nguyễn thị bảo trân 21126548 dh21shb

Bước 2: Vệ sinh phòng cấy, tất cả các dụng cụ và bề mặt bên trong tủ bằng cồn 70O.. Trang 9 Bước 7: Nhẹ nhàng đưa đầu que cấy có chứa 1 mẫu tơ nấm vào bên trong ống môi trường.. Lưu ý: T

Sinh viên thực hiện : Nguyễn Thị Bảo Trân

Hướng dẫn khoa học

KS NGUYỄN MINH QUANG

Sinh viên thực hiện

NGUYỄN THỊ BẢO TRÂN

MỤC LỤC

MỤC LỤC i

DANH SÁCH HÌNH ii

Bài 1 PHA CHẾ MÔI TRƯỜNG PDA 1

1.1 Nguyên liệu 1

1.2 Quy trình pha chế môi trường PDA để phân lập giống nấm 1

Bài 2 CHỌN MẪU NẤM LÀM GIỐNG 4

2.1 Nguyên liệu 4

2.2 Quy trình 4

2.3 Kết quả 5

Bài 3 CẤY CHUYỀN GIỐNG SANG MÔI TRƯỜNG HẠT 7

3.1 Nguyên liệu 7

3.2 Quy trình 7

3.3 Kết quả 9

Bài 4 SẢN XUẤT PHÔI NẤM 11

4.1 Nguyên liệu 11

4.2 Chuẩn bị cơ chất trồng nấm 11

4.3 Xử lý cơ chất 11

4.4 Xử lý vôi bằng 2 phương pháp 11

4.5 Quy trình sản xuất bịch mùn cưa 12

Bài 5 THANH TRÙNG NGUYÊN LIỆU MÙN CƯA 15

5.1 Chuẩn bị thiết bị 15

5.2 Tiến hành thanh trùng bịch mùn cưa 15

Bài 6 CẤY GIỐNG MEO HẠT SANG PHÔI MÙN CƯA 16

6.1 Nguyên liệu 16

6.2 Quy trình 16

DANH SÁCH HÌNH

Hình 1.1 Khoai tây cắt mỏng, đun sôi 1

Hình 1.2 Đổ môi trường vào ống nghiệm 2

Hình 1.3 Đậy nút bông vào ống nghiệm 2

Hình 1.4 Môi trường sau khi cho vào ống nghiệm 3

Hình 2.2 Nấm sau khi cấy 5

Hình 2.1 Lấy giống nấm 5

Hình 2.3 Ống nghiệm bị nhiễm nấm ở cả hai 6

Hình 3.1 Bông vải 8

Hình 3.2 Cổ nhựa 8

Hình 3.3 Lúa và bịch môi trường sau đóng 8

Hình 3.4 Tiến hành cấy truyền vào meo hạt 9

Hình 3.6 Meo sau khi cấy 1 tuần 10

Hình 3.5 Sau khi cấy vào meo hạt 10

Hình 4.1 3kg cám bắp, 100kg mùn cưa và hỗn hợp cơ chất 12

Hình 4.2 Đóng phôi thành từng bịt 13

Hình 4.3 Tiến hành hấp tuyệt trùng phôi 14

Hình 6.1 Cấy meo hạt vào mùn cưa 17

Hình 6.2 Phôi sau khi được cấy 1 tuần 17

Bài 1 PHA CHẾ MÔI TRƯỜNG PDA

1.1 Nguyên liệu

Đường dextro: 20 gram

Agar: 20 gram

Khoai Tây: 200 gram

Cao nấm men: 1gram

1.2 Quy trình pha chế môi trường PDA để phân lập giống nấm

Bước 1: Rửa và cắt khoai tây thành từng đoạn nhỏ

Bước 2: Sử dụng ống nghiệm làm dụng cụ chứa môi trường Các ống phải được rửa thật sạch và được phơi thật ráo

Bước 3: Cho khoai tây đã cắt nhỏ vào trong 1L nước và tiến hành đun sôi

Hình 1.1 Khoai tây cắt mỏng, đun sôi

Bước 4: Dùng phiểu hay vải lọc, vắt bỏ phần cái và giữ lại phần dịch khoai tây Bước 5: Cho tất cả dịch khoai tây, đường và agar vào nồi đun Tiến hành đun, đến khi nào agar tan hoàn toàn thì dừng lại

Bước 6: Đổ dịch môi trường PDA, PDAY vào trong ống nghiệm (khoảng 1/3 ống)

Hình 1.2 Đổ môi trường vào ống nghiệm

Bước 7: Sử dụng bông không thấm, làm nút và đậy nút bông vào ống nghiệm

Hình 1.3 Đậy nút bông vào ống nghiệm

Bước 8: Cho tất cả các ống môi trường vào nồi hấp tiệt trùng, chỉnh máy về 121oC trong 20 – 30 phút

