Bài giảng Thực hành sinh lý người và động vật

10/3/2022 TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦY LỢI MÔN SINH LÝ HỌC NGƯỜI VÀ ĐỘNG VẬT Bài An tồn phịng thí nghiệm Giảng viên: TS.NCVC Nguyễn Văn Hạnh Viện Công nghệ sinh học, Viện HL KHCN Việt Nam Đt: 0399939245, email: vanhanhnguyenbio@gmail.com Hà Nội 2022 MỤC TIÊU HỌC TẬP Sau học, học viên có khả năng: Trình bày ngun tắc an tồn PTN Trình bày thực số kỹ thuật sử dụng thiết bị/dụng cụ PTN 10/3/2022 NỘI DUNG BÀI GIẢNG An tồn phịng thí nghiệm o o o An tồn sinh học PTN An tồn hóa chất, cháy nổ PTN Các mối nguy khác Nội quy phịng thí nghiệm Một số kỹ thuật phịng thí nghiệm o o o o o o Sử dụng cân phân tích Pha chuẩn bị mơi trường Sử dụng pipet Sử dụng dụng cụ thủy tinh Sử dụng nồi khử trùng Sử dụng tủ nuôi cấy AN TỒN PHỊNG THÍ NGHIỆM 10/3/2022 AN TỒN SINH HỌC PTN An toàn sinh học: -Thao tác an toàn vật liệu sinh học, tác nhân truyền nhiễm -Những nguyên tắc phòng ngừa, kỹ thuật thực hành để ngăn chặn phơi nhiễm không mong muốn với tác nhân gây bệnh độc chất, vơ tình làm thất thốt/phát tán chúng Biosafety is the safe working practices associated with handling of biological materials, particularly infectious agents It addresses containment principles, technologies and practices that are implemented to prevent the unintentional exposure to pathogens and toxins, or their accidental release http://www.emro.who.int/health-topics/biosafety/ 10/3/2022 AN TOÀN SINH HỌC PTN - Nguy từ mẫu kiểm nghiệm, mẫu nghiên cứu, mẫu bệnh phẩm: o o o o Vi khuẩn Virus Ký sinh trùng Động vật thí nghiệm Nhóm nguy Phịng thí nghiệm AN TỒN SINH HỌC PTN Mối liên quan nhóm nguy với cấp độ, tiêu chuẩn thực hành trang thiết bị an toàn sinh học Tài liệu: Cẩm nang ATSH PTN – WHO - 2004 10/3/2022 AN TỒN HĨA CHẤT CHÁY, NỔ PTN Nguy hóa học: - Hóa chất gây cháy, nổ - Phản ứng hóa chât nhầm - Hóa chất độc - Hóa chất dễ bay Phơi nhiễm với hóa chất nguy hiểm: - Hít phải Tiếp xúc Nuốt phải Bị kim châm Bị thâm nhập qua vùng da hở Never taste, smell, or touch chemicals AN TỒN HĨA CHẤT CHÁY, NỔ PTN Quy định chung với hóa chất kỵ Tài liệu: Cẩm nang ATSH PTN – WHO - 2004 10/3/2022 AN TỒN HĨA CHẤT CHÁY, NỔ PTN Các loại bình cứu hỏa cách sử dụng Tài liệu: Cẩm nang ATSH PTN – WHO - 2004 AN TỒN HĨA CHẤT CHÁY, NỔ PTN 10/3/2022 AN TỒN HĨA CHẤT CHÁY, NỔ PTN CÁC MỐI NGUY KHÁC - Điện Thiết bị điện nối đất, nối mát (ổ phích chạc) - Tiếng ồn - Tia phóng xạ - Vật dụng sắc nhọn, thủy tinh dễ vỡ 10/3/2022 Một số biểu tượng cảnh báo nguy hiểm PTN NỘI QUY PHỊNG THÍ NGHIỆM 10/3/2022 NỘI QUY PHỊNG THÍ NGHIỆM BẠN KHƠNG NÊN… 10/3/2022 BẠN NÊN… -Mang đồ bảo hộ: găng tay, kính, trang, mũ chùm đầu, áo blouse - Cột gọn tóc phía sau - Đi giầy/dép kín bàn chân - Mặc đồ dài, gọn gàng Tuân thủ nội quy PTN KHI CÓ VẤN ĐỀ XẢY RA TRONG PTN? - Cháy, nổ hóa chất - Đổ hóa chất, chất bẩn - Đổ vỡ dụng cụ thủy tinh - Vật sắc nhọn cắt … Xử lý báo cho cán phụ trách PTN 10 Các bước tiến hành đếm nhịp tim Thời gian bắt mạch: Thường bắt mạch vào buổi sáng chiều Để bệnh nhân nghỉ ngơi 15 phút trước bắt mạch Vị trí bắt mạch: Người ta thường bắt mạch động mạch quay, bắt bên đối xứng Khi cần bắt mạch động mạch cánh tay, thái dương, bẹn, mu chân, khoeo v.v… Các bước tiến hành đếm nhịp tim Cách bắt mạch: Dùng ngón tay 2, 3, (ngón trỏ, giữa, ngón đeo nhẫn) đặt lên da vùng rãnh quay, ngón tay bắt mạch ấn q nhẹ khơng nhận cảm giác gì, cần phải nhấn mạnh để thắng áp lực thành động mạch ta bắt mạch Đếm số lần mạch đập phút Nhận định tính chất mạch: Đều hay không đều, mạnh hay yếu, nhanh hay chậm độ căng mạch Phân tích kết Đếm số lần mạch đập phút Nhận định tính chất mạch: Đều hay khơng đều, mạnh hay yếu, nhanh hay chậm độ căng mạch Tác động vận động lên huyết áp tim mạch TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦY LỢI MÔN SINH LÝ HỌC NGƯỜI VÀ ĐỘNG VẬT Bài Sinh lý hô hấp Giảng viên: TS.NCVC Nguyễn Văn Hạnh Viện Công nghệ sinh học, Viện HL KHCN Việt Nam Đt: 0399939245, email: vanhanhnguyenbio@gmail.com Hà Nội 2022 Mục tiêu sau học xong sinh viên có thể: Vẽ hơ hấp đồ trình bày thơng số hơ hấp Trình bày ngun lý hoạt động máy phế lưu tích phân Thực kỹ thuật đo hô hấp ký thông thường Phân tích kết hơ hấp ký Trình bày ứng dụng đo hô hấp ký NGUYÊN TẮC Hô hấp ký phương pháp ghi lại thay đổi thể tích, dung tích, lưu lượng phổi hơ hấp bình thường gắng sức Đây kỹ thuật thăm dò chức nhằm đánh giá giai đoạn thơng khí phổi hoạt động hơ hấp Thơng khí phổi q trình trao đổi khí phế nang khí trời Hoạt động thơng khí phổi thực nhờ vai trò lồng ngực, hơ hấp, màng phổi, phổi đường dẫn khí Các thông số hấp hấp bao gồm: 1.1 Các thông số đánh giá khả chứa đựng phổi Các thông số đánh giá khả chứa đựng phổi thơng số thể tích dung tích (theo qui ước hơ hấp có từ thể tích trở lên cộng lại với gọi dung tích) Nhóm thơng số có đơn vị lít Các thơng số hấp hấp bao gồm: Nhóm thơng số thể tích (V: volume) - Vt (thể tích khí lưu thơng): thể tích khí hít vào thở bình thường - IRV (thể tích khí dự trữ hít vào): thể tích khí hít vào sau hít vào bình thường - ERV (thể tích khí dự trữ thở ra): thể tích khí thở sau thở bình thường - RV (thể tích khí cặn): thể tích khí cịn lại phổi sau thở Các thông số hấp hấp bao gồm: Nhóm thơng số dung tích (C: capacity) - IC (dung tích hít vào): thể tích khí hít vào - FRC (dung tích cặn chức năng): thể tích khí cịn lại phổi sau thở bình thường - VC (dung tích sống): thể tích khí hít vào thở VC tăng nhờ luyện tập, giảm nhiều số bệnh phổi bệnh lồng ngực như: tràn dịch màng phổi, u phổi, gù vẹo cột sống Trong thăm dị chức thơng khí phổi, VC giảm 20% so với số lý thuyết trở nên coi giảm VC