Báo cáo thí nghiệm sinh học Đại cương tiểu nhóm 1 nhóm 505

Chúng có thể chứa một lượng nhỏ chất lỏng và thường được sử dụng trong các thí nghiệm khoa học.. Đĩa petri – Petri dish Đĩa Petri là một loại thủy tinh hình trụ, nông, được sử dụng tron

TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG

Khoa Dược

Thí nghiệm Sinh học Đại cương (H01212)

BÁO CÁO CUỐI KÌ

GVHD: Đỗ Bích Hằng

Sinh viên thực hiện:

Đinh Nhi – H2300113

Lê Ngọc Hiế – H2300048 Họ và Tên - MSSV u

Phan Huỳnh Như – H2300127 Họ và Tên - MSSV

Trương Khánh Linh – H2300080 Họ và Tên - MSSV

Vưu Nguyễn Giáng My - H2300094

Thành phố Hồ Chí Minh, tháng , năm 11 2023

Mục lục

I TÓM TẮT - GIỚ I THI U CHUNG Ệ 2

II THÍ NGHI M 1 M T S THI T B THÔNG D Ệ Ộ Ố Ế Ị ỤNG VÀ THAO TÁC CƠ BẢN TRONG THÍ NGHIỆM SINH H C Ọ 3

III THÍ NGHIỆ M 2 KÍNH HI N VI QUANG H C VÀ CÁCH S D Ể Ọ Ử ỤNG 11

IV THÍ NGHI M 3 QUAN SÁT T Ệ Ế BÀO NHÂN SƠ VÀ NHÂN THỰC 15

V THÍ NGHI M 4 QUAN SÁT QUÁ TRÌNH NGUYÊN PHÂN VÀ GI Ệ ẢM PHÂN 19

VI THÍ NGHI M 5 THÀNH PH N H Ệ Ầ ỮU CƠ CỦA T BÀO NHÂN TH C Ế Ự 22

VII THÍ NGHI M 6 V N CHUY N QUA MÀNG Ệ Ậ Ể 26

VIII THÍ NGHI M 7 TÁCH CHI T DNA T T Ệ Ế Ừ Ế BÀO ĐỘNG VẬT 28

IX THÍ NGHI M 8 TÁCH CHI T RNA TOÀN PH N C A LÁ Ệ Ế Ầ Ủ 30

X KẾT LUẬN 33

1 Tóm tắt

Báo cáo này dùng để trình bày các kết quả thí nghiệm cũng như kiến thức đã được tiếp

thu trong quá trình học môn Thí nghiệm Sinh học Đại cương của các sinh viên thuộc tiểu nhóm 1 nhóm 505

2 Giới thiệu chung

Nhằm học tốt được môn Sinh học Đại cương là khoa học tự nhiên nghiên cứu về sự sống

và các cơ thể sống ngoài việc nắm bắt những lý thuyết cơ bản ra thì việc được thực hành trong

phòng thí nghiệm lại mang đến cho ta cơ hội để ếp xúc, xây dựng nền kiến thức vững chắc hơn ticũng như được học tập ực tiếp, tập làm quen với thí nghiệm và viết những báo cáo khoa học tr

Mục đích của bài báo cáo này chính là trình bày lại những kiến thức cơ bản mà chúng em đã

được thực hành, học tập trong phòng thí nghiệm

3 Một số thi ết bị và thao tác cơ bản trong thí nghiệm sinh học

3.1 Giới thiệu

3.1.1 M t s d ng c phòng thí nghi m ộ ố ụ ụ ệ

I Ống nghi m Test tub ệ –

Là dụng cụ ủy tinh dùng trong phòng thí nghiệm để lấy mẫu thử và các phản ứng hóa thhọc Các ống nghiệm này được phát triển bởi một Nhà Vật lý và Hóa học nổi tiếng người Anh -

“Michael Faraday” (1791-1867)

Ống nghiệm còn được gọi là ống đun sôi Đây là những ống thanh mảnh với đáy hình chữ

