Đang tải... (xem toàn văn)
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP * KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA NAA, BA VÀ KINETINE ĐẾN SỰ HÌNH THÀNH MÔ SẸO VÀ TÁI SINH NHÂN NHANH GIỐNG HOA CÚC ĐẠI ĐÓA IN VITRO Đề tài GVHD PGS TS Phan Thanh Kiếm KS Dương Thị Lan Oan[.]
Đề tài: KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA NAA, BA VÀ KINETINE ĐẾN SỰ HÌNH THÀNH MƠ SẸO VÀ TÁI SINH NHÂN NHANH GIỐNG HOA CÚC ĐẠI ĐÓA IN VITRO GVHD: PGS.TS Phan Thanh Kiếm SVTH: Nguyễn Thị Thu Hiền KS Dương Thị Lan Oanh Lớp: DH07NHA * Mở đầu Vật liệu phương pháp nghiên cứu Kết thảo luận Kết luận đề nghị * Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề - Cúc Đại Đóa loại hoa có hình dáng màu sắc đẹp, hoa to nên người tiêu dùng ưa chuộng, đóng vai trị quan trọng thị trường hoa cúc - Hoa cúc thường nhân giống cách lưu lại mẹ tách mầm giá Phương pháp không chủ động giống dễ làm thối hóa giống - Phương pháp nhân giống nuôi cấy mô, cho hệ số nhân cao, tương đối đồng mặt di truyền bệnh * 1.1 Đặt vấn đề (tt) - Trong ni cấy mơ khơng có mơi trường chuẩn tuyệt đối cần phù hợp cho phát triển tất tế bào Vì thay đổi môi trường nuôi cấy điều cần thiết, tùy thuộc vào giống, loại mô nuôi cấy khác - Đề tài: “Khảo sát ảnh hưởng nồng độ NAA, BA kinetine đến q trình tạo mơ sẹo nhân nhanh giống hoa cúc Đại Đóa in vitro” thực * 1.2 Mục tiêu - Xác định nồng độ Hypocloride calcium thời gian khử trùng thích hợp cho khả vào mẫu cúc Đại Đóa - Tìm phối hợp BA NAA thích hợp cho q trình tạo mơ sẹo ống nghiệm nụ hoa cúc Đại Đóa - Xác định nồng độ Kinetine NAA thích hợp cho khả nhân nhanh chồi tạo rễ cúc Đại Đóa * 1.3 Yêu cầu - Đưa mẫu vào ống nghiệm giống cúc Đại Đoá - Tạo mô sẹo, chồi rễ cho giống cúc Đại Đóa ống nghiệm - Theo dõi tiêu nghiên cứu 1.4 Giới hạn đề tài Đề tài thực thời gian từ tháng đến tháng nên khơng thể thực thí nghiệm nhiều lần để có kết xác * Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Thời gian - địa điểm - Thời gian: 03/2011 đến 06/2011 - Địa điểm: phòng Di truyền Chọn giống trồng, Viện Khoa học Kỹ thuật Nông Nghiệp Miền Nam TP.HCM * 2.2 Vật liệu thí nghiệm - Thu thập chồi thân, chồi nụ hoa từ khỏe khơng bị sâu bệnh Phan Thiết, Bình Thuận - Mẫu cấy thí nghiệm nhân nhanh chồi tạo rễ lấy chai mô - Môi trường dùng thí nghiệm mơi trường MS (Murashige and Skoog, 1962), pH điều chỉnh từ 5,7 – 5,8 * 2.3 Nội dung Phương pháp nghiên cứu ❖Thí nghiệm 1: Xác định nồng độ Hypocloride calcium thời gian khử trùng thích hợp cho khả đưa mẫu vào phịng thí nghiệm cúc Đại Đóa ❖Thí nghiệm xử lý mẫu nồng độ Hypocloride calcium: 6%, 8%, 10%, 12% thời gian 30 phút 40 phút - Số NT: - Số LLL: - Số mẫu/1 LLL: 15 - Tổng số mẫu thí nghiệm: 360 mẫu * Mẫu rửa vịi nước Rửa xà bơng Rửa vịi nước Tủ cấy vô trùng, rửa lại lần