Định Tính Samonella - Tiểu Luận Phân Tích Vi Sinh Thực Phẩm.pptx

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM BỘ MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH TÍNH SALMONELLA GVHD ĐINH THỊ HẢI THUẬN Thực hiện Nhóm 02 NHÓM 02 NGUYỄN DƯƠ[.]

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM

NHÓM 02

NGUYỄN DƯƠNG THÙY VÂN 2005208543

VÕ BÙI CẨM TIÊN 2005200712 NGUYỄN VÕ MINH THÚY 2005200335 NGUYỄN TRẦN ANH THƯ 2005200177

TỔNG QUAN SALMONELLA

❑ Salmonella trực khuẩn gram âm (-), hô hấp hiếu khí hoặc kỵ khí tuỳ ý, có khả năng di động, sinh

acid từ glucose và manitol nhưng không lên men saccharose và lactose Hầu hết các chủng đều

sinh ra H2S Salmonella có thể tiết ra loại độc tố: Ngoại độc tố và nội độc tố

❑ Là một trong những tác nhân gây bệnh chủ yếu trong thực phẩm Có 3 dạng bệnh do Salmonella

gây ra

• Rối loạn tiêu hoá do S.typhymurium và S.enteritidis

❑ Nguyên nhân: Do ăn thức ăn nhiễm bẩn, nhiễm

từ người bệnh, các sản phẩm sữa như sữa

không thanh trùng

Không cho phép có sự hiện diện của

Salmonella trong 25g/25ml mẫu

TỔNG QUAN SALMONELLA

QUY TRÌNH ĐỊNH TÍNH SALMONELLA

1 Phạm vi áp

dụng

❑ Phương pháp này tham chiếu theo TCVN

4829:2005 dùng để phát hiện Salmonella trong

tất cả các loại thực phẩm.

❑ Bắt buộc phải qua 5 giai đoạn và phải sử

dụng chủng đối chứng trong toàn bộ quá

trình phân tích

2 Nguyên

tắc

3 Môi trường và hóa

chất

QUY TRÌNH ĐỊNH TÍNH SALMONELLA

Môi trường và hóa chất Mục đích

RVS

Tăng sinh chọn lọcTT

XLD

Phân lậpHE

DD creatine

Thuốc thử các phản ứng sinh hóaKháng huyết thanh

Dung dịch Buffered Peptone Water (BPW)

Dùng để làm giàu trước khi được sử dụng để giúp phục hồi vi khuẩn Salmonella bị tổn

thương trước khi đưa vào môi trường chọn lọc và phân lập.

Proteose peptone Cung cấp protein

Sodium chloride Duy trì sự cân bằng thẩm thấu của

môi trường Tạo đệm cho môi trường Hoạt động như hệ đệm

4 Mục đích môi trường ở từng

bước

Tăng sinh sơ bộ

Peptone từ đậu nành Cung cấp protein

Sodium chloride Duy trì sự cân bằng thẩm thấu của môi

trường Hoạt động như hệ đệm

Làm dung dịch đệm (chống lại sự thay đổi nồng độ)

Tăng áp suất thẩm thấu

Malachite green oxalate Ức chế vi khuẩn

4 Mục đích môi trường ở từng bước

Tăng sinh chọn lọc

Tetrethionat/Selenit xystin (TT)

Sodium phosphate Duy trì sự ổn định của pH

Ngăn pH giảm xuống

Sodium chloride Duy trì sự cân bằng thẩm thấu của

môi trường

Yeast extract Cung cấp protein (N) và vitamin

Meat extract Cung cấp protein (N) và vitamin

Lactose Cung cấp năng lượng và nguyên liệu

để cấu tạo nên tế bào

4 Mục đích môi trường ở từng

bước Tăng sinh chọn lọc

MKTTn (Muller-Kauffmann Tetrathionate Novobiocin) Broth

Meat extract Cung cấp protein và vitamin

Bile salts (muối mật) Ức chế sự sinh trường của tất cả vi

khuẩn gram dương

Brilliant green Ức chế sự sinh trường của tất cả vi

khuẩn gram dương

Sodium chloride Duy trì sự cân bằng thẩm thấu của môi

trường Ngăn pH giảm xuống

Có tính kiềm ức chế sự phát triển của vi khuẩn gram âm

4 Mục đích môi trường ở từng

bước Phân lập Xylose Lysine Desoxtcholate (XLD)

