BÁO CÁO PHÚC TRÌNH HỌC PHẦN THỰC TẬP VI SINH HỌC ĐẠI CƯƠNG

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ THỰC PHẨM

- -

BÁO CÁO PHÚC TRÌNH

HỌC PHẦN THỰC TẬP VI SINH HỌC ĐẠI CƯƠNG Mã HP: CS113

Giảng viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: Mã số sinh viên:

TS Nguyễn Bảo Lộc Trần Như Ngọc B2200175 Lưu Mỹ Ngân B2200171 Dương Thị Mộng Trúc B2200124 Huỳnh Thị Kim Xuân B2200224 Lâm Thị Mỹ Linh B2200078 Lê Hoàng Gia Uyên B2200128 Huỳnh Thị Tuyết Nhi B2200177 Trương Ngọc Trâm B2200119

Cần Thơ, ngày tháng năm

MỤC LỤC

BÀI 1: KÍNH HIỂN VI VÀ MỘT SỐ THIẾT BỊ THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM VI SINH VẬT

BÀI 2: MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY VÀ CÁC NGUỒN VI SINH VẬT BÀI 3: QUAN SÁT VI SINH VẬT

BÀI 4: NHUỘM VI SINH VẬT

BÀI 5: KĨ THUẬT GIEO CẤY (CHUYỂN) & PHÂN LẬP (TÁCH RÒNG) VI SINH VẬT

BÀI 6: ĐO VÀ ĐẾM VI SINH VẬT

BÀI 7: SỰ LÊN MEN RƯỢU VÀ SỰ LÊN MEN GIẤM BÀI 8: SỰ LÊN MEN SỮA CHUA (YAOURT)

BÀI 1: KÍNH HIỂN VI VÀ MỘT SỐ THIẾT BỊ

THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM VI SINH VẬT HỌC

I TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH

1 Vai trò của dầu cèdre khi sử dụng vật kính X100

Do khẩu độ càng nhỏ nên số lượng ánh sáng mang hình ảnh của mẫu vật đến vật kính X100 rất ít, do chùm tia sáng khi đi xuyên qua mẫu vật (trên vật mang kính có chiết xuất n=1,5) thì đi vào khoảng không khí (có độ chiết xuất n=1) nên chùm tia sáng bị khúc xạ nhiều lần cho chùm tia sáng bị lệch ra ngoài khẩu độ và chỉ có rất ít tia sáng đi vào vật kính X100 Vì vậy, khi quan sát với vật kính X100 phải dầu cèdre (có độ chiết xuất n=1,5) tương tự như thủy tinh tạo môi trường đồng chiết xuất nên ánh sáng ít bị khúc xạ tập trung vào khẩu độ giúp ta quan sát rõ hơn

2 Cách bảo quản vật kính X100 sau khi nhỏ dầu

Do dầu cèdre dễ bị oxi hóa khi đưa ra không khí trong thời gian ngắn làm vật kính X100 bị ố và hỏng vì vậy cần vệ sinh vật kính sau khi sử dụng:

Bước 1: Dùng giấy sạch lau qua lớp dầu cèdre dính trên vật kính X100

Bước 2: Dùng một tờ giấy sạch khác thấm một ít xylol (dung môi hữu cơ) hay

một hỗn hợp cồn cao độ + ether lau cho hết lớp dầu còn sót lại

Bước 3: Dùng tờ giấy sạch thứ ba lau lại cho sạch dầu và xylol hay cồn + ether

vì chúng có thể làm tan lớp keo dán thấu kính trên ống kính của vật kính X100

3 Trong các vật dụng như KIM LOẠI, CAO SU, THỦY TINH, NƯỚC CẤT, MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY; nếu đem khử trùng thì loại nào khử trùng NHIỆT KHÔ loại nào khử trùng NHIỆT ƯỚT

- Khử trùng nhiệt khô gồm: kim loại, thủy tinh

- Khử trùng nhiệt ướt gồm: kim loại, thủy tinh, cao su, nước cất, môi trường nuôi cấy

4 Tại sao khi bắt đầu khử trùng với nồi khử trùng nhiệt ướt thì phải xả hết không khí trong nồi ra?

Do trong nồi khử trùng chứa một lượng không khí dẫn đến nhiệt độ không tăng lên được Vì vậy, khi sử dụng nồi khử trùng nhiệt ướt thì phải xả hết không khí trong nồi ra để nâng áp suất trong nồi khử trùng đạt 1 kg/cm2 và nhiệt độ hơi nước lên 121oC

5 Nếu là môi trường lỏng nên KHỬ TRÙNG bằng thiết bị nào là thích hợp? Tại sao?

Nếu khử trùng môi trường lỏng nên dùng nồi khử trùng nhiệt ướt Vì khi khử trùng nhiệt ướt sẽ không làm môi trường lỏng bị bóc hơi hay làm biến tính môi trường

II KẾT QUẢ THỰC TẬP

Nấm mốc ở vật kính X40 Vi khuẩn ở vật kính X40

Nấm men ở vật kính X40

BÀI 2: MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY & CÁC NGUỒN VI SINH VẬT

I TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH

1 Cho biết công dụng của agar trong môi trường nuôi cấy Thử phân loại môi trường khoai tây – agar thuộc loại môi trường gì?

