Luận văn thạc sĩ Kỹ thuật hóa học: Nâng cao chất lượng chiết xuất từ rau má và định hướng ứng dụng cho sản phẩm chăm sóc cá nhân

Tәng quan vӅ hӧp chҩt saponin

Cҩu trúc cӫa saponin

Saponin có cҩu trúc hóa hӑc gӗm các aglycone không phân cӵc cùng vӟi các monosaccharide Sӵ khác biӋt cӫa saponLQÿѭӧc thӇ hiӋn ӣ sӕ nguyên tӱ carbon trong cҩu trúc aglycone Theo cҩX WU~F ÿy VDSRQLQ ÿѭӧc chia làm 2 loҥi: triterpenoid và steroidal [3] Triterpenoid aglycone có cҩu trúc khung gӗPFDUERQWURQJÿyÿѫQ vӏ terpene liên kӃt theo kiӇu head-to-tail Aglycone bao gӗm các hӧp chҩt pentacylic và tetracylic Cҩu trúc khung cӫa hӧp chҩt pentacylic chӭa 5 vòng và 8 nhóm methyl Các nhóm methyl này có thӇ bӏ oxi hóa hình thành ±CH2OH (tҥi vӏ trí C23, C28), ±CHO hoһc ±COOH (tҥi vӏ trí C23, C27 hoһc C30) Các nhóm phө pentacylic bao gӗm oleananes,

3 ursanes, taraxasteranes, lupanes và hopanes Triterpenoid tetracylic saponin bao gӗm dammaranes, lanostanes, tirucallanes và cucurbitantes Steroid aglycone có 27 nguyên tӱ carbon trong mҥFKYjÿѭӧc chia thành 2 cҩXWU~FNKXQJFDUERQFѫEҧn: C27 spirostanes (nhóm lӟn, cҩu trúc 6 vòng) và C26 furostanes (cҩu trúc 5 vòng)

Tҩt cҧ FiFDJO\FRQHÿӅu có nhiӅu nhóm chӭFQăQJ±OH, ±COOH, ±CH) trong mҥch, tҥo thành sӵ ÿDGҥng trong cҩu trúc cӫa aglycone [4] Aglycone có thӇ chӭa mӝt hoһc nhiӅu liên kӃt C-&FKѭDEmRKzD&iFVDSRQLQFyFKXӛi oligosaccharide gҳn ӣ vӏ trí C3 ÿѭӧc gӑLOjPRQRGHVPRVLGLFWURQJNKLFiFVDSRQLQNKiFÿѭӧc gҳn thêm các gӕc ÿѭӡng ӣ vӏ trí C16 hoһc C28 ÿѭӧc gӑi là bidessmosidic [5] Thành phҫQÿѭӡng phә biӃn nhҩt trong cҩu trúc cӫa saponin là hexoses (glucose, galactose), 6-deoxyhexoses (furanose, quinovose, rhamnose), pentoses (arabinose, xylose), và uronic acids (glucuronic acid, galocturonic acid) Các cҩXWU~Fÿѭӡng liên kӃt vӟi aglycone thông qua mӝt ether hoһc ester glycosidic liên kӃt tҥi mӝt hoһc hai glycosylation [4]

Các cҩu trúc cӫDVDSRQLQÿѭӧc phân loҥi dӵa trên khung carbon Do quá trình sinh tәng hӧp triterpenes và steroids khác nhau nên cҩu trúc cӫa saponin rҩWÿDGҥng Cө thӇ, VDSRQLQÿѭӧc phân chia thành 11 nhóm chính: dammaranes (1), tirucallanes (2), lupanes

(3), hopanes (4), oleananes (5), taraxasteranes (6), ursanes (7), cycloartanes (8), lanostanes (9), cucurbitanes (10) và steroids (11) [3]

Hình 1 1 Cҩu trúc khung carbon 11 nhóm chính cӫa saponin [3]

Tính chҩt hóa lý cӫa các hӧp chҩt saponin

Saponin là steroid hoһc triterpenoid glycoside, là thành phҫn phә biӃQÿѭӧc tìm thҩ\WURQJKѫQKӑ thӵc vұt [4] và nhiӅu sҧn phҭm có nguӗn gӕc tӯ thӵc vұt Sӵ ÿD dҥng và phӭc tҥp vӅ cҩu trúc cӫa các hӧp chҩt saponin trong tӵ nhiên dүQÿӃn sӵ ÿDGҥng vӅ tính chҩt vұt lý, hóa lý và các hoҥt tính sinh hӑc [2] Do cҩu trúc bao gӗm aglycone tan trong dҫu và các gӕFÿѭӡQJWDQWURQJQѭӟFQrQÿa sӕ FiFVDSRQLQÿӅu có chung nhӳQJÿһFÿLӇPFѫEҧQWѭѫQJWӵ QKѭPӝt chҩt hoҥWÿӝng bӅ mһt không ion (tҥo bӑt, tҭy rӱDQKǊKyD

6DSRQLQWKѭӡng có vӏ ÿҳng, trӯ mӝt sӕ WUѭӡng hӧSQKѭJO\F\UUKL]LQHWURQJ&DP thҧo), abrusoside (trong Cam thҧo dõy), ôFyYӏ ngӑt Bờn cҥQKÿy QyFǊQJGӉ gõy kớch

5 ӭng niêm mҥc Saponin là chҩt hoҥWTXDQJÿLӇm nóng chҧ\WKѭӡng rҩt cao (khoҧng 200 o&WDQWURQJQѭӟc, ethanol, methanol loãng và rҩt ít tan trong acetone, hexane Ngoài ra, saponin còn có mӝt sӕ tính chҩWGѭӧc lý, diӋWF{QWUQJNêVLQKWUQJÿӝng vұt thân mӅm, khỏng khuҭn, ô'RÿyVDSRQLQÿѭӧc ӭng dөng rӝng rói trong cỏc loҥi thuӕc, chҩt tҭy rӱa, dҫu gӝLNHPÿiQKUăQJEiQKNҽo và mӻ phҭm [2, 6].

Hoҥt tính sinh hӑc cӫa các hӧp chҩt saponin

Bên cҥnh nhӳng tính chҩt vұt lý, hóa hӑc, saponin còn nәi tiӃng vӟi các hoҥt tính sinh hӑFYjGѭӧc lý nәi bұt nKѭNKiQJYLrPNKiQJNKXҭn, bҧo vӋ tim mҥFKYjÿLӅu hòa miӉn dӏch [7] Các nghiên cӭu gҫQÿk\Wұp trung vào viӋc chӭng minh các hoҥt tính sinh hӑc cӫDVDSRQLQÿһc biӋWWURQJOƭQKYӵFOLrQTXDQÿӃn sӭc khӓHFRQQJѭӡi Asiaticoside (mӝWWULVDFFKDULGHWULWHUSHQHÿmÿѭӧc chӭng minh là mӝt chҩt có hoҥt tính chӳa lành vӃWWKѭѫQJPҥnh nhҩt trong C asiatica QKѭFKӳa lành loét dҥ dày, bӋnh phong và mӝt sӕ bӋnh lao [8] Madecassoside (mӝt trong nhӳng thành phҫn triterpenoid saponin có KjPOѭӧng cao nhҩt trong Centella asiaticaFǊQJÿѭӧc chӭng minh có nhiӅu tác dөng GѭӧF Oê QKѭ NKiQJ YLrP NKiQJ R[L KyD Yj NKiQJ NKXҭn [9] Bên cҥQK ÿy PDGHFDVVRVLGHFǊQJÿѭӧc chӭng minh là có khҧ QăQJNtFKWKtFKVӵ tái tҥo collagen và ÿLӅu hòa miӉn dӏch [10]

Rau má (Centella asiatica) là mӝt loài thӵc vұt chӭa saponin NhiӅu nghiên cӭu gҫQÿk\ÿmFKӭng minh rҵng rau má chӭa các thành phҫn triterpenoid saponin có hoҥt tính sinh hӑFQKѭNKҧ QăQJWiLWҥo collagen, kháng oxi hóa và chӕng tia UV [11]

Hoҥt tính chӳa lành vӃWWKѭѫQJ:RXQG+HDOLQJ(IIHFW

ChiӃt xuҩt Centella asiatica ÿѭӧc ӭng dөQJWURQJFiFSKѭѫQJSKiSÿLӅu trӏ nhiӉm trùng vӃWWKѭѫQJPmQWtQK[12] Asiaticoside có khҧ QăQJӭc chӃ sӵ WăQJVLQKFiFQJX\rQ bào sӧi có sҽo lӗLÿӗng thӡi kích thích quá trình tәng hӧp collagen, tӯ ÿyQJăQQJӯa sӵ hình thành sҽo lӗi [13] MDGHFDVVRVLGHFǊQJ giúp tăQJFѭӡng khҧ QăQJFKӳa lành vӃt WKѭѫQJYjJLҧm hình thành sҽo lӗi trong nguyên bào sӧi có nguӗn gӕc tӯ ÿӝng mҥch chӫ [12] Bên cҥQKÿyDVLDWLFRVLGHFǊQJÿѭӧc chӭng minh có khҧ QăQJ WăQJFѭӡng tәng hӧp collagen, tái tҥo mô cӭng và tәng hӧp chҩt nӅn ngoҥi bào, giúp tái tҥo mô nha chu [14]

Hoҥt tính kháng viêm (Anti-inflammatory activity)

Asiatic acid và madecassic acid, hai triterpenoid saponin trong Centella asiatica, thӇ hiӋn hoҥt tính kháng viêm thông qua viӋc ӭc chӃ các enzyme (iNOS, cyclooxygenase-2 (COX-2)), interleukin (IL-6, IL-ȕvà các yӃu tӕ gây hoҥi tӱ khӕi u cytokine (TNF-Į Madecassoside QJăQQJӯa collagen II (CII) ± tác nhân gây viêm khӟp ӣ chuӝt Asiaticoside ӭc chӃ lipopolysaccharide ± gây sӕt và viêm ӣ ÿӝng vұt thí nghiӋm [12]

Hoҥt tính chӕng oxi hóa (Antioxidant)

Cỏc loҥi oxi hoҥWWtQKQKѭR[LQJX\rQWӱVXSHUR[LGHK\GUR[\OUDGLFDOôOjQKӳng WiFQKkQR[LKyDOjPKѭKҥi hay phá hӫy các tӃ bào [15] Hoҥt tính kháng oxi hóa cӫa rau má rҿ quҥt (C asiatica) và rau má lá tròn (H verticillata) ÿѭӧc giҧ thuyӃt là kӃt quҧ cӫa viӋc ӭc chӃ hydroperoxide làm bҩt hoҥt các gӕc tӵ do và chelate các ion kim loҥi [12] Asiaticoside vӟLKjPOѭӧng lӟn ÿyQJYDLWUzFKӫ yӃu trong hoҥt tính kháng oxi hóa cӫa rau má [11, 16]

Khҧ QăQJFKӕng tia UV (UV protection)

ChiӃt xuҩW UDX Pi ÿѭӧc chӭng minh có khҧ QăQJ Eҧo vӋ, chӕng lҥi UVA (ultravilote-A) và UVB (ultraviolet-B) Ӣ nӗQJÿӝ thҩp, chiӃt xuҩt rau má chӍ thӇ hiӋn khҧ QăQJKҩp thu UVB ӣ mӭFÿӝ WUXQJEuQK7X\QKLrQNKLWăQJOrQQӗQJÿӝ cao, khҧ QăQJKҩp thu tia UVB và bҧo vӋ GDWăQJOrQÿiQJNӇ và có hiӋu quҧ tӕWKѫQVRYӟi octyl meWKR[\FLQQDPDWH20&'RÿyUDXPiÿѭӧc ӭng dөng trong các sҧn phҭm chӕng nҳng [11, 17]

HiӋu ӭng hӛ trӧ trҳng da (Whitening effect)

Melanogenis là quá trình hình thành sҳc tӕ da thông qua sӵ tәng hӧp và phân phӕi PHODQLQ %D WiF QKkQ FKtQK HQ]\PH W\URVLQDVH SURWHLQ OLrQ TXDQ ÿӃn tyrosinase 1 (TRP1) và TRP2, chuyӇn hóa melanin tӯ L-tyrosine ChiӃt xuҩt tӯ Centella asiatica ± TECA, hӛn hӧp cӫDDVLDWLFRVLGHDVLDWLFDFLGYjPDGHFDVVLFDFLGÿѭӧc chӭng minh làm giҧPKjPOѭӧng melanocytes [18] Bên cҥQKÿyFKLӃt xuҩt rau má FǊQJWKӇ hiӋn hiӋu quҧ ӭc chӃ sҧn sinh melanin trên các tӃ bào Clone M-3 và ӭc chӃ tyrosinase KӃt quҧ này cho thҩy C asiatica có tác dөng mҥnh trong viӋc hӛ trӧ làm trҳng da [19]

Hoҥt tính kháng khuҭn (Antifungal/antiyeast activity)

6DSRQLQÿѭӧc chӭng minh là có hoҥt tính kháng khuҭn [20] Cө thӇ, chiӃt xuҩt tӯ rau má có khҧ QăQJӭc chӃ sӵ WăQJWUѭӣng cӫa vi khuҭQJUDPGѭѫQJBacillus subtilis và vi khuҭn gram âm Pseudomonas aeruginosa, P cichorii và Escherichia coli Ngoài ra, Fugh-Berman (2ÿmFKӭng minh Microbacterium tuberculosis và M leprae nhҥy vӟi liposomal asiaticoside KѫQDVLDWLFRVLGHWӵ do [21]

Cҩu trúc cӫa saponin bao gӗm phҫn aglycol không phân cӵc và phҫn monosaccharide phân cӵc Do cҩXWU~FOѭӥng cӵc này mà saponin có tính chҩWWѭѫQJWӵ QKѭPӝt chҩt hoҥWÿӝng bӅ mһt có khҧ QăQJWҥo bӑt, tҭy rӱa Vì vұ\FK~QJWKѭӡQJÿѭӧc sӱ dөng trong các sҧn phҭm tҭy rӱa có nguӗn gӕc tӯ tӵ nhiên vӟi vai trò là chҩWQKǊKyD và chҩt tҥo bӑt [6] Ĉӝc tính ly giҧi hӗng cҫu (Haemolytic activity)

Bên cҥnh nhӳng hoҥt tính sinh hӑFVDSRQLQFzQFyÿӝc tính làm phá vӥ hӗng cҫu Ĉӝc tính ly giҧi hӗng cҫu cӫDVDSRQLQWKѭӡQJÿѭӧc giҧi thích là do sӵ WѭѫQJWiFJLӳa saponin và các sterol cӫa màng hӗng cҫu dүQÿӃn màng bӏ vӥ, gây ra sӵ WăQJWtQKWKҩm và mҩt hemoglobin Nghiên cӭu cӫa Baumann và cӝng sӵ ÿmFKRWKҩy saponin gây tәn hҥLÿӃn cҩu trúc lӟp lipid kép cӫDFѫWKӇ QJѭӡi và không thӇ phөc hӗi [20] Tuy nhiên, mӝt sӕ saponin không thӇ hiӋQÿӝc tính ly giҧi hӗng cҫXWURQJÿyFyFiFORҥi saponin cӫa rau má [22] Ngoài ra, chiӃt xuҩt C asiatica còn có khҧ QăQJәQÿӏnh màng tӃ bào hӗng cҫu [23].

Ӭng dөng hӧp chҩWVDSRQLQWURQJWKѭѫQJPҥi

Do nhӳng tính chҩt hóa lý và sinh hӑFÿһFWUѭQJQj\FӫDVDSRQLQQrQFK~QJÿѭӧc khai thác và ӭng dөng rӝQJUmLWURQJFiFOƭQKYӵFGѭӧc phҭm, thӵc phҭm và mӻ phҭm

6DSRQLQÿѭӧc sӱ dөng trong y hӑc cә truyӅn và y hӑc dӵ phòng do các tính chҩt Gѭӧc lý cӫa nó Ngoài khҧ QăQJFKӳa lành vӃWWKѭѫQJVDSRQLQFzQFyNKҧ QăQJÿLӅu trӏ các bӋQKQKѭSKRQJHF]HPDJLmQWƭQKPҥch, vҧy nӃn, sӕt, tiêu chҧy, giҧm lo âu và cҧi thiӋn trí nhӟ [24]

8 Bên cҥnh nhӳng ӭng dөng trong y hӑc cә truyӅn, trong nhӳQJ QăP gҫQ ÿk\ VDSRQLQFzQÿѭӧc nghiên cӭu và phát triӇn vӟi vai trò là chҩt bә sung trong các loҥi thuӕFÿӇ ÿLӅu trӏ XQJWKѭ[25]

ChiӃt xuҩt saponin tӯ cây Yucca và Quillaja ÿѭӧc phân loҥi là phө gia thӵc phҭm ӣ Mӻ (US Food and Drug Administration, 2003) và là chҩt tҥo bӑWÿӇ sӱ dөng trong các ÿӗ uӕng không cӗn, có gas và không có gas (200 mg/L) (Public for Publications of (XURSHDQ&RPPXQLWLHV1JRjLUDVDSRQLQFzQÿѭӧc ӭng dөng trong các loҥi thӵc phҭm chӭFQăQJQKѭFKLӃt xuҩt nhân sâm Hàn QuӕFKD\ÿѭӧc sӱ dөQJQKѭWiFQKkQ kháng khuҭn và chӕng nҩm men trong thӵc phҭm [2]

Các hoҥt chҩWVDSRQLQÿѭӧc sӱ dөng làm chҩt hoҥWÿӝng bӅ mһt tӵ nhiên trong các sҧn phҭPFKăPVyFFiQKkQQKѭJHOWҳm, dҫu gӝi, sӳa tҳPQѭӟc súc miӋng và NHPÿiQK UăQJĈӗng thӡLVDSRQLQFǊQJÿyQJYDLWUzOjFKҩt tҭy rӱa dӏu nhҽ trong các sҧn phҭm FKăP VyF HP Ep[2] Trong mӝt sӕ sҧn phҭm mӻ phҭm trên thӏ WUѭӡng, saponin và VDSRJHQLQÿѭӧc sӱ dөng làm thành phҫn mang hoҥt tính sinh hӑFJL~SQJăQQJӯa mөn và quá trình lão hóa cӫa da

1.1.5 3KѭѫQJSKiSQkQJFDRKjPOѭӧng saponin trong chӃ phҭm

Vì nhӳng hoҥt tính sinh hӑFÿһFWUѭQJFӫa saponin và tiӅPQăQJFӫa nó khi ӭng dөng vào FiFOƭQKYӵc WKѭѫQJPҥi, nhiӅu nghiên cӭXÿmÿѭӧc tiӃQKjQKÿӇ khҧo sát quá trình tinh chӃ YjQkQJFDRKjPOѭӧng saponin trong các chӃ phҭm tӯ tӵ nhiên [26, 27] 7K{QJWKѭӡng, sau khi saponLQÿѭӧc tách bҵQJSKѭѫQJSKiSWUtFKO\Uҳn ± lӓQJWKuÿѭӧc trích ly lӓng ± lӓQJÿӇ QkQJFDRKjPOѭӧng Tuy nhiên, hiӋu quҧ cӫDSKѭѫQJSKiSQj\ không cao, tӕn nhiӅu thӡLJLDQYjGXQJP{LKѫQ0ӝt trong nhӳQJSKѭѫQJSKiStinh chӃ có hiӋu suҩWFDRKѫQÿѭӧc nghiên cӭu gҫQÿk\OjVӱ dөng nhӵa hҩp phө

