Nhân giống cây ớt chuông vàng (Capsicum annuum L. in vitro

Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH ——oOo BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐÈ TÀI CHƯƠNG TRÌNH SINH VIÊN NCKH NĂM 2020 TÊN ĐỀ TÀI: NHÂN GIỐNG CÂY ỚT CHUÔNG VÀNG (Capsicum annuum L.) IN VITRO Mã số đề tài: Chủ nhiệm đề tài: Ao Thị Ngọc Vi Giảng viên hướng dẫn: ThS Đỗ Tiến Vinh ThS Mai Thị Phương Hoa Khoa: Công nghệ Sinh học Các thành viên tham gia: STT Họ tên Ao Thị Ngọc Vi MSSV 1711544984 TP Hồ Chí Minh, tháng 10 năm 2020 Lớp 17DSH1A MỤC LỤC MỤC LỤC CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Giá trị đề tài CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 2.1 Nơi thực 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.3 Phuơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát thời gian khử trùng thích họp cho q trình vơ trùng mẫu Ớt Chng Vàng 11 2.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống đến sinh trưởng phát triển Ớt Chuông Vàng 11 2.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo chồi Ớt Chuông Vàng 12 2.3.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng auxin đến trình hình thành rễ Ớt Chng Vàng 13 2.4 Phương pháp thu thập xử lý số liệu 14 2.4.1 Phương pháp thu thấp số liệu 14 2.4.2 Xử lý số liệu 14 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 15 3.1 Ket thí nghiệm 1: Khảo sát thời gian khử trùng thích hợp cho q trình vơ trùng mẫu Ớt Chng Vàng 15 3.2 Ket thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống đến sinh trường phát triển Ớt Chuông Vàng 17 3.3 Ket thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo chồi Ớt Chuông Vàng 19 3.4 Ket thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng auxin đến trình hình thành rễ Ớt Chng Vàng 21 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐÈ NGHỊ 25 TÀI LIỆU THAM KHẢO 26 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT MT Môi trường NT Nghiệm thức BA Benzylaminopurin benzyl adenin IAA P-indol-acetic acid IBA indol-3-acetic acid NAA a - Naphthaleneacetic acid SAS Statistical Analysis Systems 2,4-D 2,4 - Dichlorophenoxyacetic acid MS Môi trường Murashige & Skoog - 1926 cv Hệ so biến động DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 2.1 Sơ đồ tổng quan nội dung nghiên cứu Error! Bookmark not defined Hình 3.1 Vơ trùng mẫu hạt Ớt Chuông Vàng 16 Hình 3.2 Chồi Ớt Chng Vàng sau 30 ngày ni cấy mơi truờng khống 18 Hình 3.3 Chồi Ớt Chuông Vàng sau 30 ngày nuôi cấy MT B5 21 Hình 3.4 Rễ Ớt Chuông Vàng cấy MT B5 bổ sung IAA, IBA, NAA 24 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 2.1 Các nghiệm thức khảo sát thời gian khử trùng thích họp cho q trình vơ trùng mẫu Ớt Chuông Vàng 11 Bảng 2.2 Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng thành phần khoáng đến sinh trưởng phát triển Ớt Chuông Vàng 12 Bảng 2.3 Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng chất điều hoà sinh trưởng đến khả tạo chồi Ớt Chuông