Củ cây Đinh lăng sau khi xử lý sơ bộ...16 Trang 6 THÔNG TIN CHUNGTên đề tàiKhảo sát hoạt tính kháng oxy hóa của cao chiết ethanol trong củ Đinh lăng Polyscisa fructicosa định hướng ứng
QT6.2/KHCN2-BM7 TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH HỘI ĐỒNG KHOA HỌC & ĐÀO TẠO ISO 9001 : 2015 THUYẾT MINH CHI TIẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG TÊN ĐỀ TÀI: KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA CỦA CAO CHIẾT ETHANOL CỦ ĐINH LĂNG (POLYCIAS FRUTICOSA), ĐỊNH HƯỚNG ỨNG DỤNG TRONG SẢN XUẤT THỰC PHẨM BẢO VỆ SỨC KHỎE Chủ nhiệm đề tài: NGUYỄN THỊ NGỌC BÍCH Đơn vị: Lớp Cơng nghệ Kỹ thuật Hóa học khóa 2019 Khoa Hóa học Ứng dụng, Trường Đại học Trà Vinh Trà Vinh, ngày 14 tháng 12 năm 2021 MỤC LỤC THÔNG TIN CHUNG NỘI DUNG KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ Tính cấp thiết: Tổng quan tình hình nghiên cứu nước: .8 2.1 Tình hình nghiên cứu nước: 2.1.1 Tình hình nghiên cứu tỉnh: 2.1.2 Tình hình nghiên cứu ngồi tỉnh: 2.2 Tình hình nghiên cứu nước: 10 Mục tiêu nghiên cứu: 11 3.1 Mục tiêu chung/tổng quát: 11 3.2 Mục tiêu cụ thể: 11 Nội dung triển khai nghiên cứu: 11 4.1 Định lượng saponin tổng củ Đinh Lăng phương pháp phân tích UV-Vis .11 4.2 Xây dựng quy trình ly trích saponin tổng củ Đinh Lăng từ đưa quy trình ly trích tối ưu 11 4.3 Định lượng saponin tổng quy trình chiết tối ưu phương pháp UV-Vis .12 4.4 Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa cao chiết củ Đinh lăng để định hướng ứng dụng thực phẩm bảo vệ sức khỏe .12 Đối tượng phạm vi nghiên cứu: .12 5.1 Đối tượng nghiên cứu: .12 5.1.1 Cây Đinh lăng (Polycias fruticosa) 12 5.1.2 Ứng dụng Đinh lăng 14 5.2 Phạm vi nghiên cứu: 15 Phương pháp nghiên cứu, kỹ thuật sử dụng: .15 6.1 Định lượng hàm lượng Saponin tổng cao chiết củ Đinh lăng phương pháp UV-Vis .15 6.2 Xây dựng quy trình ly trích saponin tổng củ Đinh Lăng từ đưa quy trình ly trích tối ưu 16 6.2.1 Khảo sát ảnh hưởng dung môi chiết 17 6.2.2 Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ rắn - lỏng 18 6.2.3 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ chiết 18 6.2.4 Khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết 18 6.2.5 Khảo sát ảnh hưởng phương pháp chiết 19 6.3 Định lượng saponin tổng quy trình chiết tối ưu phương pháp UV-Vis .19 6.4 Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa cao chiết củ Đinh lăng phương pháp DPPH 20 Tình trạng đề tài, phương án phối hợp: 20 7.1 Tình trạng đề tài: 20 7.2 Phương án phối hợp với đối tác bên Trường: Không 20 Tiến độ thực hiện: .20 Sản phẩm kết nghiên cứu: 22 9.1 Sản phẩm giao nộp bắt buộc: 22 9.2 Sản phẩm khác: 23 10 Các lợi ích mang lại tác động kết nghiên cứu: 23 11 Khả ứng dụng phương thức chuyển giao kết nghiên cứu: 23 12 Tổ chức, đơn vị đặt hàng tài trợ kinh phí, đối ứng kinh phí: 23 13 Kinh phí thực đề tài: 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO 24 PHỤ LỤC 1: DỰ TỐN KINH PHÍ THỰC HIỆN .28 DANH MỤC BẢNG Bảng 6.1 Dụng cụ, thiết bị hóa chất sử dụng .14 Bảng 6.2: Khảo sát ảnh hưởng dung môi chiết 16 Bảng 6.3: Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ rắn - lỏng 17 Bảng 6.4: Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ chiết 17 Bảng 6.5: Khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết .18 DANH MỤC HÌNH Hình Cấu tạo chung saponin [30] 12 Hình Cây Đinh lăng nhỏ 15 Hình Củ Đinh lăng nhỏ .15 Hình Củ Đinh lăng sau xử lý sơ 16 Hình Củ Đinh Lăng xử lý thành bột .16 THÔNG TIN CHUNG Tên đề tài Lĩnh vực/ Chuyên ngành nghiên cứu Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa cao chiết ethanol củ Đinh lăng (Polyscisa fructicosa) định hướng ứng dụng sản xuất thực phẩm - Lĩnh vực/Chun ngành: Cơng nghệ Kỹ thuật Hóa học - Mã lĩnh vực: Thời gian thực Kinh phí 12 tháng (Từ tháng 1/2022 đến tháng 1/2023) Chủ nhiệm đề tài/dự án - NGUYỄN THỊ NGỌC BÍCH 30.000.000 đồng Trong đó: Từ ngân sách nghiệp khoa học: 30.000.000 đồng - Từ nguồn tự có/khác: … đồng - Học hàm/Học vị: Sinh viên ngành Cơng nghệ kỹ thuật hóa học khóa 2019, Khoa Hóa học Ứng dụng, Trường Đại học Trà Vinh - MSSV: - Chức danh nghề nghiệp: Sinh viên - Đơn vị công tác: - Email: 112619002@st.tvu.edu.vn - Điện thoại: 0921.102.933 Thành viên - THẠCH THỊ THẢO - Học hàm/Học vị: Sinh viên ngành Công nghệ kỹ thuật hóa học khóa 2019, Khoa Hóa học Ứng dụng, Trường Đại học Trà Vinh - MSSV: - Chức danh nghề nghiệp: Sinh viên - Đơn vị công tác: - Email: 118819008@st.tvu.edu.vn - Điện thoại: 0373.892.014 Giảng viên hướng - NGUYỄN THỊ THU HÀ dẫn - Học hàm/Học vị: Thạc sĩ - Chức vụ: - Chức danh nghề nghiệp: Giảng viên - Đơn vị cơng tác: Bộ mơn Ứng dụng Chất dẻo Linh hoạt Vật liệu Nano, Khoa Hóa học Ứng dụng - Email: ntthuha@tvu.edu.vn Điện thoại: 0987.379.318 NỘI DUNG KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ Tính cấp thiết: Cùng với tiến khoa học - kỹ thuật đời sống người ngày nâng cao, người ngày quan tâm nhiều sức khỏe hướng đến việc sử dụng lồi thảo dược có nguồn gốc từ thiên nhiên để chăm sóc sức khỏe Trong số lồi thảo dược phải kể đến Đinh lăng Đinh lăng (Polyscias fruticosa) thuốc quý thuộc họ Nhân sâm (Araliaceae) [1], từ lâu sử dụng loại thảo dược quý để cải thiện sức khỏe có chứa nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học cao như: saponin, alkaloid, flavonoid, polyphenol, vitamin loại acid amin [2] Các nghiên cứu công bố cho thấy Đinh Lăng có nhiều tác dụng y học quan trọng như: tác dụng kích thích hệ miễn dịch [3]; chống oxy hóa, hạ cholesterol [4]; hạ đường huyết [5] chống viêm, kháng histamin, chống hen suyễn [6], [7].… Ở Việt Nam, nguồn dược liệu Đinh Lăng phong phú, dễ khai thác có tiềm phát triển thành sản phẩm chăm sóc sức khỏe an tồn hiệu Ngày với phát triển ngành hóa học hữu cơ, cơng nghệ trích ly chất hữu từ thiên nhiên có hoạt tính sinh học sử dụng rộng rãi lĩnh vực y học mà sử dụng phổ biến lĩnh vực khác như: thực phẩm, mỹ phẩm, … Chính vậy, nghiên cứu Đinh Lăng nhiều nhà khoa học quan tâm nghiên cứu Tuy nhiên, cơng bố nghiên cứu lồi dừng lại xác định thành phần hóa học, hoạt tính sinh học hợp chất chứa Đinh Lăng, số ứng dụng y học mà chưa nghiên cứu ứng dụng nhiều quy trình ly trích ứng dụng vào sản phẩm bảo vệ sức khỏe Mặc khác, việc nghiên cứu Đinh Lăng