Nhӵa hҩp phө là mӝt loҥi polymer hҩp phө có cҩu trúc vi mô, không có nhóm trao ÿәi ion, các lӛ xӕp trong cҩu trúc polymer hình thành do liên kӃWQJDQJĈk\OjPӝt loҥi P{LWUѭӡng phân tách mӟLVDXWUDRÿәLLRQÿѭӧc phát triӇn theo các nhóm chӭc vi mô YjFiFÿһc tính bӅ mһt cӫa nhӵD7K{QJWKѭӡng, nhӵa hҩp phө ÿѭӧc phân loҥi dӵa theo ÿӝ phân cӵc: phân cӵc mҥnh, kém phân cӵc và không phân cӵc Nhӵa hҩp phө có cҩu

9 trúc mҥQJOѭӟi, diӋn tích bӅ mһt lӟQÿӝ bӅn cao, dӉ WiLVLQKÿLӅu kiӋn ÿѫQJLҧn, vòng ÿӡi dài và giá thành thҩp HiӋn nay, nhӵa hҩp phө ÿѭӧc sӱ dөng rӝng rãi trong viӋc tinh chӃ YjQkQJFDRKjPOѭӧng cӫa các loҥi hoҥt chҩWÿѭӧc trích ly tӯ thӵc vұWQKѭVDSRQLQ flavonoid, lactone, alkaloid [26]

Hình 1 2 Hình thái bӅ mһt cӫa nhӵa hҩp phө không phân cӵc [28]

NhiӅu nghiên cӭXÿmVӱ dөng nhӵa hҩp phө ÿӇ QkQJFDRKjPOѭӧng saponin trong các chӃ phҭm tӯ tӵ nhiên Wang ZP và cӝng sӵ ÿmWLӃn hành khҧo sát quá trình QkQJFDRKjPOѭӧng flavonoid và saponin trong cây hoàng kǤ (Astragalus) bҵng các loҥi nhӵa khác nhau Nhӵa hҩp phө XDA-5 thӇ hiӋn khҧ QăQJ tӕt nhҩt, chӃ phҭm Astragalus FyKjPOѭӧng flavonoid và saponin tәQJÿҥt 28,75% và 44,38% [27] Bên cҥQKÿyQăP 20TXiWUuQKQkQJFDRKjPOѭӧng cӫa asiaticoside và madecassoside trong rau má

Centella asiatica ÿѭӧc Guangtao Jia và cӝng sӵ thӵc hiӋn bҵQJQăPORҥi nhӵa hҩp phө

+jPOѭӧQJDVLDWLFRVLGHYjPDGHFDVVRVLGHVDXTXiWUuQKWăQJOҫQOѭӧt tӯ 2,0% ÿӃn 21,5% và 3,9% ÿӃn 39,7% [26]

&iFÿһc tính vұt lý cӫa mӝt sӕ loҥi nhӵa hҩp phө ÿѭӧc liӋt kê trong Bҧng 1 1.

Bҧng 1 1 Ĉһc tính vұt lý cӫa nhӵa hҩp phө

Loҥi Ĉӝ phân cӵc Ĉѭӡng kính hҥt (mm)

DiӋn tích bӅ mһt (m 2 /g) Ĉѭӡng kính lӛ xӕp trung bình (Å)

X-5 Không phân cӵc 0,315 ± 1,25 500 ± 600 290 ± 300 AB-8 Kém phân cӵc 0,3 ± 1,25 480 ± 520 130 ± 140

1.2 TӘNG QUAN Vӄ CÂY RAU MÁ

Rau má là mӝt trong nhӳng loài thӵc vұt nәi tiӃng có nhiӅu hoҥt tính sinh hӑc nәi bұt Các hoҥWWtQKÿySKҫn lӟQÿӅu do thành phҫn saponin trong rau má

Rau má là mӝt loҥi cây thân thҧoVLQKWUѭӣng ӣ nhӳng vùng ҭPѭӟt và phân bӕ ӣ nhiӅXQѫLWUrQWKӃ giӟi vӟi các chӫng loҥLY{FQJÿDGҥng Mӝt sӕ loҥi rau má phә biӃn QKѭ Hydrocotyle umbellata L., Hydrocotyle sibthorpioides variegata Lam.,

Hydrocotyle vulgaris L., Hydrocotyle ranunculoides L., Centella asiatica /ôHỡnh

1 3) Hydrocotyle umbellata L là mӝt loҥi rau má có nguӗn gӕc tӯ %UD]LOÿѭӧc trӗng nhiӅu ӣ khu vӵc châu Mӻ [29] Hydrocotyle sibthorpioides variegata Lam có nguӗn gӕc tӯ Ĉ{QJ1DPÈGҫn dҫQÿѭӧc lan rӝng ra nhiӅXQѫLWUrQWKӃ giӟi Bên cҥQKÿy

Hydrocotyle vulgaris L là mӝt loҥi cây thân thҧRWKѭӡQJVLQKWUѭӣng và phát triӇn ӣ khu vӵc châu Âu, bao gӗm Anh, tӯ phía Nam cӫD6FDQGDQDYLDÿӃQSKtDĈ{QJFӫa Châu Phi, vùng biӇn Caspian Hydrocotyle ranunculoides L có nguӗn gӕc tӯ châu Mӻ YjÿDQJVLQKWUѭӣng và lan rӝng ӣ các vùng cӫa Úc [30]

Hình 1 3 Ngoҥi quan mӝt sӕ loҥi rau má

ViӋt Nam là mӝWQѭӟc có khí hұu nhiӋWÿӟi, thích hӧp cho rau má VLQKWUѭӣng và phát triӇn Các loҥi rau má phӕ biӃn ӣ ViӋW1DPQKѭCentella aisatica /FzQÿѭӧc gӑi là rau má rҿ quҥt), Hydrocotyle umbellata L., Hydrocotyle verticillata Thunb (rau má lỏ trũn), ô7URQJÿyUDXPiUҿ quҥt là loҥi phә biӃQYjÿѭӧc trӗng rӝng rói nhҩt Ngoài ra, ӣ Qѭӟc ta hiӋn nay, loҥi rau má lá tròn QJj\FjQJÿѭӧc trӗng rӝQJUmLKѫQFKRPөc ÿtFKWUDQJWUt

1.2.1 Phân loҥi YjÿһFÿLӇm hình thái

1.2.1.1 Rau má r̓ qu̩t (Centella asiatica (L.) Urban)

Rau má (Centella asiatica (L.) Urban) là mӝt loҥi cây thân thҧo thuӝc hӑ Apiaceace (Bҧng 1 2) và có khoҧQJORjLNKiFQKDX5DXPiWKѭӡng sӕng ӣ nhӳng vùng ҭPѭӟt, chӫ yӃu ӣ vùng nhiӋWÿӟi và cұn nhiӋWÿӟi [31] Rau má phân bӕ ӣ nhiӅu QѫLQKѭҨQĈӝ, Sri Lanka, Nam Phi, Úc, Indonesia, Malaysia và ViӋt Nam [32]

Bҧng 1 2 HӋ thӕng phân loҥi cây rau má rҿ quҥt [33]

HӋ thӕng phân loҥi (Taxonomy)

Tên khoa hӑc Centella asiatica (L.) Urb

Tên TiӃng ViӋt Rau má rҿ quҥt

Hình 1 4 Hình thái cây rau má

Rau má sӕQJOkXQăPFyKRDWӯ WKiQJÿӃn tháng 9, hoa cӫa chúng có màu tím nhҥW&k\FyPjX[iPÿӃn nâu xanh, mùi gҫn giӕng vӟi lá thuӕc lá và vӏ KѫL ÿҳng Rau má là loҥi cây thân bò, gӗm nhiӅu khӟp nӕi liên kӃt vӟi nhau Lá rau má có cuӕng dài và mӑc lên tӯ các khӟp nӕi ӣ thân Lá rau má mӓng, mӅm, phiӃn lá có hình rҿ quҥt và Fyÿѭӡng kính khoҧng 2 ± 5 cm Mép lá có khía tai bèo hoһc có thùy nhҽ Cuӕng lá mҧnh, dài tӯ 5 ± 15 cm Lá bҳFFyNtFKWKѭӟc 1 ± 2 cm bao bӑc 2 ± 5 quҧ cӫa mӛi tán lá [33]

1.2.1.2 Rau má lá tròn (Hydrocotyle verticillata Thunb.)

Hydrocotyle verticillata Thunb (H verticillata) KD\FzQÿѭӧFJӑLOjrau má lá tròn

OjPӝWORҥLWKӵFYұWVLQKWUѭӣQJYjSKiWWULӇQӣQKӳQJYQJҭPѭӟWÿһFELӋWOjFiFYQJ

13 YHQEӡV{QJVXӕL ô Ĉk\OjPӝWORjLWKӵFYұWFyKRDFyQJXӗQJӕFӣ%ҳFYj1DP0ӻ SKkQEӕFKӫ\ӃXӣ+RD.Ǥ&KLOH3DUDJXD\ và Argentina [34]

Bҧng 1 3 HӋ thӕng phân loҥi cây rau má lá tròn

Tên khoa hӑc Hydrocotyle verticillata Thunb

Tên TiӃng ViӋt Rau má lá tròn

Rau má lá tròn OjPӝWFk\WKkQWKҧROkXQăPPӑQJQѭӟFFyKRDWӯWKiQJÿӃQ WKiQJKRDFӫDFK~QJFyPjXWUҳQJFөPKRDPӑFYzQJ&k\FyPjX[DQKYjYӏÿҳQJ 5DXPiOjORҥLFk\WKkQEzJӗPFiFNKӟSQӕLOLrQNӃWYӟLQKDXTXDWKkQ&iFOiUDXPi FyFXӕQJGjLYjPӑFOrQWӯFiFNKӟSQӕLQj\/iUDXPiPӓQJPӅPQKҹQNK{QJFy O{QJSKLӃQOiFyKuQKWUzQYjFyÿѭӡQJNtQKNKRҧQJ ± FP&XӕQJOiPҧQKGjLWӯ 1,5 ± 35 cm [34, 35]

Hình 1 5 Hình thái rau má lá tròn

Bҧng 1 4 6RViQKÿһFÿLӇm hình thái 2 loҥi rau má ĈһFÿLӇm Rau má rҿ quҥt Rau má lá tròn

Lông trên lá Nhҹn, không có lông hoһc ít lông Nhҹn, không có lông

Hình dҥng Hình rҿ quҥt Hình tròn Ĉѭӡng kính (cm) 2,5 ± 5,0 0,5 ± 6,0

Mép lá Có khía tai bèo hoһc thùy nhҽ

Hoa Sӕ Oѭӧng 3 ± 5 2 ± 15 ӣ mӛi vòng lá

Cuӕng (hoa, quҧ) ChiӅu dài (cm) 0,2 ± 0,8 8,0 ± 22,0

Tәng quan vӅ cây rau má

Thành phҫn hoҥt chҩt

Cây rau má chӭa nhiӅu hoҥt chҩt chuyӇn hóa thӭ cҩS7URQJÿyWKjQKSKҫn quan trӑng nhҩWÿѭӧc phân lұSOjSHQWDF\FOLFWULWHUSHQRLGKD\FzQÿѭӧc gӑi là centelloid, bao gӗm: asiaticoside, madecasosside (brahminoside), aisatic acid và madecassic acid (brahmic acid) [36] Ngoài ra, rau má còn chӭa 0,1% tinh dҫXYjFiFIODYRQRLGVQKѭ quercetin glycoside, kaepferol và các sesquiterpene, steroid [32] Theo 'ѭӧFÿLӇn Châu ÂuKjPOѭӧng saponin trong tәng các thành phҫn cӫa cây rau má chiӃm 1 ± 8% [33]

Bҧng 1 5 Bҧng thành phҫn hoҥt chҩt cӫa cây rau má [33]

Elemene và bicycloelemene Trans-farnesene

6-hydroxy asiatic acid Madecassic acid Madasiatic acid Betulinic acid Thankunic acid Isothankunic acid

(1-8% phө thuӝc vàRÿҩWQѭӟc và vùng)

Asiaticoside (thành phҫn chính) Asiaticoside A

Asiaticodide B Asiaticoside A (Madecassoside) and B Braminoside

Tuy nhiên, tùy tӯng loҥLUDXPiNKiFQKDXPjKjPOѭӧQJFǊQJQKѭWKjQKSKҫn cӫa các chҩWFǊQJNKiFQKDX7KHRQJKLrQFӭu cӫa Hossain và cӝng sӵ (2018), thành phҫn cӫa rau má rҿ quҥt và rau má lá tròn có sӵ khác biӋt, thӇ hiӋn trong Bҧng 1 6

Bҧng 1 6 KӃt quҧ ÿӏnh tính dӏch chiӃt methanol cӫa hai loҥi rau má [37]

7KjQKSKҫQ 5DXPiUҿTXҥW Rau má lá tròn

%L͋XWK͓PͱFÿ͡FDR - %L͋XWK͓PͱFÿ͡WK̭S

Cҩu tҥo cӫa các hӧp chҩt triterpenoid saponin trong rau má

Các hoҥt tính sinh hӑc khác nhau cӫD UDX Pi ÿѭӧc cho là do các hoҥt chҩt pentacylic triterpenoids mang lҥi, cө thӇ là asiatic acid, madecassic acid và các glycosides cӫa chúng: asiaticoside và madecassoside (Hình 1 6) NhiӅu nghiên cӭXÿm chӭng minh asiaticoside, thành phҫn triterpenoid saponin nhiӅu nhҩt trong rau má có hoҥt tính kháng khuҭn, diӋt nҩPYjWăQJVLQKWӃ bào, giúp chӳa lành vӃt tKѭѫQJYjFiF bӋnh ngoài da khác [24]

Hình 1 6 Cҩu trúc cӫa các hoҥt chҩt triterpenoid chính trong rau má

Ӭng dөng

Tӯ [D[ѭDUDXPiÿmÿѭӧc biӃWÿӃQQKѭPӝt loҥi thuӕc có thӇ hӛ trӧ chӳa lành các vӃWWKѭѫQJQKӓ mӝt cách nhanh chóng Vì vұ\FK~QJÿѭӧc sӱ dөng rӝng rãi trong y hӑc dân gian ӣ nhiӅXQѭӟFFKkXÈÿһc biӋt trong y hӑc cә truyӅn Trung Quӕc Không nhӳng thӃ, ӣ ҨQĈӝ, chiӃt xuҩWUDXPiFzQÿѭӧc sӱ dөQJÿӇ ÿLӅu trӏ các bӋQKQJRjLGDQKѭ eczema, phong, bӋnh vҧy nӃQ1JRjLUDUDXPiFzQÿѭӧc sӱ dөng trong viӋFÿLӅu trӏ bӓng, ngӭa và các vӃt côn trùng cҳn [38]

Các nghiên cӭu nuôi cҩy tӃ EjRÿmFKӍ ra rҵng các thành phҫQWULWHUSHQHQKѭDVLDWLF acid, madecassic acid và asiaticoside có khҧ QăQJNtFKWKtFKVӵ tҥo thành collagen và tәng hӧSILEURQHFWLQOrQÿӃn 20 ± 35% [11]'RÿyUDXPiÿѭӧc sӱ dөng trong các sҧn phҭPFKăPVyFFiQKkQÿӇ phөc hӗLÿӝ VăQFKҳFWăQJWtQKÿjQKӗi và cҧi thiӋn chӭc QăQg cӫa làn da.

Các công trình nghiên cӭu liên quan

Các hoҥW WtQK Gѭӧc lý nәi bұt cӫa chiӃt xuҩW UDX Pi ÿӃn tӯ các thành phҫn triterpenoid saponin, gӗm asiaticoside, madecassoside, asiatic acid và madecassic acid Tuy nhiên, viӋc phân lұp và tinh chӃ tӯng thành phҫQÿzLKӓi quá trình thӵc hiӋn phӭc tҥp và chi phí lӟQ'RÿyQKLӅu nghiên cӭu chӍ tұp trung khҧo sát khҧ QăQJFӫa mӝt nhóm thành phҫn cө thӇ trong chiӃt xuҩt tӯ UDXPiÿӇ ӭng dөQJYjRFiFOƭQKYӵc mӻ phҭPYjGѭӧc phҭm mӝt cách hiӋu quҧ nhҩt

Rau má rҿ quҥt (Centella asiatica) và rau má lá tròn (Hydrocotyle verticillata) là hai loҥi rau má phә biӃn ӣ ViӋW1DPYjOjÿӕLWѭӧng nghiên cӭu chính trong luұQYăQ Qj\&KRÿӃn nay, trên thӃ giӟi và ӣ ViӋW1DPÿmFyQKLӅu nghiên cӭXOLrQTXDQÿӃn rau má rҿ quҥWQKѭQJQJKLrQFӭu vӅ rau má lá tròn còn hҥn chӃ ĈDVӕ các nghiên cӭu vӅ H verticillata ÿӅu chӫ yӃu vӅ ÿһFÿLӇm và hình thái Mӝt sӕ bài báo nghiên cӭXVѫ bӝ vӅ thành phҫn hóa hӑc và hoҥt tính sinh hӑc cӫa hai loҥi rau má này 1ăPMohamad Rafi và cӝng sӵ ÿmF{QJEӕ thành phҫn hóa hӑc và sӵ khác biӋt vӅ thành phҫn giӳa Centella asiatica và Hydrocotyle verticillata [39] Ngoài ra, khҧ QăQJNKiQJR[L hóa cӫa hai loҥLUDXPiÿmÿѭӧc Salma Hossain và cӝng sӵ (2018) nghiên cӭu bҵng SKѭѫQJ SKiS '33+[37] Theo kӃt quҧ WKX ÿѭӧc, giá trӏ IC50 cӫa C asiatica và H

18 verticillata lҫQOѭӧt là 617,6 ߤg/mL; 482,3 ߤg/mL vӟi mүXÿӕi chӭng là ascorbic acid

