TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẪT THÀNH XSGA NÔNG NGKỈỆP CÔNG NGHỆ CAO VÂ CƠNG NGHẸ SJSE KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NHÂN GIÔNG VÀ TẠO MÔ SẸO CẦ Y ĐẬU ĨW( ịPlukenetia volubilis LJ IN VITRO SVTH í HUỲNH THANH TẤM NGẲKEỉ CỒNG NGHỆ SINH HỌG XĩâổẲ i 2'ílí • 2Í17 GTHĐ ỉ Ths ©6 TlắN VINH ThS MAI THỈ PKUƠNữ HOA :n Tất Thành - Thư viện 523 Ỉ7T 17 1601 Hồ CHÍ MINH - NĂM 2017 NHÂN GIĨNG VÀ TẠO MỒ SẸO CÂY ĐẬU NÚI (Plukenetia volubilìs L.) IN VITRO Tác giả HUỲNH THANH TÂM Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cẩu cấp Kỹ sư ngành Công nghệ sinh học SU ỉ Giảng viên hướng dẫn ThS Đỗ Tiến Vinh ThS Mai Thị Phương Hoa TRƯỜNG_ĐH NGUVẺN TẤT THÀNH TRUNG TÂM THÒNG TIN-THƯVIỆN / LVOO46Q1 Tp HCM, thảng năm 2017 i LỜI CẢM ƠN Trên thực tê khơng có thành cơng mã không gắn liền với hỗ trợ, giúp đỡ dù hay nhiều, dù trực tiếp hay gián tiếp cùa người khác Trong suốt thời gian từ bắt đầu học tập giảng đường đại học đến em nhận dược nhiều quan tâm, giúp đỡ q thầy cơ, gia đình bạn bẽ Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, em xin gửi đến quý thầy cô Khoa Nông nghiệp công nghệ cao Công nghệ sinh học Trường Đại Học Nguyễn Tất Thành với tri thức vả tám huyết minh để truyền đạt vốn kiến thức quý báu cho chúng em suốt thời gian học tập trường Đặc biệt, em xin gởi đến thầy Đỗ Tiến Vinh cỏ Mai Thị Phương Hoa, người tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em hồn thành chun đề báo cáo khóa luận lời cảm ơn sâu sắc Em xin chân thành cảm ơn bạn bè, đồng nghiệp em học làm việc trường gia đình động viên, khích lệ, tạo điều kiện giúp đỡ em suốt trình thực hồn thành báo cáo khóa luận Vì kiến thức thân cịn hạn chế, q trình thực tập, hồn thiện chun đề em khơng tránh khỏi sai sót, kính mong nhận ý kiến đóng góp từ q thầy Cuối em kính chúc q thầy, dồi sức khỏe thành cơng ttong nghiệp cao q Đồng kính chúc cô, chú, anh, chị khoa dồi sức khỏe, đạt nhiều thành công tốt đẹp ưong công việc Em xin chân thành cảm ơn! Tp Hồ Chí Minh, ngày 12 tháng năm 2017 Người thực Huỳnh Thanh Tâm ii TÓM TẤT Đê tài: “Nhân giống tạo mô sẹo Đậu núi (Plukenetia volubilis L.) in vitro ” thực từ tháng 1/2017 đến 6/2017 thi nghiệm Công nghệ sinh học thực vật Khoa Nông nghiệp công nghệ cao Công nghệ sinh học Trường Đại Học Nguyễn Tất Thành với mục tiêu xác định mơi trưởng thích hợp đế nhân nhanh chồi tạo sẹo Đậu núi Đe tài có sáu nội dung: ảnh hưởng Javel kết hợp CaỊOClh q trình vơ trùng mẫu Đậu núi in vitro; ảnh hưởng mơi trưởng khống đến khả sinh trưởng phát triển Sachi in vitro; ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng BA đến khả tạo chồi Sachi in vitro: ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng NAA, IAA, IBA đến khả tạo rễ Sachi in vitro; ảnh hưởng mơi trường khống đến khả tạo mô sẹo sachi in vitro: ảnh hưởng cùa auxin đến khả tạo mô sẹo Sachi in vitro Kết đạt được: Nồng độ Javel thích hợp để khử trùng mẫu Đậu núi 50% 15 phút, kết họp Ca(OCl)2 (8g/l/20 phút) Mơi trường khống MS thích hợp cho sinh trưởng phát triển cùa chồi Đậu núi in vitro Môi trường tạo chồi Đậu núi in vitro: MS + đường (30 g/1) - nước dừa (100 ml/1) + agar (7,8 g/1) + BA (0,1 mg/1) Mơi trường thích hợp cho phát triển rễ Đậu núi in vitro: Môi trường MS + đường (30 g/1) + nước dừa (100 ml/1) + agar (7,8 g/1) + BA (0,1 mg/1) + IBA (0,1 mg/1) Môi trường khống MS thích hợp cho tạo mơ sẹo Đậu núi ìn vitro