MỤC LỤC BÀI 1: KÍNH HIỂN VI VÀ MỘT SỐ THIẾT BỊ THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM VI SINH VẬT BÀI 2: MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY VÀ CÁC NGUỒN VI SINH VẬT BÀI 3: QUAN SÁT VI SINH VẬT BÀI 4: NH
Trang 1
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ
VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ THỰC PHẨM
- -
BÁO CÁO PHÚC TRÌNH
HỌC PHẦN THỰC TẬP VI SINH HỌC ĐẠI CƯƠNG
Mã HP: CS113
Giảng viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: Mã số sinh viên:
TS Nguyễn Bảo Lộc Trần Như Ngọc B2200175
Lưu Mỹ Ngân B2200171
Dương Thị Mộng Trúc B2200124
Huỳnh Thị Kim Xuân B2200224
Lâm Thị Mỹ Linh B2200078
Lê Hoàng Gia Uyên B2200128
Huỳnh Thị Tuyết Nhi B2200177
Trương Ngọc Trâm B2200119
Cần Thơ, ngày tháng năm
Trang 2MỤC LỤC
BÀI 1: KÍNH HIỂN VI VÀ MỘT SỐ THIẾT BỊ THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM VI SINH VẬT
BÀI 2: MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY VÀ CÁC NGUỒN VI SINH VẬT
BÀI 3: QUAN SÁT VI SINH VẬT
BÀI 4: NHUỘM VI SINH VẬT
BÀI 5: KĨ THUẬT GIEO CẤY (CHUYỂN) & PHÂN LẬP (TÁCH RÒNG) VI SINH VẬT
BÀI 6: ĐO VÀ ĐẾM VI SINH VẬT
BÀI 7: SỰ LÊN MEN RƯỢU VÀ SỰ LÊN MEN GIẤM
BÀI 8: SỰ LÊN MEN SỮA CHUA (YAOURT)
Trang 3BÀI 1: KÍNH HIỂN VI VÀ MỘT SỐ THIẾT BỊ
THƯỜNG SỬ DỤNG TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM VI
SINH VẬT HỌC
I TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH
1 Vai trò của dầu cèdre khi sử dụng vật kính X100
Do khẩu độ càng nhỏ nên số lượng ánh sáng mang hình ảnh của mẫu vật đến vật kính X100 rất ít, do chùm tia sáng khi đi xuyên qua mẫu vật (trên vật mang kính có chiết xuất n=1,5) thì đi vào khoảng không khí (có độ chiết xuất n=1) nên chùm tia sáng bị khúc xạ nhiều lần cho chùm tia sáng bị lệch ra ngoài khẩu độ và chỉ có rất ít tia sáng đi vào vật kính X100 Vì vậy, khi quan sát với vật kính X100 phải dầu cèdre (có độ chiết xuất n=1,5) tương tự như thủy tinh tạo môi trường đồng chiết xuất nên ánh sáng ít bị khúc xạ tập trung vào khẩu độ giúp ta quan sát
rõ hơn
2 Cách bảo quản vật kính X100 sau khi nhỏ dầu
Do dầu cèdre dễ bị oxi hóa khi đưa ra không khí trong thời gian ngắn làm vật kính X100 bị ố và hỏng vì vậy cần vệ sinh vật kính sau khi sử dụng:
Bước 1: Dùng giấy sạch lau qua lớp dầu cèdre dính trên vật kính X100
Bước 2: Dùng một tờ giấy sạch khác thấm một ít xylol (dung môi hữu cơ) hay
một hỗn hợp cồn cao độ + ether lau cho hết lớp dầu còn sót lại
Bước 3: Dùng tờ giấy sạch thứ ba lau lại cho sạch dầu và xylol hay cồn + ether
vì chúng có thể làm tan lớp keo dán thấu kính trên ống kính của vật kính X100
3 Trong các vật dụng như KIM LOẠI, CAO SU, THỦY TINH, NƯỚC CẤT, MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY; nếu đem khử trùng thì loại nào khử trùng NHIỆT KHÔ loại nào khử trùng NHIỆT ƯỚT
- Khử trùng nhiệt khô gồm: kim loại, thủy tinh
- Khử trùng nhiệt ướt gồm: kim loại, thủy tinh, cao su, nước cất, môi trường nuôi cấy