U và phần trên mở Chúng có thể chứa một lượng nhỏ chất lỏng và thường được sử dụng trong các thí nghiệm khoa học

Đặc trưng củ ống nghiệm như:a

• Dễ dàng và an toàn để ử ụng s d

• Chống nóng

• Chống hóa ch t ấ

• Kích thước đồng nhất

• Lý tưởng cho việc sử dụng lâm sàng và công nghiệp

• Thân thi n vệ ới môi trường

II Becher Beakers –

Beaker là dụng cụ làm việc bằng thủy tinh của bất kỳ phòng thí nghiệm nào Chúng có nhiều kích cỡ và được sử dụng để đo thể tích chất lỏng Beaker không đặc biệt chính xác Một cốc thông thường có độ chính xác trong khoảng 10%

▪ Đáy cốc phẳng giúp dễ dàng đặt trên các bề mặt phẳng như bàn thí nghiệm hoặc bếp điện

▪ Vòi giúp d ễ dàng đổ chấ ỏt l ng sang các v t ch a khác ậ ứ

▪ Phần mở r ng giúp b n d dàng thêm v t li u vào c c ộ ạ ễ ậ ệ ố

Vì vậy, cố thường được sử dụng để ộn và chuyển chất lòng.c tr

III Bình Erlen Erlenmeyer Flasks –

Loại bình này có cổ hẹp, đáy phẳng Nó tốt cho việc xoáy, lưu trữ và làm nóng chất lỏng Bình Erlenmeyer có nhiều kích cỡ, có thể có hoặc không có đánh dấu thể tích Chúng có độ chính xác khoảng 10%

IV Đĩa petri – Petri dish

Đĩa Petri là một loại thủy tinh hình trụ, nông, được sử dụng trong phòng thí nghiệm để nuôi cấy các vi sinh vật và tế bào khác nhau

Chiếc đĩa được phát minh bởi một nhà vi khuẩn học người Đức tên là Julius Richard Petri

Kể từ khi được phát minh, đĩa Petri đã trở thành một trong những thiết bị phòng thí nghiệm quan

sử dụng cho kính hiển vi huỳnh quang

Các slide của kính hiển vi tiêu chuẩn có kích thước khoảng 75 25mm (3 1 in) và dày  1mm

Các kích thước mụ đích đặc biệt có sẵn:c

▪ 75  50mm để ử ụng đị s d a chất

Pipette là một dụng cụ phòng thí nghiệm được sử dụng để đo hoặc chuyển một lượng nhỏ

chất lỏng, với thể tích mililit (mL), microlit (μL)

Các loại Pipette:

• Pasteur pipettes (unit/mL):

▪ Một pipette làm bằng thủy tinh mỏng có đầu thon nhọn; M t s b ng nh a; Chúng ộ ố ằ ựthường được thải bỏ sau khi sử dụng để ngăn ngừa khả năng nhiễm bẩn / lây nhiễm chéo và ch y u ủ ế

▪ Được s d ng khi b n mu n x lý các dung d ch riêng l , ch ng hử ụ ạ ố ử ị ẻ ẳ ạn như chuyển môi trường và lấy m u ẫ

• Komagome pipettes ( unit/mL : )

▪ Nó được làm b ng th y tinh ho c nh a, có m t ph n phình tròn gằ ủ ặ ự ộ ầ ần đầu c a thân ủ pipette

để phân tán b t khí trong ch t l ng và có th đo ch t l ng có b t m t cách an toàn ọ ấ ỏ ể ấ ỏ ọ ộDùng để hút và xả chất lỏng Các loại dung tích 2 mL, 5 mL là phổ biến

• Measuring pipettes (unit/mL):

(i.e Serological Pipettes, Mohr Pipettes / Graduated Pipettes)

▪ Pipette thẳng được làm b ng th y tinh ho c nh a v i th ằ ủ ặ ự ớ ể tích tăng dần, được đánh dấu dọc theo ống và có thể đo chấ ỏng khá chính xác t l