(70.3 ߤJP/ĈLӅu này cho thҩy khҧ QăQJNKiQJR[LKyDFӫa H verticillata FDRKѫQ nhiӅu và gҩp gҫn 1,3 lҫn so vӟi C asiatica ĈӇ WKXÿѭӧc chiӃt xuҩt tӯ rau má có hiӋu quҧ tӕt nhҩt, quá trình trích ly các hoҥt chҩWÿѭӧc khҧo sát và thӵc hiӋn bҵng nhiӅXSKѭѫQJSKiSQKѭQJkPGҫm, chiӃt Soxhlet, chiӃt vӟi sӵ hӛ trӧ cӫDVyQJVLrXkPKD\YLVyQJô1ăP-DPHVYjFӝng sӵ ÿmWLӃn hành trích ly các hoҥt chҩt chuyӇn hóa thӭ cҩp tӯ lá cây rau má rҿ quҥt bҵng ethanol tuyӋWÿӕi (1:12, w/v) Hӛn hӧSÿѭӧc khuҩy tӯ trong 24 giӡVDXÿyO\WkPSKҫn bã lá ÿѭӧc gҥn bӓ, phҫn dung dӏFKÿѭӧc cô quay ӣ 45 o &Gѭӟi áp suҩt chân không [24]

&iFÿһc tính vӅ hiӋu suҩt và khҧ QăQJSKkQWiFKÿӇ làm giàu và tinh chӃ asiaticoside và madecassoside tӯ chiӃt xuҩt C asiatica cӫDQăPORҥi nhӵa hҩp phө ÿѭӧc nghiên cӭu bӣi Guangtao Jia và cӝng sӵ (2008) Các tính chҩt hҩp phө và rӱa giҧi cӫa saponin triterpene tәQJ ÿӝ tinh khiӃt 80%) cӫa các loҥi nhӵa hҩp phө bao gӗm HPD100, HPD300, X-5, AB-Yj'ÿѭӧc so sánh Theo các kӃt quҧ WKXÿѭӧc, HPD100 có khҧ QăQJKҩp phө và giҧi hҩSFDRKѫQYjWӕFÿӝ hҩp phө asiaticoside và madecassoside cao KѫQVRYӟi các loҥi nhӵa khác Sau khi giҧi hҩSKjPOѭӧQJPDGHFDVVRVLGHWăQJWӯ 3,9% ÿӃn 39,7% và hiӋu suҩt thu hӗLOjKjPOѭӧQJDVLDWLFRVLGHWăQJWӯ 2,0% ÿӃn 21,5% và hiӋu suҩt thu hӗi là 72,0% [26]

Dӵa trên nghiên cӭu cӫa Guangtao Jia và cӝng sӵ QăPQKyPQJKLrQ cӭX71*+X\ÿmKzDWDQJFDRFKLӃt rau má rҿ quҥt (C asiatica) trong 30 mL Qѭӟc cҩWVDXÿyFKRFKҥy qua cӝt nhӵa hҩp phө HPD300, hoҥt chҩWÿѭӧc rӱa giҧi bҵng ethanol 50% KӃt quҧ cho thҩ\KjPOѭӧng saponin tәQJÿmWăQJOrQÿiQJNӇ ÿӃn 6,854 PJP/WѭѫQJÿѭѫQJVRYӟLOѭӧng cao chiӃWEDQÿҫX+jPOѭӧng saponin tәng trong cao sau khi xӱ OêWăQJÿӃQYjKjPOѭӧQJDVLDWLFRVLGH WăQJWӯ ÿӃn 31,11% [40] Nghiên cӭXTXiWUuQKQkQJFDRKjPOѭӧng saponin bҵng nhӵa hҩp phө +3'ÿѭӧc nhóm tiӃp tөc tiӃn hành KӃt quҧ WKXÿѭӧc bӝt chӃ phҭm có KjPOѭӧng asiaticoside và madecassoside lҫQOѭӧWOjYjWăQJNKRҧng 6 lҫn so vӟi KjPOѭӧng hai hoҥt chҩt này trong cao chiӃWUDXPiWUѭӟc khi xӱ lý [41]

Ngành công nghiӋp mӻ phҭPQJj\QD\Fy[XKѭӟng nghiên cӭu và phát triӇn các sҧn phҭm có nguӗn gӕc tӵ QKLrQ'RFiFÿһc tính sinh hӑc nәi trӝi cӫa saponin trong rau

19 má QrQFK~QJÿѭӧc nghiên cӭu và ӭng dөng rӝng rãi trong các sҧn phҭPFKăPVyFGD Tuy nhiên, cao chiӃWUDXPiFyKjPOѭӧng saponin tәng không cao và các thành phҫn tҥp chҩt khác sӁ biӃn tính theo thӡi gian, làm ҧQKKѭӣQJÿӃn ngoҥi quan cӫa sҧn phҭm, quá trình bҧo quҧn FǊQJQKѭWKӡi hҥn sӱ dөng sҧn phҭm Vì vұy, nghiên cӭXÿѭӧc tiӃn KjQKÿӇ tinh chӃQkQJFDRKjPOѭӧng saponin tәng trong chiӃt xuҩt tӯ UDXPiVDXÿy ӭng dөng vào các sҧn phҭPFKăPVyFFiQKkQÿӇ sҧn phҭPÿҥWÿѭӧFÿӝ bӅn và hiӋu quҧ sӱ dөng tӕt nhҩt

2.1 MӨC TIÊU VÀ NӜ,'81*Ĉӄ TÀI Ӣ ViӋt Nam, ngoài rau má rҿ quҥt (Centella asiatica), xuҩt hiӋn thêm mӝt loҥi rau má mӟi và dҫn trӣ nên phә biӃQÿyOjUDXPiOiWUzQHydrocotyle verticillata) HiӋn QD\WURQJQѭӟFFKѭDFyQKLӅu nghiên cӭu vӅ thành phҫn và hoҥt tính cӫa loҥi rau má này Bên cҥQKÿyKjPOѭӧng saponin trong các chӃ phҭm tӯ rau má trên thӏ WUѭӡng là không cao Do ÿyPөc tiêu cӫa luұQYăQOjQJKLrQFӭu, ÿiQKJLá thành phҫn saponin và hoҥt tính cӫa hai loҥi rau má rҿ quҥt YjOiWUzQÿӗng thӡi khҧo sát quá trình nâng cao KjPOѭӧng saponin trong chiӃt xuҩt tӯ rau má Tӯ ÿyÿӏQKKѭӟng ӭng dөng cho sҧn phҭPFKăPVyFFiQKkQFKӭa chiӃt xuҩWFyKjPOѭӧng saponin tәng cao

Vӟi mөc tirXÿyQӝi dung nghiên cӭu bao gӗPFiFEѭӟc sau: x Chuҭn bӏ YjÿiQKJLiQJX\rQOLӋu x Khҧo sát quá trình trích ly saponin tӯ rau má x ĈiQKJLi thành phҫn saponin trong hai loҥi rau má x KhҧRViWTXiWUuQKQkQJFDRKjPOѭӧng saponin tәng trong chiӃt xuҩt tӯ rau má x ĈiQKJLiKRҥt tính kháng oxi hóa, ӭc chӃ hình thành melanin cӫa các chӃ phҭm tӯ rau má x ĈiQKJLiÿӝ bӅn cӫa các chӃ phҭm tӯ rau má x ĈӏQKKѭӟng ӭng dөng vào sҧn phҭPFKăPVyFGD

Nguyên liӋu chính là tҩt cҧ các bӝ phұn cӫa cây rau má rҿ quҥt (Centella asiatica) (trӯ phҫn rӉÿѭӧc thu hoҥch ӣ %LrQ+zDĈӗng Nai vào tháng 10/2020 và tҩt cҧ các bӝ phұn cӫa rau má lá tròn (Hydrocotyle verticillata) (trӯ phҫn rӉÿѭӧc thu hoҥch ӣ TiӅn Giang vào cuӕi tháng 10/2020

Tҩt cҧ các hóa chҩt sӱ dөng ÿӅXÿmÿѭӧc phân tích YjÿӏQKOѭӧng nên không cҫn tinh chӃ WUѭӟc khi sӱ dөng.

STT Tên hóa chҩt Xuҩt xӭ

1 Ethanol tuyӋWÿӕi VN-Chemsol Co., Ltd

3 Sulfuric acid Xilong Chemical Co., Ltd

4 Asiaticoside Shanhai Yuanye Bio-Technology Co., Ltd

5 Madecassoside Shanhai Yuanye Bio-Technology Co., Ltd

7 Ethyl acetate VN-Chemsol Co., Ltd

8 Methanol VN-Chemsol Co., Ltd

Bҧng 2 2 Dөng cө và thiӃt bӏ sӱ dөng

3 Cánh khuҩy 4 Ӕng nhӓ giӑt

1 Cân chính xác 2 0i\ÿRÿӝ ҭm SATORIUS MA35

3 ThiӃt bӏ cô quay chân không 4 0i\ÿR89-Vis Helios Epsilon

5 ThiӃt bӏ lӑc chân không 6 ThiӃt bӏ HPLC Agilent 1260

7 BӃp khuҩy và gia nhiӋt 8 0i\ÿRPjX&KURPD0HWHU&5-400

;iFÿӏnh các tính chҩt cӫa mүu

0i\SKkQWtFKÿӝ ҭP6$725,860$ÿѭӧc sӱ dөQJÿӇ [iFÿӏQKÿӝ ҭm cӫa mүu 0,5 g mүXÿѭӧc nghiӅn nhӓ và trҧLÿӅXWUrQÿƭDQK{PWUѭӟFNKLÿѭӧFÿһt vào buӗng mүXÿӇ tiӃQKjQKÿRҬPÿѭӧc loҥi khӓi mүu bҵQJSKѭѫQJSKiSQKLӋW6DXÿyVӵ chênh lӋch khӕLOѭӧng giӳa mүu khô cuӕi cùng và mүXEDQÿҫXÿѭӧFWtQKWRiQÿӇ WKXÿѭӧFÿӝ ҭm cӫa mүu

Các thông sӕ màu sҳc cӫa mүXÿѭӧFÿREҵng máy Chroma Meter CR-400 dӵa trên không gian màu CIE LCh x Trөc L mô tҧ ÿӝ sáng cӫa màu tӯ PjXÿHQ tuyӋWÿӕL/ ÿӃn màu trҳng tuyӋt ÿӕi (L0) x TrөF&ÿҥi diӋn cho sҳFÿӝ hay ÿӝ bão hòa màu, kéo dài tӯ gӕc 0 ӣ trung tâm cӫa vòng tròn, vӏ trí hoàn toàn không bão hòa (màu xám trung lұp hoһFPjXÿHQ hay trҳQJÿӃn 100 hoһc nhiӅXKѫQӣ mép cӫa vòng trzQÿӕi vӟi các màu có sҳc ÿӝ rҩt cao hoһF³PjXWLQKNKLӃW´ x TrөFKÿҥi diӋQFKRJyFPjX&iFÿѫQYӏ ӣ dҥng góc: tӯ 0 o PjXÿӓÿӃn 90 o (màu vàng), 180 o (xanh lөFÿӃn 270 o [DQKGѭѫQJYjTXD\Oҥi 0 o

Các mүXÿѭӧF ÿR PjXWUӵc tiӃp trong cuvet thӫy tinh 1 cm mà không cҫn pha loãng

MӭFÿӝ chênh lӋch màu sҳc cӫa các mүXÿѭӧFÿiQKJLiWK{QJTXDJiá trӏ sai biӋt màu sҳc tәng ǻE Giá trӏ này ÿѭӧc [iFÿӏnh bҵng công thӭc (1):

Hình 2 1 Không gian màu CIE LCh Hình 2 2 0i\ÿRPjX&5-400

;iFÿӏQKKjPOѭӧng saponin tәng trong dӏch chiӃt

3àL mүu phõn tớch và chҩWÿӕi chӭng ÿѭӧc chҩm riờng biӋt trờn bҧn mӓng silica gel HӋ dung môi giҧLO\ÿѭӧc sӱ dөng bao gӗm ethyl acetate: methanolQѭӟc theo tӍ lӋ 8:2:1 [38] Bҧn mӓng saXNKLÿѭӧc chҩm mүu sӁ ÿѭӧFÿѭDYjREXӗng chӭa dung môi giҧi ly mӝt cách cҭn thұn Khi dung môi chҥ\ÿӃn vҥFKÿӏnh sҹn, bҧn mӓQJÿѭӧc lҩy ra sҩ\NK{ĈӇ TXDQViWÿѭӧc các vӃWVDSRQLQGѭӟi ánh sáng khҧ kiӃn, bҧn mӓQJÿѭӧc phun bҵng dung dӏch vanillin 0,06 g/mL trong ethanol và dung dӏFKVXOIXULFDFLGÿұPÿһc Sau khi sҩy khô, các vӃt hiӋn rõ trên bҧn mӓng

7KHRSKѭѫQJSKiSQj\WKtQJKLӋm tiӃn hành trên 2 mүu dӏch chiӃt rau má rҿ quҥt, lá tròn và chҩt tinh khiӃWWKѭѫQJPҥi TECA (SEPPIC) TECA bao gӗm 3 thành phҫn saponin: asiaticoside (39,7%), asiatic acid (23,6%) và madecassic acid (28,0%) Dӵa vào vӏ trí các vӃt cӫa mүXÿӕi chӭng TECA, các thành phҫn triterpenoid saponin trong hai loҥi dӏch chiӃWUDXPiÿѭӧFVѫEӝ [iFÿӏnh thông qua hӋ sӕ di chuyӇn Rf, ÿѭӧc tính theo công thӭc (2) Giá trӏ Rf cӫa các vӃt nҵm trong khoҧng 0,3 ± 0,7 thì phù hӧp

7URQJÿy[± khoҧng cách di chuyӇn cӫa chҩt phân tích y ± khoҧng cách di chuyӇn cӫa dung môi

+jPOѭӧng saponin tәQJÿѭӧF[iFÿӏnh bҵQJSKѭѫQJSKiSYDQLOOLQ± sulfuric acid [6] Dung dӏch vanillin 8% (w/v)PJYDQLOOLQÿѭӧc hòa tan trong 10 mL ethanol tuyӋWÿӕi Dung dӏch acid sulfuric 72% (v/v)P/DFLGVXOIXULFÿѭӧc hòa tan vào 28 P/Qѭӟc cҩt

0,5 mL dung dӏch mүXÿѭӧc cho vào ӕng nghiӋP6DXÿyWKrPOҫQOѭӧt 0,5 mL dung dӏch vanillin và 5,0 mL acid sulfuric, lҳFÿӅu và ngâm lҥnh Hӛn hӧSÿѭӧc làm ҩm ӣ 60 o &WURQJSK~WVDXÿyOjPOҥQKWURQJQѭӟFÿiOҥQKSK~WĈӝ hҩSWKXÿѭӧc xác ÿӏnh bҵQJPi\ÿR89-Vis Helios Epsilon ӣ Eѭӟc sóng 538 nm, thí nghiӋm lһp lҥi 3 lҫn và lҩy giá trӏ trung bình cho mӛi nӗQJÿӝ+jPOѭӧng saponin tәQJÿѭӧF[iFÿӏnh theo công thӭc (3) (dӵa theo nghiên cӭu cӫa 1KLĈ3 [42]):

Vӟi A ± Ĉӝ hҩp thu tҥLEѭӟc sóng 538 nm

3K˱˯QJSKiSV̷c kí l͗ng hi XQăQJFDR+3/&

Nguyên liӋu và thiӃt bӏ

Rau má

Hóa chҩt

ThiӃt bӏ thӵc hiӋn

Bҧng 2 2 Dөng cө và thiӃt bӏ sӱ dөng

ThiӃt bӏ sҳc kí lӓng hiӋXQăQJFDR$JLOHQW,QILQLW\WKHRP{KuQKVҳc kí pha ÿҧo sӱ dөQJÿҫu dò DAD ӣ Eѭӟc VyQJQPFySKDÿӝng là dung dӏch pH 2,7 ± 2,8 và acetonitrile vӟi tӍ lӋ WѭѫQJӭQJOjYY1ѭӟc sӱ dөng có pH 2,7 ± ÿѭӧc ÿLӅu chӍnh bҵng dung dӏch acid orthophosphoric TӕF ÿӝ dòng cӫD SKD ÿӝng là 1 mL/phỳt, thӇ tớch tiờm mүXOjȝ/YjFӝt SKDWƭQKC18 (150mmì4,6 mm, 5àm) ÿѭӧc giӳ ӣ nhiӋWÿӝ 28 o C

NӗQJÿӝ cӫDDVLDWLFRVLGHÿѭӧF[iFÿӏnh tӯ SKѭѫQJWUuQK (4) (dӵa theo nghiên cӭu cӫa Huy T N G [40]): y = 1,3769x + 13,656 R 2 = 0,9972 (4)

Vӟi y là diӋn tích (mAU.s) x là nӗQJÿӝ asiaticoside (ppm)

NӗQJÿӝ cӫDPDGHFDVVRVLGHÿѭӧF[iFÿӏnh tӯ SKѭѫQJWUuQK (5) và (6) (dӵa theo nghiên cӭXWUѭӟFÿy[41])

Vӟi y là diӋn tích (mAU.s) x là nӗQJÿӝ madecassoside (ppm)

2.3.3ĈiQKJLiKRҥt tính kháng oxi hóa

2.3.3ĈiQKJLiKR̩t tính kháng oxi hóa b̹QJSK˱˯QJSKiS$%76

6DSRQLQYjPӝWVӕWKjQKSKҫQWURQJFDRFKLӃWYjEӝWFKӃSKҭPWӯUDXPiVӁNKӱ gӕFWӵGRABTS + FyPjXOөFODPÿӃQ[DQKQJӑFYӅGҥQJ$%76 + NK{QJPjX+RҥWWtQK NKiQJR[LKyDÿѭӧF[iFÿӏQKNKLÿRÿӝKҩSWKX EҵQJPi\UV-Vis Helios Epsilon WҥL EѭӟFVyQJQPYӟLFKҩWÿӕLFKӭQJOjDVFRUELFDFLGYLWDPLQ& a 6jQJOӑFNKRҧQJQӗQJÿӝӭFFKӃ

0үXÿѭӧFSKkQWiQWURQJGXQJGӏFKÿӋPSKRVSKDWHS+ WKjQKFiFQӗQJÿӝ WKӱQJKLӋPSSP

$%76ÿѭӧFKzDWDQWURQJQѭӟFYӟLQӗQJÿӝPPRO/VDXÿyÿѭӧFWUӝQYӟLGXQJ GӏFKNDOLSHUVXOIDWH.2S2O8PPRO/WKHRWӍOӋUӗLӫWURQJEyQJWӕL ӣQKLӋWÿӝ phòng 12-JLӡWUѭӟFNKLVӱGөQJÿѭӧFGXQJGӏFKJӕF3KDORmQJGXQJGӏFKQj\EҵQJ ÿӋPÿӃQÿӝKҩSWKX2'734 WUѭӟFNKLWLӃQKjQKFKRSKҧQӭQJ