Lactose Tạo axit dư thừa để ngăn cản sự đảo ngược thành pH

kiềm bởi vi khuẩn Coliform dương tính

Sucrose

Sodium thiosulfate Có tính ức chế sự phát triển của vi khuẩn gram âm

L-Lyscine Phân biệt Salmonella với các vsv không gây bệnh khác

Sodium chloride Duy trì sự cân bằng thẩm thấu của môi trường

Sodium Deoxycholate Ức chế sự phát triển của vi khuẩn gram dương

Phenol red Chất chỉ thị giúp nhận biết sự phân huỷ của xylose,

Bacterilgical agar Làm đông môi trường tạo điều kiện cho các loại vi sinh vật bám trụBile salts Ức chế sự sinh trưởng của tất cả vi khuẩn gram dương và kìm hãm sự sinh trưởng của các chủng ColiformsSodium chloride Duy trì sự cân bằng thẩm thấy của môi trường

Có tính kiềm ức chế sự phát triển của vi khuẩn gram âm

Lactose

Phân biệt và làm giảm độc tính gây ra bởi các chỉ số màu để

phục hồi tốt của Salmonella

Sucrose

Salicin

4 Mục đích môi trường ở từng bước

Phục hồi Trytone Soy Agar (TSA)

cho các loại vsv bám trụ

Pancreatic digest of Casein Cung cấp protein và vitamin

Papaic digest of Soybean Cung cấp năng lượng vì chứ tỉ lệ

Phục hồi trên môi trường NA/TSA

Thử nghiệm sinh hoá và kháng huyết thanh

Bước 1: Tiền tăng sinh (tăng sinh sơ bộ)

Mục đích:Giúp cho Salmonella (và cả VSV khác) tăng lên nhiều trong dịch mẫu

Bước 2: Tăng sinh chọn lọc

6 Các bước tiến

hành

0,1ml dịch tiền tăng sinh + 10ml

RVS

1ml dịch tiền tăng sinh + 10ml

MKTTn

Mục đích: Tăng số lượng vi khuẩn trong mẫu bệnh phẩm

Có màu thay đổi từ xanh dương đến xanh lục, có hay không có tâm đen.

Mục đích: Sử dụng 2 môi trường XLD – HE để phân lập

Salmonella qua các màu khuẩn lạc

6 Các bước tiến

hành

Bước 4: Phục hồi

Cấy ria lên NA/TSA

Tăng khuẩn lạc được cấy

• Ủ ở 37oC trong 24 giờ

6 Các bước tiến

hànhBước 5: Khẳng định sinh hóa và kháng huyết thanh

Thử nghiệm Indol

Kết quả:

• Dương tính: Môi trường xuất hiện 1 vòng màu đỏ

• Âm tính: Môi trường xuất hiện màu khác

Thử nghiệm Urea

6 Các bước tiến

hànhBước 5: Khẳng định sinh hóa và kháng huyết thanh

cấy chuyển sang môi trường Urea phenol red

Kết quả: Khi có phản ứng Urea dương tính làm

tăng pH môi trường nên môi trường chuyển sang

màu đỏ hồng

⮚ Thử phản ứng kháng huyết thanh

6 Các bước tiến

hànhBước 5: Khẳng định sinh hóa và kháng huyết thanh

• Loại trừ chủng tự ngưng kết: + Có sự vón cục, không rời nhau (ít hoặc nhiều) → tự ngưng kết, không

cần thử phản ứng huyết thanh tiếp theo

+ Không có sự vón cục và rời nhau → không tự ngưng kết, tiếp tục thử phản ứng huyết thanh