nước cất vơ trùng Quy trình khử trùng Cấy vào mơi trường khống MS khơng bổ sung chất điều hịa sinh trưởng Rửa lại nước cất vô trùng lần Chất khử trùng * Kết thảo luận * ❖Thí nghiệm 1: Xác định nồng độ Hypocloride calcium thời gian khử trùng thích hợp cho khả đưa mẫu vào phịng thí nghiệm cúc Đại Đóa Bảng 3.1: Tỷ lệ nhiễm, sống, chết (%) mẫu Cúc Đại Đoá 10 NSC Nồng độ Hypochlorite Calcium (%) 10 12 Tỷ lệ mẫu nhiễm (%) 100 60 27 20 Thời gian khử trùng (phút) 30 40 Tỷ lệ Tỷ lệ Tỷ lệ Tỷ lệ mẫu mẫu mẫu mẫu sống chết nhiễm sống (%) (%) (%) (%) 24 56 27 16 17 53 87 51 22 16 13 29 38 18 Tỷ lệ mẫu chết (%) 20 40 67 * • Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng phối hợp BA NAA đến khả tạo mơ sẹo nụ hoa cúc Đại Đóa in vitro * Bảng 3.2: Ảnh hưởng kết hợp NAA BA đến q trình hình thành mơ sẹo TLhình hình TL NAA (mg/l) (mg/l) BA BA (mg/l) (mg/l) thành thànhmô mô sẹo sẹoĐK ĐK mô mô sẹo ngày hình hình Hình Hình thái NAA thái mơ mơ sẹo sẹo sẹo ngày (%) (cm) thành(ngày) (%) (cm) thành(ngày) 0,0f 0,00f 00 00 0,0f 0,00f 14,8e 0,57e 20 - 25 nâu đen 14,8e 0,57e 20 - 25 nâu đen 25,9de 1,07c 25 vàng nâu 25,9de 1,07c 25 vàng nâu 40,7d 0,77de 20 - 30 vàng nâu 40,7d 0,77de 20 30 vàng nâu 0,2 0,0f 0,00f 0,2 0,0f 0,00f 0,2 63,0c 0,80cde 20 - 24 trắng xanh, phát triển chậm 0,2 63,0c 0,80cde 20 - 24 trắng xanh, phát triển chậm 0,2 100,0a 2,30a 10 - 13 trắng xanh, phát triển nhanh 0,2 23 100,0a 2,30a 10 phátnâu triển nhanh 0,2 100,0a 1,93a 10 13 13 trắng xanh, vàng 0,2 30 100,0a 1,93a 10 13 vàng- nâu 0,5 0,0f 0,00f 0,5 01 0,0f 0,00f - triển hệ rễ 0,5 85,2b 0,93dc 10 13 trắng xanh, phát 0,5 12 85,2b 0,93dc 10 trắng triển hệ hệ rễ rễ 0,5 100.0a 2,07a 10 13 13 trắngxanh, xanh, phát phát triển 0,5 0,5 23 100.0a 100,0a 2,07a 1,57b 0,5 CV (%) 10,71 100,0a 1,57b F(NAA*BA) 27,7** 13,88** 10 10 13 13 10 - 13 trắng pháttriển triểnhệhệrễrễ vàngxanh, nâu, phát vàng nâu, phát triển hệ rễ CV (%) 10,71 F(NAA*BA) 27,7** 13,88** Ghi chú: : kí tự theo sau giá trị trung bình khác cột, **: có khác biệt có ý nghĩa thống kê mức α = 0,01 Hình 4.1: Mơ sẹo hình thành từ nụ hoa cúc Đại Đoá 45 NSC A): MT bổ sung mg/l BA; B): MT bổ sung 0,2 mg/l NAA; C): MT bổ sung 0,5 mg/l NAA + mg/l BA; D): MT bổ sung 0,2 mg/l NAA + mg/l BA; E): MT bổ sung 0,5 mg/l NAA + mg/l BA; F): MT bổ sung 0,2 mg/l NAA + mg/l BA.4.3 * Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng Kinetine đến trình nhân nhanh chồi giống cúc Đại Đóa in vitro đến q trình nhân nhanh chồi cúc Đại Đóa 35 Bảng 3.3: Ảnh hưởng kinetine NSC NT (mg/l) Số chồi/mẫu chồi cấy (%) (chồi) Chiều cao chồi (cm) HSN 1(Đ/C) 100 1,0d 4,65a 2,9c 100 1,0d 4,73a 3,2b 100 3,1a 4,00b 4,4a 100 2,8b 3,34c 2,8c 100 2,1c 1,75d 2,3d 4,43 3,91 3,04 372,5** 215,3** 205,7** CV (%) Ftính • Kinitine Tỷ lệ mẫu tạo Ghi chú: : kí