0̳XÿR FKͱD x ȝ/GXQJGӏFKABTS x ȝ/GXQJGӏFKPүXӣQӗQJÿӝWKӱQJKLӋP

0̳Xÿ͙LFKͱQJFKͱD x 2000 ȝ/GXQJGӏFKABTS x 1000 ȝ/ GXQJGӏFKDVFRUELFDFLGPJP/

0̳XWU̷QJFKͱD x 2000 ȝ/GXQJGӏFKABTS x 1000 ȝ/ GXQJGӏFKÿӋPS+

26 +ӛQKӧSÿѭӧFOҳFÿӅXÿӇ\rQFKRSKҧQӭQJӣQKLӋWÿӝSKzQJWURQJSK~WUӗL WLӃQKjQKÿRÿӝKҩSWKX b ;iFÿӏQKJLiWUӏ,& 50

7ӯNӃWTXҧNKҧRViWPүXӣFiFQӗQJÿӝWKӱQJKLӋPWLӃQKjQKWKtQJKLӋPWѭѫQJWӵ YӟLQӗQJÿӝSKKӧS0ӛLQӗQJÿӝPүXÿѭӧFWKӵFKLӋQtWQKҩWOҫQÿӇWtQKJLiWUӏ trung bình

3KҫQWUăPӭFFKӃFDWLRQJӕFWӵGRÿѭӧFWtQKWKHRF{QJWKӭFVDX

A ± ÿӝKҩSWKXFӫDGXQJGӏFKFKӭDPүXWKӱ

Ao ± ÿӝKҩSWKXFӫDGXQJGӏFKFKӭDPүXWUҳQJ

*LiWUӏ,&50 ÿѭӧF[iFÿӏQKWӯÿѭӡQJFRQJELӇXGLӉQPӕLTXDQKӋJLӳDQӗQJÿӝYj SKҫQWUăPӭFFKӃ4

2.3.3ĈiQKJLiKo̩t tính kháng oxi hóa b̹QJSK˱˯QJSKiS'33+

*ӕFWӵGR'33+EDQÿҫXFyPjXWtPVӁFKX\ӇQVDQJPjXYjQJGRFyVӵWiFÿӝQJ FӫDFiFFKҩWNKiQJR[LKyD.KҧQăQJEҳWJӕFWӵGRFӫDFKҩWQJKLrQFӭXÿѭӧF[iFÿӏQK EҵQJ SKѭѫQJ SKiS ÿR ÿӝ KҩS WKX WҥL EѭӟF VyQJ Qm EҵQJ Pi\UV-Vis Helios Epsilon$VFRUELFDFLGYLWDPLQ&ÿѭӧFVӱGөQJOjPFKҩWÿӕLFKӭQJ a 6jQJOӑFNKRҧQJQӗQJÿӝӭFFKӃ

0үXÿѭӧFKzDWDQWURQJDMSO ӣFiFQӗQJÿӝWKӱQJKLӋPSSPDPPH ÿѭӧFKzDWDQWURQJPHWKDQROӣQӗQJÿӝPPRO/

0̳XÿRFKͱa: x ȝ/PHWKDQRO x ȝ/GXQJGӏFKPүXӣQӗQJÿӝWKӱQJKLӋP x ȝ/GXQJGӏFK'33+WURQJPHWKDQRO

7KӵFKLӋQWѭѫQJWӵÿӕLYӟLPүXÿӕLFKӭQJYjPүXWUҳQJFKӍWKD\ÿәLGXQJGӏFK PүXEҵQJGXQJGӏFKDVFRUELFDFLGQӗQJÿӝPJP/WURQJGXQJP{L'062ÿӕLYӟL PүXÿӕLFKӭQJKRһFDMSO ÿӕLYӟLPүXWUҳQJ

+ӛQKӧSÿѭӧFOҳFÿӅXÿӇ\rQFKRSKҧQӭQJӣQKLӋWÿӝSKzQJWURQJSK~WUӗLWLӃQKjQKÿRÿӝKҩSthu

3KҫQWUăPEҳWJӕFWӵGR'33+ÿѭӧFWtQKWKHRF{QJWKӭFVDX

A0 ± ÿӝKҩSWKXFӫDGXQJGӏFKFKӭDPүXWUҳQJ

Ac ± ÿӝKҩSWKXFӫDGXQJGӏFKFKӭDFKҩWÿӕLFKLӃX

*LiWUӏ,&50 ÿѭӧF[iFÿӏQKWӯÿѭӡQJFRQJELӇXGLӉQPӕLTXDQKӋJLӳDQӗQJÿӝYj SKҫQWUăPӭFFKӃ4 ĈiQKJLi hoҥt tính hӛ trӧ trҳng da

0HODQLQÿѭӧc hình thành trong các tӃ bào melanocyte bҵng mӝWTXiWUuQKÿѭӧc gӑi là melanogenis Quá trình melanogenis diӉQUDWURQJFiFPHODQRVRPHÿҫu tiên sӁ là quá trình oxy hóa L-tyrosine thành L-DOPA (L-3,4-GLK\GUR[\SKHQ\ODODQLQH Yj VDX ÿy WKjQKGRSDTXLQRQHÿѭӧc xúc tác bӣi enzyme tyrosinase [43] Mһc dù melanLQÿyQJYDL trò bҧo vӋ GDQKѭQJVӵ tích tө PHODQLQNK{QJÿӗQJÿӅu ӣ da sӁ trӣ thành mӝt vҩQÿӅ thҭm mӻ'RÿyQKLӅu nghiên cӭu tұp trung vào viӋc ӭc chӃ sӵ KuQKWKjQKPHODQLQÿӇ ӭng dөng vào trong mӻ phҭm

3KѭѫQJSKiSÿiQKJLiKjPOѭӧng melanin nӝLEjRÿѭӧc tiӃn hành trên tӃ bào B16

TӃ EjRQj\ÿѭӧc nuụi cҩy WURQJP/P{LWUѭӡQJ'0(0'XOEHFFRảV0RGLILHG(DJOH Medium) vӟi mұWÿӝ 2 x 10 5 tӃ bào/giӃng WUrQÿƭDJLӃng ӣ ÿLӅu kiӋn 37 o C, 5% CO2 trong 24 giӡ ÿӇ әQÿӏnh tӃ bào [44]

6DXÿyàM IBMX (3-isobutyl-1-methylxanthine) ÿѭӧc thờm vào mӛi giӃng ÿӇ kích thích sinh tәng hӧS PHODQLQ Ĉӗng thӡi, các tác chҩt ӭc chӃ sinh tәng hӧp melanin (cao chiӃt rҿ quҥt và lỏ trũnÿѭӧc bә sung vào ӣ cỏc nӗQJÿӝ 50 àg/mL, 100 àg/mL và 200 àg/mL Thӵc hiӋQWѭѫQJWӵ vӟi mүXÿӕi chӭng là 2 mM arbutin

28 Sau 48 giӡ, tiӃn hành thu melanin nӝi bào Rӱa các tӃ bào bҵng 3 mL PBS SKRVSKDWHEXIIHUHGVDOLQHVDXÿyEә sung 500 àL dung dӏch gӗPÿӋm Na-phosphate

20 nM, PMSF (phenylmethylsulfonyl fluoride) 1 mM, 1% Triton-;ÿӇ hòa tan tӃ bào Dung dӏch chӭa tӃ EjRÿѭӧc ӫ ӣ 80 o C trong vòng 45 phút Các mүXÿѭӧc ly tâm vӟi tӕFÿӝ 13000 vòng/phút trong 20 phút ӣ 4 o C Thu phҫn tӫDÿӇ ÿRKjPOѭӧng melanin

Phҫn kӃt tӫD ÿѭӧc sҩ\ NK{ WUѭӟc khi thờm vào 150 àL NaOH 1N trong 10% DMSO6DXÿyKӛn hӧSÿѭӧc siêu âm ӣ 80 o &ÿӃn khi hòa tan hoàn toàn melanin Mұt ÿӝ TXDQJ2'ÿѭӧFÿRӣ Eѭӟc sóng 450 nm

+jPOѭӧQJPHODQLQWѭѫQJÿӕLÿѭӧc tính bҵng công thӭc: ܪ݈݉ዛዘ݈݊݃݉݁ܽ݊݅݊ݐዛዓ݊݃¯ዎ݅ሺΨሻ ൌܱܦ ଵ ܱܦ ଴ ൈ ͳͲͲ (9)

Vӟi OD0 và OD1 là mұWÿӝ quang cӫa mүu control và mүu thӱ.

Nӝi dung thӵc hiӋn

Quy trình thӵc hiӋn

Hình 2 4 Quy trình tách chiӃt, tinh chӃ và ÿiQKJLiWtQKFKҩt chӃ phҭm tӯ rau má

29 Rau má rҿ quҥt (Centella asiatica) và lá tròn (Hydrocotyle verticillata) WѭѫLVDX khi thu hoҥFKÿѭӧc xӱ OêÿӇ WKXÿѭӧc bӝt rau má khô 6DXÿyTX\WUuQKWUtFKO\ÿѭӧc xây dӵng dӵa trên viӋc khҧo sát các yӃu tӕ ҧQKKѭӣng QKѭGXQJP{LWUtFKO\, tӍ lӋ nguyên liӋu: dung môi và sӕ lҫn tұn trích Dӏch chiӃWÿѭӧc loҥi bӓ dung môi bҵng thiӃt bӏ cô quay chân không Hai loҥi cao chiӃt rau má rҿ quҥWYjOiWUzQÿѭӧFÿiQKJLiKjPOѭӧng saponin tәng và các thành phҫQWULWHUSHQRLGVDSRQLQ6DXÿycao chiӃWÿѭӧc tinh chӃ ÿӇ QkQJFDRKjPOѭӧng saponin tәng bҵQJSKѭѫQJSKiSVӱ dөng nhӵa hҩp phө Các yӃu tӕ ҧQKKѭӣng (nӗQJÿӝ dung dӏch cao chiӃt, loҥi dung môi rӱa giҧi, loҥi nhӵa hҩp phө) ÿѭӧc khҧRViWÿӇ xây dӵng quy trình tinh chӃ WKXÿѭӧc bӝt chӃ phҭm Các chӃ phҭm tӯ UDXPiQKѭFDRFKLӃt rҿ quҥt, cao chiӃt lá tròn và bӝt chӃ phҭPÿѭӧFÿiQKJLiWtQKFKҩt vұt lý, hoҥt tính kháng oxi hóa và hoҥt tính hӛ trӧ trҳng da.

Trích ly triterpenoid saponin tӯ rau má

Rau má rҿ quҥt và lá tròn WѭѫLÿѭӧc sҩ\NK{ÿӃQNKLÿҥWÿӝ ҭPGѭӟLVDXÿy ÿѭӧc nghiӅn nhӓ thành bӝWYjOѭXWUӳ WURQJÿLӅu kiӋn NK{QJFyiQKViQJVLOLFDJHOÿѭӧc sӱ dөQJÿӇ giӳ cho bӝt rau má không bӏ ҭm

Quá trình trích ly chӏu ҧQKKѭӣng cӫa nhiӅu yӃu tӕ QKѭORҥi dung môi, tӍ lӋ nguyên liӋu: dung môi, nhiӋWÿӝ và sӕ lҫn tұn trích Trong nӝi dung cӫa nghiên cӭu, quy trình WUtFKO\ÿѭӧc xây dӵng dӵa trên viӋc khҧo sát các yӃu tӕ Qj\WKHRSKѭѫQJSKiSOXkQ phiên tӯng biӃn ChӍ WLrXÿiQKJLiOjKLӋu suҩt chiӃWVDSRQLQÿѭӧF[iFÿӏnh qua công thӭc (10)

2.4.2.1 Xây d͹ng quy trình trích ly rau má r̓ qu̩t

Kh ̫ o sát ̫QKK˱ͧ ng c ͯ a dung môi: Các dung môi ethanol 98%, 75%, 50%, 25%

YjQѭӟFÿѭӧc lӵa chӑQÿӇ khҧo sát sӵ ҧQKKѭӣQJÿӃn quá trình trích ly saponin trong rau má BӝWUDXPiNK{ÿѭӧc chiӃt bҵng dung môi vӟi tӍ lӋ 1:10 (g/mL), khuҩ\ÿӅu trong

1 giӡ tҥi nhiӋWÿӝ sôi [19, 45]4XiWUuQKÿѭӧc tiӃn hành 3 lҫn và thӵc hiӋQWѭѫQJWӵ vӟi các lҫn chiӃt sau Dung môi phù hӧp nhҩt sӁ ÿѭӧc lӵa chӑn cho các khҧo sát tiӃp theo

Kh ̫ o sát ̫QKK˱ͧ ng c ͯ a s ͙ l ̯ n t ̵ n trích: 4XiWUuQKWUtFKO\ÿѭӧc tiӃn hành vӟi 3 lҫn tұn trích TәQJOѭӧQJVDSRQLQWKXÿѭӧc trong mӛi lҫQÿѭӧFÿiQKJLiYjVRViQK

Kh ̫ o sát ̫QKK˱ͧ ng c ͯ a t ͑ l nguyên li u: dung môi: Các tӍ lӋ 1:5, 1:10, 1:15

(g/mL) giӳa bӝt rau má khô và dung môLÿѭӧc khҧo sát Các yӃu tӕ còn lҥLWѭѫQJWӵ QKѭ các khҧo sát trên TӍ lӋ thích hӧp nhҩt sӁ ÿѭӧc lӵa chӑn

2.4.2.2 Xây d͹ng quy trình trích ly rau má lá tròn ĈLӅu kiӋn thích hӧp cӫa quy trình trích ly rau má rҿ quҥWÿѭӧc áp dөng cho quá trình trích ly rau má lá tròn Tuy nhiên, do vӏ trí thu hái và thành phҫn khác nhau nên quy trình trích ly UDXPiOiWUzQÿѭӧc khҧo sát lҥi yӃu tӕ dung môi chiӃWYuÿk\Oj\Ӄu tӕ quan trӑng ҧQKKѭӣQJÿӃn hiӋu suҩt chiӃWVDSRQLQ5DXPiOiWUzQÿѭӧc trích ly bҵng các dung P{LHWKDQROYjFiFÿLӅu kiӋQNKiFÿѭӧc cӕ ÿӏnh WKHRÿLӅu kiӋn thích hӧp cӫa quy trình trích ly rau má rҿ quҥt NӗQJÿӝ saponin tәng và hiӋu suҩt chiӃt saponin cӫa dӏch chiӃWUDXPiOiWUzQÿѭӧFÿiQKJLi

Các dӏch chiӃt rau má rҿ quҥt và rau má lá tròn ӣ ÿLӅu kiӋn trích ly thích hӧSÿѭӧc loҥi bӓ GXQJP{LÿӇ WKXÿѭӧc cao chiӃt Cao chiӃWÿѭӧFOѭXWUӳ WURQJÿLӅu kiӋn không có ánh sáng, ӣ nhiӋWÿӝ thҩp.

Tinh chӃQkQJFDRKjPOѭӧng saponin trong cao chiӃt

ĈӇ chӃ phҭm tӯ rau má thӇ hiӋQÿѭӧc các hoҥt tính tӕt nhҩt và dӉ dàng ӭng dөng vào trong mӻ phҭm, cao chiӃWUDXPiÿѭӧc tinh chӃ YjQkQJFDRKjPOѭӧng saponin tәng bҵng các loҥi polymer hҩp phө

Nhӵa HPD300 cӫa Shanghai Yuanye Bio-Technology Co Ltd (Trung Quӕc), nhӵa HPD100 và AB-8 cӫa Donghong Chemical Co Ltd (Trung QuӕFÿѭӧc sӱ dөng ÿӇ tinh chӃ YjQkQJFDRKjPOѭӧng saponin trong cao chiӃWUDXPi&iFÿһc tính cӫa nhӵa hҩp phө ÿѭӧc liӋt kê trong Bҧng 1.1

Hình 2 5 Quy trình tinh chӃ cao chiӃt rau má bҵng nhӵa hҩp phө

Nhӵa hҩp phө ÿѭӧc ngâm trong ethanol 98% trong 24 giӡ ÿӇ hoҥWKyDYjÿѭӧc rӱa lҥi nhiӅu lҫn bҵQJQѭӟc cҩWWUѭӟc khi sӱ dөng Cӝt thӫy tinh (ứ12 mm ì150 mm) ÿѭӧc nhӗi nhӵDѭӟWÿmKRҥt hóa) Cao chiӃWUDXPiÿѭӧFSKkQWiQWURQJQѭӟFYjÿһt trong bӇ VLrXkPÿӇ tҥo thành dung dӏFKÿӗng nhҩt DӏFKSKkQWiQÿѭӧc cho qua cӝt hҩp phө, sau ÿyFӝWÿѭӧc rӱa bҵng 4 BV (BV: thӇ WtFKWѭѫQJÿѭѫQJYӟLOѭӧng nhӵDÿѭӧc nhӗi trong cӝt) Qѭӟc cҩt 6DSRQLQÿѭӧc tách ra khӓi nhӵa bҵng dung môi rӱa giҧi Dung dӏch rӱa giҧLÿѭӧc loҥi bӓ hoàn toàn dung môi bҵQJF{TXD\FKkQNK{QJWKXÿѭӧc bӝt chӃ phҭm FyKjPOѭӧng saponin tәQJFDR6DXÿyEӝt chӃ phҭPÿѭӧFÿiQKJLiWtQKFKҩt vұt lý, KjPOѭӧng saponin, hoҥt tính kháng oxi hóa (mөc 2.Yjÿӝ bӅn theo thӡi gian

Quy trình tinh chӃQkQJFDRKjPOѭӧng saponin bҵng nhӵa hҩp phө chӏu nhiӅu yӃu tӕ ҧQKKѭӣQJQKѭQӗQJÿӝ dung dӏch cao chiӃt, loҥi dung môi rӱa giҧi, loҥi nhӵa hҩp phөô7URQJQӝi dung này, nghiờn cӭu tiӃn hành xõy dӵng quy trỡnh tinh chӃ chӃ phҭm tӯ rau má dӵa trên khҧo sát luân phiên tӯng biӃn các yӃu tӕ ҧQKKѭӣng Khҧ QăQJ hҩp phө và rӱa giҧLÿѭӧc lӵa chӑQÿӇ ÿiQKJLiYjOӵa chӑQÿLӅu kiӋn phù hӧp nhҩt cho quy trình Khҧ QăQJKҩp phө và rӱa giҧLÿѭӧc tính theo công thӭc (11) và (12)

Cӝt thӫ\WLQKÿѭӧc nhӗi 3 g nhӵDѭӟt WѭѫQJÿѭѫQJYӟi thӇ tích tӕi thiӇu (BV) là

6 mL), thӇ tích cӫa dung dӏch cao chiӃt là 30 mL, quá trình tinh chӃ ÿѭӧc tiӃn hành ӣ nhiӋWÿӝ SKzQJĈk\OjFiF\Ӄu tӕ ÿѭӧc cӕ ÿӏnh trong suӕt quá trình khҧo sát

Kh ̫ o sát ̫QKK˱ͧ ng c ͯ a n ͛QJÿ͡ dung d ͓ ch cao chi ͇ t: Cao chiӃt ÿѭӧc phân tán