▪ Được s d ng x lý thu c th ho c dử ụ ử ố ử ặ ịch vi khuẩn có kh ảnăng gây hại / nguy hiểm

• Volumetric pipettes:

▪ Một pipette làm b ng th y tinh và có m t vằ ủ ộ ạch chia độ duy nh t trên ấ ống th y tinh phía ủ

- Thể tích được đặt bằng cách xoay bánh xe lăn hoặc nút ấn

b) L ắp đầu côn (tips)

- Đẩy ph n giữ ầ đầu tips vào đầu tips ằng chuy b ển động xoắn nhẹ để đảm b o liên k ả ết chắc chắn và kín hơi

d) Phân phối dung d ch ị

- Đặt đầu mút vào thành bên trong của bình nhận (theo góc từ 10° đến 40°)

- Nhấn nút n t t và nh nhàng đến điểấ ừ ừ ẹ m dừng đầu tiên

- Chờ ít nhất một giây, sau đó nhấn nút nhấn đến điểm dừng th ứ hai để đẩy hết ch t l ng ấ ỏcòn sót l i khạ ỏi đầu ống Nhấn nút n xu ng hoàn toàn và (trong khi tháo ấ ố pipet ẽ đầu ) v hút d c theo b m t bên trong c a bình ọ ề ặ ủ

- Thả nút n nh ấ ẹnhàng Đẩy đầu ra bằng cách nh n mấ ạnh vào đầu của nút đẩy

3.1.2 M t s nguyên t c pha hóa ch t ộ ố ắ ấ

I Chất lượng của hóa chất

Là chất lượng dùng cho các thí nghiệm sinh học phân tử (molecular biology grade)

II Tiết trùng

Hóa chất được pha với nước cất hai lần và khử trùng ở điều kiện thông thường Đối với một số hóa chất không thể thanh trùng bằng nhiệt, việc thanh trùng được tiến hành với những phin lọc có đường kính lỗ lọc là 0,2µm hoặc 0,45µm

III. Dung d ch m - ị ẹ Stock solution

Các dung dịch thường được pha và bảo quản dưới dạng đậm đặc (dung dịch mẹ) Dung dịch mẹ được pha loãng với nước cất hai lần khử trùng để đạt nồng độ cần mỗi lần sử dụng

IV Bảo quản

Dung dịch đã pha có thể bảo quản ở nhiệt độ phòng thí nghiệm, ở nhiệt đô 40 C hoặc nhiệt độ lạo nh sâu – 20 C theo khuyến cáo cho từng loại hóa chất Dung dịch bảo quản ở – 20 C thường đượo o c phân thành những phân đọan nhỏ (aliquot) Mỗi lần sử dụng chỉ cần giải đông một phân đoạn

Máy khuấy đĩa nóng hoặc máy khuấy từ đĩa nóng là một dụng cụ phòng thí nghiệm thường được

sử dụng để khuấy và làm nóng dung dịch đồng thời

II Máy nước cất

Máy chưng cất nước trong phòng thí nghiệm, làm nóng nước thành pha hơi dễ bay hơi do

đó tách nó khỏi các tạp chất không bay hơi

III Máy ti t trùng ệ – Autoclave

Nồi hấp còn được gọi là máy tiệt trùng bằng hơi nước và thường được sử dụng cho các ứng dụng

y tế hoặc công nghiệp

IV Bể cách th y ủ – Water bath

Bể cách thủy là một thiết bị thí nghiệm dùng để ủ mẫu ở nhiệt độ không đổi trong thời gian dài

V Tủ s y ấ – Oven

Được sử dụng để khử trùng chất thải nguy hiểm sinh học, dụng cụ mổ xẻ ặc môi trường / thuốho c thử cho các xét nghiệm vô trùng