địa bàn tỉnh Trà Vinh cịn đề tài chưa có nghiên cứu nào, việc khai thác sử dụng Đinh Lăng chủ yếu dừng lại việc nấu nước uống sử dụng vào việc xông, chống cảm cho người bệnh Vì vậy, Đinh Lăng nguồn nguyên liệu dồi khai thác sử dụng cách hiệu khoa học cần nhiều nghiên cứu Đinh Lăng để tạo nguồn liệu khoa học ứng dụng vào thực tiễn Trên sở nên đề tài “Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa cao chiết ethanol củ Đinh lăng (Polyscisa fructicosa) định hướng ứng dụng sản xuất thực phẩm bảo vệ sức khỏe” thực Tổng quan tình hình nghiên cứu ngồi nước: 2.1 Tình hình nghiên cứu nước: 2.1.1 Tình hình nghiên cứu tỉnh: Đề tài “Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa cao chiết ethanol củ Đinh lăng (Polyscisa fructicosa) định hướng ứng dụng sản xuất thực phẩm bảo vệ sức khỏe” Trà Vinh cịn đề tài mới, chưa có cơng trình nghiên cứu 2.1.2 Tình hình nghiên cứu ngồi tỉnh: Đinh Lăng xem loại nhân sâm q có nhiều cơng dụng cho cải thiện sức khỏe, từ năm 60 kỷ trước có nghiên cứu Đinh Lăng loại đưa vào Dược điển Việt Nam loại dược liệu bột, tăng lực Năm 1985, nghiên cứu so sánh tác dụng tăng lực sinh thích nghi Đinh lăng Giáo sư Ngơ Ứng Long Học viện quân y tìm thấy Đinh lăng có thành phần: alkaloid, glucozid, saponin, flavonoid, tannin, vitamin B1, acid amin có lyzin, xystein, methionin acid amin thay [8] Tuy nhiên, nghiên cứu chưa đưa số liệu cụ thể hàm lượng hợp chất trên, cần có thêm nghiên cứu để xác định hàm lượng hợp chất Đinh lăng Đến năm 1992, Giáo sư Võ Xuân Minh nghiên cứu thành phần saponin phận Đinh lăng cho biết hàm lượng saponin rễ 0,49%; vỏ rễ 1,0%; lõi rễ 0,11% 0,38% Cũng năm 1992, ơng có thêm nghiên cứu đề xuất quy trình tách chiết saponin từ Đinh Lăng tạo số sản phẩm dạng bào chế từ nguyên liệu chè tan phun sương chè tan hạt Đinh lăng [9], [10] Cũng vào năm 1992, Nguyễn Thị Nguyệt cộng cô lập acid oleanolic Đinh Lăng [11] Năm 2003, nghiên cứu Nguyễn Tấn Thiện cho biết acid oleanolic tìm thấy lần xác định hợp chất Đinh lăng: 3-β-hydroxyolean-28→13-lacton; 3-hydroxymetyfurfural phytol [12] Đến năm 2010, Nguyễn Thị Lan phương pháp GC/MS để phân tích thành phần dầu Đình lăng tỉnh Nghệ An Thanh Hóa Kết cho thấy tinh dầu Đinh lăng có 15 hợp chất β-elemen, γelemen, E-γ- bisabolen, α-bergamoten, β-germacren-D, Gecmacren-B, αfarnesen [13] Năm 2014, nghiên cứu Hồ Lương Nhật Vinh lần hợp chất saponin triterpenoid có tác dụng ức chế enzym α-glucosidase [14] Năm 2016, Nguyễn Thị Bích Thu cộng cơng bố phân lập hợp chất saponin triterpene từ rễ Đinh Lăng, hợp chất lần phân lập falcarindiol [15] Nghiên cứu đưa quy trình phân lập saponin triterpene nhiên quy trình cịn phức tạp khó thực Năm 2017, Phó Giáo sư Tiến sĩ Nguyễn Thị Thu Hương cộng thử nghiệm chuột nhắt trắng tác dụng chống trầm cảm stress chế phẩm Đinh Lăng Kết cho thấy 17 cao chiết rễ Đinh Lăng có tác dụng chống trầm cảm phục hồi sức khỏe với liều lượng 45-180 mg/kg thể trọng Ngồi liều lượng có tác dụng khác tăng lực, kích thích hoạt động não nội tiết tăng sức đề kháng [16] Trong nghiên cứu cho thấy cao chiết Đinh Lăng có ứng dụng quan trọng y học, nghiên cứu dừng lại việc thử nghiệm tác dụng cao chiết, cần có nghiên cứu cụ thể quy trình chiết hàm lượng hợp chất chứa cao chiết Năm 2019, Bùi Thị Luyến nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn sở cho dược liệu Đinh Lăng [17] định lượng saponin tổng rễ Đinh lăng (Polyscias fruticosa) thu hái Thái Nguyên phương pháp đo quang [18] Khoảng tuyến tính xây dựng với nồng độ acid oleanolic khoảng 5-30µg/mL với độ tuyến tính r≈1 Phương pháp phân tích độ độ lặp lại (99,775%) cho kết phù hợp với yêu cầu phân tích [18] Tuy nhiên, quy trình trích ly cao chiết nghiên cứu cịn phức tạp sử dụng dung mơi chiết độc hại Năm 2020, Nguyễn Thị Huyền nghiên cứu khảo sát thành phần hóa học rễ Đinh Lăng Lá Răng, khảo sát khả gắn kết enzyme Phosphodiesterase 5, nghiên cứu khảo sát thành phần định tính sắc ký lớp mỏng, khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa Đinh Lăng Lá Răng [19] 2.2 Tình hình nghiên cứu ngồi nước: - Năm 1990, Joseph J Brophy nghiên cứu thành phần tinh dầu Đinh lăng Thái Lan, kết cho thấy tinh dầu có 24 cấu tử có cấu tử là: β-elemen, α-beharmoten, germacgen-D E-γ bisabolene [20] - Năm 1992, Lutomski J tiến hành nghiên cứu hợp chất polyacetylen (8E)-heptadeca-1,8-dien-4,6-diyn-3,10-diol phân lập từ Đinh Lăng cho thấy có hoạt tính kháng vi khuẩn Gram dương, kháng nấm Candida albican không kháng vi khuẩn Gram âm [21] - Năm 1996, Chaboud A cộng cô lập từ khô Đinh lăng, saponin triterpen là: Acid 3-O-[α-rhamnopirannosyl-(1-4)-β-Dglucopyranosyl]-[28-O-β-D glucopyranosyl leanolic [22] - Vào năm 1998, Võ Duy Huấn cộng tiến hành phân lập 11 saponin triterpene từ rễ Đinh lăng: tám saponin acid oleanolic có tên polysciosides A đến H phân lập với ba saponin biết Các cấu trúc saponin thiết lập phương tiện liệu quang phổ, đặc biệt NMR, bao gồm kỹ thuật COZY, HSQC, HMBC NOESY [23] - Đến năm 1999, báo đăng tạp chí Ancient Science of Life, M.B Bensita cộng công bố khả kháng khuẩn hợp chất polyacetylen Đinh lăng Khả kháng khuẩn hợp chất mạnh saponin Cũng nghiên cứu này, tác giả cho thấy khả chống trầm cảm saponin từ rễ Đinh lăng [24] - Năm 2005, M.C.Divakar cộng phân lập xác định thành công hai glycoside triterpene từ rễ Đinh lăng Các cấu trúc phân lập phương pháp hóa học, quang phổ sắc ký Các nghiên cứu cho thấy hai hợp chất tạo kích thích miễn dịch đáng kể so với chiết thô [25] - Năm 2007, Masruri tiến hành nghiên cứu chiết saponin rễ Đinh lăng dung môi methanol, diethyl ete, n-butanol Sau thực phân tích TLC kết hợp sử dụng dung môi cloroform/metanol/nước với tỷ lệ 20:60:10 kết cho thấy có xuất oleanane, oleanene, triterpenoid Sau tiến hành phân tích quang phổ IR 1H-NMR [26] Nghiên cứu đưa khả chiết saponin dung môi mà chưa thử nghiệm dung môi ethanol 10 Giảm nguy ung thư: Các nghiên cứu saponin có tính chống ung thư chống gây đột biến tế bào, giảm nguy ung thư người, cách ngăn chặn tế bào ung thư phát triển Saponin dường để phản ứng với tế bào giàu cholesterol tế bào ung thư Do hạn chế tăng trưởng khả tồn tế bào Ngoài ra, nhà nghiên cứu cịn phát saponin giúp ngăn ngừa ung thư ruột kết Một số nghiên