WURQJQѭӟc thành các nӗQJÿӝ dung dӏch 2,5; 5; 10 và 15 g/L 6DXÿydung dӏFKÿѭӧc chҧy qua cӝt nhӵa hҩp phө HPD100 trong 2 giӡ CӝWÿѭӧc rӱa bҵQJ%9Qѭӟc cҩWWUѭӟc khi 2 BV dXQJP{LHWKDQROÿѭӧc sӱ dөQJÿӇ rӱa giҧi saponin [40] Khҧ QăQJUӱa giҧLÿѭӧFÿiQKJLiYjVRViQK1ӗQJÿӝ dung dӏch cao chiӃt có giá trӏ này cao nhҩt sӁ ÿѭӧc lӵa chӑn cho các khҧo sát tiӃp theo

Kh ̫ o sát ̫QKK˱ͧ ng c ͯ a dung môi r ͵ a gi ̫ i: Sau khi quá trình hҩp phө hoàn tҩt, các dung môi rӱa giҧi (ethanol 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20% và 10%) ÿѭӧc khҧo sát khҧ năQJWiFKVDSRQLQUDNKӓi nhӵa hҩp phө KhҧRViWQj\ÿѭӧFÿiQKJLi thông qua giá trӏ khҧ QăQJUӱa giҧi Dung môi rӱa giҧi thích hӧp sӁ ÿѭӧc lӵa chӑn cho khҧo sát sau

Kh ̫ o sát ̫QKK˱ͧ ng c ͯ a polymer h ̭ p ph ͭ : Quá trình khҧo sát ҧQKKѭӣng cӫa polymer hҩp phө ÿѭӧc tiӃn hành trên 3 loҥi nhӵa HPD300, HPD100 và AB-8 Các loҥi nhӵa hҩp phө này sau khi hoҥWKyDÿѭӧc sӱ dөQJÿӇ thӵc hiӋn quy trình tinh chӃ chӃ phҭm tӯ rau má tҥLÿLӅu kiӋn thích hӧp nhҩt cӫa các khҧRViWWUѭӟFÿy.Kҧ QăQJKҩp phө và khҧ QăQJUӱa giҧi OjWLrXFKtÿӇ ÿiQKJLiYjOӵa chӑn loҥi polymer phù hӧp nhҩt cho quy trình

2.4.4 ĈiQKJLicác chӃ phҭm tӯ rau má

Cao chiӃt rau má rҿ quҥt, cao chiӃt rau má lá tròn và bӝt chӃ phҭm WKXÿѭӧc tӯ quá trình tinh chӃQkQJFDRKjPOѭӧng saponin tәng trong cao chiӃWUDXPiÿѭӧFÿiQKJLi

33 ngoҥLTXDQKjPOѭӧng saponin tәng (mөc 2.3.2), hoҥt tính kháng oxi hóa và hoҥt tính hӛ trӧ trҳng da

Tӯ ÿyFiFFKӃ phҭPÿѭӧFÿӏQKKѭӟng ӭng dөng vào các sҧn phҭPFKăPVyFFi nhân và mӻ phҭPĈӝ әQÿӏnh cӫa sҧn phҭm mӻ phҭm phө thuӝc vào nhiӅu yӃu tӕ, trong ÿyÿӝ bӅn cӫa hoҥt chҩt là mӝt trong nhӳng yӃu tӕ quan trӑng nhҩt Vì vұy, các hӋ giҧ lұp cӫa hai loҥi cao chiӃt rau má và bӝt chӃ phҭPÿѭӧFSKkQWiQWURQJQѭӟFYjÿiQKJLi ÿӝ bӅQKjPOѭӧng hoҥt chҩt saponin và màu sҳc theo thӡLJLDQNKLOѭXWUӳ WURQJFiFÿLӅu kiӋn khҧo sát ĈiQKJLiKR̩t tính kháng oxi hóa

Cao chiӃt rau má rҿ quҥt, cao chiӃt rau má lá tròn và bӝt chӃ phҭPÿѭӧFÿiQKJLi hoҥt tính kháng oxi hóa bҵQJSKѭѫQJSKiS$%76Yj'33+ÿmQrXWURQJPөc 2.3.3 Sau ÿyFiFNӃt quҧ ÿѭӧc tiӃn hành so sánh và rút ra kӃt luұn ĈiQKJLiho̩t tính h͟ trͫ tr̷ng da

Cao chiӃt rau má rҿ quҥWYjOiWUzQÿѭӧFÿiQKJLiKRҥt tính hӛ trӧ trҳng da thông TXDSKѭѫQJSKiSÿiQKJLiKjPOѭӧng melanin nӝi bào (mөc 2.3.4) rӗi tiӃn hành so sánh Các thӱ nghiӋPQj\ÿѭӧc thӵc hiӋn dӵa trên sӵ hӧp tác vӟi nhóm nghiên cӭu cӫa PGS

TS TrҫQ9ăQ+LӃu (khoa Sinh hӑc ± Công nghӋ Sinh hӑFWUѭӡng Ĉҥi hӑc Khoa hӑc tӵ nhiên ± Ĉҥi hӑc Quӕc gia Thành phӕ Hӗ Chí Minh) ĈiQKJLiÿ͡ b͉n

Các chӃ phҭm tӯ rau má sӁ ÿѭӧc phӕi trӝn vào hӋ giҧ lұp vӟi nӗQJÿӝ 0,1% Gѭӟi sӵ hӛ trӧ cӫa 0,1% chҩt hoҥWÿӝng bӅ mһt PEG-40 và 0,05% natri benzoate Các hӋ giҧ lұSQj\ÿѭӧFÿiQKJLi KjPOѭӧng saponin tәng và màu sҳc trong 1 tháng vӟi chu kǤ 7 ngày/lҫn ӣ FiFÿLӅu kiӋQOѭXWUӳ khác nhau

- ĈLӅu kiӋn sӕc nhiӋt: MүXÿѭӧFOѭXWUӳ trong tӫ lҥnh (10 o &QJj\VDXÿy ÿѭӧFOѭXWURQJWӫ ҩm (45 o C) 1 ngày, lһp lҥi chu kì nhiӅu lҫn

- ĈLӅu kiӋn nhiӋWÿӝ cao: MүXÿѭӧFOѭXWUӳ trong tӫ ҩm ӣ 45 o C

- ĈLӅu kiӋn nhiӋWÿӝ thҩp: MүXÿѭӧFOѭXWUӳ trong tӫ lҥnh ӣ 10 o C

- ĈLӅu kiӋn sáng: MүXÿѭӧFOѭXWUӳ ӣ ÿLӅu kiӋn nhiӋWÿӝ phòngSKѫLViQJWӵ nhiên

- ĈLӅu kiӋn tӕi: MүXÿѭӧFOѭXWUӳ ӣ nhiӋWÿӝ SKzQJWURQJÿLӅu kiӋn không có ánh sáng Ĉӝ bӅn hjPOѭӧng hoҥt chҩt

3KѭѫQJSKiSTXDQJSKә hҩp thu UV-Vis (mөc 3KѭѫQJSKiSTXDQJSKә hҩp thu (UV-Vis)ÿѭӧc sӱ dөQJÿӇ ÿiQKJLiKjPOѭӧng saponin tәng trong các hӋ giҧ lұp Ĉӝ bӅn màu sҳc

Bên cҥQKÿӝ bӅn cӫa saponin trong chӃ phҭm rau má, sӵ biӃQÿәi màu sҳc cӫa chӃ phҭPFǊQJVӁ ҧQKKѭӣQJÿӃn ngoҥi quan cӫa sҧn phҭm mӻ phҭm 'RÿyQJRҥi quan cӫa các hӋ giҧ lұSFǊQJÿѭӧFÿiQKJLi0i\ÿRPjX&KURPD0HWHU&5-ÿѭӧc sӱ dөQJÿӇ [iFÿӏnh màu sҳc cӫa các hӋ (;iFÿӏnh màu sҳc)

&+ѬѪ1*: KӂT QUҦ VÀ BÀN LUҰN

Các công trình nghiên cӭu cӫDQKyPWUѭӟFÿk\ÿmQJKLrQFӭu, khҧo sát thành phҫn cӫDUDXPiQKѭQJFKӍ tұp trung vào rau má rҿ quҥt tҥLFiFÿӏDSKѭѫQJNKiFQKDX Ĉӗng Nai, Long An và thành phӕ Hӗ Chí Minh) Tuy nhiên, quy trình trích ly saponin tӯ rau PiFKѭDÿѭӧc nghiên cӭu sâu Vì vұy, luұQYăQQj\VӁ tiӃn hành khҧo sát, xây dӵng quy trình trích ly saponin tӯ rau má rҿ quҥWYjUDXPiOiWUzQĈӗng thӡi, so sánh tính chҩt và thành phҫn hóa hӑc cӫDKDLÿӕLWѭӧng nghiên cӭu này

Hình 3 1 Rau má rҿ quҥWWѭѫL Hình 3 2 Rau má rҿ quҥt sҩy khô

Hình 3 3 5DXPiOiWUzQWѭѫL Hình 3 4 Rau má lá tròn sҩy khô ĈӕLWѭӧng nghiên cӭu cӫDÿӅ tài là rau má rҿ quҥt (Centella asiaticaÿѭӧc thu hoҥch ӣ Ĉӗng Nai và rau má lá tròn (Hydrocotyle verticillata) thu hoҥch ӣ TiӅn Giang 5DXPiWѭѫLVDXNKLÿѭӧc loҥi bӓ rӉ và rӱa sҥFKÿѭӧc sҩ\NK{ÿӃn NKLÿҥWÿӝ ҭm khoҧng 9% - 6DXÿyUDXPiNK{ÿѭӧc nghiӅn nhӓ YjOѭXWUӳ WURQJÿLӅu kiӋn kín, tránh ҭm

Bҧng 3 1 Tính chҩt cӫa bӝt rau má khô

Rau má rҿ quҥt Rau má lá tròn

0LKѭѫQJ +ѭѫQJWKҧRGѭӧc nhҽ +ѭѫQJWKҧRGѭӧFQKҽ Màu sҳc Màu xanh lөc có ánh vàng 0jX[DQKOөFFyiQKYjQJ

Xây dӵng quy trình trích ly

Dӏch chiӃt

3.2.1.1 Rau má r̓ qu̩t (Centella asiatica) Ҧnh Kѭӣng cӫa dung môi

'XQJ P{L ÿѭӧc sӱ dөng là hӋ ethanol-Qѭӟc, cho khҧ QăQJ ӭng dөng cao Tuy nhiên, nӗQJÿӝ HWKDQROOLrQTXDQÿӃn tính chҩt dӏch chiӃt Ӣ nӝi dung này, tính chҩt dung môi hay nӗQJÿӝ HWKDQROÿѭӧc khҧRViWÿӇ ÿiQKJLiWtQKFKҩt cӫa dӏch chiӃt YjOѭӧng hoҥt chҩWWKXÿѭӧc

Hình 3 6 Ngoҥi quan cӫa dӏch chiӃt rau má rҿ quҥt vӟi các loҥi dung môi khác nhau

Các dӏch chiӃt rau má cӫa các dung môi chiӃt khác nhau có màu sҳFWKD\ÿәi (Hình

3 6) Dӏch chiӃWFy[XKѭӟng chuyӇn tӯ màu xanh lөc sүm, nhҥt dҫn và chuyӇn thành màu vàng ánh nâu khi giҧm nӗQJÿӝ EtOH cӫa dung môi chiӃWĈӕi vӟi các dӏch chiӃt cӫa dung môi chiӃt có nӗQJÿӝ EtOH nhӓ KѫQGӏch chiӃWNK{QJFzQPjX[DQKÿһc tUѭQJFӫa sҳc tӕ FKORURSK\OOĈLӅu này chӭng tӓ, khi giҧm nӗQJÿӝ EtOH cӫa dung môi chiӃWWKuKjPOѭӧQJFKORURSK\OOFǊQJJLҧm dҫn

Hình 3 7 ҦQKKѭӣng cӫa dung môi chiӃt ÿӃn hiӋu suҩt chiӃt saponin

39 KӃt quҧ Hình 3 7 cho thҩy dung môi ҧQKKѭӣng rҩt lӟQÿӃn hiӋu quҧ chiӃt saponin

Cө thӇ, khi giҧm dҫn nӗQJÿӝ ethanol, hiӋu suҩt chiӃt saponin FǊQJFy[XKѭӟng giҧm ĈLӅu này có thӇ do các triterpenoid saponin trong rau má rҿ quҥWFyÿӝ WDQWURQJQѭӟc không cao Dӏch chiӃt EtOH 98% cho hiӋu suҩt chiӃt saponin cao nhҩWÿҥt 4,91%, cao gҩp 2,7 lҫn so vӟi dӏch chiӃWQѭӟc Vì vұy, ethanol 98% là dung môi phù hӧp cho nhӳng khҧo sát tiӃp theo ҦQKKѭӣng cӫa sӕ lҫn tұn trích

Trích ly là quá trình khuӃch tán phân tӱ, chҩt cҫn trích ly hòa tan vào dung môi và khuӃch tán ra ngoài tӃ bào Khi nӗQJÿӝ cӫa saponin cân bҵng giӳa trong và ngoài tӃ bào thì quá trình trích ly kӃWWK~F'RÿyFҫn phҧi trích ly nhiӅu lҫn và khҧo sát sӕ lҫn tұQWUtFKÿӇ WKXÿѭӧFOѭӧng saponin tӕi ÿD

Hình 3 8 Ngoҥi quan dӏch chiӃt EtOH 98% tӯ bӝt rau má rҿ quҥt

Dӏch chiӃt EtOH 98% sau 3 lҫn tұn trích cӫa rau má khô có màu sҳc giҧm dҫn theo sӕ lҫn trích ly Dӵa vào ngoҥi quan, có thӇ nhұQ[pWVѫEӝ phҫn lӟn hoҥt chҩt và các sҳc tӕ bao gӗm chlorophyll tұp trung trong dӏch chiӃt lҫn thӭ nhҩt và giҧm dҫn trong các lҫn chiӃt tiӃp theo

Bҧng 3 3 NӗQJÿӝ saponin tәng cӫa dӏch chiӃt rau má rҿ quҥt

Lҫn NӗQJÿӝ saponin tәng (mg/mL)

KhӕLOѭӧng saponin

40 Theo sӕ liӋu Bҧng 3.3, khӕLOѭӧng saponin tәng WKXÿѭӧc trong dӏch chiӃt lҫQÿҥt giá trӏ cao nhҩt (153,083 mg) và giҧm dҫn sau 3 lҫn tұn trích Cө thӇ, khӕi Oѭӧng saponin tәng trong dӏch chiӃt lҫQFDRKѫQ lҫn so vӟi dӏch chiӃt lҫn 2 (55,328 mg) Trong dӏch chiӃt lҫn thӭ OѭӧQJVDSRQLQWKXÿѭӧc chӍ chiӃm 7,40% nên các lҫn chiӃt tiӃp theo có thӇ bӓ qua ĈӇ tӕLÿDOѭӧQJVDSRQLQWKXÿѭӧc, trong các khҧo sát tiӃp theo quá trình trích ly ÿӅXÿѭӧc tiӃn hành 3 lҫn ҦQKKѭӣng cӫa tӍ lӋ nguyên liӋu: dung môi

TӍ lӋ nguyên liӋu: dung môi không chӍ ҧQKKѭӣQJÿӃn hiӋu suҩt cӫa quá trình trích ly mà còn ҧQKKѭӣQJÿӃn hiӋu quҧ kinh tӃQăQJOѭӧng và quá trình loҥi bӓ dung môi phía sau

Hình 3 9 ҦQKKѭӣng cӫa tӍ lӋ nguyên liӋu: dung môi (g/mL) ÿӃn hiӋu suҩt chiӃt saponin

KӃt quҧ (Hình 3 9) cho thҩ\NKLWăQJOѭӧng dung môi chiӃt thì hiӋu suҩt chiӃt VDSRQLQWăQJOrQ.KLOѭӧng dung môi chiӃWWăQJOrQOҫQWKuOѭӧQJVDSRQLQWKXÿѭӧc FǊQJWăQJOrQJҩSÿ{LTuy nhiên, ӣ tӍ lӋ nguyên liӋu: dung môi là 1:10 và 1:15, hàm Oѭӧng saponin trong dӏch chiӃt không có sӵ chênh lӋFKÿiQJNӇ Xét vӅ yӃu tӕ kinh tӃ, NKLOѭӧng dung môi lӟn, quá trình loҥi bӓ dung môi cҫn tӕn nhiӅu thӡLJLDQYjQăQJ OѭӧQJKѫQ9uYұy, chӑn tӍ lӋ 1:10 (nguyên liӋu: dung môi) thích hӧp cho quá trình trích ly

41 ĈLӅu kiӋn chiӃt thích hӧp cӫa quá trình trích ly rau má rҿ quҥt: x Dung môi: ethanol 98% x TӍ lӋ bӝt rau má khô/dung môi: 1:10 g/mL x NhiӋWÿӝ: nhiӋWÿӝ sôi x Sӕ lҫn chiӃt: 3 lҫn x Thӡi gian chiӃt mӛi lҫn: 1 giӡ

3.2.1.2 Rau má lá tròn (Hydrocotyle verticillata)

Do Hydrocotyle verticillata là mӝt ÿӕLWѭӧng nguyên liӋu rau má khác nên có thӇ thành phҫn khác biӋt, do vұy ҧQKKѭӣng cӫDGXQJP{LÿӃn quá trình trích ly sӁ ÿѭӧc kiӇm tra lҥi Ӣ các khҧo sát cӫa rau má rҿ quҥt thì dung môi ethanol có nӗQJÿӝ thҩp KѫQkhông có hiӋu quҧ khi tách saponin (3.2.1.1) Do vұy trong phҫn này, bӝt rau PiOiWUzQNK{ÿѭӧc thӱ lҫQOѭӧt bҵng các dung môi ethanol 98%, 90%, 75%, 60% và 50%

Hình 3 10 Ngoҥi quan cӫa dӏch chiӃt rau má lá tròn vӟi các loҥi dung môi khác nhau

Bҧng 3 4 NӗQJÿӝ saponin tәng trong các dӏch chiӃt lҫn thӭ nhҩt vӟi dung môi khác nhau

42 Các dӏch chiӃt vӟLFiFGXQJP{LNKiFQKDXÿӅu có màu xanh lөc sүm và màu sҳc giҧm dҫn khi giҧm nӗQJÿӝ ethanol (Hình 3 10) 'XQJP{LFǊQJҧQKKѭӣQJÿӃn hàm Oѭӧng saponin tәng trong dӏch chiӃt (Bҧng 3 47URQJÿydung môi EtOH 75%WKӇ KLӋQKLӋXTXҧFKLӃWWӕWQKҩW trong lҫn chiӃt thӭ nhҩt vӟi nӗQJÿӝ saponin tәng cao nhҩt (2,849 mg/mL) và tӍ lӋ saponin so vӟi nguyên liӋXNK{EDQÿҫXÿҥt 3,20%

