Định Tính Shighela - Tiểu Luận Phân Tích Vi Sinh Thực Phẩm.pptx

PowerPoint Presentation Định tính Shigella TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Sinh viên thực hiện Nhóm 6 Phạm Thị Xuân Đào – 2005200438 Huỳnh Tấn Lộc – 2005208212 Pha[.]

Nội dung chính

Chương I Tổng quan

Chương II Phương pháp phân

tích Shigella

Chương I: Tổng quan

Đặc điểm sinh học

- Trực khuẩn gram (-), hiếu khí, kị khí tùy nghi

- Không sinh bào tử , không di động

- Không sinh H2S

- Shigella có kháng nguyên thân O, một số có

kháng nguyên K và không có kháng nguyên H

Bệnh do Shigella

 Căn nguyên gây bệnh lị trực trùng

 Viêm khớp mãn tính, thủng ruột, xuất huyết tiêu hóa,

viêm loét đại tràng.

 Nước và thực phẩm: rau quả, thịt bằm, thủy sản

 Nguyên liệu

 Tiếp xúc bề mặt trong sản xuất, chế biến thực phẩm

Cơ chế gây bệnh của Shigella rất phức tạp , liên quan đến tiền chất tiêu chảy có thể gây độc ruột, độc tế bào và ngoại độc tố, độc tố thần kinh

Khả năng và cơ chế gây bệnh

Chương II Phương pháp phân tích

Môi trường và hóa chất Mục đích

MacConkey

Phân lậpXLD

Hektoen Enteric Agar

TSI

Thử nghiệm sinh hóa khẳng định Shigella

UreaLDC

X g hoặc X ml mẫu thử + 9.Xml canh thang

DỤNG CỤ THIẾT BỊ

Que trang, que cấy vòng Máy dập mẫu (Stomacher)

Đầu tip Pipetman (1000, 5000 l) Pipetman (1000, 5000 l)

Các bước tiến hành

Bước 1: Tăng sinh chọn lọc

Các bước tiến hành

Trên môi trường XLD khuẩn lạc có màu hồng trong suốt, có hoặc không

có tâm màu đen

Trên môi trường HE khuẩn lạc có màu xanh lam, có hoặc không có tâm màu đen

Các bước tiến hành

Bước 3: Phục hồi trên môi trường dinh dưỡng NA/TSA

Đánh dấu 5 khuẩn lạc trên MCA, XLD, HE

Cấy ria lên NA/TSA

Các bước tiến hành

Bước 4: Khẳng định sinh hóa

Môi trường thạch TSI/KIA

Mục đích: Được sử dụng để thử nghiệm khả năng sử dụng

các nguồn carbon khác nhau (glucose, lactose) và khả

Các bước tiến hành

Bước 4: Khẳng định sinh hóa

Môi trường Urea agar

Mục đích: Phát hiện vi sinh vật có mang enzyme urease hay không Cấy ria trên bề mặt thạch.

Ủ trong tủ ở 37 o C - 1 o C trong 24h - 3h.

Nếu urea bị thủy phân, thì sẽ có màu hồng đến hồng đậm do giải phóng amoniac từ việc phân hủy urea với sự đổi màu của chất chỉ thị pH Khi không có sự đổi màu của thạch chứng tỏ phản ứng âm tính.

Các loài Shigella không thủy phân urea.

Các bước tiến hành

Bước 4: Khẳng định sinh hóa

Phương pháp hiện đại

Phương pháp PCR

Bộ công cụ dùng trong xét nghiệm “bộ Kít PCR” với độ nhạy rất cao với các vi khuẩn, cứ trong

25g mẫu thực phẩm có một con vi khuẩn cần tìm thì PCR sẽ phát hiện ra chúng

rất ít thời gian

Þ Riêng đối với Shigella thì cho phép phát hiện Shigella ở mức 10 CFU/25g mẫu sau 12→14h

tăng sinh, cho kết quả sau 24h

Kỹ thuật LA (latex agglutination)

Cơ chế của thử nghiệm LA

 Các mẫu thực phẩm cần kiểm tra sau khi được xử lý được pha trộn với hạt cao su đã được phủ

một kháng thể hoặc kháng nguyên cụ thể Nếu mẫu bị nghi ngờ có sự hiện diện của Shigella, các

hạt cao su sẽ cụm lại với nhau (tựu lại).