cứu saponin gây apoptosis bệnh bạch cầu tế bào cách gây phân bào tế bào gây ung thư Tăng cường khả miễn dịch: Các saponin chống lại nhiễm trùng ký sinh trùng Trong hệ tiêu hóa người, saponin giúp hệ thống miễn dịch chống lại bảo vệ vi khuẩn, virus xâm nhập thể Chất chống oxy hóa: Phần khơng đường saponin hoạt động trực tiếp chất chống oxy hóa, giúp làm giảm nguy mắc bệnh ung thư tim mạch Giảm nguy ung thư đại tràng: Các chế tương tự mà Saponin có thể làm giảm cholesterol – liên kết với acid mật – thực làm giảm nguy ung thư ruột kết Theo Viện Linus Pauling, số acid mật thứ cấp thúc đẩy ung thư ruột kết Vi khuẩn ruột sản xuất acid mật thứ cấp từ acid mật Bằng cách gắn vào acid mật chính, saponin làm giảm lượng acid mật thứ cấp mà vi khuẩn đường ruột sản xuất, làm giảm nguy ung thư ruột kết 5.2 Phạm vi nghiên cứu: Phạm vi nghiên cứu phịng thí nghiệm, thời gian từ 1/2022- 1/2023, thực nghiên cứu phịng thí nghiệm Trường Đại học Trà Vinh Phương pháp nghiên cứu, kỹ thuật sử dụng: 6.1 Định lượng hàm lượng Saponin tổng cao chiết củ Đinh lăng phương pháp UV-Vis Bảng 6.1 Dụng cụ, thiết bị hóa chất sử dụng STT Dụng cụ, thiết bị sử dụng Hóa chất Máy đo quang phổ UV – 1800 Ethanol Shimazu Cân phân tích 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) Acid oleanolic Bếp cách thủy Ascorbic acid (Meck) Máy nghiền mẫu Vanillin Bình hút ẩm Acid acetic Máy lọc chân không Acid perchloric Bể siêu âm Hydrochloric acid (HCl) Bếp khuấy từ, gia nhiệt Phosphoric acid Máy ly tâm Nước deion 10 Máy ly tâm Diễn giải: 15 Mục tiêu: Định lượng phương pháp đo quang có nhiều ưu điểm tiến hành nhanh, sử dụng phổ biến phân tích hoạt chất dược liệu Đối với saponin, cần tiến hành phản ứng màu với thuốc thử, sản phẩm tạo thành có khả hấp thụ vùng ánh sáng khả kiến Đo độ hấp thụ dung dịch thử so sánh với chuẩn, tính hàm lượng saponin tồn phần Đối với nhóm triterpenoid dùng thuốc thử vanillin-sulfuric acid perchloric, saponin cho màu tím với thuốc thử Bố trí thí nghiệm: Sử dụng thuốc thử vanilin acid acetic băng 5% acid perchloric 70% Hỗn hợp ủ 60ºC 15 phút Làm lạnh nhanh nước đá Đo độ hấp thụ bước sóng 550nm Tính kết saponin tồn phần dựa vào phương trình đường chuẩn Phương pháp thực Dung dịch chuẩn: Lấy xác khoảng 5,0mg chất chuẩn acid oleanolic pha ethanol tuyệt đối vừa đủ 50mL thu dung dịch chuẩn có nồng độ 0,1mg/mL Chuẩn bị thuốc thử vanillin acid acetic băng 50mg/mL: Cân 0,5g vanillin tinh thể pha acid acetic băng vừa đủ 10mL thu thuốc thử có nồng độ 50mg/mL Dung dịch thử: Cân xác khoảng 5,0mg cắn pha ethanol 96 vừa đủ 10mL thu dung dịch thử có nồng độ 0,5mg/mL Chuẩn bị bình định mức dung tích 10mL Hút xác 1mL dung dịch thử, cho vào bình 0,6mL thuốc thử vanillin/acid acetic băng, 1mL thuốc thử acid perchloric ủ 70C 20 phút Sau làm lạnh nhanh cốc nước đá thêm dung dịch acid acetic băng đến vạch Lắc Mẫu trắng acid acetic băng chuẩn bị song song Sau đó, tiến hành đo quang phổ UV-Vis với bước sóng 550nm Chất chuẩn vitamin C pha với ethanol 96o, bình định mức 10mL, để bóng tối 6.2 Xây dựng quy trình ly trích saponin tổng củ Đinh Lăng từ đưa quy trình