BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGUYỄN HẢI HÒA ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP VÀ BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA VIÊN NANG NHẤT GAN LINH TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QN Y NGUYỄN HẢI HỊA ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP VÀ BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA VIÊN NANG NHẤT GAN LINH TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC HÀ NỘI – 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGUYỄN HẢI HỊA ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP VÀ BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA VIÊN NANG NHẤT GAN LINH TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC Cán hướng dẫn: PGS.TS Chử Văn Mến HÀ NỘI – 2022 LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập nghiên cứu trường Học viện Qn y, tơi may mắn thực khóa luận tốt nghiệp Bộ mơn Dược lý Để hồn thành khóa luận này, ngồi cố gắng nỗ lực thân, nhận giúp đỡ từ thầy cơ, gia đình bạn bè Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới: PGS.TS Chử Văn Mến, người trực tiếp hướng dẫn, tận tình dạy bảo, giúp đỡ truyền đạt kinh nghiệm quý báu cho suốt q trình thực khóa luận Sự nhiệt huyết, quan tâm, động viên thầy động lực, hành trang giúp bước tiếp đường tương lai Tôi xin bày tỏ lịng biết ơn tới tồn thể thầy, giáo, anh chị kỹ thuật viên môn Dược lý nhiệt tình giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu Với tất lịng kính trọng, tơi xin chân thành cảm ơn tới tồn thể thầy hội đồng thông qua đề cương, hội đồng chấm điểm khóa luận đóng góp nhiều ý kiến quý báu để tơi hồn chỉnh khóa luận Cuối cùng, tơi xin cảm ơn bày tỏ lịng kính yêu tới bố mẹ, người thân gia đình, bạn bè ln bên giúp đỡ, động viên, cổ vũ, khuyến khích tơi suốt năm năm học, thời gian tơi thực khóa luận Hà Nội, ngày 10 tháng năm 2022 Học viên Nguyễn Hải Hịa MỤC LỤC TRANG PHỤ BÌA LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, BIỂU ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG - TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ BÀI THUỐC NHẤT GAN LINH TRONG ĐIỀU TRỊ XƠ GAN 1.1.1 Căn xây dựng thuốc 1.1.2 Tác dụng thuốc 1.1.3 Những vị thuốc thuốc 1.2 TỔNG QUAN VỀ CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐỘC TÍNH 16 CỦA THUỐC 1.2.1 Phương pháp xác định độc tính cấp thuốc 16 1.2.2 Phương pháp xác định độc tính độc tính bán trường diễn 19 CHƯƠNG – NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN 23 CỨU 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 23 2.1.1 Chế phẩm nghiên cứu 23 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 23 2.1.3 Thiết bị dụng cụ 23 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.2.1 Độc tính cấp 24 2.2.2 Độc tính bán trường diễn 25 2.2.3 Xử lý số liệu 28 CHƯƠNG – KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 28 3.1 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VỀ ĐỘC TÍNH CẤP 29 3.1.1 Kết theo dõi, đánh giá số chuột chết lơ vịng 72 29 sau uống viên nang 3.1.2 Kết theo dõi, đánh giá tình trạng chung chuột lơ 29 thời gian sau 72 hết ngày sau uống thuốc 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VỀ ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN 33 3.2.1 Tình trạng chung 33 3.2.2 Sự thay đổi thể trọng chuột 33 3.2.3 Ảnh hưởng viên nang Nhất gan linh số tiêu huyết học chuột 33 