VI Máy lắc ổn định nhiệt – Shaking incubator

Tủ ấm lắc được thiết kế để ủ đồng thời và lắc hoặc khuấy mẫu

VII Tủ nhi ủ ệt – Incubator

Tủ ấm là một thiết bị dùng để nuôi cấy và duy trì nuôi cấy vi sinh hoặc nuôi cấy tế bào

VIII Tủ cấy vô trùng – Clean bench

Tủ cấy vô trùng là bàn làm việc khép kín được kiểm soát để ngăn bụi bẩn trong không khí và môi trường xung quanh bám vào hoặc làm ô nhiễm các vật dụng đang làm việc

IX Máy ly tâm – Centrifuge

Máy ly tâm là một thiết bị trong phòng thí nghiệm được sử dụng để tách chất lỏng, khí hoặc chất lỏng, dựa trên tỷ trọng

3.2 Quy trình: Thao tác pha loãng

▪ Pipette thủy tinh 10mL 1 cái

▪ Ống bóp cao su 1 cái

▪ Micropepette p1000 1 cái

▪ Hộp đầu tips p1000 1 hộp

3.2.2 Thao tác

• Đặt 5 ng nghiố ệm vào khay đựng ống nghi m ệ

• Dùng pipette thủy tinh cho 9 mL nước c t vào mấ ỗi ống nghiệm Dùng micropipette cho 1

mL dung d ch CuSO 1% vào ng nghi m th nh t và lị 4 ố ệ ứ ấ ắc đều

• Dùng micropipette hút 1 mL dung d ch ng nghi m th nh t chuy n sang ng nghiị ở ố ệ ứ ấ ể ố ệm thứ 2

3.3 Kết quả

Hình 3 5 ống nghiệm sau khi pha

loãng theo dãy nồng độ 1

có thể đóng mở để điều chỉnh lượng ánh sáng chiếu tới mẫu vật

Khi màng điều sáng mở: hình ảnh sẽ sáng; Khi đóng lại: hình ảnh sẽ bị mờ

Thị kính là thấu kính mà bạn nhìn qua Kính hiển vi có một thị kính là kính hiển vi một mắt và kính hiển vi có hai thị kính là kính hiển vi hai mắt Thị kính thường phóng đại hình ảnh lên

10 lần

Thân kính hiển vi là một vỏ kim loại để ánh sáng truyền qua ống nhòm Trong kính hiển vi

có ống thân uốn cong và ống nhòm nghiêng, ống thân chứa gương và lăng kính chuyển hướng ánh sáng tớ ống nhòm.i

4.1.4 H ệ thố ng xem và ghi

Hệ ống xem và ghi (nếu có ), sẽ chuyển đổi bức xạ thành hình ảnh có thể xem được và thghi lại vĩnh viễn Hệ ống xem và ghi hình thường bao gồm một máy ảnh hoặc màn hình video thHầu hết các kính hiển vi học sinh không có hệ ống quan sát và ghi lạth i

4.1.5 S d ng kính hi n vi ph c h ử ụ ể ứ ợp đứ ng (upright compoundmicroscope)

Bước 1: Xoay măm quay để gắn vật kính 10 ( Đảm bảo măm quay sẽ dừng lại bằng một tiếng tách rõ ràng)

Bước 2: Đặt mẫu lên bàn để mẫu

Bước 3: Xoay núm trục X và núm trục Y để di chuyển mẫu vật vào đường ánh sáng

Bước 4: Bật công tắc thành “I” (BẬT) và điều chỉnh độ sáng bằng núm điều chỉnh cường độ ánh sáng

Bước 5: Xoay các núm điều chỉnh thô và tinh để đưa mẫu vào tiêu cự

Bước 6: ều chỉnh khoảng cách đồng tử.Đi

Bước 7: Điều chỉnh vòng hội tụ

Bước 8: Canh giữa trường sáng

Bước 9: ều chỉnh khẩu độ màng chắn và màng chắn trường sáng.Đi

4.1.6 S d ng v t kính soi d u (100 ) ử ụ ậ ầ 

Bước 1: Tập trung vào mẫu bằng cách chuyển vật kính từ công suất thấp nhất sang công suất cao

nhất

Bước 2: Trước khi đặt vật kính soi dầu vào đường dẫn ánh sáng, hãy nhỏ một giọt dầu soi được

cung cấp với mô hình kết hợp vật kính 100 lên mẫu vật tại khu vực cần quan sát.

