Ảnh hưởng của nồng độ casein hydrolysate kết hợp với BA trong quá trình tạo chồi từ đoạn thân cây bắp hủy đỉnh sinh trưởng, 4 tuần tuổi .... Ảnh hưởng của nồng độ BA kết hợp với IAA tron
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Vật liệu
2.1.1 Địa điểm và thời gian thực hiện khóa luận tốt nghiệp
2.1.1.1 Địa điểm: Phòng Công nghệ Tế Bào- Khoa Công nghệ Sinh Học
Trường Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh
Giống Bắp được sử dụng là giống SSC-2095 của Công ty cổ phần Giống cây trồng miền Nam
Mẫu cấy được đem tiến hành khử trùng theo thứ tự như sau:
• Lắc liên tục trong Javel 20% trong 30 phút (lặp lại 2 lần)
• Rửa lại bằng nước cất vô trùng thật sạch từ 3-5 lần
2.1.4 Điều kiện nuôi cấy in vitro cây Bắp Zea mays L
Sử dụng môi trường nuôi cấy MS cơ bản, bổ sung một số thành phần: Đường: 30 g/l
Chất điều hòa sinh trưởng thực vật được bổ sung tùy theo mục đích thí nghiệm, bao gồm: Casein hydrolysate, 6-Benzylaminopurine và Indole-3-acetic acid với nồng độ thay đổi
Sử dụng chai thủy tinh 500 ml, cho vào mỗi chai 40 ml môi trường, hấp khử trùng ở 121 o C, 1 atm, trong 1 giờ
2.1.4.2 Điều kiện nuôi cấy Độ ẩm trung bình: 70±5%
Thời gian chiếu sáng: 16 giờ/ ngày
2.1.4.3 Hóa chất dùng trong nuôi cấy mô
Các hóa chất pha môi trường nuôi cấy thực vật: MS
Các chất điều hòa tăng trưởng thực vật: (Merck KgaA, 64271 Damstadt, Germany)
Phương pháp nghiên cứu
2.2.1 Tạo cây con in vitro từ hạt cây Bắp
Mục đích thí nghiệm: Khảo sát nồng độ khác nhau của casein hydrolysate nhằm tìm ra nồng độ tốt nhất cho sự nảy mầm từ hạt của cây Bắp
Môi trường nuôi cấy: Môi trường MS bổ sung casein hydrolysate theo bảng
Mô tả thí nghiệm: Hạt Bắp khi mua về được khử trùng với cồn 70 o trong 1 phút Sau đó, hạt được lắc liên tục trong Javel 20% với thời gian 30 phút (lặp lại 2 lần)
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên gồm 5 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần, 1 bình/lần, 5 hạt/bình
Thời gian theo dõi: 2 tuần
Bảng 2.1 Ảnh hưởng của nồng độ casein hydrolysate lên khả năng nảy mầm của hạt Bắp
Nghiệm thức Nồng độ casein hydrolysate mg/l
2.2.2 Khảo sát khả năng tạo chồi trên môi trường MS có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng thực vật Mục tiêu thí nghiệm: Khảo sát nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thực vật nhằm tìm ra môi trường tốt nhất tạo chồi từ đoạn thân của cây Bắp
Vật liệu thí nghiệm: Đoạn thân cây Bắp
Mô tả thí nghiệm: Cấy đoạn thân cây Bắp in vitro trên môi trường MS bổ sung casein hydrolysate và chất điều hòa sinh trưởng thực vật với hai cách xử lý là chẻ đôi đoạn thân và hủy đỉnh sinh trưởng
Thời gian theo dõi: 4 tuần
Chỉ tiêu đánh giá: Số lượng, đặc điểm chồi tạo thành từ đoạn thân cây Bắp sau 4 tuần nuôi cấy
Môi trường MS bổ sung BA với nồng độ thay đổi theo bảng 2.2 và 2.3 tương ứng với hai cách xử lý
Thí nghiệm được bó trí theo kểu hoàn toàn ngẫu nhiên gồm 11 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức lặp lại 6 lần, 1 mẫu/lần, cấy trong 3 bình, 1 bình 2 mẫu,
Bảng 2.2 Ảnh hưởng của nồng độ BA trong quá trình tạo chồi từ đoạn thân cây
Bắp (chẻ đôi đoạn thân)
Bảng 2.3 Ảnh hưởng của nồng độ BA trong quá trình tạo chồi từ đoạn thân cây
Bắp (hủy đỉnh sinh trưởng)
Môi trường MS bổ sung 500 mg/l thủy phân casein kết hợp với BA ở các nồng độ khác nhau theo bảng 2.4 và 2.5 tương ứng với 2 cách xử lý Thí nghiệm thực hiện theo thiết kế hoàn toàn ngẫu nhiên, gồm 6 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức lặp lại 9 lần, mỗi mẫu thực hiện 1 lần và cấy trong 3 bình, mỗi bình chứa 3 mẫu.
Bảng 2.4 Ảnh hưởng của nồng độ casein hydrolysate kết hợp với BA trong quá trình tạo chồi từ đoạn thân cây Bắp (chẻ đôi đoạn thân)
Nghiệm thức Nồng độ BA mg/l
Môi trường MS + CH 500 mg/l
Bảng 2.5 Ảnh hưởng của nồng độ casein hydrolysate kết hợp với BA trong quá trình tạo chồi từ đoạn thân cây Bắp (hủy đỉnh sinh trưởng)
Nghiệm thức Nồng độ BA mg/l
Môi trường MS + CH 500 mg/l
Môi trường MS bổ sung BA kết hợp với IAA theo các nồng độ khác nhau theo bảng 2.6 và bảng 2.7 tương ứng với hai cách xử lý
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên gồm 10 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức lặp lại 6 lần, 1 mẫu/lần, cấy trong 3 bình, mỗi bình 2 mẫu
Bảng 2.6 Ảnh hưởng của nồng độ BA kết hợp với IAA trong quá trình tạo chồi từ đoạn thân cây Bắp (chẻ đôi đoạn thân)
Nghiệm thức Nồng độ BA mg/l Nồng độ IAA mg/l
Bảng 2.7 Ảnh hưởng của nồng độ BA kết hợp với IAA trong quá trình tạo chồi từ đoạn thân cây Bắp (hủy đỉnh sinh trưởng)
Nghiệm thức Nồng độ BA mg/l Nồng độ IAA mg/l
Bố trí thí nghiệm
Kết quả thí nghiệm được xử lý bằng phần mềm STATGRAPHICS Plus 3.0
Sự khác biệt có ý nghĩa ở mức 95% của giá trị được thể hiện bởi các chữ cái kèm theo, phân hạng DUNCAN