Mơi trường tạo sẹo Đậu núi in vitro thích hợp nhất: Mơi trường MS + đường (30 g/I) + nước dừa (100 ml/1) + agar (7,6 g/1) + 2,4D (2 mg/1) iii MỤC LỤC TRANG Bìa lót i LỜI CẢM ƠN ii TÓM TẨT iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẤT viii DANH SÁCH HÌNH ix DANH SÁCH BẢNG X MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu đề tài Nội dung đề tài Chương 1: TÔNG QUAN 1.1 Giới thiệu Đậu núi 1.1.1 Phân bố sinh thái 1.1.2 Đặc điểm thực vật học 1.1.3 Thành phần dinh dưỡng 1.1.4 Tình hình trồng trọt Sachi nước ta 1.1.5 Một số cơng trình nghiên cứu nước 1.1.5.1 Cơng trình nghiên cứu nước 1.1.5.2 Cơng trình nghiên cứu nước ngồi 1.2 Giới thiệu nuôi cấy in vitro 1.2.1 Khái niệm nuôi cấy in vitro 1.2.2 Lịch sử phát triển nuôi cấy in vitro 1.2.3 Các giai đoạn nuôi cấy in vitro 1.2.3.1 Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng 1.2.3.2 Tạo thể nhân giống in vitro iv 1.2.3.3 Nhân giống in vitro 1.2.3.4 Tái sinh hoàn chỉnh in vitro 1.2.3.5 Chuyên in vitro vườn ươm 1.2.3.6 Nhân giống in vivo 1.2.3.7 Cây bầu đất trồng ruộng 1.2.3.8 Chọn lọc đầu dòng 1.3 Các phương pháp nhân giống in vitro 1.3.1 Ni cấy đình sinh trưởng 1.3.2 Nuôi cấy mô sẹo 1.3.2.1 Khái niệm mô sẹo 1.3.2.2 Các giai đoạn trình hình thành mô sẹo 10 1.3.2.3 Các tác nhân tố ảnh hưởng tới trình phát sinh mỏ sẹo 11 1.3.2.4 Các giai đoạn phát triển mô sẹo 12 1.3.2.5 Màu sắc mô sẹo 12 1.3.2.6 Hình thái mơ sẹo 13 1.3.2.7 Phát sinh quan nuôi cấy mô sẹo 14 1.3.2.8 Hình thành chồi từ mơ sẹo 15 1.3.2.9 ứng dụng nuôi cấy mô sẹo 15 1.3.3 Nuôi cấy tế bào đơn 15 1.3.4 Nuôi cấy protoplast - chuyển gen 16 1.3.5 Nuôi cấy bao phấn phấn đơn bội 16 1.3.6 Các thành phần môi trường nuôi cấy in vitro 16 1.3.6.1 Các chất khoáng 16 1.3.6.2 Vitamin 18 1.3.6.3 Chất điều hòa sinh trưởng (ĐHSTTV) 19 1.3.6.4 Auxin 19 1.3.6.5 Cytokinin 20 1.3.6.6 Gibberellin 20 1.3.6.7 Các chất bố sung 22 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 25 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 25 v 2.2 Vật liệu nghiên cứu 25 2.2.1 Mầu nuôi cấy 25 2.2.2 Trang thiết bị dụng cụ thí nghiệm 25 2.2.3 Điều kiện nuôi cấy 25 2.2.4 Môi trường nuôi cấy 26 2.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 26 2.3.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 26 2.3.2 Nội dung nghiên cứu 26 2.3.2.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng Ca(OCl)2 kế: hợp nồng độ thời gian Javel đến trình vơ mẫu Sachi in vitro — 26 2.3.2.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống đến khả sinh trưởng phát triển Sachi in vitro 27 2.3.2.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ chất điêu hòa sinh trưởng BA đến khả tạo chồi Sachi in vitro 28 2.3.2.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ cùa chất điều hòa sinh trưởng NAA, IAA, IBA đến khả tạo rễ Sachi in vitro 29 2.3.2.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống đến khả tạo mơ sẹo sachi in vitro 30 2.3.2.6 Thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hưởng auxin đến khả tạo mô sẹo cày Sachi in vitro 30 2.4 Phương pháp thu thập xử lý số liệu 31 2.4.1 Phương pháp thu thập 31 2.4.2 Phương pháp xử lýsố liệu 31 2.4.3 Xử lý kết 32 Chương 3: KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Kết thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hường Ca(OCl)2 kết hợp nồng độ thời gian Javel đến q trình vơ mầu Sachi in vitro 33 3.2 Kết thí nghiệm 2: Khảo sát