ly trích tối ưu Hình Cây Đinh lăng nhỏ Hình Củ Đinh lăng nhỏ Diễn giải: Bố trí thí nghiệm: Nguyên liệu rễ Đinh lăng nhỏ có độ tuổi từ 3-5 năm 16 mua Trà Vinh Sau mẫu rửa sạch, loại bỏ phần sâu bệnh phơi khô nhiệt độ phòng sấy tủ sấy 40C, tránh tiếp xúc trực tiếp với ánh nắng mặt trời gay gắt tia tử ngoại (UV) có ánh sáng mặt trời kích thích phản ứng hóa học, tạo nên hợp chất không mong muốn Tiến hành xay thành bột dược liệu để ứng dụng cho nghiên cứu Hình Củ Đinh lăng sau xử lý sơ Hình Củ Đinh Lăng xử lý thành bột Sử dụng phương pháp ngâm dầm nhiệt độ phòng Bột mịn rễ Đinh lăng ngâm dầm dung môi ethanol 96 o Sau lọc lấy dịch chiết, thu hồi dung môi Tiếp tục thực nhiều lần lượng cao thu không đáng kể Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết saponin tổng từ củ Đinh lăng 6.2.1 Khảo sát ảnh hưởng dung môi chiết Bảng 6.2: Khảo sát ảnh hưởng dung môi chiết TT Phương pháp chiết Ngâm dầm Tỷ lệ rắn-lỏng (g/mL) Thời gian (giờ) 1/10 Nhiệt độ (°C) Dung môi 30 Nước Ethanol 20% Ethanol 40% Ethanol 60% Ethanol 80% Ethanol 100% Củ Đinh Lăng mua Trà Vinh, sau xử lý thực theo quy trình chiết cao, tiến hành khảo sát ảnh hưởng dung mơi đến q trình chiết cao Thực phương pháp chiết ngâm dầm, với tỷ lệ rắn lỏng: 1/10 (g/mL), thời gian chiết 4(giờ), nhiệt độ chiết 30ºC, khảo sát với dung môi khác nhau: nước, ethanol 20%, ethanol 40%, ethanol 60%, ethanol 80%, ethanol 100% 17 Chỉ tiêu đánh giá trình khảo sát quy trình chiết Định tính saponin cao chiết rễ Đinh lăng Trước kết khảo sát ta thực định tính saponin tổng để kiểm tra có saponin tổng hay khơng Lấy 10 giọt dịch chiết đậm đặc cho vào ống nghiệm có sẵn 10mL nước cất Sau dùng ngón tay bịt miệng ống nghiệm lắc mạnh theo chiều đứng ống nghiệm phút (30 lần lắc) Mặt ngăn cách hai lớp có xuất bọt khí bền 30 giây chứng tỏ dịch chiết có chứa saponin Hiệu suất cao thơ Định lượng hàm lượng Saponin tổng cao chiết củ Đinh lăng phương pháp UV-Vis Xây dựng đường chuẩn chuẩn acid oleanolic phương pháp UV-Vis Dựa vào đường chuẩn xác định hàm lượng saponin tổng khảo sát yếu tố để đánh giá 6.2.2 Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ rắn - lỏng Bảng 6.3: Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ rắn - lỏng TT Phương pháp chiết Ngâm dầm Tỷ lệ rắn-lỏng (g/mL) 1/10 1/20 1/30 1/40 1/60 Thời gian (giờ) Nhiệt độ (°C) Dung mơi 30 Dung mơi tối ưu Sau có kết thí nghiệm ta tiến hành lấy dung mơi chiết tối ưu để thực khảo sát yếu tố tỷ lệ rắn - lỏng Ta cố định yếu tố dung môi chiết, nhiệt độ chiết, thời gian chiết, phương pháp chiết thay đổi tỷ lệ rắn - lỏng từ 1/10, 1/20, 1/30, 1/40 1/60 Chỉ tiêu đánh giá trình khảo sát quy trình chiết Định tính saponin cao chiết rễ Đinh lăng Hiệu suất cao thô Định lượng hàm lượng Saponin tổng cao chiết củ Đinh lăng phương pháp UV-Vis 18 6.2.3 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ chiết Bảng 6.4: Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ chiết TT Phương pháp chiết Tỷ lệ rắn-lỏng (g/mL) Thời gian (giờ) 4 Ngâm dầm Tỷ lệ rắn lỏng tối ưu Nhiệt độ (°C) 30 40 50 60 80 Dung mơi Dung mơi tối ưu Sau có kết thí nghiệm ta