Vàng 12 Bảng 2.4 Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng hàm lưọng auxin đến trình hình thành rễ Ớt Chng Vàng 13 Bảng 3.1 Ket khảo sát thời gian khử trùng thích họp cho q trình vơ trùng mẫu hạt Ớt Chuông Vàng 15 Bảng 3.2 Ket khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống đến sinh trưởng phát triển Ớt Chuông Vàng 18 Bảng 3.3 Ket khảo sát ảnh hưởng chất điều hoà sinh trưởng đến khả tạo chồi Ớt Chuông Vàng 20 Bảng 3.4 Ket khảo sát ảnh hưởng hàm lượng auxin đến trình hình thành rễ ớt Chuông Vàng 22 CHƯƠNG TỎNG QUAN 1.1 Tính cấp thiết đề tài Ớt Chng Vàng hay gọi ớt ngọt, loại thực phẩm giàu dinh dưỡng với vị cay nhẹ bổ ích cho sức khoẻ Ớt chng có nguồn gốc từ Trung Nam Mỹ, ngày có mặt khắp nơi giới sử dụng gia vị, rau thuốc, Việt Nam, loại trồng chủ nhiều Đà Lạt nên gọi với tên khác ớt Đà Lạt Ớt chng có nhiều màu sắc bắt mắt, có chứa hàm lượng dinh dưỡng cao, giúp ích nhiều việc tăng cường sức khoẻ hệ miễn dịch người Trong ớt chuông chứa lượng lớn vitamin c, A, khoáng chất thiết yếu hàm lượng calo thấp, nguồn dinh dưỡng cân đối thiết yếu nhằm bổ sung cho thể Vì vậy, ớt chng đưa vào thực đơn ăn uống ngày gia đình tất người nhận lợi ích tuyệt vời cho sức klioẻ mà chúng mang lại Mặt khác, ớt khơng kén đất trồng, thích nghi với nhiều vùng sinh thái nên tiềm phát triển ớt nước ta lớn Khác với loại rau củ khác, ớt thu hoạch nhiều lần, sơ chế, chế biến phơi khô, làm tương, chiết lấy dịch Với ưu điểm ớt khắc phục tính rủi ro thị trường, giữ giá ổn định, đảm bảo lợi ích cho người sản xuất Với giá trị lớn mà ớt mang lại giúp cho diện tích trồng ngày mở rộng tăng nhanh Nhưng nay, nguồn hạt giống chuyên dụng để trồng phải phụ thuộc hồn tồn vào nước có kinh tế phát triển Hà Lan, Isarel nên giá thành hạt giống mà tăng cao, ngồi chất lượng hạt giống lại khơng đảm bảo trọn vẹn vận chuyển Trong trình nhân giống gặp khơng khó khăn tác động nhiều yếu tố nội sinh ngoại sinh Vì vậy, việc nghiên cứu phương pháp nhân nhanh giống Ớt Chuông Vàng cấp thiết Kỹ thuật nhân giống in vitro phương pháp hiệu với ưu điểm tạo non trẻ hoá bệnh nên tiềm sinh trưởng, phát triển cho suất cao, khắc phục nhược điểm phương pháp nhân giống truyền thống Đối tượng trồng nhân lên theo hệ số nhân theo phương pháp nhân giống in vitro đáp ứng nhu cầu số lượng, chất lượng trồng quy mô sản xuất lớn Nên việc sản xuất giống trồng chất lượng cao từ phương pháp tối ưu giúp hạn chế tối đa việc nhiễm mầm bệnh, chất tạp nhiễm cho Vì vậy, số lượng chất lượng giống đảm bảo Nhằm đáp ứng nhu cầu thực tiễn, cấp thiết trên, đồng thời góp phần chủ động tạo giống, thực đề tài “Nhân giống Ớt Chuông Vàng (Capsicum annuum L.) in vitro.” 1.2 Mục tiêu đề tài Xác định thành phần khống chất điều hịa sinh trưởng thích họp để nhân nhanh giống Ớt Chng Vàng (Capsicum annuum L.) in vitro 1.3 Giá trị đề tài Việc ứng dụng phương pháp nuôi cấy mô thực vật in vitro đôi tượng Ớt Chuông Vàng, từ vật liệu ban đầu hạt Ớt Chuông Vàng, thành cơng nghiên cứu mơi trường khống thích họp; nghiên cứu khả hình thành rễ tạo chồi Ớt Chuông Vàng Ket qủa thành nuôi cấy thành cơng với thí nghiệm tạo tiền đề cho việc nhân giống quy mô lớn phục vụ cho sản xuất CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 2.1 Noi thực Phịng thí nghiệm nuôi cấy mô Thực Vật khoa Công nghệ Sinh học - trường Đại học Nguyễn Tất Thành Thời gian thực đề tài: tháng (từ tháng 06/2020 đến tháng 09/2020) Vật liệu thí nghiệm: Thí nghiệm tiến hành Ớt Chuông Vàng công ty Rijk Zwaan cung cấp 2.2 Nội dung nghiên cứu - Khảo sát thời gian khử trùng thích họp cho q trình vơ tràng mẫu Ớt Chuông Vàng in vitro - Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống đến sinh trưởng phát triển Ớt Chuông Vàng - Khảo sát ảnh hưởng chất điều hoà sinh trưởng đến khả tạo chồi Ớt Chuông Vàng - Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng auxin đến trình tạo rễ Ớt Chuông Vàng 2.3 Phương pháp nghiên cứu Điều kiện nuôi cấy Mau cấy môi trường khử trùng nồi hấp vô trùng atm, 121°c 15 phút, pH môi trường: 5,8, nhiệt độ phịng ni cấy 25 ± 2°c, cường độ ánh sáng: 2.000 - 3.000 lux, thời gian chiếu sáng giờ/ngày Các thí nghiệm bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên yếu tố (CRD), gồm lần lặp lại, mồi nghiệm thức lần lặp lại cấy chai, thể tích 500 ml, có chưa 50 ml môi trường nuôi cấy số liệu thu thập từ thí nghiệm xử lý phần mểm SAS 9.1 Vô trùng mẫu hạt Hạt giống Ớt Chuông Vàng Ớt Chuông Vàng Nồng độ Javel 50% Thời gian: 5; 10; 15 phút Khảo sát ảnh hưởng thành phần mơi trường khống đến sinh trưởng phát triển Môi trường khảo sát ◄- MS, WPM, LV, B5 ớt Chuông Vàng ^0^ Khảo sát ảnh hưởng chất điều hoà sinh trưởng đến khả tạo chồi ◄— BA, kinetin (0,5; 1; 2; mg/1) Ớt Chuông Vàng Khảo sát ảnh hưởng nồng độ auxin đến hình thành rễ Ớt Chuông Vàng ◄— IAA, IBA, NAA (0,5; mg/1) Hình 2.1 Sơ đồ tổng quan nội dung nghiên cứu Bảng 2.2 Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng thành phần khoáng đến sinh trưởng phát triển Ớt Chuông Vàng NT Môi trường 1.1 MS 1.2 WPM 1.3 LV 1.4 B5 - Chỉ tiêu khảo sát: Chiều cao (cm), số (lá/mẫu), số rễ (rễ/mẫu) - Thời gian thí nghiệm: 30 ngày 2.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo chồi Ớt Chuông Vàng - Mục tiêu: Xác định hàm lượng chất điều hịa sinh trưởng thích hợp đến khả tạo chồi Ớt Chuông Vàng Bảng 2.3 Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng chất điều hoà sinh trưởng đến khả tạo chồi Ớt Chuông Vàng NT BA (mg/1) Kinetin (mg/1) 1.1 0,5 - 1.2 - 1.3 - 1.4 - 1.5 - 0,5 1.6 - 1.7 - 1.8 - - Vật liệu: chồi Ớt Chuông Vàng in vitro - Mơi truờng khống: mơi truờng B5 (có bổ sung đường 30 g/1, agar g/1) - Chất điều hòa sinh trưởng: BA (0,5; 1; 1; mg/1); kinetin (0,5; 1; 2; mg/1) - Tiến hành: Cây Ớt Chuông Vàng (thí nghiệm 2) cắt thành đoạn có chiều dài cm, có sau cấy vào mơi trường thí nghiệm có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng BA (0,5; 1; 2; mg/1), kinetin (0,5; 1; 2; mg/1) - Chỉ tiêu khảo sát: Chiều cao (cm), số (lá/mẫu), số rễ (rễ/mẫu), số chồi (chồi/mẫu) - Thời gian thí nghiệm: 30 ngày 2.3.