4 Tại sao khi bắt đầu khử trùng với nồi khử trùng nhiệt ướt thì phải xả hết không khí trong nồi ra?
Trang 4Do trong nồi khử trùng chứa một lượng không khí dẫn đến nhiệt độ không tăng lên được Vì vậy, khi sử dụng nồi khử trùng nhiệt ướt thì phải xả hết không khí trong nồi ra để nâng áp suất trong nồi khử trùng đạt 1 kg/cm2 và nhiệt độ hơi nước lên 121oC
5 Nếu là môi trường lỏng nên KHỬ TRÙNG bằng thiết bị nào là thích hợp? Tại sao?
Nếu khử trùng môi trường lỏng nên dùng nồi khử trùng nhiệt ướt Vì khi khử trùng nhiệt ướt sẽ không làm môi trường lỏng bị bóc hơi hay làm biến tính môi trường
II KẾT QUẢ THỰC TẬP
Nấm mốc ở vật kính X40 Vi khuẩn ở vật kính X40
Nấm men ở vật kính X40
Trang 5BÀI 2: MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY & CÁC NGUỒN VI
SINH VẬT
I TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH
1 Cho biết công dụng của agar trong môi trường nuôi cấy Thử phân loại môi trường khoai tây – agar thuộc loại môi trường gì?
- Công dụng của agar trong môi trường nuôi cấy: là nguồn cung cấp thức
ăn cần thiết cho vi sinh vật phát triển, được sử dụng làm chất chống đỡ trong môi trường nuôi cấy vi sinh vật Môi trường thạch Agar được đổ đĩa tạo ra môi trường
có điều kiện thuận lợi cho các loại vi sinh vật bám trụ Agar rất khó tiêu hóa đối với vi sinh vật do đó không ảnh hưởng đến lượng thạch khi nuôi vi sinh Ngoài ra, với đặc tính cô đặc chất dinh dưỡng sẽ hạn chế sự thất thoát và đảm bảo cách ly với các vi sinh vật bên ngoài Tuy nhiên, cần đảm bảo rằng môi trường thạch Agar cần được tiệt trùng trước khi cấy vi sinh vật vào đĩa
- Phân loại theo môi trường nuôi cấy:
• Phân theo trạng thái vật lý:
+Môi trường bán đặc : là môi trường lỏng có khoảng 0.5% arga
+ Môi trường đặc : có khoảng 2% arga trong môi trường
• Phân theo nguồn gốc vật liệu: thuộc môi trường tự nhiên vì khoai tây có nguồn gốc từ thiên nhiên và có nguồn gốc hóa học không xác định
• Phân theo công dụng: thuộc môi trường căn bản vì đây là môi trường có thành phần thức ăn thích hợp cho nhiều loài vi sinh vật
2 Nếu môi trường khoai tây – agar khử trùng bằng tủ khử trùng nhiệt khô
ở 121 o C có được không? Tại sao?
Không thể khử trùng môi trường khoai tây – agar bằng tủ khử trùng nhiệt khô ở 121oC Vì xảy ra sự bốc hơi nước gây biến tính hoặc hư môi trường, đồng thời ở nhiệt độ này không thể tiêu diệt vi sinh vật
Trang 63 Tại sao phải mở cửa, mở quạt máy trong phòng thí nghiệm lấy vi sinhvật
từ không khí?
Mở cửa, mở quạt để không khí trong phòng xáo trộn để mật độ vi sinh vật ở các
vị trí khác nhau trong phòng không chênh lệch ,ngoài ra còn để vi sinh vật bên ngoài vào trong phòng thí nghiệm bám vào môi trường
Trang 7BÀI 3: QUAN SÁT VI SINH VẬT
I TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH :
1 Quan sát và vẽ hình các nhóm vi sinh vật trong mẫu giọt ép
2 Quan sát và vẽ hình các nhóm vi sinh vật trong mẫu giọt treo
3 Cho biết nhóm nào di chuyển thật sự hay chỉ di chuyển tạm thời (chuyển động Brown)
-Nhóm nấm móc không di chuyển
-Nhóm nấm men di chuyển tạm thời (chuyển động Brown)
-Nhóm vi khuẩn di chuyển thật sự
II THỰC HÀNH:
* Quan sát bằng mắt:
Khuẩn
lạc
Hình dạng
Vi
khuẩn-
nấm
men
Hình tròn (circular)
Phẳng (flat)
Nguyên (enrite)
Trắng đục
Ướt, trơn
Nấm
mốc
Không đều (irregular)
Lài (raised)
Sợi (Filamentous)
Trắng đục phía ngoài, xám xanh bên trong
Khô, xù
xì
Trang 8Hình 3.1: Mẫu vi khuẩn- nấm men trên đĩa petri Hình 3.2: Mẫu nấm mốc trên đĩa petri
Vi khuẩn- Nấm men
-Hình dạng: Tròn
-Liên kết: Rời rạc
-Di chuyển: Có khả năng di chuyển
Nấm mốc
-Có túi bào tử
Trang 9BÀI 4 NHUỘM VI SINH VẬT
I.TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH
1 Nếu sau khi trải vi sinh vật không cố định mẫu vật trước khi
nhuộm,kết quả như thế nào?