Sau thử nghiệm

 Nếu thử nghiệm là âm tính, cao su vẫn còn mịn và giữ lại màu sắc ban đầu của nó

 Nếu thử nghiệm dương tính, hạt cao su thay đổi màu sắc khác biệt so với hạt cao su xung quanh

Phương pháp hiện đại

Kết luận

Chỉ tiêu Shigella được kiểm soát rất nghiêm ngặt trong thực phẩm, đòi hỏi các

phương pháp kiểm nghiệm phải rất nhạy, các quy trình kiểm soát phải chặt chẽ

Sau khi tiến hành định tính Shigella sẽ phát hiện hay không phát hiện Shigella có

trong mẫu thực phẩm

Cảm ơn cô và cả lớp đã lắng nghe

Câu hỏi trắc nghiệm

Câu 1 Chọn câu đúng về Shigella

A Trực khuẩm gram âm, không sinh bào tử

B Trực khuẩn gram dương, không sinh bào tử

C Trực khuẩn gram âm, sinh bào tử

D Trực khuẩn gram dứơng sinh bào tử

Câu 2 Trong cơ chế của thử nghiệm LA nếu nghi ngờ phát hiện Shigella?

A Cao su vẫn mịn và giữ lại các màu sắc ban đầu của nó

B Thay đổi màu sắc so với các hạt xung quanh

C Cao su thay đổi màu sắc khác và không còn mịn

D Hạt cao su cụm lại với nhau và thay đổi màu sắc khác biệt với cao su xung quanh

Câu 3 Định tính Shigella gồm mấy bước

A 1

B 2

C 3

D 4

Câu 4 Phát biểu đúng về Shigella

A Nội độc tố độc như trực khuẩn uốn ván

B Ngoại độc tố gây tác dụng trong hệ thần kinh

C Cả hai độc tố này là độc tố yếu

D Ngoại độc tố chủ yếu gây phản ứng trong ruột

Câu 5 Trong bước phân lập khi định tính Shigella môi trường XLD khuẩn lạc Shigella điển hình

có màu gì?

A Màu hồng trong suốt

B Màu xanh lam

Câu 7 Trong bước phân lập khi định tính Shigella môi trường MacConkey khuẩn lạc Shigella

điển hình có màu gì?

A Màu đỏ nhạt

B Màu tím hoa cà

C Màu hồng

D Màu nâu đen

Câu 8 Ở quy trình phân tích, đồng hoá chỉnh tới pH?

A pH = 6

B pH = 5

C pH = 7

D pH = 8

Câu 9 Shigella có mấy loại kháng nguyên?

Câu 11 Đâu là phản ứng sinh hoá của Shigella?

A Lên men đường glucose không sinh hơi

B Không phản ứng Oxidase

C Không lên men Lactose (một số có thể lên men chậm sau 2 ngày đến 2 tuần), không sinh H2S

D Tất cả đều đúng

Câu 12 Mức cho phép phát hiện Shigella?

A 10 CFU/25g mẫu sau 12  14h tăng sinh, cho kết quả 24h

B 15 CFU/25g mẫu sau 12  13h tăng sinh, cho kết quả 24h

C 10 CFU/25g mẫu sau 14  20h tăng sinh, cho kết quả 24h

D 20 CFU/25g mẫu sau 12  14h tăng sinh, cho kết quả 24h

Câu 13 Bệnh lỵ trực khuẩn do tác nhân Shigella gây ra cho

Câu 15 Nguồn nhiễm Shigella vào thực phẩm chủ yếu là

A Từ nước, từ nguyên liệu

B Từ công nhân chế biến thực phẩm

Câu 17 Khẳng định sinh hóa trên môi trường thạch TSI/KIA, Shigella cho phản ứng:

A Cho phản ứng kiềm trên bề mặt nghiêng và acid ở phần đâm sâu

B Cho phản ứng acid trên bề mặt nghiêng và ở phần đâm sâu

C Cho phản ứng acid trên bề mặt nghiêng và kiềm ở phần đâm sâu

D Cho phản ứng kiềm trên bề mặt nghiêng và ở phần đâm sâu

Câu 18 Mục đích của môi trường Urea agar

A Phát hiện vi sinh vật có mang enzyme urease hay không

B Phát hiện vi sinh vật có lên men glucose hay không

C Phát hiện vi sinh vật tạo sản phẩm trung tính

D Tất cả đều đúng

Câu 19 Shigella nào có khả năng lên men monnitol và Lactose?