tiến hành lấy dung mơi chiết tối ưu tỷ lệ rắn - lỏng tối ưu để thực khảo sát yếu tố nhiệt độ chiết Ta cố định yếu tố tỷ lệ rắn - lỏng, dung môi chiết, phương pháp chiết, thời gian chiết số lần chiết thay đổi nhiệt độ chiết từ 30; 40; 50; 60 đến 80 0C Chỉ tiêu đánh giá trình khảo sát quy trình chiết Định tính saponin cao chiết rễ Đinh lăng Hiệu suất cao thô Định lượng hàm lượng Saponin tổng cao chiết củ Đinh lăng phương pháp UV-Vis 6.2.4 Khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết Bảng 6.5: Khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết TT Phương pháp chiết Tỷ lệ rắn-lỏng (g/mL) Ngâm dầm Tỷ lệ rắn lỏng tối ưu Thời gian (giờ) Nhiệt độ (°C) Dung môi Nhiệt độ tối ưu Dung mơi tối ưu Sau có kết thí nghiệm ta tiến hành lấy dung môi tối ưu, tỷ lệ rắn - lỏng tối ưu để thực khảo sát yếu tố thời gian chiết Ta cố định yếu tố dung môi chiết, tỷ lệ rắn - lỏng, thời gian chiết, phương pháp chiết thay đổi yếu tố thời gian chiết: 3; 4; 5; 6; Chỉ tiêu đánh giá trình khảo sát quy trình chiết Định tính saponin cao chiết rễ Đinh lăng Hiệu suất cao thô Định lượng hàm lượng Saponin tổng cao chiết củ Đinh lăng phương pháp UV-Vis 6.2.5 Khảo sát ảnh hưởng phương pháp chiết Sau có kết thí nghiệm ta tiến hành lấy dung môi tối ưu, tỷ lệ rắn - lỏng tối ưu, nhiệt độ tối ưu thời gian tối ưu Ta cố định yếu tố dung môi chiết, tỷ lệ rắn - lỏng, thời gian chiết, nhiệt độ chiết thay đổi phương pháp chiết: phương pháp ngâm dầm, phương 19 pháp ngâm có kết hợp siêu âm Chỉ tiêu đánh giá trình khảo sát quy trình chiết Định tính saponin cao chiết rễ Đinh lăng Hiệu suất cao thô Định lượng hàm lượng Saponin tổng cao chiết củ Đinh lăng phương pháp UV-Vis 6.3 Định lượng saponin tổng quy trình chiết tối ưu phương pháp UV-Vis Sau thu quy trình chiết saponin tối ưu, ta tiến hành thực lại quy trình chiết tối ưu với điều kiện chiết tối ưu để xác định hàm lượng saponin tổng củ Đinh lăng 6.4 Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa cao chiết củ Đinh lăng phương pháp DPPH Sau xác định hàm lượng saponin tổng củ Đinh lăng quy trình ly trích tối ưu, ta thực lại thơng số tối ưu khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa phương pháp DPPH Theo phương pháp DPPH (C18H12N5O6): 1,1-dipheny-l-2-picrylhydrazyl có khả tạo gốc tự bền bên dung dịch ethanol bão hòa Khi mẫu thử nghiệm cho vào hỗn hợp này, mẫu trung hịa bao vây gốc tự giảm độ hấp thụ ánh sáng gốc tự Hoạt tính kháng oxy hóa đánh giá thông qua giá trị hấp thụ ánh sáng thí nghiệm so với đối chứng so màu bước sóng 515nm Khả kháng oxy hóa cao chiết rễ Đinh lăng thực sau: cao chiết pha thành nồng độ khác nhau: 20, 40, 60, 80, 100ppm ethanol 0,2mL DPPH (mỗi nồng độ thực lặp lại lần) Dung dịch mẫu để ổn định bóng tối nhiệt độ phịng 37 phút Sau tiến hành đo UV-Vis với bước sóng 515nm Chất chuẩn vitamin C pha với ethanol 96o, bình định mức 10mL, để bóng tối (C = 10ppm) Với: AB độ hấp thu mẫu trắng AS: độ hấp thu mẫu Tình trạng đề tài, phương án phối hợp: 7.1 Tình trạng đề tài: Mới: Kế tiếp đề tài kết thúc giai đoạn trước 7.2 Phương án phối hợp với đối tác bên Trường: Không 20