HiӋu quҧ chiӃt hay khҧ QăQJWұQWUtFKWUrQUDXPiOiWUzQFǊQJFyNKiFELӋt so vӟi rau má rҿ quҥt Vӟi dung môi EtOH 98% và ӣ nhiӋWÿӝ sôi, quá trình chiӃWÿѭӧc tұn trích

3 lҫn chiӃt, các dӏch chiӃWWKXÿѭӧc có ngoҥi quan và tính chҩt QKѭtrong Hình 3 11 và Bҧng 3 5

Hình 3 11 Ngoҥi quan dӏch chiӃt EtOH 98% cӫa rau má lá tròn Bҧng 3 5 NӗQJÿӝ saponin tәng cӫa dӏch chiӃt EtOH 98% cӫa rau má lá tròn

Dӏch chiӃt có màu xanh lөc sүm và giҧm dҫn khi tұn trích các lҫn sau KӃt quҧ này WѭѫQJWӵ vӟi dӏch chiӃt rau má rҿ quҥt (Hình 3 8) Bên cҥQKÿyKjPOѭӧng saponin cӫa dӏch chiӃWFǊQJJLҧm dҫn (Bҧng 3 5) Cө thӇ, dӏch chiӃt lҫn thӭ nhҩt chӭa 122,363 mg saponin, chiӃm 57,39% tәQJ OѭӧQJ VDSRQLQ WKX ÿѭӧc Ĉӕi vӟi lҫn chiӃt thӭ nhҩt thì OѭӧQJVDSRQLQWiFKUDÿѭӧc trong lá tròn thҩSKѫQWURQJUҿ quҥt Tuy nhiên, khoҧng 93% tәng saponin trong nguyên liӋXÿѭӧc chiӃt hӃt trong lҫn 1 và tұQWUtFKWѭѫQJÿӗng trên cҧ KDLÿӕLWѭӧng

Bҧng 3 6 NӗnJÿӝ saponin tәng cӫa dӏch chiӃt EtOH 75%

NӗQJÿӝ saponin tәng (mg/mL)

Hӛn hӧp tәng 1,405 ± 0,072 100 1,890 ± 0,055 100 Ĉӕi vӟi GXQJP{L(W2+[XKѭӟQJFǊQJWѭѫQJWӵ QKѭWUrQ/ѭӧng saponin WKXÿѭӧc chӫ yӃu trong dӏch chiӃt lҫn thӭ nhҩt và thӭ hai (Bҧng 3.6) Bên cҥQKÿyWӍ lӋ saponin chiӃWÿѭӧc so vӟi nguyên liӋXNK{EDQÿҫu cӫDUDXPiOiWUzQÿҥt 6,37%, trong khi rau má rҿ quҥt chӍ ÿҥt 4,62% 1KѭYұy, thì dung môi ethanol 75% thích hӧp cho viӋc tách saponin tӯ rau má lá tròn và quá trình trích ly nên tұn trích trên 2 lҫn

3.2.1.3 So sánh hai lo̩i rau má ĈӇ so sánh tính chҩt và thành phҫQKDLÿӕLWѭӧng rau má rҿ quҥWYjOiWUzQÿѭӧc trích ly vӟLFQJÿLӅu kiӋn (dung môi: EtOH 98%, tӍ lӋ nguyên liӋu/dung môi: 1/10, nhiӋWÿӝ: nhiӋWÿӝ sôi, sӕ lҫn chiӃt: 3 lҫn)

Dӏch chiӃt cӫa rau má rҿ quҥt (Centella asiatica) và rau má lá tròn (Hydrocotyle verticillataÿѭӧc tiӃQKjQKSKDORmQJYj[iFÿӏnh quang phә hҩp thu UV-Vis, trình bày trong Hình 3 12

Hình 3 12 Phә hҩp thu UV-Vis cӫa dӏch chiӃt rau má rҿ quҥt và rau má lá tròn

44 Nhìn chung, các phә hҩp thu cӫa các dӏch chiӃt trҧi dài tӯ Eѭӟc sóng 200 ± 800 nm Hai phә FyFQJÿӍnh hҩSWKXÿһFWUѭQJWҥi các khoҧQJEѭӟc sóng 200 ± 230 nm,

320 ± 330 nm, 390 ± 400 nm và 660 ± QPĈLӅu này chӭng tӓ rҵng, hai loҥi rau má này có nhiӅu thành phҫQWѭѫQJÿӗng nhau Ĉһc biӋt trong YQJEѭӟc sóng 200 ± 230 QPÿӍnh hҩp thu khá lӟn, chӭng minh cho sӵ hiӋn diӋn cӫa saponin trong hai loҥi dӏch chiӃt rau má này [47] Theo Subban và cӝng sӵ, sӵ xuҩt hiӋQFiFÿӍnh tín hiӋu tҥi vùng Eѭӟc sóng 320 ± 330 nm và 390 ± 400 nm thӇ hiӋn cho sӵ có mһt cӫa các dүn xuҩt tӯ hӧp chҩt flavonoid Bên cҥQKÿyÿӍnh hҩp thu trong khoҧng 660 ± 670 nm cho thҩy sӵ có mһt cӫa chlorophyll a và b trong dӏch chiӃt EtOH 98% cӫa cҧ hai loҥi rau má [48] Hai loҥi rau má Centella asiaticaUDXPiUҿTXҥW và Hydrocotyle verticillata UDX PiOiWUzQÿѭӧc chiӃt FQJÿLӅXNLӋQ+jPOѭӧng saponin tәQJÿѭӧc thӇ hiӋn qua Hình

Hình 3 13 ҦQKKѭӣng cӫa nguyên liӋXÿӃn nӗQJÿӝ saponin tәng

Cao chiӃt

Dӏch chiӃWÿѭӧc loҥi bӓ dung môi bҵng thiӃt bӏ F{TXD\FKkQNK{QJWKXÿѭӧc cao chiӃt có các tính chҩWÿѭӧc trình bày trong Bҧng 3.7

Bҧng 3 7 Tính chҩt cӫa cao chiӃt rau má

7tQKFKҩW &DRFKLӃWUҿTXҥW &DRFKLӃWOiWUzQ

0jX[DQKOөFÿұP (L",63; C=6,28; hy,82) 0LKѭѫQJ +ѭѫQJWKҧRGѭӧF +ѭѫQJWKҧRGѭӧFQKҽ

+jPOѭӧQJҭPYjFKҩWGӉ

VRYӟLQJX\rQOLӋXVҩ\NK{ 22,46 23,37

Hai loҥi cao chiӃWFyKjPOѭӧng ҭm và hӧp chҩt dӉ ED\KѫLWѭѫQJÿӕi cao (cao chiӃt rҿ quҥt ± 11,90% và cao chiӃt lá tròn ± 16,32%) Tuy nhiên, do thành phҫn này không chӍ OjQѭӟFPjÿDVӕ là ethanol, khó có hiӋQWѭӧng vi sinh vұt phát triӇQQrQÿLӅu kiӋn này vүn có thӇ giӳ ÿӇ OѭXWUӳ và bҧo quҧn

+jPOѭӧQJVDSRQLQWәQJVRYӟLQJX\rQOLӋXNK{NK{QJTXiNKiFELӋWNKLVӱGөQJKDLORҥLUDXPiFQJWURQJNKRҧQJ KӃt quҧ Qj\WѭѫQJWӵ vӟi kӃt quҧ cӫa hàm Oѭӧng saponin trong dӏch chiӃt cӫa hai loҥi rau má (3.2.1.3)

46 Ĉӕi vӟi rau má rҿ quҥt, bӕn thành phҫn VDSRQLQ Fѫ Eҧn là asiaticoside, PDGHFDVVRVLGHDVLDWLFDFLGYjPDGHFDVVLFDFLGWKѭӡQJÿѭӧc sӱ dөQJÿӇ [iFÿӏnh và ÿiQKJLiFKҩWOѭӧng thӵc vұt hay cao chiӃt bҵng HPLC 7X\QKLrQFiFNKҧRViWYӅUDX PiOiWUzQUҩWtW1JKLrQFӭu này nhҵP[iFÿӏnh và phân biӋt hai loҥi rau má bҵng cách so sánh sҳc kí ÿӗ HPLC cӫa hai loҥi này

7URQJ TXi WUuQK ÿiQK JLiWәng quát cao chiӃt bҵng HPLC cho thҩy thành phҫn saponin chӫ yӃu ӣ dҥng asiaticoside và madecassoside Các thành phҫn dҥQJDFLGQKѭ asiatic acid và madecassic acid chiӃm tӍ lӋ thҩp Ngoài ra còn các dҥng saponin khác FKѭD[iFÿӏnh [40] Do vұ\ÿӇ ÿӏQKOѭӧQJYjVRViQKWKuÿӅ tài tұp trung vào hai thành phҫn chính là dҥng asiaticoside và madecassoside

Hình 3 14 Sҳc kí ÿӗ HPLC cӫa TECA, cao chiӃt rҿ quҥt và cao chiӃt lá tròn

KӃt quҧ tӯ Hình 3 14 cho thҩy sҳFNtÿӗ cӫa mүXWKѭѫQJPҥL7(&$FyÿӍnh hҩSWKXÿһFWUѭQJӣ 3,665 phút, 37,841 phút và 40,149 phút DӵDYjRÿӝ phân cӵc, các hӧp chҩt triterpenoid saponin trong TECA ӭng vӟi các khoҧng thӡL JLDQ OѭX WUrQ Oj asiaticoside, madecassic acid và asiatic acid

Nhìn chung, sҳc kí ÿӗ cӫa hai mүXUDXPiFyFiFÿӍnh xuҩt hiӋQKѫLNKiFQKDXWKӇ hiӋn thành phҫn hóa hӑc khác biӋt Mӝt sӕ ÿӍQKFǊQJÿѭӧc nhұn diӋQQKѭQJÿӝ cao thҩp thӇ hiӋQKjPOѭӧng thҩp &iFÿӍnh xuҩt hiӋn tҥi vùng thӡLJLDQOѭX- 4 phút trên sҳc kí

47 ÿӗ cӫa cҧ hai loҥi cao chiӃt là các chҩt có cҩXWU~FOLrQTXDQÿӃn dүn xuҩt glycoside cӫa saponin Bên cҥQKÿyYQJWKӡLJLDQOѭX± SK~WWѭѫQJTXDQFiFGүn xuҩt dҥng acid cӫa saponin, mүu cao chiӃt rҿ quҥWYjOiWUzQÿӅXFyFiFÿӍQKQj\QKѭQJWtQKLӋu ÿӍnh rҩt thҩp So sánh vӟi sҳFNtÿӗ cӫa TECA, cҧ hai mүu cao chiӃWUDXPiÿӅu chӭa PDGHFDVVLFDFLGYjDVLDWLFDFLGQKѭQJKjPOѭӧng rҩt thҩp KӃt quҧ này phù hӧp vӟi kӃt quҧ TLC (Hình 3 5)

Do các hӧp chҩt saponin (asiaticoside và madecassoside) khá phân cӵc nên các ÿӍnh hҩp thu cӫa cao chiӃt rҿ quҥt và cao chiӃt lá tròn chӫ yӃu tұp trung ӣ vùng thӡi gian OѭXQJҳn Vì vұy, vùng thӡLJLDQOѭXQKӓ KѫQSK~WÿѭӧFÿiQKJLiYjVRViQK

Hình 3 15 Sҳc kí ÿӗ HPLC cӫa asiaticoside, madecassoside, cao chiӃt rҿ quҥt và cao chiӃt lá tròn

Hình 3 15 WKӇKLӋQFKLWLӃWFiFÿӍQK hҩp thu cӫa hai loҥi cao chiӃt rau máWURQJYQJ WKӡL JLDQ OѭX QKӓ KѫQ SK~W Sҳc kí ÿӗ HPLC cӫa chuҭn asiaticoside và madecassoside thӇ hiӋn hai chҩt này xuҩt hiӋn ӣ thӡLJLDQOѭXYjSK~WDӵa vào hai thӡL JLDQ OѭX ÿy UDX Pi Uҿ quҥt ÿѭӧF [iF ÿӏnh chӭa cҧ hai thành phҫn triterpenoid saponin dҥng glycoside này Tuy nhiên, sҳc kí ÿӗ cӫa rau má lá tròn không xuҩt hiӋQÿӍnh hҩp thu tҥi khoҧng thӡLJLDQOѭXSK~WYjÿӍnh hҩp thu tҥi khoҧng

48 thӡLJLDQOѭXSK~Wӭng vӟi madecassoside rҩt thҩp Chӭng minh rҵng rau má lá tròn FyKjPOѭӧng madecassoside rҩt thҩp và không có thành phҫn asiaticoside ĈLӅu này FǊQJWѭѫQJWӵ vӟi nghiên cӭu cӫa Mohamad Rafi và cӝng sӵ WUrQÿӕLWѭӧng là rau má rҿ quҥt và rau má lá tròn tҥi Indonesia Theo kӃt quҧ cӫa nghiên cӭu này, thành phҫn hóa hӑc cӫa hai loҥi rau má là khác biӋWWURQJÿyDVLDWLFRVLGHYjPDGHFDVVoside chӍ ÿѭӧc tìm thҩy trong rau má rҿ quҥt [39]

Cө thӇ dӵa vào diӋn tích ÿӍnh WѭѫQJӭng vӟi asiaticoside và madecassoside (Hình

3 15 c và d)KjPOѭӧng cӫa hai triterpenoid saponin này ÿѭӧF[iFÿӏnh &DRFKLӃWUau má rҿ quҥt FyDVLDWLFRVLGH và madecassoside lҫQOѭӧt là 4,00% và 9,62% Ĉӕi vӟi rau má lá tròn, chӍ FyKjPOѭӧng madecassoside có giá trӏ 0,91% thҩSKѫQUҩt nhiӅu so vӟi rau má còn lҥi

MһFGKjPOѭӧng saponin tәng cӫa hai loҥi cao chiӃt rau má gҫQQKѭWѭѫQJÿѭѫQJ QKDXQKѭQJVҳc kí ÿӗ +3/&ÿmFKӍ U}ÿѭӧc cao chiӃt rҿ quҥt FyKjPOѭӧng asiaticoside YjPDGHFDVVRVLGHFDRKѫQKҷn so vӟi cao chiӃt lá tròn'RÿyFҫn có nhӳng nghiên cӭu VkXKѫQYӅ thành phҫn hóa hӑc cӫa rau má lá tròn

3.3 XÂY DӴNG QUY TRèNH TINH CHӂ 1ặ1* &$2 +ơ0 /ѬӦNG SAPONIN TRONG CHӂ PHҬM TӮ RAU MÁ

Do rau má rҿ quҥt (Centella asiatica) phә biӃn và có nguӗn cung cҩp әQÿӏQKKѫQ rau má lá tròn (Hydrocotyle verticillata) và các thành phҫn triterpenoid saponin DVLDWLFRVLGHPDGHFDVVRVLGHÿѭӧc quan tâm chӍ có trong rau má rҿ quҥt nên các nghiên cӭu tiӃp theo vӅ TXiWUuQKQkQJFDRKjPOѭӧng chiӃt xuҩt tӯ rau má sӁ chӑn rau má rҿ quҥt làm nguyên liӋu chính

Các nghiên cӭXWUѭӟFÿk\Fӫa nhóm chӍ khҧo sát khҧ QăQJWLQKFKӃ và nâng cao KjPOѭӧng trong cao chiӃt rau má rҿ quҥt bҵng polymer hҩp phө HPD300 [40, 41, 46] Trong luұQYăQQj\QJKLrQFӭu tұp trung khҧo sát và xây dӵng quá trình tinh chӃ và QkQJFDRKjPOѭӧng saponin trong chӃ phҭm tӯ rau má bҵng các loҥi nhӵa hҩp phө HPD100, HPD300 và AB-8

Quá trình tinh chӃQkQJFDRKjPOѭӧng saponin trong chӃ phҭm tӯ rau má bӏ ҧnh Kѭӣng bӣi nhiӅu yӃu tӕ QKѭQӗQJÿӝ dung dӏch cao chiӃt, dung môi rӱa giҧi, loҥi polymer

Xây dӵng quy trình tinh chӃ, QkQJFDRKjPOѭӧng saponin trong chӃ phҭm tӯ rau má

ҦQKKѭӣng cӫa nӗQJÿӝ dung dӏch cao chiӃt

Khҧ QăQJKҩp phө - rӱa giҧi cӫa nhӵa phө thuӝc vào mӕLWѭѫQJTuan giӳa nӗQJÿӝ cӫa dung dӏFKÿѭӧc hҩp phө và khӕLOѭӧng nhӵa hҩp phө Khҧ QăQJKҩp phө hoҥt chҩt tӕLÿDFӫa mӝWOѭӧng nhӵa nhҩWÿӏnh là cӕ ÿӏnh Vӟi 3 g nhӵDѭӟt HPD100, dung dӏch cao chiӃt vӟi các nӗQJÿӝ YjJ/ÿѭӧc khҧRViWYjÿiQKJLiNhҧ QăQJUӱa giҧi saponin

Hình 3 16 ҦQKKѭӣng cӫa nӗQJÿӝ dung dӏFKÿӃn khҧ QăQJUӱa giҧi saponin

Theo kӃt quҧ WKXÿѭӧc, kKLKjPOѭӧng saponin trong dung dӏFKWăQJGҫn thì khҧ QăQJUӱa giҧi FǊQJWăQJOrQĈӃn nӗQJÿӝ dung dӏch cao chiӃt 10 và 15 g/L, hai giá trӏ này không có sӵ khác biӋt lӟn (lҫQOѭӧt là 25,89 mg/g và 24,09 mg/g) ĈLӅu này có thӇ do, 3 g nhӵD+3'ÿmKҩp phө tӕLÿDOѭӧQJVDSRQLQĈӗng thӡi, khҧ QăQJUӱa giҧi cӫa thӱ nghiӋm ӣ nӗQJÿӝ 15 g/L có giá trӏ thҩSKѫQ, có thӇ do sai sӕ trong quá trình rӱa giҧLYjÿiQKJLiKjPOѭӧng saponin tәng trong dӏch rӱa giҧi Bên cҥQKÿyVӵ chênh lӋch Qj\FǊQJFyWKӇ do ӣ nӗQJÿӝ dung dӏFKFDRKѫQQKLӅu tҥp chҩt khác cҥnh tranh, làm giҧm khҧ QăQJKҩp phө và rӱa giҧi saponin cӫa nhӵa DRÿydung dӏch cao chiӃt vӟi nӗQJÿӝ J/ÿѭӧc lӵa chӑn cho các khҧo sát tiӃp theo.