Bước 9: Sau khi hấp xong, tắt máy và lấy môi trường ra và để nghiêng 1 góc 30o (làm tăng diện tích bề mặt môi trường)

Lưu ý: chọn nơi thoáng mát và sạch sẽ để làm địa điểm đặt các chai môi trường

Bước 10: Môi trường sau khi hấp sau, để ít nhất 24-48 giờ mới bắt đầu sử dụng Sau 48 giờ, nếu phát hiện ống môi trường nào bị nhiễm, phải loại bỏ và cách ly khu vực cấy

Hình 1.4 Môi trường sau khi cho vào ống nghiệm

Bài 2 CHỌN MẪU NẤM LÀM GIỐNG

Bước 1: Chọn ống giống phát triển mạnh, không quá già hoặc quá non

Bước 2: Vệ sinh phòng cấy, tất cả các dụng cụ và bề mặt bên trong tủ bằng cồn

70O Chuyển ống môi trường và những dụng cụ cần thiết vào trong tủ cấy

Bước 3: Đặt tất cả mẫu vật vào tủ cấy Bật đèn UV và quạt thổi Sau 10 -15 phút, tắt đèn UV, nhưng quạt thổi vẫn phải duy trì trong suốt quá trình phân lập, cấy chuyền giống

Bước 4: Cầm que cấy móc nghiêng 1 góc 45o , hơ nóng que cấy đến khi que cấy

thật đỏ Để cho que cấy nguội ( khoảng 15 - 20 giây, lưu ý là không để phần đã khử

trùng của que cấy bị chạm vào bất cứ vật gì)

Bước 5: Sử dụng que cấy móc, cắt một mẫu thạch nhỏ chứa tơ nấm

Bước 6: Hơ lửa vòng quanh miệng ống nghiệm Sử dụng ngón út, rút nút bông ra khỏi miệng ống nghiệm ra hướng phía trước ngọn lửa Thao tác phải nhẹ nhàng và cẩn thận để tránh bị nhiễm

Bước 7: Nhẹ nhàng đưa đầu que cấy có chứa 1 mẫu tơ nấm vào bên trong ống môi trường Trong quá trình thao tác cần lưu ý, khi đưa mẫu vào bên trong ống nghiệm cẩn thẩn không để mẫu chạm vào bất kỳ vật gì

Bước 8: Hơ lửa xung quanh ống nghiệm lần cuối và dùng nút bông vặn kín miệng ống nghiệm lại

Lưu ý: Phần đáy của ống nghiệm phải luôn luôn thấp hơn miệng cổ ống nghiệm và đảm bảo luôn gần ngọn lửa đèn cồn Cẩn thận để mẫu nằm trên thạch, tránh để nấm dính vào thành ống làm nấm không tạo tơ được

Bước 9: Dán nhãn và ghi rõ thông tin: Ngày cấy và loại nấm

2.3 Kết quả

Sau 1 tuần từ ngày 8/3/2024 đến ngày 15/3/2023 mẫu nấm bào ngư trắng được cấy

đã mọc gần phủ kín hết lớp môi trường chứng tỏ giống nấm này phát triển tốt Tuy nhiên, trong quá trình cấy do chưa khử khuẩn tốt, chưa đảm bảo môi trường cấy nên có hiện tượng nhiễm nấm

Hình 2.3 Ống nghiệm không bị nhiễm nấm ở cả hai

Bài 3 CẤY CHUYỀN GIỐNG SANG MÔI TRƯỜNG HẠT

Đèn cồn, que cấy, nhíp gấp, muỗng mút meo

Lưu ý: Tùy thuộc vào điều kiện của nơi trồng nầm, mà người dân có thể sử dụng các nguyên liệu: lúa,bắp, đạt đậu xanh… làm môi trường meo hạt

Bước 2: Vớt các hạt ngũ cốc đã hé miệng ra rổ, để cho nguội và ráo nước

Bước 3: Bổ sung thêm chất dinh dưỡng: 5-10% cám gạo hoặc 5-10% cám bắp Trộn thật đều, rồi phân phối vào các bịch nylon Lưu ý, độ cao của hạt cho vào chiếm ½ chiều dài của bịch

Bước 4: Chuẩn bị bông và làm nút bông

Hình 3.1 Bông vải Hình 3.2 Cổ nhựa

Bước 5: Cho nút bông vào miệng bịch và vặn chặt

Bước 6: Chuyển tất cà các bịch môi trường hạt vào nồi hấp khử trùng Thời gian hấp khử trùng là 21 phút, với nhiệt độ 121oC

