113.2.5 Thí nghiệm 3: Khảo sát tác động của than hoạt tính đến khả năng ra rễ của đoạn thân Sâm bố chính.. 174.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát tác động của than hoạt tính đến khả năng ra rễ của
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Vật liệu
Cây sâm bố chính được nuôi cấy in vitro từ hạt trong Phòng thí nghiệm Công nghệ Tế bào Thực vật, Khoa Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Mở thành phố
3.1.2 Địa điểm và thời gian thực hiện Địa điểm thực hiện: Phòng thí nghiệm Công nghệ Tế bào Thực vật, Khoa Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh
Thời gian: 3 tháng (từ tháng 2 năm 2023 đến tháng 5 năm 2023)
Găng tay, khẩu trang y tế
Bút lông dầu, băng keo giấy, kéo cắt giấy, thước đo
Cân phân tích, cân kỹ thuật
Máy lọc nước một lần
Tủ lạnh, tủ sấy, tủ cấy
Lò vi sóng, nồi hấp vô trùng
Kẹp, đĩa petri, becher, erlen, ống nghiệm, chày và cối nghiền mẫu
Máy điều hòa, nhiệt kế, đèn chiếu sáng Đèn cồn
Sử dụng môi trường Murashige and Skoog (MS) bổ sung sucrose 30 g/L, agar
10 g/L và chất điều hòa tăng trưởng thực vật TDZ và than hoạt tính (nồng độ thay đổi theo thiết kế và mục đích thí nghiệm, sẽ được trình bày chi tiết phía sau)
Nhiệt độ phòng nuôi: 25 ± 2 o C Độ ẩm: 70 ± 5 %
Cường độ chiếu sáng: 2000 – 3000 lux pH môi trường nuôi cấy: 5,7 – 5,8
Phương pháp nghiên cứu
3.2.1 Phương pháp thu thập, tổng hợp tài liệu
Các nghiên cứu liên quan đã được công bố ở Việt Nam và quốc tế được tìm và thu thập thông qua các nền tảng như Google và Pubmed-NCBI
Mục đích phương pháp: So sánh sự khác biệt (đáng kể hoặc không đáng kể) giữa các kết quả thu được từ các nghiệm thức
Mô tả phương pháp: Sử dụng phần mềm Statgraphics Plus 3.0 và phần mềm Excel để phân tích one-way ANOVA (kiểm định Duncan)
Chỉ tiêu đánh giá: Thông qua so sánh tìm được nồng độ tối ưu của các chất điều hòa tăng trưởng TDZ và than hoạt tính đến sự tạo chồi và rễ của Sâm bố chính
3.2.3 Thí nghiệm 1: Khảo sát tác động của TDZ đến khả năng ra chồi của đoạn thân cây Sâm bố chính
Mục đích thí nghiệm: Đánh giá khả năng ra chồi trong môi trường MS bổ sung TDZ nồng độ 0,01 mg – 0,07 mg/L
Mô tả thí nghiệm: Đoạn thân Sâm bố chính từ cây in vitro được cấy sang môi trường MS bổ sung TDZ ở các nồng độ khác nhau và 30 g/L sucrose, 10 g/L agar, pH 5,5-5,7
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, mỗi nghiệm thức 3 lần lặp lại, 3 mẫu trong một bình thủy tinh 500 mL
Thời gian theo dõi: 30 ngày
Chỉ tiêu đánh giá: số lượng chồi/mẫu
Bảng 3.1 Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ TDZ đến khả năng tạo chồi của đoạn thân cây Sâm bố chính
Nghiệm thức Nồng độ TDZ
3.2.4 Thí nghiệm 2: Khảo sát tác động của TDZ đến khả năng ra chồi của lá cây Sâm bố chính
Mục đích thí nghiệm: Đánh giá khả năng ra chồi trong môi trường MS bổ sung TDZ nồng độ 0,01 mg – 0,1 mg/L
Mô tả thí nghiệm: Lá cây Sâm bố chính từ cây in vitro được cấy sang môi trường
MS bổ sung TDZ ở các nồng độ khác nhau và 30 g/L sucrose, 10 g/L agar, pH 5,5- 5,7
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, mỗi nghiệm thức 3 lần lặp lại, 3 mẫu trong một bình thủy tinh 500 mL