ành hường mơi trường khống đến khả sinh trưởng phát triển Sachi in vitro 35 vi 3.3 Két quà thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng nóng dộ chất điều hòa sinh trường BA đên khả tạo chồi Sachi in vitro 37 3.4 Kêt thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hường nóng độ cùa chất điêu hịa sinh trưởng NAA, IAA IBA đến khả tạo rễ Sachi in vitro 39 3.5 Kêt thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hường mơi trưởng khống đên khả tạo mô sẹo sachi in vitro 41 3.6 Kêt thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hưởng auxin đến kỉtà tạo mô sẹo Sa chiin vitro 43 KÉT LUẬN VÀKIÉN NGHỊ 46 Kết luận 46 Kiến nghị 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 Tiếng việt 47 Tiếng anh 47 Tài liệu từ Internet 50 PHỤ LỤC 51 Phụ lục 51 Phụ lục 52 vii DANH SÁCH CHỮ VIÉT TẮT 2,4-D Dichloro phenoxy acetic acid ABA Abscisic acid B5 Gamborg medium, 1968 BA 6-Benzylaminopurie BAP 6-Benzylaaminopurin CNSHTV Công nghệ sinh học thực vật Ctv Cộng tác viên ĐC Đối chứng ĐHST Điều hòa sinh trưởng ĐHSTTV Điều hòa sinh trưởng thực vật DNA Deoxyribonucleic acid GA Gibberellic ga3 Gibberellic acid IAA Indole-3-acetic acid IBA Indol butyric acid KH-CN Khoa học & Công nghệ Ki Kinetin LV Litvay medium, 1985 MS Murashige Skoog, 1962 NAA a-Naphthaleneacetic acid NXB Nhà xuất PM Trọng lượng nguyên từ khối TDZ Thidiazuron TN Thí nghiệm pVPM McCown Woody Plant medium, 1980 z Zeatin vỉỉỉ DANH SÁCH HÌNH TRANG HỈNH Hình 1.1: Cây Sachi {Plukenetia Volubilis L.) Hình 2.1: Sơ đồ bố trí thí nghiệm 26 Hình 3.1: Chồi Sachi sau vô trùng 35 Hình 3.2: Cây Sachi mơi trường thí nghiệm 37 Hình 3.3: Cây Sachi mơi trường thí nghiệm bổ sưng 3A 39 Hình 3.4: Rễ Sachi mơi trường có bổ sung IBA o.ì gi 41 Hình 3.5: Cây Sachi ngồi vườn ươm 41 Hình 3.6: Phát sinh sẹo từ Sachi môi trường khống 43 Hình 3.7: Phát sinh sẹo từ Sachi ưên mơi trường MS có bổ sung 2.4D 45 ix TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Dỗn Trí I uệ, 2015 Sachi trồng cùa sống, Tạp chí KH - CN Nghệ An, số 9/2015, Trang 24-26 Dương Công Kiên, 2003 Nuôi cấy mô thực vật, NXB Đại học Quốc Gia Tp HCM, 183 trang Lê Thị Muội, Nghiêm Như Vân, Lê Xuân Đắc, Lê Trần Binh, 2002 Chọn tạo dòng thuán ưu tú từ dòng lúa ưu lai phương pháp ni cấy bao phấn, Tạp chí Sinh Học 24(1): 44-49 Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị Thủy Tiên, (2006) Công Nghệ Tẻ Bào NXB Đại Học Quốc gia Hồ Chí Minh Nguyễn Đức Minh Hùng, 2009 Giáo trình Ni cấy Mơ Te Bào Thực Vật, Đại Học Nguyễn Tất Thành Nguyễn Đức Thành, 2000 Nuôi cấy mô tế bào thực vật ứng dụng, NXB Nơng nghiệp Hà nội Nguyễn Hồng Lộc, 2006 Công nghệ tế bào, NXB Đại học Huế Nguyễn Thị Bích Hồng, Nguyễn Thế Hùng, Nguyễn Thị Trâm Cầy, 2012, Nghiên cứu bước đầu khả phát triển đậu núi (Plukenetỉa volubilis lỵ Việt Nam, Tạp chí Nông nghiệp & Phát ữiển nông thôn số 3+4/2016 trang 71-78 Nguyễn Thị Phương Thảo, 2014, Sachi - vua cùa loại hạt, Học viện Nông nghiệp Việt Nam, Tạp chí Nơng Nghiệp 10 Nguyễn Văn Uyển, 1996, Những phương pháp công nghệ sinh học, NXB Nông nghiệp 11 Trần Văn Minh, 2006, Công nghệ sinh học thực vật, Giáo trình cao học - nghiên cứu sinh, Trường Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chi Minh, 751 trang Tiếng Anh Brown and Thorpe 1986, Also the block may be gen - etic in the sense that a high de gree of heriabilyty is involed in regeneration of organs in vitro Plant Cell and