• Kiểm tra O, H,… : + Xảy ra hiện tượng ngưng kết → phản ứng dương tính

+ Vi khuẩn phân bố đều trong huyết thanh, làm dung dịch đục đều → âm tính

QUY TRÌNH ĐỊNH TÍNH SALMONELLA

7 Kết

qủa

❑ Phát hiện hay không phát hiện Salmonella

trong 25g mẫu rắn hoặc 25ml mẫu lỏng.

• Mẫu được kết luận dương tính với Salmonella

khi có KQ sinh hóa sau:

❑ Trong thực phẩm không được phép

có sự hiện diện của Salmonella,

Salmonella vô cùng nguy hiểm, là

tác nhân gây bệnh chủ yếu trong thực phẩm

KẾT LUẬN

TRẮC NGHIỆM CỦNG CỐ

CÂU 1.Chọn câu đúng:

C Salmonella trực khuẩn gram âm (+), hô hấp hiếu khí hoặc kỵ khí tuỳ ý, có khả năng di động, sinh

acid từ glucose và manitol nhưng không lên men saccharose và lactose, không sinh phân giải ure

D Salmonella trực khuẩn gram âm (-), hô hấp hiếu khí hoặc kỵ khí tuỳ ý, không có khả năng di động,

sinh acid từ glucose và manitol nhưng không lên men saccharose và lactose, không sinh phân giải ure

B Salmonella trực khuẩn gram âm (-), hô hấp hiếu khí hoặc kỵ khí tuỳ ý, có khả năng di động,

sinh acid từ glucose và manitol nhưng lên men saccharose và lactose, không sinh phân giải ure

A Salmonella trực khuẩn gram âm (-), hô hấp hiếu khí hoặc kỵ khí tuỳ ý, có khả năng di động, sinh

acid từ glucose và manitol nhưng không lên men saccharose và lactose, không sinh phân giải ure

A Salmonella trực khuẩn gram âm (-), hô hấp hiếu khí hoặc kỵ khí tuỳ ý, có khả năng di động, sinh

acid từ glucose và manitol nhưng không lên men saccharose và lactose, không sinh phân giải ure

A.Tăng sinh sơ bộ B.Tăng sinh chọn lọc C.Thuốc thử các phản ứng sinh hóa D.Phục hồi

CÂU 2 Mục đích của kháng huyết thanh là gì?

C.Thuốc thử các phản ứng sinh hóa

A.Tăng số lượng Salmonella B.Phân lập Salmonella

C.Tăng số lượng vi khuẩn trên bệnh phẩm D.Phục hồi

CÂU 3 Mục đích của bước tăng sinh sơ bộ là gì?

A.Tăng số lượng Salmonella

A.Tăng sinh sơ bộ B.Tăng sinh chọn lọc C.Phân lập

D.Điều chỉnh độ pH

CÂU 4 Mục đích của HCl và NaOH 10% là gì?

D.Điều chỉnh độ pH

A.Tiền tăng sinh→ tăng sinh chọn lọc →phân lập→phục hồi→khẳng định

B Tiền tăng sinh→tăng sinh chọn lọc→phục hồi→phân lập→khẳng định

C Tiền tăng sinh→phục hồi→tăng sinh chọn lọc→phân lập→khẳng định D.Tiền tăng sinh→phân lập→tăng sinh chọn lọc →phục hồi→khẳng định

CÂU 5 Quy trình phát hiện Salmonella bắt buộc phải trải

qua 5 giai đoạn theo thứ tự ?

A.Tiền tăng sinh→ tăng sinh chọn lọc →phân lập→phục hồi→khẳng định

A.Phân lập B.Khẳng định C.Tiền tăng sinh D.Phục hồi

CÂU 6 Sau khi tăng sinh chọn lọc thì bước tiếp theo là gì?