bệnh lý Các thông số hấp hấp bao gồm: Nhóm thơng số dung tích (C: capacity) Có dạng: + SVC=VC: dung tích sống thở chậm + FVC (dung tích sống thở mạnh): hít vào thở nhanh, mạnh + IVC (dung tích sống hít vào): thở hít vào - TLC (dung tích tồn phổi): khả chứa đựng tối đa phổi Các thông số hấp hấp bao gồm: Các thông số đánh giá thơng thống đường dẫn khí Các thơng số đánh giá thơng thống đường dẫn khí thông số lưu lượng (F: flow) với đơn vị lít/s số thơng số khác Các thơng số có tính đến kháng lực đường dẫn khí - FEV1 (VEMS): thể tích khí thở tối đa giây sau hít vào FEV1 đánh giá mức độ thơng thống đường dẫn khí khả giãn nở phổi, FEV1 giảm số bệnh gây thắt hẹp đường dẫn khí đặc biệt bệnh hen phế quản Các thông số hấp hấp bao gồm: Các thông số đánh giá thơng thống đường dẫn khí - Chỉ số Tiffeneau: tỷ lệ phần trăm FEV1 so với VC Bình thường khoảng 70% Chỉ số Tiffeneau đánh giá mức độ chun giãn phổi, lồng ngực, hồnh, mức độ thơng thống đường dẫn khí Chỉ số Tiffeneau = FEV1/VC x 100 (Chỉ số Gaensler = FEV1/FVC x 100) Các thông số hấp hấp bao gồm: Các thơng số đánh giá thơng thống đường dẫn khí Ở người bình thường, FVC xấp xỉ VC nên số Gaensler xấp xỉ số Tiffeneau - MMEF (FEF25-75%) - PEF (lưu lượng đỉnh) - MEF75, MEF50, MEF25 (hay FEF25, FEF50, FEF75) - MVV (thơng khí phút tối đa) Chuẩn bị dụng cụ - - Máy phế lưu tích phân (Spiroanalyser ST- 95) - Giấy ghi hô hấp đồ: giấy nhiệt với khổ giấy phù hợp cho tưng loại máy - Ống thở: sử dụng lần tái sử dụng - Nose clips: kẹp mũi - Nhiệt kế phòng - Cân thước đo chiều cao Các bước tiến hành Đánh giá nhóm máu - Là lấy lam kính có kí hiệu A B sau ngón tay khử trùng cồn trích lấy máu, trích xong lặn giọt máu bỏ , lặn lấy máu giọt vào lam kính kí hiệu B, giọt cho vào lam kính kí hiệu A, dùng đũa lấy huyết vào antiB, antiA ( đũa không dùng chung ) khuấy đẻ thời gian ta quan sát Các bước tiến hành Đánh giá thời gian đơng máu - Sát trùng, chích máu đầu ngón tay đeo nhẫn - Cho máu chảy hai phiến kính, phiến kính giọt có đường kính 1cm, bấm đồng hồ máu chảy Đặt phiến kính thứ ngồi Đặt phiến kính thứ vào hộp petri Sau hai phút bắt đầu nghiêng nhẹ phiến kính thứ góc 45o xem giọt máu đơng chưa; sau 30 giây nghiêng lần máu đông (giọt máu khơng thay đổi hình dạng nghiêng phiến kính) Tiếp tục xem phiến kính thứ hai máu đông Bấm đồng hồ dừng lại Thời gian đông máu tính máu đơng phiến kính hai Đánh giá phân tích kết - Sau thời gian quan sát anti mà ngưng kết nhóm máu B - Nếu hai khơng ngưng kết nhóm máu O - Nếu ngưng kết giọt ba (AntiA) nhóm máu A - Nếu hai huyết ngưng kết nhóm máu AB TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦY LỢI MÔN SINH LÝ HỌC NGƯỜI VÀ ĐỘNG VẬT Bài Phản xạ tủy Giảng viên: TS.NCVC Nguyễn Văn Hạnh Viện Công nghệ sinh học, Viện HL KHCN Việt Nam Đt: 0399939245, email: vanhanhnguyenbio@gmail.com