ҦQKKѭӣng cӫa dung môi rӱa giҧi

Bên cҥnh ҧQKKѭӣng cӫa nӗQJÿӝ dung dӏch cao chiӃt, sӵ WѭѫQJWiFJLӳa dung môi rӱa giҧi vӟLVDSRQLQÿѭӧc hҩp phө trên nhӵa FǊQJ ҧQKKѭӣQJÿӃn quá trình rӱa giҧi cӫa quy trình tinh chӃ Các hӋ GXQJP{LHWKDQROQѭӟc vӟi tӍ lӋ ethanol WѭѫQJӭng tӯ 90%

50 ÿӃn 10% (v/v) ÿѭӧFGQJÿӇ tiӃn hành khҧo sát quá trình rӱa giҧi saponin ra khӓi nhӵa hҩp phө

Hình 3 17 ҦQKKѭӣng cӫDGXQJP{LÿӃn ngoҥi quan cӫa dung dӏch rӱa giҧi

Sau khi dung dӏch cao chiӃWUDXPiÿѭӧc hҩp phө vào nhӵDQѭӟFÿѭӧFGQJÿӇ rӱDVѫEӝ các tҥp chҩt còn bám trên nhӵa hҩp phө Các dung dӏch rӱa giҧi có màu vàng sүm và màu sҳc nhҥt dҫn khi giҧm dҫn nӗQJÿӝ ethanol trong dung môi (Hình 3 17)

Do trong quá trình hҩp phө - rӱa giҧi, mӝt phҫn chlorophyll vүn còn bám trên nhӵa hҩp phө mà trong quá trình rӱa nhӵa không thӇ loҥi bӓ ÿѭӧc hoàn toàn, nên các dung môi rӱa giҧi có nӗQJÿӝ ethanol cao sӁ hòa tan phҫn chlorophyll này, làm cho màu cӫa dung dӏFKÿұPKѫQ Tuy nhiên, các dung dӏch rӱa giҧLQj\NK{QJFzQPjX[DQKÿұPQKѭ trong dӏch chiӃt rau má rҿ quҥt (Hình 3 8)ĈLӅu này chӭng tӓ rҵng, quá trình hҩp phө

- rӱa giҧi không chӍ QkQJFDRKjPOѭӧng saponin trong chiӃt xuҩt tӯ rau má, mà nó còn loҥi bӓ phҫn lӟn chlorophyll

Hình 3 18 ҦQKKѭӣng cӫa dung môi rӱa giҧLÿӃn khҧ QăQJUӱa giҧi saponin

51 Các triterpenoid saponin trong rau má Fyÿӝ tan thҩSWURQJQѭӟc (asiaticoside: 0,8 g/L; madecassoside: 1,71 g/L; asiatic acid: 0,011 g/L; madecassic acid: 0,036 g/L), do ÿyWѭѫQJWiFFӫa nó vӟi dung môi rӱa giҧi giҧm dҫn khi nӗQJÿӝ ethanol giҧm dҫn KӃt quҧ WKXÿѭӧc (Hình 3 18) cho thҩy khi giҧm dҫn nӗQJÿӝ ethanol trong dung môi rӱa giҧi, khӕi OѭӧQJVDSRQLQWKXÿѭӧc trên mӛi g nhӵa khô FǊQJJLҧm Dung môi EtOH 90 thӇ hiӋn khҧ QăQJ Uӱa giҧi tӕt nhҩt, trong lҫn rӱa giҧL ÿҫX WLrQ WKX ÿѭӧc 17,031 mg saponin (chiӃm 29,97% so vӟLOѭӧng saponin trong dung dӏch cao chiӃt rau má) và lҫn thӭ hai là 5,721 mg (chiӃm 10,07&iFGXQJP{LHWKDQROQѭӟc vӟi tӍ lӋ ethanol 80%, 70%, 60% và 50% khҧ QăQJUӱa giҧi saponin trong lҫn thӭ nhҩt gҫQQKѭWѭѫQJÿѭѫQJ (khoҧng 20 mg saponin/g nhӵa khô) Dung môi có nӗQJÿӝ ethanol thҩSKѫQWKӇ hiӋn khҧ QăQJUӱa giҧi saponin khӓi nhӵa hҩp phө kém ĈӇ tӕLÿDOѭӧng saponin thu ÿѭӧc, ethanol 90% ÿѭӧc chӑn làm dung môi rӱa giҧi ĈLӅu kiӋn thích hӧp cho quá trình tinh chӃ, nâng cao KjPOѭӧng saponin bҵng nhӵa hҩp phө HPD100:

- KhӕLOѭӧng nhӵa: 3,00 g

- ThӇ tích dung dӏch cao chiӃt: 30 mL

- NӗQJÿӝ dung dӏch cao chiӃt: 10 g/L

ҦQKKѭӣng cӫa polymer tinh chӃ

ĈӇ ÿiQKJLiҧQKKѭӣng cӫa các loҥi polymer tinh chӃ khác nhau, ba loҥi nhӵa hҩp phө HPD300, HPD100 và AB-ÿѭӧc sӱ dөQJÿӇ tiӃn hành quá trình hҩp phө - rӱa giҧi saponin trong cao chiӃt tӯ UDXPi7\YjRNtFKWKѭӟc lӛ xӕp và diӋn tích bӅ mһt cӫa nhӵa mà mӛi loҥi nhӵa hҩp phө có khҧ QăQJKҩp phө saponin khác nhau

Hình 3 19 Dung dӏch rӱa giҧi lҫn 1 và lҫn 2 cӫa 3 loҥi nhӵa hҩp phө

52 Màu sҳc cӫa các dung dӏch rӱa giҧi cӫa 3 loҥi nhӵa hҩp phө ÿӅu có màu vàng sүm ÿӕi vӟi lҫn rӱa giҧi thӭ nhҩWYjPjXYjQJÿӕi vӟi lҫn rӱa giҧi thӭ hai Nhìn chung, các dung dӏch này không còn ánh xanh, chӭng tӓ rҵng, quá trình hҩp phө - rӱa giҧi cӫa các loҥLSRO\PHUQj\ÿmORҥLÿѭӧc chlorophyll trong dung dӏch cao chiӃt rau má baQÿҫu ĈLӅu này giúp chӃ phҭm rau má dӉ dàng ӭng dөng vào trong các sҧn phҭm mӻ phҭm KѫQ

Hình 3 20 Khҧ QăQJ hҩp phө và rӱa giҧi saponin cӫa ba loҥi nhӵa

Hình 3 20 thӇ hiӋn khҧ QăQJKҩp phө và rӱa giҧi saponin cӫa ba loҥi nhӵa Nhӵa HPD100 và HPD300 có khҧ QăQJ Kҩp phө saponin gҫQ QKѭ QKDX, khoҧng 53 mg saponin/g nhӵa khô, tӕWKѫQVRYӟi nhӵa AB-8, chӍ có hҩp phө 45,77 mg/g Sӵ khác biӋt vӅ tính chҩt vұWOêQKѭGLӋn tích bӅ mһWKD\NtFKWKѭӟc lӛ xӕp sӁ ҧQKKѭӣng rҩt lӟQÿӃn khҧ QăQJKҩp phө cӫa nhӵa NhӵD+3'Yj+3'ÿӅu không phân cӵc và kích WKѭӟc lӛ xӕSGѭӟi 100 Å, phù hӧp vӟi cҩu trúc cӫa saponinWURQJNKLÿyQKӵa AB-8 là loҥi kém phân cӵFYjFyNtFKWKѭӟc lӛ xӕp lӟQKѫQNKRҧng 130 ± 140 Å) Ngoài ra, diӋn tích bӅ mһt cӫa nhӵa +3'Yj+3'FǊQJOӟQKѫQQKӵa AB-8

Quá trình rӱa giҧi bҵng ethanol 90% (v/v) ÿѭӧc tiӃn hành 2 lҫQÿӕi vӟi mӛi loҥi nhӵa KӃt quҧ cho thҩy khҧ QăQJUӱa giҧi saponin cӫa nhӵD+3'ÿҥt giá trӏ cao nhҩt, 38,93 mg/g và giҧm dҫQÿӕi vӟi HPD300 và AB-8, 36,40 mg/g và 27,35 mg/g ĈiӅu này thӇ hiӋn nhӵa hҩp phө HPD100 có khҧ QăQJKҩp phө và rӱa giҧi saponin tӕWKѫQQKӵa HPD300 và AB-8

53 Phҫn lӟn saponin tұp trung trong lҫn rӱa giҧi thӭ nhҩt Ĉӕi vӟi nhӵa HPD100, trong lҫn rӱDÿҫXWLrQWKXÿѭӧc 17,567 mg saponin (chiӃm 75,67% so vӟi tәQJOѭӧng saponin trong dӏch rӱa giҧi) và lҫn thӭ hai là 5,648 mg (chiӃm 24,33%) TӍ lӋ saponin WKXÿѭӧc trong dӏch rӱa giҧi lҫQÿҫu tiên cӫa nhӵa HPD300 và AB-8 lҫQOѭӧt là 81,80% và 88,25% Vì vұ\ÿӇ tiӃt kiӋm chi phí và dung môi, chӍ chӑn dung dӏch rӱa giҧi lҫn thӭ nhҩWÿӇ loҥi dung môi và thu chӃ phҭm.

Bӝt chӃ phҭm

Bӝt chӃ phҭPÿѭӧc tҥo thành tӯ quá trình tinh chӃQkQJFDRKjPOѭӧng saponin vӟLFiFÿLӅu kiӋn:

- NӗQJÿӝ dung dӏch cao chiӃt: 10 g/L

Bҧng 3 8 Tính chҩt cӫa các loҥi bӝt chӃ phҭm

Tính chҩt Bӝt chӃ phҭm tӯ nhӵa HPD100

Màu sҳc Nâu ánh vàng Nâu ánh vàng Nâu ánh vàng

+jPOѭӧng ҭm và chҩt dӉ bay

+jPOѭӧng saponin tәng

Ba loҥi bӝt chӃ phҭPÿӅXFyPjXQkXiQKYjQJWѭѫQJÿӕi giӕng nhau Tuy nhiên, bӝt chӃ phҭm tӯ nhӵD+3'FyKjPOѭӧng saponin tәQJFDRKѫQKҷn so vӟi bӝt chӃ phҭm cӫa hai lҥi nhӵa còn lҥi (Bҧng 3.8) MһFGKjPOѭӧng saponin trong dung dӏch rӱa giҧi cӫa nhӵD+3'FDRKѫQVRYӟi nhӵa AB-QKѭQJEӝt chӃ phҭm cӫa hai loҥi nhӵa này lҥLFyKjPOѭӧng saponin gҫQQKѭQKDXĈLӅu này là do ngoài saponin thì nhӵa còn hҩp phө thêm mӝt sӕ thành phҫQNKiFQKѭIODYRQRLd, Bên cҥQKÿyVDLVӕ do quá trình hҩp phө - rӱa giҧLFǊQJҧQKKѭӣQJÿӃn kӃt quҧ

Trong các thí nghiӋm tiӃp theo, bӝt chӃ phҭm tӯ nhӵa HPD100 sӁ ÿѭӧc lӵa chӑn ÿӇ tiӃQKjQKÿiQKJLiWtQKFKҩWFǊQJQKѭKRҥt tính sinh hӑc, và so sánh vӟi cao chiӃt rau má

Hình 3 21 Phә hҩp thu UV-Vis cӫa dung dӏch bӝt chӃ phҭm

Dӵa vào Hình 3 21, phә hҩp thu UV-Vis cӫa bӝt chӃ phҭm vүQFyKDLÿӍQKÿһc WUѭQJӣ YQJEѭӟc sóng 200 ± 210 nm và 320 ± 330 nm +DLÿӍnh hҩp thu này ӭng vӟi ÿӍnh hҩp thu cӫa saponin, flavonoid và các dүn xuҩt cӫa chúng So sánh vӟi phә hҩp thu cӫa cao chiӃt rҿ quҥt (Hình 3 12), hai phә Qj\FyFiFÿӍnh hҩSWKXWѭѫQJWӵ nhau Tuy nhiên, trong phә hҩp thu cӫa bӝt chӃ phҭPÿӍnh hҩp thu ӣ Eѭӟc sóng 660 ± 670 nm cӫa FKORURSK\OO ÿm JLҧP ÿiQJ NӇ Chӭng tӓ rҵng, quy trình tinh chӃ bҵng nhӵa hҩp phө không nhӳng nânJFDRKjPOѭӧng saponin mà còn loҥi bӓ phҫn lӟn chlorophyll trong bӝt chӃ phҭm

55 3KѭѫQJSKiSVҳc kí lӓng hiӋXQăQJFDRPөc 3KѭѫQJSKiSVҳc kí lӓng hiӋu QăQJ FDR +3/& ÿѭӧc sӱ dөQJ ÿӇ [iF ÿӏQK KjP Oѭӧng cӫa asiaticoside và madecassoside trong bӝt chӃ phҭm

Hình 3 22 Sҳc kí ÿӗ HPLC cӫa bӝt chӃ phҭm

Dӵa vào sҳFNtÿӗ HPLC cӫa chҩt chuҭn asiatioside và madecassoside (Hình 3 15 a, b), thӡLJLDQOѭXFӫa hai chҩt này là 3,757 phút và 2,531 phút TѭѫQJӭng tҥi hai khoҧng thӡLJLDQOѭXÿyVҳc kí ÿӗ cӫa bӝt chӃ phҭm cho thҩ\WURQJÿyFyFKӭa hai thành phҫn triterpenoid saponin vӟLKjPOѭӧQJÿѭӧFQkQJFDRÿiQJNӇ so vӟi cao chiӃt (Hình

3 15 c) Cө thӇ dӵa vào diӋQWtFKSHDNKjPOѭӧng cӫa hai triterpenoid glycoside trong bӝt chӃ phҭm là 15,78% và 54,38% ӭng vӟi asiaticoside và madecassoside Các sӕ liӋu này chӭng minh nhӵa hҩp phө HPD100 có khҧ QăQJKҩp phө và rӱa giҧi các triterpenoid saponin, cө thӇ là asiaticoside và madecassoside TrRQJÿyQKӵa HPD100 thӇ hiӋn khҧ QăQJKҩp phө madecassoside tӕWKѫQ

Bҧng 3 9 HiӋu suҩt thu hӗi saponin tӯ cao chiӃt

KhӕLOѭӧng cao chiӃt 1,322 g

/ѭӧng saponin trong cao chiӃt 289,541 mg

Khӕi Oѭӧng bӝt chӃ phҭm 0,2016 g

/ѭӧng saponin trong bӝt chӃ phҭm 141,443 mg

Quá trình tinh chӃ ÿmOjPWăQJKjPOѭӧng saponin trong bӝt chӃ phҭPOrQÿiQJNӇ, cө thӇ, tәQJKjPOѭӧng asiaticoside và madecassoside là 70,16% Tuy nhiên, hiӋu suҩt thu hӗi saponin chӍ ÿҥt 48,85% (Bҧng 3.9) Phҫn saponin còn lҥLÿmWKҩt thoát trong quá trình tinh chӃ Vì vұy, quá trình tinh chӃQkQJFDRKjPOѭӧng saponin trong chiӃt xuҩt

56 tӯ rau má cҫQÿѭӧc nghiên cӭXVkXKѫQÿӇ hҥn chӃ sӵ thҩt thoát VDSRQLQFǊQJQKѭWăQJ hiӋu suҩt cӫa quá trình tinh chӃ

Bҧng 3 10 So sánh tính chҩt cӫa các loҥi bӝt chӃ phҭm

Màu sҳc Nâu ánh vàng Vàng ánh cam Trҳng Ĉӝ ҭm 4,00% 15,0% 3,60%

So sánh vӟi bӝt chӃ phҭm tӯ rau má trong nghiên cӭu cӫa Thanh N 1ÿѭӧc tinh chӃ bҵng nhӵa hҩp phө HPD300 và chӃ phҭm TECA trên thӏ WUѭӡng, bӝt chӃ phҭm tӯ nhӵa HPD100 có màu nâu ánh vàng và bӝt chӃ phҭm tӯ HPD300 có màu vàng ánh cam, WURQJNKLÿyFiFWULWHUSHQRid saponin có màu trҳng (Bҧng 3.10) ĈLӅu này là do ngoài các thành phҫn chính là saponin thì trong hai loҥi bӝt chӃ phҭm còn chӭa nhiӅu hӧp chҩt tҥo nên sҳc tӕ +jP Oѭӧng saponin trong hai loҥi bӝt chӃ phҭP WѭѫQJ ÿѭѫQJ QKDX (khoҧng 70%) và khá cao khi so sánh vӟi TECA (91,3%)7URQJÿyEӝt chӃ phҭm tӯ nhӵa HPD100 chӫ yӃu chӭa madecassoside vӟLKjPOѭӧQJOrQÿӃn 54,38% Hai thành phҫn asiaticoside và madecassoside trong bӝt chӃ phҭm tӯ nhӵD+3'FyKjPOѭӧng gҫQQKѭEҵng nhau (khoҧng 35%) 'Rÿһc tính vұt lý cӫa mӛi loҥi nhӵa khác nhau, nên khҧ QăQJWLQKFKӃ QkQJFDRKjPOѭӧng cӫa các hoҥt chҩWFǊng khác nhau

Các nghiên cӭu cӫa phҫQYjWKXÿѭӧc các sҧn phҭm tӯ rau má là:

Trong phҫn này tұSWUXQJYjRÿiQKJLiWtQKFKҩtÿӝ bӅn và hoҥt tính sinh hӑFQKѭ kháng oxi hóa, ӭc chӃ sӵ hình thành melanin cӫa ba loҥi sҧn phҭm trên.

Tính chҩt các chӃ phҭm tӯ rau má

Bҧng 3 11 Tính chҩt cӫa các chӃ phҭm tӯ rau má

Tính chҩt Cao chiӃt rҿ quҥt Cao chiӃt lá tròn Bӝt chӃ phҭm

Màu nâu ánh vàng (LD,75; C,86; h,61) Ĉӝ ҭm (%) 11,90 16,32 4,00

Hàm Oѭӧng saponin tәng (%) 21,91 21,79 35,54

VӅ ngoҥi quan, hai loҥi cao chiӃt rҿ quҥt và lá tròn ÿӅu có màu xanh lөFÿұm và KjPOѭӧng ҭPWѭѫQJÿӕi cao Trong khLÿyEӝt chӃ phҭm có màu nâu iQKYjQJÿmORҥi bӓ ÿѭӧc màu xanh lөc cӫa chlorophyll Ĉӝ ҭm cӫa bӝt chӃ phҭm thҩp (chӍ 4,00%) thích hӧSFKRTXiWUuQKOѭXWUӳ và bҧo quҧQKѫQVRYӟi hai loҥi cao chiӃW+jPOѭӧng saponin tәng trong bӝt chӃ phҭPFDRKѫQ khoҧng 1,4 lҫn so vӟLKjPOѭӧng trong hai loҥi cao

58 chiӃt rau má Cө thӇKjPOѭӧng asiaticoside trong bӝt chӃ phҭm là 15,78% trong khi trong cao chiӃt rҿ quҥt là 6,24% và cao chiӃt lá tròn không có thành phҫn này Bên cҥnh ÿyEӝt chӃ phҭm chӭDKjPOѭӧng madecaVVRVLGHOrQÿӃn 54,38% FDRKѫQNKRҧng 5 lҫn so vӟLOѭӧng madecassoside trong cao chiӃt rҿ quҥt và gҩp 60 lҫQÿӕi vӟi cao chiӃt lá tròn Nhìn chung, bӝt chӃ phҭPÿmÿѭӧc nâng cao KjPOѭӧng saponin và loҥi bӓ ÿѭӧc phҫn lӟQFKORURSK\OOĈây là 2 yӃu tӕ cho thҩy tiӅPQăQJWURQJYLӋc ӭng dөng vào các sҧn phҭm mӻ phҭPYjGѭӧc phҭm.