Thời gian theo dõi: 30 ngày
Chỉ tiêu đánh giá: số lượng chồi/mẫu
Bảng 3.2 Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ TDZ đến khả năng tạo chồi của lá Sâm bố chính
Nghiệm thức Nồng độ TDZ
3.2.5 Thí nghiệm 3: Khảo sát tác động của than hoạt tính đến khả năng ra rễ của đoạn thân Sâm bố chính
Mục đích thí nghiệm: Đánh giá khả năng phát triển rễ trong môi trường MS bổ sung than hoạt tính nồng độ 1,5 g – 4,5 g/L
Mô tả thí nghiệm: Đoạn thân Sâm bố chính từ cây in vitro được cấy sang môi trường MS bổ sung than hoạt tính ở các nồng độ khác nhau và 30 g/L sucrose, 10 g/L agar, pH 5,5-5,7
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, mỗi nghiệm thức 3 lần lặp lại, 3 mẫu trong một bình thủy tinh 500 mL
Thời gian theo dõi: 30 ngày
Chỉ tiêu đánh giá: số rễ/mẫu, chiều dài rễ
Bảng 3.3 Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ than hoạt tính đến khả năng tạo rễ của đoạn thân cây Sâm bố chính
Nghiệm thức Nồng độ Than hoạt tính
3.2.6 Thí nghiệm 4: Khảo sát tác động của than hoạt tính đến khả năng ra rễ của lá cây Sâm bố chính
Mục đích thí nghiệm: Đánh giá khả năng phát triển rễ trong môi trường MS bổ sung than hoạt tính nồng độ 1 g – 5 g/L
Mô tả thí nghiệm: Lá cây Sâm bố chính từ cây in vitro được cấy sang môi trường MS bổ sung than hoạt tính ở các nồng độ khác nhau và 30 g/L sucrose, 10 g/L agar, pH 5,5-5,7
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, mỗi nghiệm thức 3 lần lặp lại, 3 mẫu trong một bình thủy tinh 500 mL
Thời gian theo dõi: 30 ngày
Chỉ tiêu đánh giá: số rễ/mẫu, chiều dài rễ
Bảng 3.4 Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ than hoạt tính đến khả năng tạo rễ của lá cây Sâm bố chính
Nghiệm thức Nồng độ Than hoạt tính
3.2.7 Định tính saponin từ chiết xuất rễ
3.2.7.1 Thử nghiệm dựa trên tính chất tạo bọt
Mục đích thí nghiệm: Định tính saponin trong chiết xuất rễ Sâm bố chính được nuôi cấy trong in vitro
Mô tả thí nghiệm: Định tính sự hiện diện của saponin dựa trên tính chất tạo bọt: 2 g rễ tươi được nghiền cẩn thận trong 20 mL nước cất (tỉ lệ w/v = 1:10) Sau đó, hỗn hợp được lọc qua giấy lọc, dịch lọc được cô đặc bằng cách đun cách thủy cho đến khi thể tích đạt ẵ so với thể tớch ban đầu rồi chuyển vào ống nghiệm và lắc đều trong vũng 1 phỳt để tạo bọt Bọt được duy trì ổn định trong 15 phút và 30 phút, sau đó cho thêm 3 giọt dầu olive rồi lắc mạnh quan sát sự hình thành của nhũ tương
Chỉ tiêu đánh giá: cột bọt duy trì trong 15 phút và 30 phút, lớp nhũ tương
3.2.7.2 Thử nghiệm saponin bằng thuốc thử
Mục đích thí nghiệm: Định tính saponin trong chiết xuất rễ Sâm bố chính được nuôi cấy trong in vitro
Mô tả thí nghiệm: Định tính sự hiện diện của saponin bằng thuốc thử: chiết 1 g rễ sâm khô với 15 mL cồn 70, đun cách thủy (10 – 15 phút) và lọc qua giấy lọc, sau đó cô cạn dung
14 môi, thu nhận cao chiết Cao chiết được hòa tan trong 1 mL acetic anhydride 99,5 % và 2 mL chloroform 99 %, sau đó cho từ từ từng giọt H2SO4 đậm đặc Quan sát màu sắc vòng màu nâu xuất hiện ở mặt phân cách của hai lớp và xuất hiện: xanh lá cây- saponin steroid, đỏ đậm-saponin triterpeniod
Chỉ tiêu đánh giá: màu sắc lớp phân cách.