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng auxin đến trình hình thành rễ Ớt Chuông Vàng - Mục tiêu: Xác định hàm lượng auxin đến trình hình thành rễ Ớt Chng Vàng - Vật liệu thí nghiệm: chồi Ớt Chng Vàng ỉn vitro - Mơi trường khống: mơi trường B5 (có bổ sung đường 30 g/1, agar g/1) - Điều hòa sinh trưởng: IAA, IBA, NAA (0,5; mg/1) Bảng 2.4 Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng hàm lượng auxin đến trình hình thành rễ Ớt Chuông Vàng NT IAA (mg/1) IBA (mg/1) NAA (mg/1) 1.1 0,5 - - 1.2 - - 1.3 - 0,5 - 1.4 - - 1.5 - - 0,5 1.6 - - - Tiến hành: Cây Ớt Chuông Vàng cắt thành đoạn có chiều dài cm, có sau cấy vào mơi trường thí nghiệm có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng IAA (0,5; mg/1); IB A (0,5; mg/1); NAA (0,5; mg/1) - Chỉ tiêu khảo sát: Chiều cao (cm), số (lá/mẫu), số rễ (rễ/mẫu) - Thời gian thí nghiệm: 30 ngày 2.4 Phương pháp thu thập xử lý số liệu 2.4.1 Phương pháp thu thấp số liệu - Tỷ lệ mẫu vô trùng (%) = (tổng số mẫu vô trùng/tổng số mẫu ban đầu) X 100 - Tỷ lệ mẫu tạo chồi (%) = (tổng số mẫu tạo chồi/tổng số mẫu vô trùng) X 100 - Số phát sinh tính cách đếm số sau tuần trừ cho số ban đầu - Số chồi phát sinh tính số chồi sau tuần nuôi cấy trừ cho số chồi ban đầu - Chiều cao chồi tính từ phần tiếp giáp thân với rễ tới đỉnh chồi cao (cm) - Số rễ tính cách đếm số rễ sau tuần nuôi cấy 2.4.2 Xử lý số liệu - Xử lý thống kê: Sử dụng phần mềm SAS 9.1 - Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên CRD (Completely randomized design) thực độc lập Mồi thí nghiệm lặp lại CHƯƠNG KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ket thí nghiệm 1: Khảo sát thịi gian khử trùng thích họp cho q trình vơ trùng mẫu Ớt Chng Vàng Trong nuôi cấy ỉn vitro, môi trường nuôi cấy chứa nhiều chất dinh dưỡng như: vitamin, đa lượng, vi lượng, nên thuận lợi cho vi sinh vật phát triển Các phận thực vật đưa vào nuôi cấy ỉn vitro như: thân, lá, hoa, chồi, Tuỳ vào điều kiện tiếp xúc bên mà phận mang nhiều hay vi khuẩn, nấm loại, Tốc độ phát triển tác nhân gây bệnh nhanh nhiều lần Vì vậy, khâu vô trùng mẫu quan trọng nuôi cấy mô Vô tràng mẫu họp lý giúp nâng cao hiệu trình sản xuất giống Phương pháp phổ biến dùng chất hố học có tính chất diệt khuẩn Hiệu phương pháp phụ thuộc vào thời gian vô trùng mẫu, mức độ xâm nhập vi khuẩn, nấm xâm nhập vào mẫu hạt Để tăng hiệu khử tràng, xử lý mẫu cồn 70° vòng phút, chất diệt khuẩn dùng Javel Bảng 3.1 Ket khảo sát thời gian khử trùng thích họp cho trình vơ trùng mẫu hạt Ớt Chng Vàng Chỉ tiêu khảo sát NT Javel (%) Thời gian (phút) 1.1 50 1.2 1.3 Tỉ lệ vô trùng (%) Tỷ lệ nảy mầm (%) Chiều cao (cm) 100 88,79b l,22c 50 10 100 92,67b 2,05b 50 15 100 100a 3,20a Các ký tự theo sau giả trị trung bình cột thê khác biệt nghiệm thức với mức ỷ nghĩa nghĩa p