3.2.4 Ảnh hưởng viên nang Nhất gan linh số tiêu sinh hóa chuột 35 3.2.5 Kết mơ bệnh học tạng chuột thí nghiệm 36 CHƯƠNG – BÀN LUẬN 38 4.1 VỀ ĐỘC TÍNH CẤP 38 4.2 VỀ ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN 38 4.2.1 Tình trạng chung thay đổi thể trọng 39 4.2.2 Ảnh hưởng viên nang Nhất gan linh đến chức tạo máu 39 4.2.3 Ảnh hưởng viên nang Nhất gan linh đến chức gan 40 4.2.4 Ảnh hưởng viên nang Nhất gan linh đến chức thận 40 KẾT LUẬN 42 KIẾN NGHỊ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Viết đầy đủ TT Viết tắt ALT Alanin transaminase AST Aspartat transaminase EDTA Hb Hemoglobin (Huyết sắc tố) HE Hematoxylin Eosin Ethylen diamin tetra acetic acid (Phương pháp nhuộm Hematoxylin Eosin) ICH International Conference on Harmonization (Hội nghị quốc tế hài hịa hóa thủ tục đăng ký dược phẩm sử dụng cho người) LD50 Lethal dose 50% ( Liều gây chết 50% động vật thí nghiệm) OECD Organisation for Economic Co-operation and Development (Tổ chức Hợp tác Phát triển Kinh tế) SPSS Statistical Package for the Social Sciences (Ứng dụng phân tích liệu khoa học) 10 YHCT Y học cổ truyền 11 WHO World Health Organization (Tổ chức Y tế Thế giới) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 1.1 Thành phần thuốc Nhất gan linh 1.2 Kết đánh giá số chuột chết lơ vịng 72 sau uống viên nang 28 3.2 Tỷ lệ chuột có bất thường vận động tự động 28 3.3 Tỷ lệ chuột có biểu co giật, run, tăng tiết mồ hơi, tím tái 30 3.4 Tỷ lệ chuột có biểu hiên rối loạn tiêu hóa 31 3.5 Ảnh hưởng viên nang với thể trọng chuột 32 3.6 Ảnh hưởng viên nang số tiêu huyết học chuột 33 3.7 Nồng độ AST, ALT, Creatinin Ure lô chuột 36 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ Tên hình vẽ, sơ đồ Hình Trang 1.1 Sa sâm 1.2 Sinh địa 1.3 Đương quy 1.4 Xuyên luyện tử 1.5 Nấm Trư linh 1.6 Bạch linh 1.7 Trạch tả 1.8 Râu ngơ 1.9 Hồng bá 10 1.10 Mẫu đơn bì 11 1.11 Sơn thù du 11 1.12 Chỉ thưc 12 1.13 Sài hồ 13 1.14 Mật nhân 14 1.15 Bạch thược 14 2.1 Bột viên nang Nhất gan linh 23 2.2 Sơ đồ quy trình nghiên cứu độc tính cấp theo phương pháp Litchfield – Wilcoxon 25 2.3 Sơ đồ mơ hình cách tiến hành thử độc tính bán trường diễn 26 3.1 Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột thực nghiệm 39 3.2 Hình ảnh vi thể gan chuột thực nghiệm 39 3.3 Hình ảnh vi thể lách chuột thực nghiệm 40 3.4 Hình ảnh vi thể thận chuột thực nghiệm 40 ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, Việt Nam, xơ gan nguyên nhân gây tử vong đứng hàng thứ 9, gây 14 nghìn ca tử vong Bên cạnh đó, Việt Nam quốc gia nằm phía Tây Thái bình Dương có tỷ lệ nhiễm viêm gan virút cao nhất, ước tính khoảng 8,7 triệu người mắc viêm gan B triệu người mắc viêm gan C mạn tính (năm 2016); đó, tỷ lệ bệnh nhân viêm gan mạn tính chuyển thành xơ gan cao Theo y học cổ truyền, có nhiều thuốc, vị thuốc có tác dụng điều trị chứng bệnh lý liên quan đến xơ gan như: cà gai leo, an xoa, cà gai leo Từ nhu cầu thiết điều trị xơ gan, từ lý luận y học cổ truyền nghiên cứu gần chứng minh tác dụng vị thuốc y học cổ truyền bệnh xơ gan Trong thời gian từ năm 2013 đến năm 2017, Viện Y học cổ truyền Quân đội sử dụng thuốc Nhất gan linh dạng thuốc sắc điều trị cho 86 bệnh nhân xơ gan kết triệu chứng phù, cổ trướng, vàng da…cải thiện rõ rệt, đa số triệu chứng cải thiện 76% Để có sở khoa học cho việc tiếp tục nghiên cứu ứng dụng viên nang Nhất gan linh lâm sàng, địi hỏi