Tế bào vi sinh vật không gắn chặt lên lam kính, dễ bị rữa trôi
Tế bào vi sinh vật chết dễ bắt màu thuốc nhuộm hơn các tế bào sống nên khi không cố định mẫu vật trước các vi sinh vật sẽ không bắt màu thuốc nhuộm
Cố định mẫu sẽ giúp tế bào đứng yên , giúp thấm thuốc nhuộm hơn, giữ đúng các vị trí bào quan , làm cho cấu trúc tế bào bền vững hơn
2 Cho biết lợi ích của việc nhuộm đơn :
Làm cho mẫu vật ăn màu một loại phẩm nhuộm giúp ta dễ quan sát dưới kính hiển vi
3 Có kết luận gì về các vi sinh vật nhuộm trong phần thực hành (Gram
dương hay Gram âm) :
Gram dương có mày tím xanh của Crystal violet (do vách tế bào dày không rửa trôi khi rửa bằng cồn)
Gram âm có mày hồng đỏ của Fuchsin (do vách tế bào mỏng nên khi rửa bằng cồn sẽ không còn Crystal violet nên sẽ ăn màu của Fuchsin hoặc Safranin)
II.KẾT QUẢ THỰC HÀNH :
Trang 10Hình 1 Mẫu khi chưa nhuộm Hình 2 Mẫu khi đã nhuộm đơn
Trang 11BÀI 5: KỸ THUẬT GIEO CẤY (CHUYỂN)
& PHÂN LẬP (TÁCH RÒNG) VI SINH VẬT
I TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH
1 Có thể xác định độ thuần (ròng) của vi sinh vật bằng mắt được không ?
- Không thể xác định độ thuần (ròng) của vi sinh vật bằng mắt được
- Vì khi quan sát bằng mắt ta chỉ nhìn thấy hình dạng khuẩn lạc của các vi sinh vật, các khuẩn lạc này đôi khi có hình dạng giống nhau nên rất khó phân biệt Và trong khuẩn lạc có thể có nhiều loại chủng vi sinh vật khác nhau, nên chúng ta không thể xác định được chúng có cùng vi sinh vật
- Vi sinh vật có kích thước rất nhỏ nên ta phải quan sát dưới kính hiển vi quang học ở độ phóng đại cao
2 Tại sao khi phân lập phải vẽ thành nhiều đường ?
- Khi phân lập phải vẽ thành nhiều đường vì để:
+ Tách riêng từng nhóm vi sinh vật ra và cho chúng phát triển trong môi trường chọn lọc
+ Tách riêng từng tế bào và để từng tế bào phát triển thành một khuẩn lạc độc lập
3 Tại sao phải hơ lửa miệng ống nghiệm trước khi đưa kim cấy vào bên
trong ống nghiệm ?
- Việc phải hơ lửa miệng ống nghiệm trước khi đưa kim cấy vào bên trong ống nghiệm vì:
+ Để khử trùng và giết chết các vi sinh vật sống trên miệng ống nghiệm tránh các
vi sinh vật này nhiễm vào môi trường khi ta đưa kim cấy vào
+ Loại bỏ các vi khuẩn, đảm bảo được độ thuần của mẻ cấy, tránh được việc lẫn lộn và không bị mất đi sự thuần chủng của vi sinh vật đang nuôi cấy
+ Tránh bị nhiễm các loại vi khuẩn khác từ không khí, môi trường bên ngoài
Trang 12II KẾT QUẢ THỰC TẬP
- Hình ảnh các các đĩa cấy phân lập:
Trang 13BÀI 6: ĐO VÀ ĐẾM VI SINH VẬT
I TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH
1 Cho biết kích thước của tế bào nấm men và vi
khuẩn?