Hà Nội 2022 Mục tiêu sau học xong sinh viên có thể: Trình bày thành phần cung phản xạ, qui luật phản xạ tủy sống thời gian phản xạ Chứng minh phản xạ xảy thành phần cung phản xạ nguyên vẹn mặt giải phẫu sinh lý Mơ tả giải thích biểu ếch bị kích thích H2SO4 nồng độ khác NGUYÊN TẮC Tủy sống phận hệ thần kinh trung ương nằm ống xương sống, chi phối nhiều phản xạ gọi phản xạ tủy đồng thời phận dẫn truyền xung động thần kinh NGUYÊN TẮC NGUYÊN TẮC Thí nghiệm tạo ếch tủy gây phản xạ co gấp chân kích thích H2SO4 Phá hủy phần cung phản xạ để chứng minh vai trị thành phần thí nghiệm với nồng độ H2SO4 tăng dần để đánh giá qui luật phản xạ tủy thời gian phản xạ tủy Chuẩn bị dụng cụ - ếch - Bộ tiểu phẫu: dao, kéo, kẹp sonde lòng máng - Giá treo cóc, chậu đựng nước, bơng, giấy thấm - Dung dịch H2SO4 HCl pha lỗng có nồng độ tăng dần - Ether novocain, nước - Kim nhọn, Các bước tiến hành Chuẩn bị động vật thí nghiệm - Tạo ếch tủy: cắt bỏ hàm ngang phía sau hai mắt - Treo cóc lên giá tư thẳng đứng Rửa lớp nhờn hai chân ếch Chờ cho hết choáng tủy - Xác định ngưỡng kích thích cách nhúng chân ếch vào dung dịch H2SO4 nồng độ tăng dần xuất phản xạ co gấp chân Các bước tiến hành Thí nghiệm 1: chứng minh vai trị thành phần cung phản xạ - Loại bỏ phận nhận cảm cách lột da chân ếch, thử lại phản xạ co gấp chân cách nhúng chân vào dung dịch H2SO4 nồng độ ngưỡng - Loại bỏ đường dẫn truyền hướng tâm ly tâm: + Bộc lộ dây thần kinh đùi Dùng tẩm novocain đặt vào dây thần kinh đùi + Thử lại phản xạ co gấp chân cách nhúng chân vào dung dịch H2SO4 nồng độ ngưỡng Các bước tiến hành Thí nghiệm 1: chứng minh vai trị thành phần cung phản xạ + Khi thấy phản xạ không xảy ra, dùng tẩm novocain đặt lên da lưng ếch, quan sát thấy chân ếch lại co + Một lát sau, tiếp tục dùng tẩm novocain đặt lên da lưng ếch, quan sát thấy chân ếch không co - Loại bỏ trung tâm phản xạ cách dùng kim hủy tủy, thử lại phản xạ co gấp chân H2SO4 nồng độ ngưỡng Các tiêu yêu cầu quan sát: Quan sát xuất phản xạ co gấp chân ếch phá hủy phần cung phản xạ Các bước tiến hành Thí nghiệm 2: qui luật phản xạ tủy Thực nghiệm: - Kích thích chân sau cóc dung dịch H2SO4 hay HCl pha loãng nồng độ ngưỡng tăng dần - Sau lần nhúng, rửa lại chân cóc nước lau khơ * Các tiêu yêu cầu quan sát: Quan sát so sánh đáp ứng cóc nồng độ H2SO4 khác từ nhận biết qui luật phả xạ tủy Các bước tiến hành Thí nghiệm 3: thời gian phản xạ tủy * Thực nghiệm: - Kích thích chân sau ếch dung dịch H2SO4 hay HCl pha loãng nồng độ ngưỡng tăng dần Ở nồng độ kích thích làm lần, lần cách phút Sau lần nhúng, rửa lại chân ếch nước lau khô - Dùng đồng hồ bấm giây để xác định thời gian từ lúc kích thích đến lúc có đáp ứng * Các tiêu yêu cầu quan sát: Quan sát so sánh thời gian đáp ứng cóc nồng độ H2SO4 khác từ nhận biết thời gian phả xạ tủy