- Công dụng của agar trong môi trường nuôi cấy: là nguồn cung cấp thức ăn cần thiết cho vi sinh vật phát triển, được sử dụng làm chất chống đỡ trong môi trường nuôi cấy vi sinh vật Môi trường thạch Agar được đổ đĩa tạo ra môi trường có điều kiện thuận lợi cho các loại vi sinh vật bám trụ Agar rất khó tiêu hóa đối với vi sinh vật do đó không ảnh hưởng đến lượng thạch khi nuôi vi sinh Ngoài ra, với đặc tính cô đặc chất dinh dưỡng sẽ hạn chế sự thất thoát và đảm bảo cách ly với các vi sinh vật bên ngoài Tuy nhiên, cần đảm bảo rằng môi trường thạch Agar cần được tiệt trùng trước khi cấy vi sinh vật vào đĩa

- Phân loại theo môi trường nuôi cấy: • Phân theo trạng thái vật lý:

+Môi trường bán đặc : là môi trường lỏng có khoảng 0.5% arga + Môi trường đặc : có khoảng 2% arga trong môi trường

• Phân theo nguồn gốc vật liệu: thuộc môi trường tự nhiên vì khoai tây có nguồn gốc từ thiên nhiên và có nguồn gốc hóa học không xác định • Phân theo công dụng: thuộc môi trường căn bản vì đây là môi trường có

thành phần thức ăn thích hợp cho nhiều loài vi sinh vật

2 Nếu môi trường khoai tây – agar khử trùng bằng tủ khử trùng nhiệt khô ở 121oC có được không? Tại sao?

Không thể khử trùng môi trường khoai tây – agar bằng tủ khử trùng nhiệt khô ở 121oC Vì xảy ra sự bốc hơi nước gây biến tính hoặc hư môi trường, đồng thời ở nhiệt độ này không thể tiêu diệt vi sinh vật

3 Tại sao phải mở cửa, mở quạt máy trong phòng thí nghiệm lấy vi sinhvật từ không khí?

Mở cửa, mở quạt để không khí trong phòng xáo trộn để mật độ vi sinh vật ở các vị trí khác nhau trong phòng không chênh lệch ,ngoài ra còn để vi sinh vật bên ngoài vào trong phòng thí nghiệm bám vào môi trường

BÀI 3: QUAN SÁT VI SINH VẬT

I TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH :

1 Quan sát và vẽ hình các nhóm vi sinh vật trong mẫu giọt ép 2 Quan sát và vẽ hình các nhóm vi sinh vật trong mẫu giọt treo

3 Cho biết nhóm nào di chuyển thật sự hay chỉ di chuyển tạm thời (chuyển

Hình 3.1: Mẫu vi khuẩn- nấm men trên đĩa petri Hình 3.2: Mẫu nấm mốc trên đĩa petri

BÀI 4 NHUỘM VI SINH VẬT

I.TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH

1 Nếu sau khi trải vi sinh vật không cố định mẫu vật trước khi nhuộm,kết quả như thế nào?

Tế bào vi sinh vật không gắn chặt lên lam kính, dễ bị rữa trôi

Tế bào vi sinh vật chết dễ bắt màu thuốc nhuộm hơn các tế bào sống nên khi không cố định mẫu vật trước các vi sinh vật sẽ không bắt màu thuốc nhuộm

Cố định mẫu sẽ giúp tế bào đứng yên , giúp thấm thuốc nhuộm hơn, giữ đúng các vị trí bào quan , làm cho cấu trúc tế bào bền vững hơn

2 Cho biết lợi ích của việc nhuộm đơn :

Làm cho mẫu vật ăn màu một loại phẩm nhuộm giúp ta dễ quan sát dưới kính hiển vi

3 Có kết luận gì về các vi sinh vật nhuộm trong phần thực hành (Gram dương hay Gram âm) :

Gram dương có mày tím xanh của Crystal violet (do vách tế bào dày không rửa trôi khi rửa bằng cồn)

Gram âm có mày hồng đỏ của Fuchsin (do vách tế bào mỏng nên khi rửa bằng cồn sẽ không còn Crystal violet nên sẽ ăn màu của Fuchsin hoặc Safranin)

II.KẾT QUẢ THỰC HÀNH :