- Tế bào nấm men:
- Với x=10/3
- Ta có kích thước trung bình của tế bào nấm men như sau:
Chiều dài : [[( 2+3+2):3]x10/3] =7,8 μm Chiều rộng: [[(2+2+1):3]x10/3] =5,6 μm Vậy kích thước trung bình của nấm men là: (7,8×5,6) μm
2 Cho biết lí do sự khác biệt về mật số cho bởi phương pháp đếm
gián tiếp và trực tiếp?
- Sự khác biệt về mật số bởi hai phương pháp:
+ Phương pháp đếm trực tiếp tuy cho kết quả nhanh nhưng chúng ta không thể phân biệt được tế bào sống với tế bào chết
+ Phương pháp đếm gián tiếp cho tế bào sống
- Vì vậy kết quả đếm trực tiếp thường cao hơn đếm gián tiếp
3 Cho biết công dụng của thước trắc vi vật kính?
Để kiểm tra đơn vị, kích thước trong các phép đo trên kính hiển vi
II KẾT QUẢ THỰC HÀNH
- Thực hành đếm mẫu nấm men bằng phương pháp đếm trực tiếp
trên kính mang vật:
- Phương pháp Breed (đếm trên kính mang vật)
• Diện tích thị trường: S= 𝜋𝑑2/4 = 0,07065( mm)
• Số trung bình cộng tế bào : ( 251+132+241+139+195)/5 =
192 ( tế bào)
• Số tế bào / 1ml = số trung bình cộng tế bào x50x ( diện tích
ô vông)/( diện tích thị trường)
🢣Số tế bào /1ml = 192x50x484/0,07065= 65625441 (tế bào)
Trang 14BÀI 7: SỰ LÊN MEN RƯỢU & SỰ LÊN MEN GIẤM
I TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH
1 Nấm men lên men rượu nhằm mục đích gì? Viết phản ứng lên men rượu?
- Nấm men lên men rượu để lấy năng lượng cho hoạt động sống của chúng
- Phản ứng lên men rượu:
2 Cho biết cấu tạo của cái giấm
- Cái giấm được cấu tạo từ các sợi cellulose đan chặt vào nhau do vi khuẩn giấm tổng hợp ra và nổi lên môi trường, vi khuẩn nấm sẽ sống bám vào đó để dễ dàng thu nhận oxi
II KẾT QUẢ THỰC TẬP
Hình ảnh nấm men có trong mẫu cơm rượu ở vật kính X40
Hình ảnh nấm men có trong mẫu giấm ở vật kính X40
Trang 15BÀI 8: SỮA CHUA (YAOURT)
I TRẢ LỜI CÂU HỎI PHÚC TRÌNH
Câu 1: Thử xác định các vi sinh vật nhìn thấy trong yaourt ủ ở 45℃ thuộc nhóm nào? (nấm men, nấm mốc, vi khuẩn)
Các vi sinh vật nhìn thấy trong yaourt ủ ở 45℃ thuộc nhóm vi khuẩn, đó là các vi khuẩn lactic hình cầu Streptococcus và hình que Lactobacillus
Câu 2; So sánh mật số 2 nhóm vi sinh vật hình que và hình cầu trong yaourt được ủ ở 30℃ và 45℃
Mật độ phân bố nhóm vi sinh vật (vi khuẩn lactic) hình cầu nhiều hơn hình que, tập trung lại thành từng nhóm hoặc dãy còn hình que phân bố rải rác riêng lẽ
Câu 3: Vai trò của nhóm vi khuẩn acid lactic trong sự lên men sữa
Nhóm vi khuẩn acid lactic có vai trò quan trọng trong sự lên men sữa Chúng chuyển hóa lactose thành acid lactic, làm casein của sữa đông tụ lại thành cục sữa (caseum) làm dịch sữa đông đặc lại dễ tiêu hóa
Phương trình:
Đường Lactose + Vi khuẩn Lactic →Acid lactic + Năng lượng
II KẾT QUẢ THỰC HÀNH
Lactobacillus bulgaricus
Streptococcus thermophilus