báo cáo tiểu luận nhóm 6

ĐẶT VẤN ĐỀCác vi sinh vật gây bệnh từ thực phẩm gây ranhững thiệt hại nghiêm trọng như bệnh tật và tửvong, dẫn đến các vấn đề sức khỏe cộng đồngcó thể gây ra dịch bệnh bằng cách là

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

TP Thủ Đức, Tháng 10 năm 2023

Môn: Thiết bị và KT CNSH

1

PHÁT HIỆN VI KHUẨN Bacillus cereus SINH ĐỘC TỐ GÂY NGỘ ĐỘC Ở SỮA

BẰNG KĨ THUẬT PCR

Thành viên nhóm

21126192 Vi Thị Thảo

211126193 Võ Th ị Thu Thảo

21126388 Đinh Quyền Linh

2

Nội dung

Phương pháp

Gi ới thiệu Bacillus cereus

03

02

3

Đ ẶT VẤN ĐỀ

Các vi sinh vật gây bệnh từ thực phẩm gây ra

những thiệt hại nghiêm trọng như bệnh tật và tử

vong, dẫn đến các vấn đề sức khỏe cộng đồng

có thể gây ra dịch bệnh bằng cách làm ô nhiễm

thực phẩm ở bất kỳ giai đoạn nào của quá trình

từ sản xuất thực phẩm đến tiêu dùng.

Vì sữa là thực phẩm giàu chất dinh dưỡng nên nó có một

vị trí rất lớn trong dinh dưỡng của con người Mặc dù sữa trong các tế bào vú khỏe mạnh được báo cáo là vô trùng nhưng hoạt độ nước cao và điều kiện pH trung tính có thể gây ô nhiễm sữa bởi vi sinh vật nếu quy trình sản xuất và điều kiện bảo quản không đảm bảo điều kiện vệ sinh.

4

GI ỚI THIỆU VI KHUẨN

BACILLUS CEREUS

Bacillus cereus là vi khuẩn hình que, có vỏ bọc gram dương

Tùy thuộc vào chủng, nó có thể kỵ khí, kỵ khí tùy ý

Hầu hết các chủng đều ưa nhiệt độ trung bình , có nhiệt độ

tối ưu từ 25 °C đến 37 °C, và ưa trung tính, thích độ pH trung

tính, nhưng một số đã được phát hiện phát triển trong môi

trường có điều kiện khắc nghiệt hơn nhiều

Bacillus cereus thuộc giới Bacteria, ngành (phylum)

Firmicutes, lớp (Class) Bacilli, bộ (Order) Bacillales, họ (Family)

Bacillaceaem, chi (Genius) Bacillus, loài (Species) Cereus.

5

Tăng sinh và ph ương pháp nuôi

c ấy

Th ực hiện phản ứng PCR

Trích xu ất DNA

Đi ện di

PH ƯƠNG PHÁP

6

Để kiểm soát dương tính, Bacillus cereus (chủng ATCC

11778) có xuất hiện Phương pháp trải đĩa được áp dụng

bằng cách sử dụng thạch MYP (Mannitol Egg Yolk

Polymyxin) để nuôi cấy vi khuẩn Bacillus cereus Nuôi

cấy vi khuẩn được đặt trong tủ ấm ở 37 ° C và để trong

hai ngày ủ

Các khuẩn lạc vi khuẩn được chọn lọc về mặt hình thái được đưa vào môi trường môi trường LB và ủ ở 37°C trong 150 vòng/phút qua đêm Việc phân lập DNA được thực hiện từ các khuẩn lạc nhân

lên sau một đêm

7

Mẫu chứa khuẩn lạc vi khuẩn được ủ vào đêm

trước khi thu thập bằng cách ly tâm DNeasy Blood

& Tissue được áp dụng theo hướng dẫn của nhà

sản xuất để phân lập DNA của khuẩn lạc vi khuẩn

Sau khi phân lập DNA, mẫu DNA tinh sạch được bảo quản ở -20°C trong dung dịch đệm rửa giải để tái

sử dụng

8

Quy trình Phản ứng chuỗi polymerase (PCR)

được thực hiện bằng Máy quay vòng nhiệt cảm

ứng BIO-RAD C1000 PCR được thực hiện bằng

cách tối ưu hóa các điều kiện phản ứng cho

từng mồi và phản ứng PCR được thực hiện

trong tổng thể tích 25 µl

Các phản ứng trong chu trình PCR như sau: 10 phút ở lần biến tính đầu tiên ở 95°C, sau đó là 94°C trong 60 giây, 50-60°C trong 60 giây (nhiệt độ ủ thay đổi đối với từng

mồi),72°C trong 60 giây và 72°C, bước kéo dài cuối cùng là 10 phút sau

9

Hệ thống điện di cung cấp năng lượng

Thermo Scientific EC 1000 XL được sử

dụng để thực hiện các mẫu DNA

Hệ thống hình ảnh BIO-RAD ChemiDOC

MP (máy phát tia UV) đã được sử dụng để

chụp ảnh các gel nơi các sản phẩm DNA

và PCR được vận hành

Các đoạn PCR được chạy trong 30 phút ở điệ

áp 100 volt trong dung dịch đệm 0,5 x TBE vớ

điện di trên gel agarose 2% được bổ sung ethidium bromide và hiển thị dưới ánh sáng

tia cực tím 10

K ẾT LUẬN

11

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1 Fusco, V., et al., Microbial quality and safety of milk and milk products in the 21st century Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, 2020 19(4): p 2013-2049

2.Aadil, R.M., et al., Influence of different pulsed electric field strengths on the quality of the grapefruit juice International Journal of Food Science & Technology, 2015 50(10): p

2290-2296

3 Shabbir, M.A., Effect of non-thermal processing techniques on pathogenic and spoilage

microorganisms of milk and milk products Food Science and Technology, 2021.41(2): p 279-

294

4 Addis, M.F., et al., The bovine milk microbiota: Insights and perspectives from‐omics

studies Molecular Biosystems, 2016 12: p 2359-2372

5 Liu, Z., et al., Evaluation of machine learning models for predicting antimicrobial resistance

of Actinobacillus pleuropneumoniae from whole genome sequences Frontiers in

microbiology, 2020 11: p 48

6 Burdova, O., et al., Hygiene of pasteurized milk depending on psychrotrophic

microorganisms Bulletin-Veterinary Institute In Pulawy, 2002 46(2): p 325-330

12

13