Hoҥt tính kháng oxi hóa

ĈiQKJLiKR̩t tính kháng oxi hóa b̹QJSK˱˯QJSKiS b̷t g͙c t͹ do ABTS

Các mүu cao chiӃt cӫa hai loҥi rau má và bӝt chӃ phҭPÿѭӧc pha loãng bҵng dung dӏFKÿӋPSKRVSKDWHVDXÿyWLӃQKjQKÿiQKJLihoҥt tính bҵQJSKѭѫQJSKiSEҳt gӕc tӵ do ABTS

Hình 3 23 Khҧ QăQJNKiQJR[LKyDFӫa các mүXWKHRSKѭѫQJSKiS bҳt gӕc tӵ do ABTS

Nhìn chung, hai mүu cao chiӃt rau má có hoҥt tính kháng oxi hóa gҫn giӕng nhau, thӇ hiӋn qua ÿѭӡng cong mӕi quan hӋ giӳa nӗQJÿӝ và phҫQWUăPӭc chӃ gӕc tӵ do ABTS WѭѫQJWӵ nhau Bên cҥQKÿyEӝt chӃ phҭm thӇ hiӋn hoҥt tính tӕWKѫQKҷn so vӟi hai loҥi cao chiӃt Ĉѭӡng cong ӭc chӃ gӕc tӵ do cӫa bӝt chӃ phҭm nҵm trong vùng có nӗQJÿӝ

59 thҩSKѫQӢ cùng mӝt nӗQJÿӝ, bӝt chӃ phҭm có phҫQWUăPӭc chӃ gӕc tӵ do ABTS cao KѫQVRYӟi cao chiӃt rҿ quҥt và lá tròn ĈӇ so sánh hoҥt tính kháng oxi hóa cө thӇ KѫQJLiWUӏ IC50 (ppm) cӫa các mүXÿѭӧc [iFÿӏnh dӵa trêQÿѭӡng cong mӕi quan hӋ giӳa nӗQJÿӝ và phҫQWUăPӭc chӃ gӕc tӵ do ABTS

Hình 3 24 Giá trӏ IC 50 cӫa các mүXWK{QJTXDSKѭѫQJSKiS bҳt gӕc tӵ do ABTS

Giá trӏ IC50 cӫa cao chiӃt rau má rҿ quҥt và lá tròn không có sӵ khác biӋWÿáng kӇ, lҫQOѭӧt là 8,28 và 7,96 ppm Tuy nhiên, bӝt chӃ phҭm thӇ hiӋn hoҥt tính kháng oxi hóa FDRKѫQVRYӟi hai loҥi cao chiӃt này vӟi IC50 cӫa bӝt chӃ phҭm (2,74 ppm) thҩSKѫQ khoҧng 3 lҫnĈLӅXQj\OjGRKjPOѭӧng cӫa các hoҥt chҩt có khҧ QăQJNKiQJR[i hóa QKѭVDSRQLQIODYRQRLGôÿmÿѭӧc nõng lờn trong quỏ trỡnh tinh chӃ chӃ phҭm tӯ cao chiӃt rau má bҵng nhӵa hҩp phө ĈiQKJLiKR̩t tính kháng oxi hóa b̹QJSK˱˯QJSKiS b̷t g͙c t͹ do DPPH

0HWKDQROÿѭӧc sӱ dөng làm dung môi pha loãng cao chiӃt rҿ quҥt, cao chiӃt lá tròn và bӝt chӃ phҭm thành các nӗQJÿӝ khҧo sát Các mүXÿѭӧFÿiQKJLiKRҥt tính bҵng SKѭѫQJSKiS bҳt gӕc tӵ do DPPH Giá trӏ IC50 cӫa các mүXÿѭӧF[iFÿӏnh dӵa vào mӕi quan hӋ giӳa nӗQJÿӝ và phҫQWUăPEҳt gӕc tӵ do DPPH Các giá trӏ nj\ÿѭӧc thӇ hiӋn trong Hình 3 25 và Hình 3 26

Hình 3 25 Khҧ QăQJNKiQJR[LKyDFӫa các mүXWKHRSKѭѫQJSKiS bҳt gӕc tӵ do DPPH

Hình 3 26 Giá trӏ IC 50 cӫa các mүXWKHRSKѭѫQJSKiS bҳt gӕc tӵ do DPPH

7ѭѫQJWӵ QKѭ SKѭѫQJSKiS$%76kӃt quҧ hoҥt tính kháng oxi hóa bҵQJSKѭѫQJSKiS '33+FǊQJWKӇ hiӋn bӝt chӃ phҭm có hoҥt tính kháng oxi hóa WѭѫQJÿӕi cao, vӟi giá trӏ

IC50 là 47,64 ppm, thҩSKѫQ,6 lҫn so vӟi cao chiӃt rҿ quҥt và 4,2 lҫQÿӕi vӟi cao chiӃt lá tròn Bên cҥQKÿySKѭѫQJSKiSQj\WKӇ hiӋQU}ÿѭӧc sӵ khác biӋt vӅ khҧ QăQJNKiQJ oxi hóa cӫa hai loҥi cao chiӃt thông qua sӵ sai lӋch vӅ giá trӏ IC50 Mһc dù có sӵ WѭѫQJ ÿӗng vӅ KjPOѭӧng saponin tәng (Bҧng 3.8) QKѭQJcao chiӃt lá tròn có hoҥt tính tӕWKѫQ so vӟi rҿ quҥt, thӇ hiӋn qua giá trӏ IC50 thҩSKѫQ 1,34 lҫn ĈLӅu này là do thành phҫn hoҥt

61 chҩt saponin trong hai loҥi cao chiӃWNKiFQKDXÿӗng thӡi, các thành phҫn hoҥt tính khác trong cao chiӃWFǊQJFyWKӇ góp phҫn tҥo nên sӵ khác biӋt này

Nhìn chung, sau khi xӱ OtQkQJFDRKjPOѭӧng, bӝt chӃ phҭPÿӅu thӇ hiӋQÿѭӧc hiӋu quҧ kháng oxi hóa tӕWKѫQVRYӟi cao chiӃt rau má trên cҧ KDLSKѭѫQJSKiSEҳt gӕc tӵ do ABTS và DPPH.

1 Ĉһc tính vұt lý cӫa nhӵa hҩp phө

Loҥi Ĉӝ phân cӵc Ĉѭӡng kính hҥt (mm)

DiӋn tích bӅ mһt (m 2 /g) Ĉѭӡng kính lӛ xӕp trung bình (Å)

X-5 Không phân cӵc 0,315 ± 1,25 500 ± 600 290 ± 300 AB-8 Kém phân cӵc 0,3 ± 1,25 480 ± 520 130 ± 140

1.2 TӘNG QUAN Vӄ CÂY RAU MÁ

Rau má là mӝt trong nhӳng loài thӵc vұt nәi tiӃng có nhiӅu hoҥt tính sinh hӑc nәi bұt Các hoҥWWtQKÿySKҫn lӟQÿӅu do thành phҫn saponin trong rau má

Rau má là mӝt loҥi cây thân thҧoVLQKWUѭӣng ӣ nhӳng vùng ҭPѭӟt và phân bӕ ӣ nhiӅXQѫLWUrQWKӃ giӟi vӟi các chӫng loҥLY{FQJÿDGҥng Mӝt sӕ loҥi rau má phә biӃn QKѭ Hydrocotyle umbellata L., Hydrocotyle sibthorpioides variegata Lam.,

Hydrocotyle vulgaris L., Hydrocotyle ranunculoides L., Centella asiatica /ôHỡnh

1 3) Hydrocotyle umbellata L là mӝt loҥi rau má có nguӗn gӕc tӯ %UD]LOÿѭӧc trӗng nhiӅu ӣ khu vӵc châu Mӻ [29] Hydrocotyle sibthorpioides variegata Lam có nguӗn gӕc tӯ Ĉ{QJ1DPÈGҫn dҫQÿѭӧc lan rӝng ra nhiӅXQѫLWUrQWKӃ giӟi Bên cҥQKÿy

Hydrocotyle vulgaris L là mӝt loҥi cây thân thҧRWKѭӡQJVLQKWUѭӣng và phát triӇn ӣ khu vӵc châu Âu, bao gӗm Anh, tӯ phía Nam cӫD6FDQGDQDYLDÿӃQSKtDĈ{QJFӫa Châu Phi, vùng biӇn Caspian Hydrocotyle ranunculoides L có nguӗn gӕc tӯ châu Mӻ YjÿDQJVLQKWUѭӣng và lan rӝng ӣ các vùng cӫa Úc [30]

Hình 1 3 Ngoҥi quan mӝt sӕ loҥi rau má

ViӋt Nam là mӝWQѭӟc có khí hұu nhiӋWÿӟi, thích hӧp cho rau má VLQKWUѭӣng và phát triӇn Các loҥi rau má phӕ biӃn ӣ ViӋW1DPQKѭCentella aisatica /FzQÿѭӧc gӑi là rau má rҿ quҥt), Hydrocotyle umbellata L., Hydrocotyle verticillata Thunb (rau má lỏ trũn), ô7URQJÿyUDXPiUҿ quҥt là loҥi phә biӃQYjÿѭӧc trӗng rӝng rói nhҩt Ngoài ra, ӣ Qѭӟc ta hiӋn nay, loҥi rau má lá tròn QJj\FjQJÿѭӧc trӗng rӝQJUmLKѫQFKRPөc ÿtFKWUDQJWUt

1.2.1 Phân loҥi YjÿһFÿLӇm hình thái

1.2.1.1 Rau má r̓ qu̩t (Centella asiatica (L.) Urban)

Rau má (Centella asiatica (L.) Urban) là mӝt loҥi cây thân thҧo thuӝc hӑ Apiaceace (Bҧng 1 2) và có khoҧQJORjLNKiFQKDX5DXPiWKѭӡng sӕng ӣ nhӳng vùng ҭPѭӟt, chӫ yӃu ӣ vùng nhiӋWÿӟi và cұn nhiӋWÿӟi [31] Rau má phân bӕ ӣ nhiӅu QѫLQKѭҨQĈӝ, Sri Lanka, Nam Phi, Úc, Indonesia, Malaysia và ViӋt Nam [32]

2 HӋ thӕng phân loҥi cây rau má rҿ quҥt [33]

Tên khoa hӑc Centella asiatica (L.) Urb

Tên TiӃng ViӋt Rau má rҿ quҥt

Hình 1 4 Hình thái cây rau má

Rau má sӕQJOkXQăPFyKRDWӯ WKiQJÿӃn tháng 9, hoa cӫa chúng có màu tím nhҥW&k\FyPjX[iPÿӃn nâu xanh, mùi gҫn giӕng vӟi lá thuӕc lá và vӏ KѫL ÿҳng Rau má là loҥi cây thân bò, gӗm nhiӅu khӟp nӕi liên kӃt vӟi nhau Lá rau má có cuӕng dài và mӑc lên tӯ các khӟp nӕi ӣ thân Lá rau má mӓng, mӅm, phiӃn lá có hình rҿ quҥt và Fyÿѭӡng kính khoҧng 2 ± 5 cm Mép lá có khía tai bèo hoһc có thùy nhҽ Cuӕng lá mҧnh, dài tӯ 5 ± 15 cm Lá bҳFFyNtFKWKѭӟc 1 ± 2 cm bao bӑc 2 ± 5 quҧ cӫa mӛi tán lá [33]

1.2.1.2 Rau má lá tròn (Hydrocotyle verticillata Thunb.)

Hydrocotyle verticillata Thunb (H verticillata) KD\FzQÿѭӧFJӑLOjrau má lá tròn

OjPӝWORҥLWKӵFYұWVLQKWUѭӣQJYjSKiWWULӇQӣQKӳQJYQJҭPѭӟWÿһFELӋWOjFiFYQJ

13 YHQEӡV{QJVXӕL ô Ĉk\OjPӝWORjLWKӵFYұWFyKRDFyQJXӗQJӕFӣ%ҳFYj1DP0ӻSKkQEӕFKӫ\ӃXӣ+RD.Ǥ&KLOH3DUDJXD\ và Argentina [34].

3 HӋ thӕng phân loҥi cây rau má lá tròn

Tên khoa hӑc Hydrocotyle verticillata Thunb

Tên TiӃng ViӋt Rau má lá tròn

Rau má lá tròn OjPӝWFk\WKkQWKҧROkXQăPPӑQJQѭӟFFyKRDWӯWKiQJÿӃQ WKiQJKRDFӫDFK~QJFyPjXWUҳQJFөPKRDPӑFYzQJ&k\FyPjX[DQKYjYӏÿҳQJ 5DXPiOjORҥLFk\WKkQEzJӗPFiFNKӟSQӕLOLrQNӃWYӟLQKDXTXDWKkQ&iFOiUDXPi FyFXӕQJGjLYjPӑFOrQWӯFiFNKӟSQӕLQj\/iUDXPiPӓQJPӅPQKҹQNK{QJFy O{QJSKLӃQOiFyKuQKWUzQYjFyÿѭӡQJNtQKNKRҧQJ ± FP&XӕQJOiPҧQKGjLWӯ 1,5 ± 35 cm [34, 35]

Hình 1 5 Hình thái rau má lá tròn

4 6RViQKÿһFÿLӇm hình thái 2 loҥi rau má

ĈһFÿLӇm Rau má rҿ quҥt Rau má lá tròn

Lông trên lá Nhҹn, không có lông hoһc ít lông Nhҹn, không có lông

Hình dҥng Hình rҿ quҥt Hình tròn Ĉѭӡng kính (cm) 2,5 ± 5,0 0,5 ± 6,0

Mép lá Có khía tai bèo hoһc thùy nhҽ

Hoa Sӕ Oѭӧng 3 ± 5 2 ± 15 ӣ mӛi vòng lá

Cuӕng (hoa, quҧ) ChiӅu dài (cm) 0,2 ± 0,8 8,0 ± 22,0

Cây rau má chӭa nhiӅu hoҥt chҩt chuyӇn hóa thӭ cҩS7URQJÿyWKjQKSKҫn quan trӑng nhҩWÿѭӧc phân lұSOjSHQWDF\FOLFWULWHUSHQRLGKD\FzQÿѭӧc gӑi là centelloid, bao gӗm: asiaticoside, madecasosside (brahminoside), aisatic acid và madecassic acid (brahmic acid) [36] Ngoài ra, rau má còn chӭa 0,1% tinh dҫXYjFiFIODYRQRLGVQKѭ quercetin glycoside, kaepferol và các sesquiterpene, steroid [32] Theo 'ѭӧFÿLӇn Châu ÂuKjPOѭӧng saponin trong tәng các thành phҫn cӫa cây rau má chiӃm 1 ± 8% [33]

5 Bҧng thành phҫn hoҥt chҩt cӫa cây rau má [33]

Elemene và bicycloelemene Trans-farnesene

6-hydroxy asiatic acid Madecassic acid Madasiatic acid Betulinic acid Thankunic acid Isothankunic acid

(1-8% phө thuӝc vàRÿҩWQѭӟc và vùng)

Asiaticoside (thành phҫn chính) Asiaticoside A

Asiaticodide B Asiaticoside A (Madecassoside) and B Braminoside

Tuy nhiên, tùy tӯng loҥLUDXPiNKiFQKDXPjKjPOѭӧQJFǊQJQKѭWKjQKSKҫn cӫa các chҩWFǊQJNKiFQKDX7KHRQJKLrQFӭu cӫa Hossain và cӝng sӵ (2018), thành phҫn cӫa rau má rҿ quҥt và rau má lá tròn có sӵ khác biӋt, thӇ hiӋn trong Bҧng 1 6

6 KӃt quҧ ÿӏnh tính dӏch chiӃt methanol cӫa hai loҥi rau má [37]

7KjQKSKҫQ 5DXPiUҿTXҥW Rau má lá tròn

%L͋XWK͓PͱFÿ͡FDR - %L͋XWK͓PͱFÿ͡WK̭S

1.2.3 Cҩu tҥo cӫa các hӧp chҩt triterpenoid saponin trong rau má

Các hoҥt tính sinh hӑc khác nhau cӫD UDX Pi ÿѭӧc cho là do các hoҥt chҩt pentacylic triterpenoids mang lҥi, cө thӇ là asiatic acid, madecassic acid và các glycosides cӫa chúng: asiaticoside và madecassoside (Hình 1 6) NhiӅu nghiên cӭXÿm chӭng minh asiaticoside, thành phҫn triterpenoid saponin nhiӅu nhҩt trong rau má có hoҥt tính kháng khuҭn, diӋt nҩPYjWăQJVLQKWӃ bào, giúp chӳa lành vӃt tKѭѫQJYjFiF bӋnh ngoài da khác [24]

Hình 1 6 Cҩu trúc cӫa các hoҥt chҩt triterpenoid chính trong rau má

Tӯ [D[ѭDUDXPiÿmÿѭӧc biӃWÿӃQQKѭPӝt loҥi thuӕc có thӇ hӛ trӧ chӳa lành các vӃWWKѭѫQJQKӓ mӝt cách nhanh chóng Vì vұ\FK~QJÿѭӧc sӱ dөng rӝng rãi trong y hӑc dân gian ӣ nhiӅXQѭӟFFKkXÈÿһc biӋt trong y hӑc cә truyӅn Trung Quӕc Không nhӳng thӃ, ӣ ҨQĈӝ, chiӃt xuҩWUDXPiFzQÿѭӧc sӱ dөQJÿӇ ÿLӅu trӏ các bӋQKQJRjLGDQKѭ eczema, phong, bӋnh vҧy nӃQ1JRjLUDUDXPiFzQÿѭӧc sӱ dөng trong viӋFÿLӅu trӏ bӓng, ngӭa và các vӃt côn trùng cҳn [38]

Các nghiên cӭu nuôi cҩy tӃ EjRÿmFKӍ ra rҵng các thành phҫQWULWHUSHQHQKѭDVLDWLF acid, madecassic acid và asiaticoside có khҧ QăQJNtFKWKtFKVӵ tҥo thành collagen và tәng hӧSILEURQHFWLQOrQÿӃn 20 ± 35% [11]'RÿyUDXPiÿѭӧc sӱ dөng trong các sҧn phҭPFKăPVyFFiQKkQÿӇ phөc hӗLÿӝ VăQFKҳFWăQJWtQKÿjQKӗi và cҧi thiӋn chӭc QăQg cӫa làn da

1.3 CÁC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CӬU LIÊN QUAN