Tissue Culture, pp 30 47 Cheng I and Smith 1973, The influence of genomes on autonomous growth ofpith culture ofN glauca - langsdorffli hybrids Planta 113, 29 - 34 Chirinos R, Zuloeta G, Pedreschi R, Mignolet E, Larondclle Y, Campos D, 2013 Sacha inchi (Plukenetia volubilis L.): a seed source of polyunsaturated fatty acids, tocopherols, phytosterols, phenolic compounds and antioxidant capacity, Food Chern Dec 1; 141(3): 1732-9 Darus H Ahmad, 1994 Multiplication of Acacia mangium by stem cutting and tissue culture techniques, Advances in tropical acacia research, pp 32 - 34 Dicosmo F and Misawa M., 1995 Plant cell and tissue culture- Alternatives for metabolite production Biotechnology Advance 13 (3): 425-453 Dicosmo F and Tower G.H.N., 1984 Stress and secondary metabolism in ciltured plant cells Recent Adv Phytochem 18 (eds) Timmerman sc and Loewus FA Plenum Press, NewYork: 97-175 Dixon R.A., 1999 Plant natural products: the molecular genetic basis of biosynthetic diversity Current Opinion in Biotechnology 10: 192-197 Do Prado IM, Giufrida WM, Alvarez VH, Cabral VF, Quispe- Condori s, Saldana MDA, Cardozo L 2011 Phase equi- librium measurements of Sacha Inchi oil (Plukenetia volubilis) and CO2 at high pressures J Am Oil Chem Soc 88, 1263-1269 Economou, 1986, Int Congr Plant Tissue Cell Culture Abstr 6: 431 10 Fanali c, Dugo L, Cacciola F, Beccaria M, Grasso s, Dacha M, Dugo p, Mondello L 2011 Chemical characterization ofSacha Inchi (Plukenetia volubilis L.) Oil J Agric Food Chern 59, 13043-13049 11 Gamborg O.L, G.c Phillips, 1997 Plant Cell, Tissue and Organ culture - bG Fundamental Methods cell spinger, Lab Manual 12 Gonzales GF, Gonzales c, 2014 A randomized, double-blind placebo-controlled study on acceptability, safety and efficacy of oral administration of sacha inchi oil (Plukenetia volubỉlỉs L.) in adult human subjects, Food Chem Toxicol Mar;65:168-76 48 13 Guillén MD, Ruiz A, Cabo N, Chirinos R, Pascual G 2003 Characterization of Sacha Inchi (Plukenetia volubilis L.) oil by FTIR spectroscopy and H-I NMR comparison with linseed oil J Am Oil Chern Soc 80, 755-762 14 Guillen, Maria D.; Ainhoa Ruiz; Nerea Cabo; Rosana Chirinos; Gloria Pascual, 2003 Characterization of sacha inchi (Plukenetia volubilis Ly oil by FTIR spectroscopy and ỈH NMR Comparison with linseed oil Journal of the American Oil Chemists' Society 80 (8): 755-762.doi: 10 Ĩ 007 si 1746-003- 0768 15 Gutierrez LF, Rosada LM, Jimenez Á, 2011 Chemical composition of Sacha Inchi (Plukenetia volubilis L.) seeds and characteristics of their llzld fraction Grasas Aceites 62, 76-83 16 Ilaberlandt, 1902 Kulturversuche mit isolierten Pflanzenzeller Silzungsber Akad Wiss Wien Math.-Naturwiss KI., Abt J 111, 69 - 92 17 Hamaker BR, Valles C, Gilman R, Hardmeier RM, Clark D, Garcia HH, Gonzales AE, Kohlstad I, Castro M, Valdivia R, Rodriguez T, Lescano M 1992 Aninoacid and fatty-acid profiles of the Incha peanut (Plukenetia volubilis) Cereal Chern 69, 461-^63 18 J Agric, 2002 Isolation, Purification, and Biochemical Characterization of a Novel Water Soluble Protein from Inca Peanut (Plukenetia volubilis L.) Food Chern 50(17), pp 4906-4908 19 Jump up Hufstader, Chris, 2009 Looking to Sacha Inchi for their future Oxfam Exchange (1): 2-3 20 Jump up to: a b Gonzales GF, Gonzales C, 2014 A randomized, double-blind placebo-controlled study on acceptability, safety