phải có đánh giá tiền lâm sàng độc tính tác dụng viên nang Tuy nhiên Việt Nam chưa có nhóm chuyên gia sâu nghiên cứu vấn đề Do đó, tơi tiến hành đề tài: “Đánh giá độc tính cấp bán trường diễn viên nang Nhất gan linh động vật thực nghiệm” Nghiên cứu có mục tiêu chính: Xác định độc tính cấp viên nang Nhất gan linh chuột nhắt trắng Xác định độc tính bán trường diễn viên nang Nhất gan linh chuột cống trắng Bảng 3.2 Tỷ lệ chuột có bất thườg vận động tự động (n=10) Thời điểm nghiên cứu Lô nghiên Chỉ tiêu theo dõi cứu T1 T2 T3 T5 T7 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% Liều Đi lại bình thường 20,0 Co cụm góc lồng 0 0 g/kg Rối loạn vận động 0 0 Liều Đi lại bình thường 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 18,0 Co cụm góc lồng 0 0 g/kg Rối loạn vận động 0 0 Liều Đi lại bình thường 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 16,0 Co cụm góc lồng 0 0 g/kg Rối loạn vận động 0 0 Liều Đi lại bình thường 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 14,0 Co cụm góc lồng 0 0 g/kg Rối loạn vận động 0 0 Liều Đi lại bình thường 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 12,0 Co cụm góc lồng 0 0 g/kg Rối loạn vận động 0 0 Liều Đi lại bình thường 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 10,0 Co cụm góc lồng 0 0 g/kg Rối loạn vận động 0 0 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% Liều g/kg Liều g/kg Vận động bình thường 100,0% Co cụm góc lồng 0 0 Rối loạn vận động 0 0 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% Vận động bình thường 100,0% Co cụm góc lồng 0 0 Rối loạn vận động 0 0 Các chuột tất lô hoạt động, vận động bình thường, khơng có 29 chuột có biểu trạng thái kích thích ức chế thần kinh; khơng có chuột có biểu tổn thương thần kinh vận động Bảng 3.3 Tỷ lệ chuột có biểu co giật, run, tăng tiết mồ hơi, tím tái (n=10) Lơ nghiên cứu Liều 20,0 g/kg Liều 18,0 g/kg Liều 16,0 g/kg Liều 14,0 g/kg Liều 12,0 g/kg Liều 10,0 g/kg Liều 8,0 g/kg Liều 6,0 g/kg Thời điểm nghiên cứu Chỉ tiêu theo dõi T1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Co giật, run Tăng tiết mồ Tím tái Co giật, run Tăng tiết mồ Tím tái Co giật, run Tăng tiết mồ Tím tái Co giật, run Tăng tiết mồ Tím tái Co giật, run Tăng tiết mồ Tím tái Co giật, run Tăng tiết mồ Tím tái Co giật, run Tăng tiết mồ Tím tái Co giật, run Tăng tiết mồ Tím tái T2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 T3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 T5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 T7 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Các chuột tất lơ có tình trạng hơ hấp bình thường, khơng có biểu ảnh hưởng thuốc lên thần kinh thực vật, khơng có chuột có biểu co, giãn đồng tử, ho hay tím tái 30 Bảng 3.4 Tỷ lệ chuột có biểu rối loạn tiêu hóa (n=10) Lơ nghiên cứu Thời điểm nghiên cứu Chỉ tiêu theo dõi T1 T2 T3 T5 T7 0 0 0 0 0 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 0 0 0 0 0 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 0 0 0 0 0 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 0 0 0 0 0 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 0 0 0 0 0 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 0 0 0 0 0 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% Giảm ăn, uống 0 0 Tiêu chảy 0 0 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% Giảm ăn, uống 0 0 Tiêu chảy 0 0 