Hình 3.3 Lúa và bịch môi trường sau đóng

Bước 7: Chuyển các bịch môi trường hạt vào phòng cấy

Bước 8: Vệ sinh bề mặt ngoài các bịch môi trường hạt đã tiệt trùng bằng cồn 70o

Chuẩnbị chai môi trường PDA chứa đầy giống nấm

Bước 9: Vệ sinh tủ cấy, bằng cách lau bề mặt bên trong tủ bằng cồn 70o

Bước 10: Chuyển các bịch môi trường PDA mới, môi trường hạt, thung, giấy vảo

tủ cấy,đèn cồn, que cấy, kẹp,…và tật đèn U.V trong khoảng thời gian 10-15 phút Ngâm que cấy vào trong cồn 90o Tắt đèn U.V, lau tay bằng cồn và đặt tay vào trong tủ cấy

Bước 11: Dùng 2 ngón tay, lấy que cấy hơ dưới ngọn lửa đèn cồn đến khi que cấy nóng đỏ

Bước 12: Đợi que cấy nguội, dùng que cấy cắt 1 mẫu tơ nấm trắng (5mm x 5mm) trên môi trường

Bước 13: Hơ lửa vòng quanh miệng ống nghiệm và đóng miệng bịch lại Thao tác luôn gần ngọn lửa đèn cồn

Bước 14: Sử dụng tay khác, cầm bịch môi trường hạt lên và tháo nút bông ra Hơ lửa quanh miệng cổ bịch môi trường hạt, thao tác cẩn thận và tránh bị nhiễm Bước 15: Đặt mẫu nấm vào bên trong bịch môi trường hạt

Lưu ý: sợi nấm phải không chạm vào bất cứ vật gì trước khi đưa vào trong miệng bịch môi trường hạt

Bước 16: Dùng giấy phủ lên lớp gòn trên miệng chai và dùng thun buộc chặt lại Bước 17: Dán nhãn và ghi rõ thông tin: tên giống, ngày cấy, thời gian ủ,…

Bước 18: Quan sát và ghi nhận dữ liệu

3.3 Kết quả

Hình 3.4 Tiến hành cấy truyền vào meo hạt

Meo cấp hai lên sợ tơ trắng đều, phát triển chậm hơn so với ống giống do sợ tơ nấm cần nhiều thời gian để hấp thu chất dinh dưỡng phức tạp

Bài 4 SẢN XUẤT PHÔI NẤM

4.1 Nguyên liệu

Bao nylon PP (polypropylene 7” x 12.5”)

Nút cổ giấy hoặc nhựa (đường kính khoảng 4 cm)

Mùn cưa cây cao su

Cám gạo hoặc cám bắp

Calcium carbonate (CaCO3)

Magnesium sulfate ( MgSO4)

Phân DAP

4.2 Chuẩn bị cơ chất trồng nấm

Mùn cưa cây cao su vừa mới được mua về, nên ủ đóng tự nhiên khoảng 1 đến 2 tuần mới sử dụng được Nguyên liệu mùn cưa nên để nơi khô ráo và cách ly với khu sản xuất

/rây, sàn khối nguyên liệu để loại bỏ các dâm bào có kích thước lớn và tiến hành ủ đóng qua đêm

+ Phương pháp 2: Thay vì sử dụng vôi bột, ta sử dụng vôi cục Cân 1 lượng vôi nhất định cho vào thùng nước, dùng nước vôi tưới lên khôi nguyên liệu đến khi độ

ẩm khối nguyên liệu đạt 40 - 45% và tiến hành ủ đóng qua đêm

4.5 Quy trình sản xuất bịch mùn cưa

Tỷ lệ nước vôi 1%( 1kg vôi trong 100 lít nước)

Tỷ lệ cơ chất khô 100kg mùn cưa + 3kg cám bắp(3%), cám bắp càng nhiều càng dễ nhiễm tỷ (3-5%) + Ủ 7 ngày

Bước 1: Sau 24 giờ đã ủ qua đêm, kéo tấm phủ ra và tiến hành xử lý: Cân các thành phần dinh dưỡng và cho vào nước, khuấy đều cho các muối, NPK, DAP,…tan hoàn toàn rồi tưới đều lên khối cơ chất

Hình 4.1 3kg cám bắp, 100kg mùn cưa và hỗn hợp cơ chất

Bước 2: Nếu ẩm độ chưa đạt, pha thêm nước và trộn thật đều để ẩm độ đạt đến giá trị 55% - 65%

Bước 3: Dùng máy rây nguyên liệu

Bước 4: Cho cơ chất mùn cưa vào các bao nylong chịu nhiệt

Bước 5: Dùng tay hoặc khúc gỗ, vỗ đều lên thành bịch để cho khối cơ chất nén chặt xuống Hoặc sử dụng máy nén bịch

