Nghiên cứu nhân giống cây hoa Dạ Yến Thảo (Petunia Hybrida) in vitro

ĐẠI HOC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYEN TAT THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY HOA DẠ YẾN THẢO (Petunia hybridà) IN VITRO Sinh viên thực : Nguyễn Thị Thu Thủy MSSV :1711547297 GVHD : ThS ĐỒ Tiến Vinh ThS Mai Thị Phương Hoa TP HCM, 2020 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii TÓM TẮT iv SUMMARY V DANH MỤC • CÁC HÌNH ẢNH vi DANH MỤC BẢNG BIẾU vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT viii ĐẶT VẤN ĐỀ ix CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan Dạ Yen Thảo 1.1.1 Phân loại .1 1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.3 Đặc điêm phân bô 1.1.4 Giá trị kinh tế 1.2 Phương pháp nhân giong 1.2.1 Kỳ thuật nhân giong truyền thống 1.2.2 Kỳ thuật nhân giong in vitro 1.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến nuôi cấy 1.3.1 Yeu tố ảnh hưởng đến nhân giống in vitro 1.3.2 Chất điều hòa sinh trưởng 11 1.4 Các cơng trình nghiên cứu nước nước 13 1.4.1 Các cơng trình nghiên cứu giới 13 1.4.2 Các cơng trình nghiên cứu Việt Nam 15 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 17 ii 2.1 Nơi thực .17 2.2 Nội dung nghiên cứu 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng thành phần môi trường khoáng đến sinh trưởng phát triển Dạ Yen Thảo 18 2.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo chồi Dạ Yen Thảo 19 2.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng auxin đến trình hình thành rề Dạ Yen Thảo 20 2.4 Phương pháp thu thập xử lý số liệu 21 2.4.1 Phương pháp thu thập số liệu 21 2.4.2 Xử lý số liệu 21 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 3.1 Ket thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng thành phần mơi trường khống đến sinh trưởng phát trien Dạ Yen Thảo 22 3.2 Ket thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo chồi Dạ Yen Thảo 24 3.3 Ket thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng auxin đến trình hình thành rễ Dạ Yen Thảo 27 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 30 Kết luận 30 Đe nghị 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO 31 PHỤ LỤC 33 iii TÓM TẤT Đe tài: “Nghiên cứu nhân giống hoa Dạ Yến Thảo (Petunia hybrida) in vitro” thực từ tháng 06/2020 đến tháng 09/2020 Phịng thí nghiệm ni cấy mơ thực vật khoa Công nghệ Sinh học, trường Đại học Nguyễn Tất Thành với mục tiêu xác định thành phần khoáng chất điều hịa sinh trưởng thích họp để nhân giống hoa Dạ Yen Thảo (Petunia hybridà) in vitro Đe tài có ba nội dung: Khảo sát ảnh hưởng thành phần mơi trường khống đến sinh trưởng phát triển hoa Dạ yến Thảo Khảo sát ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo choi hoa Dạ Yen Thảo Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng auxin đến trình hình thành rễ cùa hoa Dạ Yến Thảo Các thí nghiệm bố trí theo kiểu hồn tồn ngầu nhiên Ket đạt được: Mơi trường MS thích họp đe nhân giống hoa Dạ Yen Thảo in vitro Mơi trường thích họp đe tạo chồi hoa Dạ Yen Thảo: MS bo sung BA 0,25 mg/1, đường 30 g/1, agar g/1 Mơi trường thích hợp cho hình thành rễ cùa Dạ Yen Thảo: MS bo sung NAA mg/1, đường 30 g/1, agar g/1 IV DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Hoa Dạ Yến Thảo Hình 2.1: Sơ đồ tổng quan nội dung nghiên cứu .18 Hình 3.1 Chồi hoa Dạ Yen Thảo