR: nhỏ vào giọt MethylRed Đỏ (dương tính) Vàng (âm tính) VP: nhỏ vào giọt α-Napthol, nhỏ thêm giọt KOH 40% Đỏ (dương tính) Vàng (âm tính) Ci: quan sát Xanh dương (dương tính) Xanh (âm tính) - Nội dung 2: kết MCA XLD Nhuộm TSI Indol MR VP Ci Hồng Mọc ít/Khơng mọc Trực Vàng/Vàng +sinh +/+ - Vàng Tâm đen Trực Đỏ/Vàng + H2S + + Kết Quả E.coli Salmonella III Báo cáo kết Mẫu bệnh trại 1,2 Nghi vấn: Mẫu bệnh chứa lại vi khuẩn E coli Salmonella a Nuôi cấy mẫu bệnh phẩm hai môi trường MCA (MacConKeyAgar) XLD (Xylose Lysine Desoxycholate) Kết XLD KẾT QUẢ XLD MCA MCA Màu Mọc Hồng b Nhộm Gram Kết quả: Vi khuẩn bắt màu hồng Nghi ngờ E.coli Kết luận:Vi khuẩn Gram âm c Tác dụng với Indol, MR, Ci Phương pháp Cho mẫu bệnh tác dụng với từ chất TSI, Indol, MR, VP, Ci TSI: vi khuẩn sử dụng loại đng, có xuất màu Vàng/Vàng sinh Indol: màu vàng (âm tính) VP: màu vàng (âm tính) MR: Màu đỏ (dương tính) Ci: Xanh (âm tính) Kết luận: Mẫu bệnh phẩm lấy trại 1,2 chứa vi khuẩn E coli Mẫu bệnh trại a) Nuôi cấy mẫu bệnh phẩm hai môi trường MSA môi trường BA KẾT QUẢ Môi trường MSA BA Tình trạng Khuẩn lạc nhỏ, màu vàng Gây dung huyết Nghi ngờ Staphylococus aureus MSA BA b) Nhộm Gram Kết Tụ cầu khuẩn gram dương Kết luận: Staphylococus aureus c) Cấy Khuẩn lạc vào môi trường huyết tương thỏ (phản ứng coagulase) Kết : Mẫu khơng kết tủa Giải thích: khơng có vi khuẩn Staphylococus aureus mẫu độc lực vi khuẩn thấp nên không đông đặc Kết luận: Mấu trại chứa vi khuẩn Staphylococus aureus Mẫu phòng khám, bệnh viện Mẫu lấy từ dịch viêm tác nhân gây viêm nhiễm: Staphylococcus aureus (tụ cầu vàng) Pseudomonas (trực khuẩn mủ xanh) Các trường hợp xảy Môi trường MHA BA Màu Màu xanh Không đổi màu Nghi ngờ pseudomonas Staphylococcus aureus Dung huyết β pseudomonas Staphylococcus aureus MHA BA KẾT LUẬN Vì mơi trường thạch máu có gây dung huyết beta mơi trường MHA đổi màu thành xanh(lơ) nên tác nhân gây bệnh pseudomonas b) Nhộm Gram Kết Trực khuẩn Gram âm bắt màu hồng Kết luận: Ở mẫu phòng khám chứa pseudomonas spp ... bước thực L? ?y khuẩn lạc từ môi trường MSA BA Đốt que c? ?y sau để nguội khều nhẹ khuẩn lạc chấm que vào ống huyết tương (không xoay để tránh bị đứt g? ?y sợi huyết) Ng? ?y 3: đọc phản ứng sinh. .. vi khuẩn Staphylococus aureus Mẫu phòng khám, bệnh vi? ??n Mẫu l? ?y từ dịch vi? ?m tác nhân g? ?y vi? ?m nhiễm: Staphylococcus aureus (tụ cầu vàng) Pseudomonas (trực khuẩn mủ xanh) Các trường hợp x? ?y. .. thực L? ?y tăm quét lên lam hong khơ, nhuộm Nhuộm dung dịch Crystal Violet 60s rửa nước Nhuộm dung dịch Lugol 30s để củng cố độ bám thuốc nhuộm Crystal Violet, rửa nước T? ?y cồn 3-5 gi? ?y,