and efficacy of oral administration of sacha inchi oil (Plukenetia volubilisL.) in adult human subjects Food Chern Toxicol 65 21 Krivankova B, Polesny z, Lojka B, Lojkova J, Banout J, Preininger D, 2007 Sacha Inchi (Plukenetia volubilis, Euphorbiaceae): a promising oilseed crop from Peruvian Amazon In Conference on International Agricultural Research and Development University of Kassel, Germany 49 22 Luis Felipe Gutierrez Lina Maria Rosada, Álvaro Jimenez, 2011, Chemical composition of Sacha Inchi (Plukenetia volubili:; L.J seeds and characteristics of their lipidfraction Grasas y Aceites, Vol 62, No 1, pp 76-83, issn 0017-3495 doi: 10.3989/gya044510 23 Maria D Guillen, Ainhoa Ruiz, Nerea Cabo, Rosana Chirinos Gloria Pascual, 2003, Characterization of sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) oil by FTIR spectroscopy and 1H NMR Comparison with linseed oil Journal of the American Oil Chemists' Society Volume 80, Issue 8, pp "55-762 24 Matthias Schleiden and Theodor Schwann, (1838) Proposed cell theory J M Schleiden, Arch Anat., Physiol Ư wiss Med (J Muller 1838: 137-176 25 Matthias Schleiden and Theodor Schwann, 1838 Proposed cell theory J M Schleiden, Arch Anat., Physiol Ư wiss Med (J Muller), 1838: 137 - 176; T Schwann, w Engelman, No 176, 1910 26 Maurer NE, Hatta-Sakoda B, Pascual-Chagman G, Rodriguez- Saona LE, 2012 Characterization and authentication of a novel vegetable source of omega-3 fatty acids, Sacha Inchi (Plukenetia volubilis L.) oil Food Chern 134, 1173- 1180 27 Mrashige T, Skoog F (1962), A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures, Physiol Plant, 15: 473-497 28 Skoog and Miller, (1945) Explore the role ratio concentrations of auxin: cytokinin in the environment for the generation of organs (roots or shoots), c o F Skoog and Miller, In vitro Symp Soc Exp Biol., No 11: 118-131 Tài liệu từ Internet Nguyễn Thị Trâm, Nguyễn Thị Bích Hồng, Nguyễn Thế Hùng, Phạm Thị Ngọc Yến, Đoàn Thu Thủy, “Nghiên cứu so đặc điểm sinh trưởng phát triến hàm lượng axit béo dầu đậu núi (Plukenetia volubilis L.) trồng Gia Lâm,HàNộĩ\ http://www.tapchikhoahocnongnghiep.vn uploads/news/2016 03/9 pdf Võ thị Phưomg Thanh 2013, “ứng dụng còng nghệ sinh học thực vật nông nghiệp" http://bigbenO violet.vn/present/shou print entrỵ id'9750795 50 PHỤ LỤC Phụ lục Thanh phân môi trường sử dụng thí nghiệm “Nhân giống tạo mơ sẹo Đậu núi (Plukenetia volubilis L.) in vitro” Mói trướng Nguyên tố Đa lượng (g/1) Vi lượng (mg/1) Vitamine & aminoacid (nig/1) Fe EDTA (g/l) MS LV WP.M B5 CaCl2.2H2O - 0.022 0.0725 0,15 CaCl2 0,334 - - - Ca( NO3)2.4H2O - - ■J.556 - KNO3 1,9 1.9 - 2,5 K2SO4 - - 0,99 - (NH4)2SO4 - - 0,134 kh2po4 0,17 0.340 0.17 - NaH2PO4.2H2O - - - 0.15 MgSO4.7H2O 0,37 0,185 0,37 0,25 NH4NO3 1,65 1,65 0,4 - CoC12.6H2O 0,025 0,125 0.025 0.025 CuSO4.5H2O 0,025 0,5 0.025 0.025 h3bo3 6,20 31 6,20 KI 0,83 4,15 0.83 0.75 MnSO4.H2O 22,3 27.7 22,3 10 Na2MoO4.H2O 0,25 1,25 0,25 025 ZnSO4.H2O 8,60 43 8.60 Glycine 2,00 2.00 2.00 2.00 Myo-Inositol 100 100 100 100 Nicotinic acid 0,50 0.50 0.50 0.50 Pyridoxine HC1 0,50 0.50 0.50 0.50 Thiamine-HCl 0.10 0.10 0.10 0.10 NaEDTA 0.0373 0.0373 0.0373 0,0373 FeSO4.7H2O 0.0278 0.0278 0.0278 0,0278 51 Phụ lục xử LÝ SỐ LIỆU THÍ NGHIỆM Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng Ca(OCl)2 kết hợp nồng độ thịi gian Javel đến q trình vô mẫu Sachi in vitro > Tỷ lệ mẫu vô trùng Source Model Error Corrected Total Source T The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values T VI V2 V3 V4 vs = Number of Observations Read 18 Number of Observations Used IS The ANOVA Procedure Sum of Mean Square DF F value Squares 20373.61111 4074.72222 41.91 1166.66667 12 97.22222 17 21540.27778 N Mean Coeff Var Root MSE R-Square 36.38889 0.945838 2.09655 9.860133 Anova ss Mean Square F Value DF 41.91 20373.61111 4074.72222 t Tests (LSD) for N Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 12 Error Mean Square 97.22222 2.17881 Critical Value of t 17.541 Least Significant Difference N T Mean t Grouping V6 91.667 A V4 63.333 B V5 46.667 B V2 10.000 c V3 6.667 c VI 0.000 c Pr > F F Tỷ lệ mẫu tạo chồi Source Model Error Corrected Total Source T The ANOVA Procedure Class Level Information Values Levels Class T VI V2 V3 V4 vs V6 Number of Observations Read 18 Number of Observations Used 18 The ANOVA Procedure Dependent Variable: N Sum of Mean Square F Value Squares DF 1956.66667 14.09 9783.33333 1666.66667 38.88889 12 11450 eeew 17 Root MSE N Mean Coeff Var R-Square 11.78511 21.66667 5.39283 0.854440 Mean Square F Value Anova SS DF 1956.666667 14.09 9783.333333 52 Pr > F 0.0001 Pr > F 0.0001 t Tests (LSD) for H Alpha «.05 Error Degrees of Freedor 12 Error Mean Square 138.8889 Critical Value of t 2.17881 Least Significant Difference 28.966 t Grouping Mean N T A 63.333 V6 B 36.667 V5 B 26.667 V4 c 3.333 V3 c 0.000 VI c 0.000 31 V2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống đến khà sinh trưởng phát triển Sachi in vitro > Số chồi phát sinh Source Model Error Corrected Total Source T The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values T VI V2 V3 V4 Number of Observations Read 12 Number of Observations Used 12 Sum of DF Mean Square Squares 9.53149167 3.17716389 2.23340000 0.27917500 11.76489167 11 Root MSE Coeff Var R-Square 0.528370 5.04295 0.810164 Mean Square Anova ss DF 3.17716389 9.53149167 F Value 11.38 Pr > F 0.0029 N Mean 1.055833 F Value 11.38 Pr > F 0.0029 t Tests (LSD) for N Alpha 0-05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.279175 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 0.9948 t Grouping Mean N T A 2.5567 VI B 0.8900 V3 B 0.4433 V4 B 0.3333 V2 > Chiều cao chồi The ANOVA Procedure Class Level Information Levels Class Values VI V2 V3 V4 12 Number of Observations Read 12 Number of Observations Used Sum of F Value Squares iMean Square DF 52.04 05683333 3.17050000 Ô 02030833 0.16246667 33296667 11 N Mean Root MSE Coeff Var R-Square T Source Model Error Corrected Total 53 Pr > F F số Source Model Error Corrected Total Source T The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values T VIV2 V3 V4 Number of Observations Read Í2 Number of Observations Used 12 Sum of DF Squares Mean Square 26.48722500 8.82907500 2.51926667 0.31490833 11 29.00649167 R-Square Coeff Var Root MSE 0.913148 2.33684 0.561167 DF Anova ss Mean Square 26.48722500 8.82907500 t Tests (LSD) for N Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.314908 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 1.0566 t Grouping Mean N T A 4.5567 VI B 2.6667 V3 c 1.3333 V4 c 0.6667 V2 F Value 28.04 Pr > F 0.0001 N Mean 2.305833 F Value 28.0 Pr > F 0.0001 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng BA đến khả tạo chồi Sachi in vitro > Số chồi Source