sau 20 ngày ni cấy mơi trường khống 23 Hình 3.2 Chồi Dạ Yen Thảo sau 20 ngày nuôi cấy mơi trường MS có bổ sung BA, kinetin 26 Hình 3.3 Chồi Dạ Yen Thảo sau 20 ngày nuôi cấy môi trường MS có bổ sung auxin .29 vi DANH MỤC BANG BIÊU Bảng 2.1 Khảo sát ảnh hưởng thành phần mơi trường khống đến sinh trưởng phát triển Dạ Yến Thảo 19 Bảng 2.2 Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo chồi Dạ yến Thảo 20 Bảng 2.3 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng auxin đến trình hình thành rề Dạ Yen Thảo 21 Bảng 3.1 Ket khảo sát ảnh hưởng thành phần mơi trường khống đến sinh trưởng phát trien Dạ Yen Thảo .22 Bảng 3.2 Ket khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo chồi cùa Dạ Yen Thảo 25 Bảng 3.3 Ket khảo sát ảnh hưởng hàm lượng auxin đến trình hình thành rễ Dạ Yến Thảo 28 vii DANH MỤC • CHỮ VIÉT TẮT BA Benzylaminopurin benzyl adenin IAA P-indol - acetic acid IBA indol - - acetic acid NAA a - Naphthaleneacetic acid SAS Statistical Analysis Systems MS Môi trường Murashige & Skoog - 1926 NT Nghiệm thức MT Môi trường viii ĐẶT VÁN ĐÈ Tính cấp thiết đề tài Hoa Dạ Yen Thảo (Petunia hybrida) hay gọi Dã Yên Thảo, thuộc họ Cà (Solanaceae) Là loài địa nước có khí hậu nhiệt đới khu vực miền nam Châu Mỹ Đây loại thân thảo chịu nhiệt, hoa nở liên tục đợt đến đợt khác, hoa có nhiều màu sắc kiểu dáng phong phú Dạ Yen Thảo thường trồng chậu trang trí khn viên ngơi nhà làm cho nhà thêm rực rõ với ưu điếm màu sắc hoa phong phú Dạ Yen Thảo mang lại nhiều lựa chọn cho người tiêu dùng Hiện Dạ Yen Thảo trồng từ hạt Tuy nhiên giá bán hạt giống hoa từ 1.000 - 3.000 đ/hạt tùy loại hoa đơn, kép hay khảm Mặc khác, tỉ lệ nảy mầm hạt tương đối thấp khoảng 60% Ngồi ra, Dạ Yen Thảo cịn có the nhân giống phương pháp giâm cành Tuy nhiên, giâm cành có sức sống yếu gieo hạt nhanh tàn Nuôi cấy mô phương pháp áp dụng nhân giống phổ biến Nhân giống kĩ thuật ni cấy mơ tăng số lượng lớn giống thời gian ngắn, chất lượng đồng giữ đặc tính ưu việt mẹ, giá thành thấp, kiểm soát mầm bệnh Phương pháp nhân giống trồng nuôi cấy mô in vitro xem phương pháp hữu ích đế giảm chi phí sản xuất, nâng cao suất trồng chủ động nguồn giống không phụ thuộc điều kiện tự nhiên Đe trình ni cấy mơ diễn thuận lợi vai trị yếu tố tham gia điều khiến q trình tạo chồi rễ Dạ Yen Thảo chất điều hòa sinh trưởng đa lượng, vi lượng môi trường nuôi cấy mô cần nghiên cứu làm rõ Vì vậy, trình nhân giống hoa Dạ Yen Thảo có ý nghĩa thiết thực Xuất phát từ yêu cầu thực tiễn tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu nhân giống hoa Dạ Yen Thảo (Petunia hybrìda) in vitro” Mục tiêu đề tài Xác định thành phần khống chất điều hịa sinh trưởng thích hợp đe nhân giống hoa Dạ Yen Thảo (Petunia hybridà) in vitro IX Chương Tổng quan tài liệu CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan Dạ Yen Thảo 1.1.1 Phân loại Giới : Thực vật Ngành : Magnoliophyta Bộ : Solanales Họ : Solanaceae Chi : Petunia Lồi : Petunia Hybrida Hình 1.1 Hoa Dạ Yen Thảo Dạ Yen Thảo thân mềm, loại dề trồng, nở nhiều hoa phong phú màu sắc Cây phù hợp trồng chậu treo trang trí trước thềm nhà trồng bồn hoa sân Thuộc lồi thực vật có hoa họ Cà (Solanaceằ), có nguồn gốc từ nước miền Nam Châu Mỹ, Dạ Yen Thảo đà phố biến khắp giới với hàng trăm giống lai ' Là loài chịu nhiệt, ưa sáng, hoa điểm tô cho ban công