A.Phân lập

A.Màu xanh lam, có hoặc không có tâm đen B.Màu vàng nhạt, có hoặc không có tâm đen C.Màu đỏ hồng, có hoặc không có tâm đen D.Màu hồng trong suốt, có hoặc không có tâm đen

CÂU 7 Trên môi trường XLD, khuẩn lạc Salmonella có màu gì?

D.Màu hồng trong suốt, có hoặc không có tâm đen

A.XLD B.HE C.TSI D.TSA

CÂU 8 Môi trường nào sau đây là môi trường phục hồi?

D.TSA

A.TSI: đỏ, KIA: vàng; VP(-); ONPG(-); LDC(+); Ure(-); Indol(-)

B.TSI: đỏ, KIA: vàng; VP(+); ONPG(-); LDC(+); Ure(-); Indol(-)

C.TSI: đỏ, KIA: vàng, VP(-); ONPG(-); LDC(-); Ure(-); Indol(-)

D.TSI: đỏ, KIA: vàng, VP(-); ONPG(+); LDC(+); Ure(-); Indol(-)

CÂU 9 Mẫu được kết luận là dương tính với Salmonella khi

cho kết quả sinh hoá như thế nào?

A.TSI: đỏ, KIA: vàng; VP(-); ONPG(-); LDC(+); Ure(-); Indol(-)

A.Tăng sinh sơ bộ B.Phân lập

C.Phục hồi D.Tăng sinh chọn lọc

CÂU 10 Vai trò của môi trường XLD và HE là gì?

B.Phân lập

A.S gallinarum B.S pullorum C.S typhi

D.Cả 3 đáp án trên

C.S typhi

A Cấy ria

B Cấy đâm sâu

C Trãi

D Cấy ria hoặc cấy đâm sâu

CÂU 12 KIA dùng kỹ thật cấy nào?

B Cấy đâm sâu

A.3 B.4

C.5

D.6

CÂU 13 Quy trình phát hiện Salmonella bắt buộc phải

trải qua mấy giai đoạn?

C.5

A.Tăng sinh sơ bộ B.Tăng sinh chọn lọc C.Phân lập

D.Phục hồi

CÂU 14 Mục đích của BPW là gì?

A.Tăng sinh sơ bộ

A.RVS ủ ở 45,50C trong khoảng 24h

B.RVS ủ ở 41,50C trong khoảng 18h và MKTTn ủ ở 370C trong khoảng 24h

C.MKTTn ủ ở 300C trong khoảng 24h

D.RVS ủ ở 41,50C và MKTTn ủ ở 370C trong khoảng 24h

CÂU 15 Ở bước tăng sinh chọn lọc:

A.300C 18h B.300C 24h C.370C 18h D.370C 24h

CÂU 16 Ở bước tiền tăng sinh, mẫu được ủ trong điều kiện nào?

C.370C 18h

A.Phản ứng dương tính, không có sự xuất hiện của Salmonella

B.Phản ứng âm tính, không có sự xuất hiện của Salmonella

C.Phản ứng dương tính, có sự xuất hiện của Salmonella

D.Phản ứng âm tính, có sự xuất hiện của Salmonella

CÂU 17 Khẳng định sinh hóa trên môi trường MRVP xuất hiện màu hồng trong 15 phút chứng tỏ điều gì xảy ra?

A.Phản ứng dương tính, không có sự xuất hiện của Salmonella

A.Dương tính khi môi trường có màu vàng

B.Dương tính khi môi trường có màu tím

C.Âm tính khi môi trường có màu vàng

D.Cả B và C đều đúng

CÂU 18 Ở môi trường LDC, Salmonella có phản ứng:

D.Cả B và C đều đúng

A.42,50C B.38,20C C.450C D.41,50C

CÂU 19 Ở bước tăng sinh chọn lọc, nhiệt độ ủ tối đa là bao nhiêu?