Bước 6: Dùng nút nhựa đặt vào bịch

Bước 7: Túm chặt đầu bịch mùn cưa và xoay thật đều khối nguyên liệu

Bước 8: Đeo nút vòng cổ vào bịch mùn cưa và kéo căng bịch nylong về phía dưới bịch Dùng dây quấn, cột chặt nút cổ giấy

Bước 9: Tạo lỗ chứa giống: để nghiên cổ bịch trút xuống khoảng 45o, Vỗ nhẹ vào đáy bịch đến khi mùn cưa không rơi ra nữa

Bước 10: Kiểm tra trọng lượng của khối nguyên liệu ( Thông thường 1 bịch nguyên liệu đạt 1,2 - 1,5 kg là vừa)

Bước 11: Tạo nút bông: Dùng bông không thấm, quấn thành từng nút, phần nút tiếp giáp với khối nguyên liệu mùn cưa nên tạo thật trơn, đều và ít sần sùi

Bước 12: Dùng nắp nhựa hoặc giấy báo chụp đầu nút gòn và cột bằng dây thun lại Bước 13: Chuyển các bịch mùn cưa vào nồi hấp thanh trùng

Hình 4.2 Đóng phôi thành từng bịt

Hình 4.3 Tiến hành hấp tuyệt trùng phôi

Bài 5 THANH TRÙNG NGUYÊN LIỆU MÙN CƯA

5.1 Chuẩn bị thiết bị.ư

Dùng thùng 200 lít hoặc thiết bị thanh trùng được xây bằng gạch chịu nhiệt

Sử dụng bằng điện trở

Sử dụng vĩ hấp bằng tre hoặc bằng sắt

5.2 Tiến hành thanh trùng bịch mùn cưa

Bước 1: Vệ sinh thiết bị thiết bị hấp thanh trùng và cho vào 1 lượng nước nhất định,chiều cao mực nước là 30 - 40 cm

Bước 2: Đặt vĩ sắt hoặc vĩ tre cao hơn mực nước khoảng 1 - 2cm và mặt trong thiết

bị được bao phủ bởi 1 lớp vải cách nhiệt

Bước 3: Cho các bịch mùn cưa đã đóng vào trong thiết bị hấp thanh trùng (Thùng

200 lít chứa khoảng 50 - 60 bịch)

Bước 4: Đậy nắp thùng lại

Bước 5: Cài đặt nhiệt độ và thời gian

Bước 6: Sau khi hấp thanh trùng xong Chuyển các túi mùn cưa ra khu vực cấy giống

Bài 6 CẤY GIỐNG MEO HẠT SANG PHÔI MÙN CƯA

Lưu ý: Phòng cấy giống phải luôn luôn được giữ vệ sinh sạch sẽ và không có bất

kỳ mầm bệnh nào Tránh ánh sáng mặt trời chiếu vào khu vực phòng cấy này, tốt nhất phòng cấy nên có hệ thống máy đều hòa nhiệt độ

Bước 3: Khử trùng tay và bề mặt chai meo hạt bằng cồn 70oC

Bước 4: Lấy tất cả các chai meo hạt đem ra ngoài khu vực cấy (Những chai meo hạt có màu trắng đều)

Bước 5: Hơ lửa vòng quanh cổ chai và muỗng để múc meo, đặt chai meo hạt gần ngọn lửa để không cho không khí bên ngoài tràn vào bên trong

Bước 6: Cho muỗng vào lấy meo và đưa vào bịch mùn cưa giống meo hạt, thao tác

cấy giống phải nhanh và thật cẩn thận ( Lưu ý trước khi cấy vào bịch mùn cưa, vỗ

nhẹ vào đáy bịch để tạo lỗ chứa giống, như đã làm ở bài 4.)

Hình 6.1 Cấy meo hạt vào mùn cưa

Bước 7: Sau đó, dùng bông đóng túi lại nhanh chóng Các túi còn lại cấy tương tự như lần trước

Bước 8:Thao tác lấy meo giống cấy cho các bịch tiếp theo cũng như lần trước Tháo nắp nhựa ra và hơ đều quanh miệng cổ chai, luôn để chai gần ngọn lửa cho đến khi cấy đến bịch cuối cùng, dùng giấy báo mới bịt miệng cổ chai lại

Bước 9: Theo dõi và quan sát quá trình ủ các bịch mùn cưa đã cấy giống Dùng giấy báo cắt thành từng mảnh nhỏ và dùng dây quấn cột lên đầu nút bông của bịch mùn cưa

Bước 10: Mang tất cả các túi đi vào phòng ủ

Hình 6.2 Phôi sau khi được cấy 1 tuần

Nhận xét : Tơ bắt đầu phát triển và lan rộng hơn