tự theo sau giá trị trung bình khác cột, **: có khác biệt có ý nghĩa thống kê mức α = 0,01 * Hình 3.2: Ảnh hưởng kinitine đến trình nhân nhanh chồi cúc Đại Đóa 35 NSC * Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng NAA đến trình hình thành rễ cúc Đại Đóa in vitro Bảng 3.4: Ảnh hưởng NAA đến rễ hoa cúc Đại Đóa 25 NSC NT • NAA Tỷ lệ rễ Số rễ/cây Chiều dài rễ (mg/l) (%) (rễ) (cm) 1(Đ/C) 98,7 3,8d 6,4a 0,5 98,7 4,8c 6,1a 100 5,2bc 6,2a 1,5 100 5,9a 5,0 b 100 5,4b 4.5b 2,5 98,7 4,2d 3.5c CV (%) 1,64 4,37 5,43 Ftính 0,6ns 42,9** 47,3** Ghi chú: Kí tự theo sau giá trị trung bình khác cột, **: có khác biệt có ý nghĩa thống kê mức α = 0,01.; ns: khơng có khác biệt thống kê.* Hình 3.3: Ảnh hưởng NAA đến trình rễ cúc Đại Đóa 25 NSC * Kết luận đề nghị 4.1 Kết luận - Dung dịch Hypocloride calcium 10% xử lý mẫu 30 phút phù hợp cho việc đưa mẫu vào phịng thí nghiệm - Môi trường MS bổ sung 0,2 mg/l NAA kết hợp với mg/l BA môi trường phù hợp để tạo mơ sẹo nụ hoa cúc Đại Đóa * - Môi trường MS + mg/l kinitine mơi trường thích hợp cho nhân chồi cúc Đại Đóa in vitro - Môi trường MS + 0,1 g/l than hoạt tính + 1,5 mg/l NAA mơi trường phù hợp để rễ cúc Đại Đóa * 4.1 Đề nghị - Sử dụng mơi trường có bổ sung 0,2 mg/l NAA kết hợp với mg/l BA thí nghiệm tạo mơ sẹo nụ hoa cúc Đại Đóa - Tiếp tục nghiên cứu nồng độ kinitine bước nhảy 0,5 mg/l thí nghiệm nhân chồi để tìm nồng độ phù hợp nhân chồi hoa cúc Đại Đóa in vitro * Cảm ơn quan tâm theo dõi Thầy Cô bạn * Bảng 4.3: Ảnh hưởng kết hợp NAA BA đến đường kính mơ sẹo từ nụ hoa cúc Đại Đoá 45NSC Yếu tố A (NAA, mg/l) Đường kính mơ sẹo (cm) Yếu tố B (BA,mg/l) Trung bình A CV = 4,57% Trung 0,2 0,5 bình B 0,00f 0,00f 0,00f 0,00D (0,07) (0,07) (0,07) 0,07 0,57e 0,80cde 0,93dc 0,77C (1,03) (1,14) (1,20) (1,12) 1,07c 2,30a 2,07a 1,81A (1,25) (1,67) (1,60) (1,52) 0,77de 1,93a 1,57b 1,42B (1,12) (1,56) (1,44) (1,37) 0,60b 1,26a 1,14a 1,03 1,27 1,26 F(A) = 70,66** F(B) = 384,59** F(A*B) = 13,88** Ghi chú: Các ký tự trung bình có ký tự khơng có khác biệt thống kê; **: có khác biệt có ý nghĩa * thống kê mức α = 0,0;.các số liệu chuyển đổi sang √(x + 0,5) Bảng 4.2: Ảnh hưởng kết hợp NAA BA đến tỷ lệ hình thành mơ sẹo từ nụ hoa cúc Đại Đoá 45NSC Yếu tố A ( NAA (mg/l)) Trung Tỷ lệ tạo mô sẹo Yếu tố B (BA (mg/l) Trung bình A CV = 10,71% 0,2 0,5 bình B 0,0f 0,0f 0,0f 0,0C (0,02) (0,02) (0,02) (0,02) 14,8e 63,0 85,2b 54,3B (0,39) (0,92) (1,24) (0,85) 25,9de 100,0a (1,55) (1,21) 100,0a (1,55) 75,3A (1,21) 40,7d 100,0a (1,55) (1,27) 100,0a (1,55) 80,2A (1,27) 20,4B 65,8A 64,6A (0,41) (1,01) (1,09) F(A) = 208.2** F(B) = 373,1** F(A*B) = 27,7** Ghi chú: Các giá trị trung bình có ký tự khơng có khác biệt thống kê; **: có khác biệt có ý nghĩa thống kê mức α = 0,01;.các số liệu chuyển đổi sang arcsin√% *