A.42,50C

A.Maltose B.Glucose C.Lactose D.Salmonella không có khả năng lên men đường

CÂU 20 Salmonella có khả năng lên men loại đường nào?

B.Glucose

CÂU 21 Trên môi trường thạch TSI, các khuẩn lạc Salmonella điển hình thể hiện

A.Tính kiềm (màu xanh), tính acid (màu đỏ) B.Tính kiềm (màu đỏ), tính acid (màu vàng) C.Tính kiềm (màu hồng), tính acid (màu xanh) D.Tính kiềm (màu xanh), tính acid (màu vàng)

B.Tính kiềm (màu đỏ), tính acid (màu vàng)

CÂU 22 Có thể làm giảm nguy cơ nhiễm bệnh Salmonella bằng cách nào?

A.Đun nấu thức ăn B.Làm lạnh, cấp đông thực phẩm C.Cả A và B đều đúng

D.Cả A và B đều sai

C.Cả A và B đều đúng

CÂU 23 Trong môi trường tăng sinh chọn lọc RVS, có mấy nhóm chất dinh dưỡng?

CÂU 24 Salmonella gây ra 3 dạng bệnh nào?

A.Sốt thương hàn do S typhy, nhiễm trùng máu do S typhymurium, rối loạn tiêu hóa do S cholera-sius

B.Sốt thương hàn do S typhy, nhiễm trùng máu do S cholera-sius, rối loạn tiêu hóa do S typhymurium và S enteritidis

C.Sốt thương hàn do S cholera-sius, nhiễm trùng máu do S typhy, rối loạn tiêu hóa do S typhymurium và S enteritidis

D.Sốt thương hàn do S cholera-sius, nhiễm trùng máu do S enteritidis, rối loạn tiêu hóa do S typhymurium và S typhy

B.Sốt thương hàn do S typhy, nhiễm trùng máu do S cholera-sius, rốI loạn tiêu hóa do S typhymurium và S enteritidis

CÂU 25 Ở môi trường thạch Ure, khí nào được tạo ra?

A.NH3B.NO2C.NH4D.NO3

CÂU 26 Sau khi thêm 1ml thuốc thử Kovac’s trên bề mặt môi trường Indol xuất hiện màu hồng cánh sen chứng tỏ điều gì xảy ra?

A.Phản ứng âm tính, có sự xuất hiện của Salmonella

B.Phản ứng dương tính, không có sự xuất hiện của Salmonella

C.Phản ứng dương tính, có sự xuất hiện của Salmonella

D.Phản ứng âm tính, không có sự xuất hiện của Salmonella

B.Phản ứng dương tính, không có sự xuất hiện của Salmonella

CÂU 27 Thuốc thử dùng trong môi trường phản ứng Indol?

A.Dung dịch α-naphtol B.KOH 40%

C.Thuốc thử Kovac’s D.Dung dịch creatine

C.Thuốc thử Kovac’s

CÂU 28 Thử nghiệm sinh hóa nào sau đây không dùng để khẳng định Salmonella?

A.Lysine Decacboxylase broth B.Voges-Proskauer

C.Kligler Iron Agar D.Coagulase

CÂU 29 Ở môi trường Indol phản ứng dương tính thì:

A.Giữ nguyên màu tím B.Chuyển thành đỏ hồng C.Xuất hiện một vòng màu đỏ D.Xuất hiện màu hồng đến màu đỏ sáng

C.Xuất hiện một vòng màu đỏ

CÂU 30 Trên môi trường HE, khuẩn lạc có màu gì

A.Xanh, có hoặc không có tâm đen B.Vàng, có hoặc không có tâm đen C.Tím, có hoặc không có tâm đen D.Hồng, có hoặc không có tâm đen

A.Xanh, có hoặc không có tâm đen

NHÓM 02 XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN CÔ VÀ

CÁC BẠN ĐÃ CHÚ Ý LẮNG NGHE!