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% Giảm ăn, uống Liều 20 Tiêu chảy g/kg Bình thường Giảm ăn, uống Liều 18 Tiêu chảy g/kg Bình thường Giảm ăn, uống Liều 16 Tiêu chảy g/kg Bình thường Giảm ăn, uống Liều 14 Tiêu chảy g/kg Bình thường Giảm ăn, uống Liều 12 Tiêu chảy g/kg Bình thường Giảm ăn, uống Liều 10 Tiêu chảy g/kg Bình thường Liều g/kg Liều g/kg Bình thường Bình thường Các chuột tất lơ ăn uống bình thường, khơng có biểu việc bỏ ăn khơng có biểu việc ăn uống tăng lên Đồng thời chuột tất lô ngồi bình thường, phân khn, hậu mơn khơ 31 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VỀ ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN 3.2.1 Tình trạng chung Chuột cống trắng theo dõi hàng ngày tình trạng chung gồm hoạt động, ăn uống, tình trạng lơng, da, niêm mạc, chất tiết Các chuột lô chứng lô dùng hỗn hợp viên nang Nhất gan linh hoạt động bình thường Chuột lơng mượt, da, niêm mạc bình thường, ăn uống bình thường, phân thành khn 3.2.2 Sự thay đổi thể trọng chuột ̅ ± SD) Bảng 3.5 Ảnh hưởng viên nang thể trọng chuột (n = 10, 𝒙 Lô chứng (1) Lô trị (2) Lô trị (3) P lô t (a) 188 ± 20,02 192,5 ± 30,88 203,4 ± 18,67 p2−1 > 0,05 t (b) 189,7 ± 20,35 205,2 ± 29,74 206,7 ± 20,97 p3−2 > 0,05 t (c) 190,7 ± 18,51 202,4 ± 29,41 205,3 ± 19,75 p3−1 > 0,05 Thời điểm XN P lô Trọng lượng thể (g) pb,c−a < 0,05, pc−b < 0,05 - So sánh lô chuột nghiên cứu với thời điểm, trọng lượng chuột lơ tương đương, khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p>0,05) - So sánh lô chuột nghiên cứu, trọng lượng chuột thời điểm sau tăng cao so với thời điểm trước, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p 0,05 p3−2 > 0,05 p3−1 > 0,05 p2−1 > 0,05 p3−2 > 0,05 p3−1 > 0,05 p2−1 > 0,05 p3−2 > 0,05 p3−1 > 0,05 p2−1 > 0,05 p3−2 > 0,05 p3−1 > 0,05 p2−1 > 0,05 p3−2 > 0,05 p3−1 > 0,05 p2−1 > 0,05 p3−2 > 0,05 p3−1 > 0,05 pb,c−a > 0,05, pc−b > 0,05 So sánh lô thời điểm thí nghiệm lơ thời điểm, số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết sắc tố, hematocrit, thể tích trung bình 33 hồng cầu, số lượng bạch cầu số lượng tiểu cầu máu chuột thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 3.2.4 Ảnh hưởng viên nang Nhất gan linh chức gan, thận chuột Bảng 3.7 Nồng độ AST, ALT, Creatinin Ure lô chuột ̅ ± SD) (n = 10, 𝒙 Thời điểm Lô chứng (1) Lô trị (2) Lô trị (3) P lô 143,5± 17,06 p2−1 > 0,05 p3−2 > 0,05 p3−1 > 0,05 Hoạt độ AST (UI/L) t (a) 135,2 ± 3,65 t (b) 140,3 ± 22,32 147,6 ± 12,93 155,4 ± 11,74 t (c) 137,9 ± 9,97 140,5 ± 9,16 147,9 ± 13,73 Hoạt độ ALT (UI/L) t (a) 66,1 ± 19,98 61 ± 8,15 68,4 ± 14,13 t (b) 62,9 ± 13,19 59 ± 9,52 64,7 ± 16,01 t (c) 53,7 ± 14,28 54,9 ± 8,48 Creatinin (µmol/L) 59,9 ± 5,9 t (a) 68,7 ± 5,29 69,5 ± 6,31 64,8 ± 6,61 t (b) 70,3 ± 8,12 68,4 ± 5,34 64,2 ± 7,16 t (c) 67,4 ± 6,45 67,9 ± 5,34 Ure (mmol/L) 62,2 ± 6,2 t (a) 3,94 ± 0,61 3,6 ± 1,14 3,57 ± 0,82 t (b) 3,79 ± 0,65 3,54 ± 1,08 4,01 ± 0,67 t (c) 3,81 ± 0,52 4,11 ± 0,31 3,73 ± 0,61 P lô 145,9 ± 16,15 p2−1 > 0,05 p3−2 > 0,05 p3−1 > 0,05 p2−1 > 0,05 p3−2 > 0,05 p3−1 > 0,05 p2−1 > 0,05 p3−2 > 0,05 p3−1 > 0,05 pb,c−a > 0,05, pc−b > 0,05 So sánh lơ thời điểm thí nghiệm lơ thời điểm hoạt độ enzym AST, ALT hàm lượng creatinin, ure máu thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 34 3.2.5 Kết mơ bệnh học tạng chuột thí nghiệm 3.2.5.1 Đại thể mô bệnh học gan, lách thận chuột thí nghiệm (a) (c) (b) Hình 3.1 Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột thực nghiệm (a): lô chứng, (b): lô trị 1, (c): lô trị Hình ảnh đại thể tạng gan, lách, thận chuột lô trị lô trị có màu nâu đỏ thẫm đồng đều, bề mặt nhẵn, khơng có u cục xuất huyết, có đàn hồi ấn xuống, không khác biệt so với hình ảnh gan, lách, thận chuột lơ chứng 3.2.5.2 Vi thể gan, lách thận chuột thí nghiệm (a) (c) (b) Hình 3.2 Hình ảnh vi thể gan chuột thực nghiệm (HE x 400) (a): lô chứng, (b): lơ trị 1, (c): lơ trị Hình ảnh vi thể gan kính hiển vi chuột lô trị lô trị không khác biệt so với hình ảnh vi thể gan chuột lơ chứng Trên hình ảnh khơng thấy ổ xuất huyết hoại tử, thối hóa tế bào gan 35 (a) (b) (c) Hình 3.3 Hình ảnh vi thể lách chuột thực nghiệm (HE x 400) (a): lô chứng, (b): lô trị 1, (c): lơ trị Hình ảnh vi thể lách kính hiển vi lơ trị lơ trị khơng khác biệt so với hình ảnh vi thể lách chuột lơ chứng Trên hình ảnh thấy vùng tủy trắng bắt màu xanh thẫm, tập trung nang lympho lớn Vùng tủy đỏ có màu xanh đỏ, với xoang nang chứa nhiều hồng cầu số đại thực bào; không thấy ổ hoại tử (a) (b) (c) Hình 3.4 Hình ảnh vi thể thận chuột thực nghiệm, (HE x 400) (a): lô chứng, (b): lơ trị 1, (c): lơ trị Hình ảnh vi thể thận kính hiển vi chuột lơ trị lô trị không khác biệt so với hình ảnh vi thể thận chuột lơ chứng Cấu trúc vùng chức thận bình thường 36 CHƯƠNG – BÀN LUẬN 4.1 VỀ ĐỘC TÍNH CẤP Thử độc tính cấp nhằm cung cấp thơng tin cho việc xếp loại mức độ độc thuốc, dự đoán triệu chứng dự kiến biện pháp điều trị ngộ độc cấp, đồng thời làm để thiết lập mức liều cho nghiên cứu (nghiên cứu độc tính dài hạn, nghiên cứu tác dụng dược lý [11] Đối tượng thí nghiệm lựa chọn luận văn chuột nhắt trắng, bao gồm chuột đực chuột cái, kết nghiên cứu bao hàm cho giống với phương pháp lựa chọn thực theo hướng dẫn WHO thuốc có nguồn gốc dược liệu xác định liều chết 50% (LD50) theo phương pháp Litchfield – Wilcoxon Việc theo dõi đánh giá tình trạng chung chuột, số chuột chết lơ địi hỏi phải theo dõi thường xuyên liên tục, tránh việc để sót dấu hiệu bị độc Việc phẫu tích chuột chuẩn bị sẵn sàng để có chuột chết cần phải tiến hành phẫu tích nhằm đánh giá nguyên nhân gây chết chuột Các nguyên nhân gây chết chuột độc tính thuốc gây kích thích thần kinh làm chuột co giật, suy hơ hấp chết; gây suy gan, suy thận; lỏng nhiều gây rối loạn điện giải mà chết; tắc ruột … Trong nghiên cứu độc tính cấp cao khơ thuốc Nhất gan linh, khơng có chuột bị chết nên khơng có ngun nhân kể Kết nghiên cứu độc tính cấp cao khơ Nhất gan linh chuột nhắt trắng cho thấy với mức liều cao cho chuột uống 24 giờ, chuột khỏe mạnh, lông mượt, mắt trong, ăn uống hoạt động bình thường, khơng có chuột chết Việc chưa tìm thấy LD50 viên nang Nhất gan linh theo đường uống chuột nhắt trắng với mức liều cao cho chuột uống 24h 20,0 g/kg, với việc không phát thấy biểu bất thường tình trạng bị độc dùng thuốc liều cao, chứng tỏ cao khơ Nhất gan linh có tính an tồn cao chuột nhắt trắng dù dùng liều tối đa 4.2 VỀ ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN Để đánh giá độc tính thuốc dùng liều lặp lại làm sở để xác định liều thử nghiệm lâm sàng, sử dụng phương pháp Abraham, theo quy định Tổ chức Y tế giới Bộ Y tế hiệu lực an toàn thuốc, để đánh giá cách 37 toàn diện độc tính bán trường diễn viên nang Nhất gan linh Phương pháp giúp đánh giá cách toàn diện độc tính viên nang