A Shigella Dysenteriae

B Shigella Flexneri

C Shigella Boydii

D Shigella Sonei

Câu 20 Kỹ thuật LA làm sao để nhận biết mẫu thử nghiệm, chọn đáp án đúng

A Cao su thay đổi màu sắc khác biệt với các hạt cao su khác Âm tính

B Chỉ hạt cao su mịn Âm tính

C Hạt cao su vẫn còn mịn và giữ màu sắc ban đầu Âm tính

D Cao su thay đổi màu sắc khác biệt với các hạt cao su khác và vẫn còn mịn Âm tính

Câu 21 Biến chứng thường gặp ở bệnh lỵ trực khuẩn

A Nhiễm khuẩn huyết

B Viêm loét niêm mạc, đại tràng

C Viêm thận, truỵ mạch

D Rối loạn tuần hoàn

Câu 22 Câu nào sau đây đúng về các bước tiến hành

A Tăng sinh chọn lọc < Phân lập < Phục hồi trên môi trường dinh dưỡng NA/TSA < Khẳng định sinh hóa

B Tăng sinh chọn lọc < Phục hồi trên môi trường dinh dưỡng NA/TSA < Phân lập < Khẳng định sinh hóa

C Tăng sinh chọn lọc < Phân lập < Khẳng định sinh hóa < Phục hồi trên môi trường dinh dưỡng NA/TSA

D Phân lập < Phục hồi trên môi trường dinh dưỡng NA/TSA < Tăng sinh chọn lọc < Khẳng định sinh hóa

Câu 23 Mục đích của 3 môi trường TSI, Urea, LDC

A Phân lập

B Phục hồi

C Thử nghiệm sinh hóa

D Tăng sinh chọn lọc

Câu 24 Thử nghiệm trên môi trường VP cho phản ứng dương tính khi:

A Thử nghiệm VP (+) khi có màu cam trên bề mặt môi trường

B Thử nghiệm VP (+) khi có màu xanh nhạt trên bề mặt môi trường

C Thử nghiệm VP (+) khi có màu hồng trên bề mặt môi trường

D Thử nghiệm VP (+) khi có màu đỏ trên bề mặt môi trường

Câu 25 Để thử nghiệm khả năng sử dụng các nguồn cacbon khác nhau (glucose, lactose) và khả năng H2S, dùng môi trường

A Môi trường TSI/KIA

B Môi trường Urea Agar

C Môi trường VP

D Cả 3 đáp án trên đều sai

Câu 26 Trong bước khẳng định sinh hóa theo phương pháp truyền thống, chúng ta sử dụng

phương pháp cấy gì trên bề mặt thạch?

A Cả B và C

B Cấy vạch

C Cấy đâm sâu

D Cấy ria

Câu 27 Ở bước tăng sinh chọn lọc sau khi dập mẫu người ta thường ủ mẫu trong điều kiện như nào?

A 37°C - 18h

B 36°C - 18h

C 36°C - 20h

D Cả B và C đều đúng

Câu 28 Shigella nội độc tố có đặc điểm

A Nội độc tố có tính độc mạnh, cấu tạo như kháng nguyên thân, là loại kháng nguyên yếu Tác dụng chủ yếu là gây phản ứng trong ruột

B Nội độc tố có tính độc nhẹ, cấu tạo như kháng nguyên thân, là loại kháng nguyên yếu Tác dụng chủ yếu là gây phản ứng trong ruột

C Nội độc tố có tính độc nhẹ, cấu tạo như kháng nguyên thân, là loại kháng nguyên mạnh Tác dụng chủ yếu là gây phản ứng trong ruột

D Nội độc tố có độc tố này rất độc, mạnh như độc tố của trực khuẩn uốn ván, có tác dụng đặc hiệu vào hệ thần kinh

Câu 29 Shigella ngoại độc tố có đặc điểm

A Ngoại độc tố có tính độc mạnh, cấu tạo như kháng nguyên thân, là loại kháng nguyên yếu Tác dụng chủ yếu là gây phản ứng trong ruột Những độc tố mạnh thì sẽ trung hòa bằng kháng thể đặc hiệu

B Ngoại độc tố có tính độc nhẹ, cấu tạo như kháng nguyên thân, là loại kháng nguyên yếu Tác dụng chủ yếu là gây phản ứng trong ruột

C Ngoại độc tố có tính độc nhẹ, cấu tạo như kháng nguyên thân, là loại kháng nguyên mạnh Tác dụng chủ mạnh là gây phản ứng trong ruột

D Ngoại độc tố có độc tố này rất độc, mạnh như độc tố của trực khuẩn uốn ván, có tác dụng đặc hiệu vào hệ thần kinh Những độc tố mạnh thì sẽ trung hòa bằng kháng thể đặc hiệu

Câu 30 Môi trường XLD dùng để

A Phân lập

B Tăng sinh chọn lọc

C Thử nghiệm sinh hóa khẳng định Shigella

D Chỉnh pH