nhà thêm tươi tắn, đặc sắc thân hoa có lóp lơng tơ bao phủ thật mềm mại, ấn tượng tao nhã 1.1.2 Đặc điểm hình thái Cây hoa Dạ Yen Thảo thân cỏ, sống năm, cao 15-30 cm Thân mềm phủ đầy lơng dính, nhánh phân từ nách lá, nách phân nhiều nhánh Lá đơn, mọc cách mặt mặt có lớp lơng phủ mịn, mép ngun khơng cưa, màu xanh bóng Hoa nhỏ, đơn độc mọc nách lá, cọng dài - cm, đài hoa cao - 2,5 cm Hoa lưỡng tính gồm tiểu nhụy gắn phần ống vành Cánh đài họp gốc, lải quả, cánh tràng họp thành ống loe rộng đỉnh, noi rõ gân thùy Quả nang hai mảnh, nhiều hạt2 Tốc độ sinh trưởng hoa Dạ Yen Thảo nhanh Hoa có dạng hình phễu, dạng hoa Dạ Yen Thảo lai có hình dáng đa dạng phong phú nhiều Ví dụ hoa cánh đơn, hoa kép với mép có viền sợn sóng, mép nhúng hình cung nhọn Hoa có sọc, đom, viền quanh cánh với nhiều màu sắc khác Chương Tổng quan tài liệu đỏ tía, màu hoa cà, màu oải hương, hồng, đỏ, trắng, vàng, cam Dạ Yen Thảo rũ hồng đậm có mùi thơm dịu dàng, chạm cuống hoa sè thấy dính Là lồi niên thường nở hoa vào mùa hè Dạ Yen Thảo ưa sáng, trở nên mảnh khảnh hoa trồng tối Cây thích hợp với điều kiện độ ẩm vừa phải, có the sống điều kiện khơ khơng thích ứng với điều kiện ngập úng Cây thích hợp với khí hậu nóng ẩm, không chịu nhiệt độ lạnh hay nóng Dạ Yen Thảo trồng hầu hết loại đất, tốt đất màu mỡ, đất có pH từ 6,0 - 7,0 Dạ Yen Thảo thường bị chết úng nước, cần tưới nước liều lượng, không tưới nước lên nụ tránh làm thối nụ, cải thiện điều kiện vệ sinh trì ẩm độ thích hợp Ngồi ra, Dạ Yen Thảo thường bị héo rũ nấm, bị thối nhũn vi khuẩn sâu, sên, rệp cắn phá Một số bệnh virus ảnh hưởng nhiều đến làm biến dạng lá, chậm phát triển, hoa khơng có màu hình dạng thay đoi, thân tàn lụi liên tục, thối đỉnh, có sọc xanh sáng, bị lốm đốm héo, có kết dính thành cụm 1.1.3 Đặc điểm phân bố Hoa Dạ Yen Thảo thuộc chi 35 lồi thực vật có hoa, liên quan chặt chẽ với thuốc lá, cà chua, khoai tây ớt thuộc họ cà {Solanaceae} Cây hoa Dạ Yen Thảo có nguồn gốc từ miền Nam Châu Mỹ, trồng rộng rãi bãi cỏ, khu đất rộng, vườn hoa khắp nước ta ổ miền Bắc, hoa nở vào hè dịp thu, miền Nam, hoa nở vào dịp Tet Cây có nhiều tên gọi khác nhau, theo Phạm Hồng Hộ (2000) có tên Dã Yên Thảo theo Trần Họp (2000) có tên Hoa Cà Đây loại lai mà tổ tiên có từ nhiều lồi khác chi Petunia, ví p axillaris BSP {Large White Petunia} hoa dạng ong dẹp, màu trắng p virolace Lindl {Viloỉet - flowered Petunia} hoa dạng ống dài, thùy rộng, màu tím Ngày nay, nhà vườn từ lồi lai cịn cho dạng hoa kép hay cánh hoa xịe ngón đẹp 4’5 1.1.4 Giá trị kinh tế Những năm gần đây, với tăng lên đời sống vật chất, nhu cầu tinh thần người dân quan tâm ý, mà ngành hoa kiểng dần phát TÀI LIỆU THAM KHẢO Lê Hông Thủy Tiên Khảo sát hoa ong nghiệm dừa cạn (Catharanthus roseus) Dã yên tháo (Petunia hybrida), Trường Đại học Nông Lâm; 2006 Tiếng MTN Thực vật bậc cao Nhà xuất Đại học Quốc Gia Tp HMC; 2001 Jumin HB, Ahmad M High-frequency in vitro flowering of Murraya paniculata (L.) Jack Plant Cell Reports 1999;18:764-768 Việt BT Sinh lý thực vật đại cương, phần II: Phát triển Nhà xuất Đại học Quốc Gia, Tp HCM,; 2000 Scorza R In vitro flowering: Horticultural reviews Công ty xuất AVI, Inc.; 1982 Bùi Thị Cúc, Đồng Huy Giới, Hương BTT Nhân nhanh in vitro Dạ Yen Thảo hoa hơng sọc tím (Petunia hybridal.) Tạp khoa học Công nghệ Lâm nghiệp 2017 