Nhất gan linh chức cấu trúc quan quan trọng thể tim, gan, thận lách 4.2.1 Tình trạng chung thay đổi thể trọng Tình trạng chung cân nặng động vật thực nghiệm số nghiên cứu bắt buộc theo dõi trước dùng thuốc định kỳ thời gian dùng thuốc [9] Trong suốt thời gian nghiên cứu, chuột lô hoạt động bình thường, lơng mượt, da niêm mạc bình thường, ăn uống bình thường, phân thành khn Bên cạnh tiêu quan sát khả tiêu thụ thức ăn, nước uống, tình trạng phân nước tiểu động vật thực nghiệm, thay đổi trọng lượng thể đóng vai trị dấu hiệu nhạy cảm để đánh giá tình trạng sức khỏe chung động vật dấu hiệu nguy hiểm cảnh báo độc tính Số liệu bảng 3.5 cho thấy, sau 42 ngày uống thuốc thử, cân nặng chuột lô tăng so với trước nghiên cứu, khơng có khác biệt lô trị so với lô uống nước cất thời điểm trước sau uống thuốc thử Từ kết kết luận rằng, cho chuột uống viên nang Nhất gan linh với mức liều 450 mg/kg/ngày 1350 mg/kg/ngày 42 ngày liên tục không gây ảnh hưởng dến tình trạng chung thể trọng chuột 4.2.2 Ảnh hưởng viên nang Nhất gan linh đến chức tạo máu Các số xét nghiệm tế bào máu ngoại vi có giá trị lớn việc đánh giá chức tạo máu.Vì vậy, đề tài tiến hành đánh giá ảnh hưởng viên nang Nhất gan linh đến chức phận tạo máu thông qua số huyết học gồm: số lượng hồng cầu, hàm lượng hemoglobin, hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu, số lượng bạch cầu tiểu cầu Ngồi ra, hình ảnh đại thể vi thể lách, quan quan trọng phản ánh chức tạo máu đời sống tế bào máu đánh giá Kết nghiên cứu cho thấy, xét nghiệm máu số huyết học thời điểm sau uống hỗn hợp cao khô tuần tuần khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so với trước dùng thuốc thử tất số nghiên cứu (p > 0,05) Hình ảnh vi thể đại thể lách chuột bình thường 38 Các kết phản ánh viên nang Nhất gan linh mức liều dùng không gây ảnh hưởng xấu lên chức tạo máu đời sống hồng cầu chuột sau 42 ngày uống thuốc thử 4.2.3 Ảnh hưởng viên nang Nhất gan linh đến chức gan Gan tạng lớn thể, vừa có chức ngoại tiết, vừa có chức nội tiết, vừa kho dự trữ nhiều chất, vừa trung tâm chuyển hóa quan trọng thể [18] Vì vậy, nghiên cứu ảnh hưởng thuốc đến gan cần thiết đánh giá độc tính thuốc [9] Khi đưa thuốc vào thể, thuốc gây độc với gan, làm tổn thương gan Sự tổn thương tế bào gan làm tăng hoạt độ số enzym có nguồn gốc gan huyết thanh, quan trọng enzym ALT AST ALT enzym có nhiều gan, khu trú bào tương tế bào nhu mô gan Khi tổn thương hủy hoại tế bào gan, chí cần thay đổi tính thấm màng tế bào gan, hoạt độ ALT máu tăng cao Khác với ALT, 2/3 AST khu trú ty thể (mitochondria) 1/3 lượng AST khu trú bào tương tế bào Khi tổn thương tế bào gan mức độ tế bào, AST ty thể giải phóng Do đó, tổn thương gan, AST ALT tăng cao so với bình thường, mức độ tăng ALT cao so với AST, tăng sớm trước có vàng da, tuần đầu vàng da [18,19] Trong nghiên cứu này, hoạt độ ALT AST máu chuột lô uống viên nang khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh thời điểm trước sau uống thuốc thử tuần tuần, chứng tỏ liều viên nang Nhất gan linh dùng không gây tổn thương hủy hoại tế bào gan Kết mô bệnh học phù hợp với kết xét nghiệm hóa sinh máu Hình ảnh đại thể vi thể gan lô uống hỗn hợp cao khô có cấu trúc tế bào gan bình thường, khoảng cửa mạch máu bình thường giống lơ chứng, khơng thấy hình ảnh tổn thương vi thể gan 4.2.4 Ảnh hưởng viên nang Nhất gan linh đến chức thận Trong đánh giá độc