Model Error Corrected Total The ANOVA Procedure Class Level Information Levels Values Class VI V2 V3 V4 VS T 15 Number of Observations Read 15 Number of Observations Used Sum of Squares Mean Square DF 27.68142667 6.92035667 27.40746667 2.74074667 10 55.08889333 14 54 F Value 2.52 Pr > F 0.1071 Source T R-Square 0.502487 DF Coeff Var Root MSE 5.50470 1.655520 Anova SS Mean Square 27.68142667 6.92835667 t Tests (LSD) for fl Alpha 6.85 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 746747 Critical Value of t 2.22814 Least Significant Difference 3.0118 t Grouping Mean N T A 4.667 V2 A 3.890 V3 B A 3.133 V4 B A 2.557 VI B 0.667 V5 N Mean 2.982667 F Value 2.52 Pr > F 0.1071 > Chiều cao chồi Source Model Error Corrected Total Source T The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values T VI V2 V3 V4 V5 Number of Observations Read 15 Number of Observations Used 15 Sum of DF Squares Mean Square F Value 3.68524000 0.92131000 9.77 0.94340000 0.09434000 10 4.62864000 14 N Mean Root MSE R-Square Coeff Var 1.112000 2.62124 0.307148 0.796182 F Value Mean Square Anova ss DF 9.77 3.68524000 0.92131000 t Tests (LSD) for N 0.05 Alpha 10 Error Degrees of Freedom 0.09434 Error Mean Square 2.22814 Critical Value of t 0.5588 Least Significant Difference N T Mean t Grouping V2 1.6667 A VI 1.3900 B A V3 1.3867 B A V4 0.8367 B c VS 0.2800 c Pr > F 0.0018 Pr > F a.0018 > Sola The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels T Source Model Number of Observations Number of Observations Sum of DF Squares 28.61129333 55 Values VI V2 V3 V4 VS Read Used Mean Square 7.15282333 15 15 F Value 10.48 Pr > F 0.0013 Error Corrected Total Source T 10 14 6.82300006 0,68230000 35.43429333 R-Square Coeff Var Root MSE N Mean 0.857445 2.94910 0.826615 3.599333 DF Anova ss Mean Square F /alue Ạ 28.61129333 7.15282333 10.48 t Tests (LSD) for N Alpha 0.Ố5 Error Degrees of Freedom 18 Error Mean Square 0.6823 Critical Value of t 2.22814 Least Significant Difference 1.5027 t Grouping Mean N T A 5.2233 V2 B A 4.5567 VI B A 3.8867 V4 B 3.1100 V3 c 1.2200 V5 Pr > F 8.8613 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trường NAA, IAA, IBA đến khả tạo rễ Sachi in vitro > Số chồi Source Model Error Corrected Total Source T The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values T 13 VI Vie Vil V12 V13 V2 V3 V4 V5 V6 V7 V8 V9 Number of Observations Read 39 Number of Observations Used 39 Sum of Pr > F DF Mean Square F Value Squares 8.14 F Chiều cao chồi Class T Source Model Error Corrected Total Source T The ANOVA Procedure Class Level Information Levels Values 13 VI V10 Vil V12 V13 V2 V3 V4 /Ĩ /6 V7 /8 V9 Number of Observations Read 35 Number of Observations Used 39 Sum of DF Squares Mean Square F value Pr > F 12 10.32709231 0.86059103 5.66 6.6061 26 3.95466667 0.15210256 38 14.28175897 R-Square Coeff Var Root MSE Ji Mear 0.723097 2.64630 0.390003 1.888974 DF Anova ss Mean Square F value Pr > F 12 10.32709231 0.86059103 5.66 6.0001 t Tests (LSD) for N Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 26 Error Mean Square 0.152163 Critical Value of t 2.05553 Least Significant Difference 0.6546 t Grouping Mean N T A 2.6100 V10 B A 2.5000 V3 B A 2.5000 V4 B A 2.4433 Vil B A c 2.0567 V5 B A c 2.0000 V2 B D c 1.8900 V6 D c 1.7767 V12 D c 1.6667 V7 D c 1.5000 VI E D c 1.4433 V8 E D 1.3333 V13 E 0.8367 V9 > SỐ rễ Class T Source