Bước 3: Xoay măm quay để gắn vật kính soi dầu, sau đó lấy nét bằng núm điều chỉnh tinh Bước 4: Sau khi sử dụng, loại bỏ dầu khỏi vật kính phía trước bằng cách lau bằng gạc hơi ẩm với

• Luôn bắt đầu b ng cách làm s ch th kính và v t kính b ng gi y th u kính ằ ạ ị ậ ằ ấ ấ

• Luôn bắt đầu quan sát v i v t kính công su t th p ớ ậ ấ ấ

• Nếu bạn chuy n sang v t kính công su t cao, hãy xoay vể ậ ấ ật kính vào đúng vị trí m tcách ộcẩn thận

• Sau khi chuy n sang v t kính công su t cao, luôn ch s d ng ng vi cể ậ ấ ỉ ử ụ ố ấp để ấ l y néthình ảnh

• Khi bạn đã hoàn thành công việc của mình v i kính hi n vi, hãy lau s ch các v t kínhb ng ớ ể ạ ậ ằgiấy lau v t kính, quậ ấn dây điện an toàn xung quanh cánh tay c a kính hiủ ển vi và đưa kính hiển vi của bạn về nơi cất giữ

4.2 Quy trình: Quan sát mẫu

Bước 1: Lấy kính hiển vi ra khỏi tủ và mang nó thẳng đứng bằng một tay nắm vào cánh tay và tay

kia của bạn đỡ kính hiển vi bên dưới đế của nó Đặt kính hiển vi của bạn trên bàn trước mặt bạn

Không sử dụng khăn giấy hoặc Kimwipes để lau thấu kính của kính hiển vi; chúng có thể làm xước

ống kính Chỉ lau thấu kính bằng giấy lau thấu kính

Bước 2: Cắm kính hiển vi và bật nguồn sáng

Bước 3: Nếu nó chưa ở đúng vị trí, hãy xoay ống kính cho đến khi vật kính có công suất thấp nhất

(4) phù hợp với nguồn sáng Luôn bắt đầu kiểm tra các trang trình bày với vật kính có công suất

thấp nhấ t

Bước 4: Xác định vị trí ống sơ cấp ở mặt bên của kính hiển vi Tùy thuộc vào loại kính hiển vi mà

bạn đang sử dụng, ống sơ cấp di chuyển ống kính (có vật kính) hoặc bàn để mẫu để tập trung các thấu kính vào mẫu vật Chỉ xoay một phần củ ống sơ cấp sẽ di chuyển ống kính (có vật kính) a hoặc bàn để mẫu một khoảng cách tương đối lớn Chỉ nên sử dụng điều chỉnh thô khi bạn đang xem mẫu vật bằng vật kính 4 hoặ c 10

Bước 5: Nếu kính hiển vi của bạn là hai mắt, hãy điều chỉnh khoảng cách giữa hai mắt để phù hợp

với khoảng cách giữa các đồng tử của bạn Nếu kính hiển vi của bạn là một mắt, hãy mở cả hai mắt khi sử dụng kính hiển vi; điều này sẽ làm giảm căng thẳng cho mắt của bạn Sau khi thực hành một chút, bạn sẽ bỏ qua hình ảnh nhận được không nhìn qua thị kính