Hình 1 Mẫu khi chưa nhuộm Hình 2 Mẫu khi đã nhuộm đơn

BÀI 5: KỸ THUẬT GIEO CẤY (CHUYỂN) & PHÂN LẬP (TÁCH RÒNG) VI SINH VẬT

I TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH

1 Có thể xác định độ thuần (ròng) của vi sinh vật bằng mắt được không ?

- Không thể xác định độ thuần (ròng) của vi sinh vật bằng mắt được

- Vì khi quan sát bằng mắt ta chỉ nhìn thấy hình dạng khuẩn lạc của các vi sinh vật, các khuẩn lạc này đôi khi có hình dạng giống nhau nên rất khó phân biệt Và trong khuẩn lạc có thể có nhiều loại chủng vi sinh vật khác nhau, nên chúng ta không thể xác định được chúng có cùng vi sinh vật

- Vi sinh vật có kích thước rất nhỏ nên ta phải quan sát dưới kính hiển vi quang học ở độ phóng đại cao

2 Tại sao khi phân lập phải vẽ thành nhiều đường ?

- Khi phân lập phải vẽ thành nhiều đường vì để:

+ Tách riêng từng nhóm vi sinh vật ra và cho chúng phát triển trong môi trường

+ Để khử trùng và giết chết các vi sinh vật sống trên miệng ống nghiệm tránh các vi sinh vật này nhiễm vào môi trường khi ta đưa kim cấy vào

+ Loại bỏ các vi khuẩn, đảm bảo được độ thuần của mẻ cấy, tránh được việc lẫn lộn và không bị mất đi sự thuần chủng của vi sinh vật đang nuôi cấy

+ Tránh bị nhiễm các loại vi khuẩn khác từ không khí, môi trường bên ngoài

II KẾT QUẢ THỰC TẬP

- Hình ảnh các các đĩa cấy phân lập:

BÀI 6: ĐO VÀ ĐẾM VI SINH VẬT

I TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH

1 Cho biết kích thước của tế bào nấm men và vi

Vậy kích thước trung bình của nấm men là: (7,8×5,6) μm

2 Cho biết lí do sự khác biệt về mật số cho bởi phương pháp đếm gián tiếp và trực tiếp?

- Sự khác biệt về mật số bởi hai phương pháp:

+ Phương pháp đếm trực tiếp tuy cho kết quả nhanh nhưng chúng ta không thể phân biệt được tế bào sống với tế bào chết

+ Phương pháp đếm gián tiếp cho tế bào sống

- Vì vậy kết quả đếm trực tiếp thường cao hơn đếm gián tiếp

3 Cho biết công dụng của thước trắc vi vật kính?

Để kiểm tra đơn vị, kích thước trong các phép đo trên kính hiển vi

• Số tế bào / 1ml = số trung bình cộng tế bào x50x ( diện tích ô vông)/( diện tích thị trường)

🢣Số tế bào /1ml = 192x50x484/0,07065= 65625441 (tế bào)

BÀI 7: SỰ LÊN MEN RƯỢU & SỰ LÊN MEN GIẤM

I TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH

1 Nấm men lên men rượu nhằm mục đích gì? Viết phản ứng lên men rượu?

- Nấm men lên men rượu để lấy năng lượng cho hoạt động sống của chúng - Phản ứng lên men rượu:

2 Cho biết cấu tạo của cái giấm

- Cái giấm được cấu tạo từ các sợi cellulose đan chặt vào nhau do vi khuẩn giấm tổng hợp ra và nổi lên môi trường, vi khuẩn nấm sẽ sống bám vào đó để dễ dàng

BÀI 8: SỮA CHUA (YAOURT)

I TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH

Câu 1: Thử xác định các vi sinh vật nhìn thấy trong yaourt ủ ở 45℃ thuộc nhóm nào? (nấm men, nấm mốc, vi khuẩn)

Các vi sinh vật nhìn thấy trong yaourt ủ ở 45℃ thuộc nhóm vi khuẩn, đó là các vi khuẩn lactic hình cầu Streptococcus và hình que Lactobacillus

Câu 2; So sánh mật số 2 nhóm vi sinh vật hình que và hình cầu trong yaourt được ủ ở 30℃ và 45℃

Mật độ phân bố nhóm vi sinh vật (vi khuẩn lactic) hình cầu nhiều hơn hình que, tập trung lại thành từng nhóm hoặc dãy còn hình que phân bố rải rác riêng lẽ

Câu 3: Vai trò của nhóm vi khuẩn acid lactic trong sự lên men sữa

Nhóm vi khuẩn acid lactic có vai trò quan trọng trong sự lên men sữa Chúng chuyển hóa lactose thành acid lactic, làm casein của sữa đông tụ lại thành cục sữa (caseum) làm dịch sữa đông đặc lại dễ tiêu hóa