Model Error Corrected Total Source T The ANOVA Procedure Class Level Information Values Levels VI V10 Vil V12 V13 V2 V3 V4 VS V6 V7 V8 V9 13 39 of Observations Read Number 39 Observations Used Number of Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F DF 93 1865641 7.7655470 15.45 F DF 15.45 Chiều dài rễ Class T Source Model Error Corrected Total Source T The ANOVA Procedure Class Level Information Levels Values 13 VI V10 Vil V12 V13 V2 V3 V4 V5 V6 V7 V8 V9 Number of Observations Read 39 Number of Observations Used 39 Sum of DF Squares Mean Square F Value Pr > F 12 381.0308308 31.7525692 17.72 F 31.7525692 12 381.0308308 17.72 Thòi gian phát sinh rễ Class T Source Model Error Corrected Total Source T c c c c c c c c The ANOVA Procedure Class Level Information Levels Values 13 VI V10 Vil V12 VI3 V2 '73 74 /5 76 V7 78 V9 number of Observations Read 39 Number Of Observations Used 39 Sum of DE Squares Mean Square Pr > F 12 133.6410256 11.1367521 F 12 133.6410256 11.1367521 Tỷ lệ tạo sẹo Source Model Error Corrected Total The ANOVA Procedure Class Level Information Levels Values Class VI V2 V3 T Number of Observations Read Used Number of Observations Sum of Mean Square DF Squares 1117.984622 558.992311 1493.946067 248.991011 2611.930689 R-Square 0.428030 Coeff Var 4.09429 59 Root MSE 15.77945 F Value 2.25 N Mean 32.14111 Pr > F 0.1871 Source DF T Meai1 Square 558 992311 Anova SS 1117.984622 t Tests (LSD) for N Alpha Least Significant Difference t Grouping Mean N 43.53 35.88 17.01 Pr > F 9.1871 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t A A A F Value 2.25 3 248.991 2.44691 31.526 T VI V2 V3 > Thòi gian tạo sẹo Source Model Error Corrected Total Source T The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values T VI V2 V3 Number of Observations Reac1 Number of Observations Used1 Sum of DF Squares Mean Square 11.44444441 22.88888889 6.00000000 1.00000000 28.88888889 R-Square Coeff Var Root MSE 0.792308 6.716418 1.900000 DF Anova ss Mean Square 22.88888889 11.44444444 t Tests (LSD) for N Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t 2.44691 Least Significant Difference 1.9979 t Grouping Mean N T A A B 16.3333 15.6667 12.6667 3 F Value 11.44 N Mean 14.88889 F Value 11.44 Pr > F 9.9999 Pr > F 9.9999 V3 V2 VI Thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hưởng auxin đến khả tạo mô sẹo Sachi in vitro > Tỷ lệ tạo sẹo The ANOVA Procedure Class Level Information Class T Source Model Error Corrected Total Levels Values VI V2 V3 V4 V5 V6 V7 V8 24 Number of Observations Read 24 Number of Observations Used Sum of F Value Mean Square Squares DF 22.69 1295.932152 9065.225067 57.291667 916.666667 16 9981.891733 23 60 Pr > F F Thòi gian tạo sẹo Source Model Error Corrected Total Source T The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values T VI V2 V3 V4 V5 V6 V7 V8 Number of Observations Read 24 Number of Observations Used 24 Sum of DF Squares Mean Square F Value 158.851190 317.70 1111.958333 0.500000 8.000000 23 1119.958333 N Mean R-Square Coeff Var Root MSE 0.707107 0.992857 1.57645 5.208333 Mean Square F Value DF Anova ss 158.851190 317.70 1111.958333 t Tests (LSD) for N Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference N Mean Grouping 16.3333 A 12.6667 B 12.6667 B 0.0000 C 0.0000 c 0.0000 C 0.0000 c 0.0000 c 61 0.05 16 0.5 2.11991 1.2239 T VI V2 V3 V4 VS V6 V7 V8 Pr > F F