Bước 6: Điều chỉnh cường độ ánh sáng để tạo sự thoải mái và chất lượng hình ảnh Lấy nét một

mẫu vật bằng cách sử dụng các bước sau:

a) Cắt m t m u giấy báo in có chộ ẫ ữ e Đặt mi ng gi y trên lam kính và cế ấ ố định b ng mi ng ằ ếche lamen

b) Đặt lam kính nằm ngay bên dướ ật kính có công suất thấp nhất và phía bên phi v ở ải Nó phải được đặt chính giữa lỗ trên sân khấu

c) Xoay ống sơ cấp để di chuyển v t kính trong vòng 1 cm so vậ ới bàn đặt m u (1 cm = 0,4 ẫin)

d) Nhìn qua th kính v i cị ớ ả hai mắt m ở

e) Xoay ống sơ cấp (t c là nâng v t kính ho c hứ ậ ặ ạ thấp tiêu cự) cho đến khi th y ch e N u ấ ữ ếbạn không nhìn th y hình nh, ch e có th b lấ ả ữ ể ị ệch tâm Đảm b o r ng e n m ngay bên ả ằ ằdướ ậi v t kính và b n có th nhìn thấy mạ ể ột điểm sáng xung quanh e

f) Xoay ng vi cố ấp để ấy nét và đạt đượ l c hình nh s c nét nh ả ắ ất

g) Điều chỉnh màng điều sáng củ ụa t quang sao cho độ sáng c a ánh sáng truy n qua mang ủ ềlại t m nhìn t t nhầ ố ất

h) Quan sát chữ cái, sau đó xoay măm quay để căn chỉnh vật kính 10  để kết thúc việc quan sát c a b n Không s d ng v t kính ngâm d u ủ ạ ử ụ ậ ầ

4.3 Kết quả

HÌnh 5 Hình ảnh quan sát qua kính

hiển vi thấy được chữ " ư "

5 Quan sát tế bào nhân sơ và nhân thực

5.1 Giới thiệu

T ế bào là đơn vị cơ bản của cơ thể ố s ng vì chúng th c hi n tự ệ ất c các quá trình mà chúng ả

ta gọi chung là “sự ống” Tấ ả s t c các sinh vật đều được c u t o t các t bào ấ ạ ừ ế

T bào h c là nghiên c u v c u trúc và chế ọ ứ ề ấ ức năng củ ếa t bào Các công c chính c a các ụ ủnhà t bào h c là kính hi n vi quang h c, kính hiế ọ ể ọ ển vi điệ ửn t và hóa h c t bào B ng cách ọ ế ằnghiên c u c u trúc gi i ph u c a t bào, chúng ta có th tìm ra manh m i v cách th c hoứ ấ ả ẫ ủ ế ể ố ề ứ ạt

5.2 Quy trình

5.2.1 Quy trình 1: Quan sát t bào hành ế

Bước 1: Cắt nh m t c hành tím và lo i b m t lá thịt ỏ ộ ủ ạ ỏ ộ

Bước 2: Lập ngượ ạc l i và lo i b ph n m ng c a biạ ỏ ầ ỏ ủ ểu bì bên trong được hình thành tại điểm đứt

Bước 3: Đặt mô bi u bì này vào m t giể ộ ọt nước trên lam kính

hiển vi, đặt một lamen lên lam kính và quan sát mẫu bằng

kính hi n vi quang h c Luôn bể ọ ắt đầu ki m tra vể ới độ

phóng đại thấp nhất

Bước 4: Ở ậ v t kính 40X, ta tìm ki m: ế

• Vách t bào mế – ột đường ngăn cách giữa hai t bào c nh nhau t o thành ế ạ ạ

• Nhân có th – ể xuất hi n hình tròn ở ph n trung tâm c a t bào ệ ầ ủ ế

• Tế bào chất – nằm ở xung quanh nhân và sát màng t bào ế

• Không bào là nh ng kho ng tr ng trong t bào ch t, r t khó nh n bi t vì không bào – ữ ả ố ế ấ ấ ậ ếthường chứa đầy dịch t bào nên không phân biế ệt được ranh giới gi a t bào và t bào ữ ế ế