Kiên DC Nuôi cấy mô thực vật II NXB Đại học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh; 2003 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Tấn HM Sinh ỉỉ học thực vật NXB Giáo dục Việt Nam; 2005 Bình NX Giảo trình nuôi Cấy mô tế bào thực vật Nhà xuất Khoa Học Kỹ Thuật; 2010 10 Nguyễn Bá Lộc, Trương Văn Lung, Võ Thị Mai Phương, Lệ Thị Hoa, Trĩ LT Sinh lý học thực vật Nhà xuât Đại Học Huê; 2005 11 Dimasi-Theriou K, Economou A, Sfakiotakis E Promotion of petunia (Petunia hybrida L.) regeneration in vitro by ethylene Plant Cell, Tissue and Organ Culture 2004;32:219-225 12 Moshe Reuveni, Evenor D On the effect of light on shoot regeneration in petunia Plant Cell Tiss Organ Cult 2007;89:49 - 54 13 Hassan Abu - Qaoud, Anas Abu - Rayya, Yaish aS In vitro Regeneration And Somaclonal Variation of Petunia hybrida Journal of Fruit and Ornamental Plant Research 2010; 18(1):71 - 81 14 Kazemi D, Kaviani B Callus Induction and Organogenesis Capacity from Lamina Explant of Petunia X hybrida Fl Induced by BA and NAA Journal of Ornamental Plants 2017;7(3): 157-162 15 Trân Ọuôc Cường Hiệu BA, NAA TDz lên tái sinh chồi Dã Yên Thảo (Petunia Sp.) In Vitro, cần Thơ Đại học cần Thơ 2011; 2011 16 Vũ Thị Mai Nghiên cứu nhãn giong Dã Yên Thảo Rũ Hồng Đậm (Petunia Hybrida L.) kỹ thuật nuôi cấy mô, Trường Đại học Hà Nội 2; 2018 31 17 Toshio Murashige, Skoog F A Revised Medium for Rapid Growth and Bio Assays with Tobacco Tissue Cultures Physiologia Plantarum 1962; 15:473497 18 J D Litvay DCV, M A Johnson Influence of a loblolly pine (Pinus taeda L.) culture medium and its components on growth and somatic embryogenesis of the wild carrot (Daucus carota L.) Plant Cell Report 1985;4(6):325-328 19 Gamborg O.L MRAaOK Nutrient requirements of suspension of soybean root cells Experimental Cell Res 1968;50:148-151 20 Quyên NTN Khảo sát ảnh hưởng cùa hàm lượng auxin đến trình tạo rễ Cà chua thán go (Solanum betaceum) 2018 32 PHỤ LỤC Phụ lục Môi trường MS: NH4NO3 : 1,65 g/1 KNO3 : 1,9 g/1 MgSO4.7H2O : 0,37 g/1 KH2PO4 : 0,17 g/1 CaCb : 0,332 g/1 Môi trường WPM: NH4NO3 : 0,4 g/1 K2SO4 : 0,99 g/1 Ca(NO3)2.4H2O : 0,556 g/1 MgSO4.7H2O : 0,37 g/1 CaCl2 : 0,0725 g/1 KH2PO4 : 0,17 g/1 Môi trường LV: NH4NO3 : 1,65 g/1 KNO3 : 1,9 g/1 MgSO4.7H2O : 1,85 g/1 KH2PO4 : 0,34 g/1 CaCÌ2.2H2O : 0,22 g/1 MyO Inositol : lg/1 Mơi trường B5: KNO3 : 2,5 g/1 CaCl2.2H2O :0,15g/l MgSO4.7H2O : 0,25 g/1 (NH4)2.SO4 : 0,134 g/1 NaH2PO4.H2O :0,15g/l 33 Phụ lục TNI, than The ANOVA Procedure Class Level Information Levels Class T Values VI V2 V3 V4 Number of Observations Read 12 Number of Observations Used 12 Sum of DF Source Value 3.12636389 F 9.37909167 T 304.27 9.37909167 Error Value F Pr > F Model 304.27 Mean Square Squares 3.12636389 F Model 377.68 Mean Square Squares 8.31849167 2.77283056 F Model 910.05 Mean Square Squares 59.60842500 19.86947500 F Model 65.39 Mean Square Squares DF Source 1.02880000 F Model 774.25 Squares 31.18599583 4.45514226 F 39 Anova ss Mean Square F T 1618.29 116.4430292 16.6347185 F Model 295.60 Squares 42.51282917 6.07326131 F T 295.60 Anova ss DF Source 0.143338 6.07326131 42.51282917 F Model 737.88 Squares 4.26058704 34.08469630 F Model 127.25 Squares 146.1813333 18.2726667 F Model 100.81 Squares 262.3382000 32.7922750 F T 100.81 262.3382000 32.7922750