tính thuốc, ảnh hưởng chế phẩm tới gan thận yêu cầu bắt buộc phải đánh giá [9] Thứ nhất, quan quan trọng trình chuyển hóa thải trừ thuốc Thứ hai, quan dễ bị tổn thương dùng thuốc Thận dễ bị tổn thương dùng thuốc đặc điểm quan thải trừ, đào thải chất thể qua nước tiểu Để tạo thành nước tiểu, trình lọc thận mơ thận có nhiều máu qua nhất, thời gian lượng 39 chất chuyển hố mà mơ thận tiếp xúc thường nhiều [18] Các thuốc sản phẩm chuyển hóa thuốc thường chất lạ thể, qua thận gây độc làm tổn thương thận, từ ảnh hưởng đến chức thận Hiện nay, creatinin số thường dùng để đánh giá theo dõi chức thận [20] Nguyên nhân creatinin thành phần đạm máu ổn định nhất, gần không phụ thuộc vào chế độ ăn thay đổi sinh lý mà phụ thuộc vào khả đào thải thận Khi cầu thận bị tổn thương, nồng độ creatinin máu tăng sớm Trong nghiên cứu này, kết định lượng creatinin máu chuột lô uống viên nang Nhất gan linh mức liều dùng cho thấy lượng creatinin sau tuần tuần uống thuốc thử khơng có khác biệt so với lô chứng so sánh thời điểm trước sau uống thuốc thử (p > 0,05) Ngoài số creatinin, số ure dùng để đánh giá xem có tổn thương thận hay không Ure dạng sản phẩm thối hóa protein, chúng lọc cầu thận trước thải nước tiểu Xét nghiệm số ure đánh giá chức thận, theo dõi bệnh lý liên quan [21] Kết nghiên cứu cho thấy việc dùng viên nang Nhất gan linh thời gian dài không gây ảnh hưởng lên nồng độ ure chứng chứng tỏ hỗn hợp cao khô không gây tổn thương thận Các kết hoàn toàn phù hợp với kết mô bệnh học thận Quan sát đại thể thận tất chuột nghiên cứu, cấu trúc vi thể thận 30% số chuột thực nghiệm lô cho thấy: lô uống viên nang Nhất gan linh, hình ảnh cấu trúc vi thể vùng chức thận bình thường chuột lô chứng 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Chưa tìm thấy LD 50 viên nang Nhất gan linh theo đường uống chuột nhắt trắng Với mức liều cao cho chuột uống 20,0 g/kg thể trọng không gây chết chuột nào, khơng có biểu độc tính cấp Trên lô chuột cống trắng cho uống viên nang Nhất gan linh với mức liều 450 mg/kg/24h liều 1350 mg/kg/24h, liên tục 42 ngày không làm ảnh hưởng đến tình trạng chung, thể trọng chuột, không làm biến đổi số huyết học, số sinh hóa giới hạn bình thường, hình ảnh mơ bệnh học gan, thận lách chuột bình thường KIẾN NGHỊ Xác định độc tính cấp viên nang Nhất gan linh chuột nhắt trắng Xác định độc tính bán trường diễn viên nang Nhất gan linh chuột cống trắng 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Huang Huang (2009), People's Medical Publishing House, 3rd ed., People’s Medical Publishing House, page 219 Jin Gui Yao Lue (2020), Essentials from the Golden Cabinet, World Century Publishing Corporation, page 412 Đỗ Tất Lợi (2005), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, tập I Trần Văn Kỳ (2013), Dược học cổ truyền, Nhà xuất Đà Nẵng Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội Trần Quốc Bào, Trần Quốc Bình (2011), Thuốc Y học cở truyền ứng dụng lâm sàng, Nhà xuất Y học ,Hà Nội Đỗ Trung Đàm (2014), Phương pháp xác định độc tính cấp thuốc, Nhà xuất Y học Cục Khoa học Công nghệ Đào tạo - Bộ Y tế (2015) Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu, Ban hành kèm theo Quyết định số 141/QĐ-K2ĐT ngày 27 tháng 10 năm 2015 10 World Health Organisation (2000) General Guidelines for Methodologies on Research and Evaluation of Traditional Medicine, Geneva, Switzerland 11 Bộ Y tế (2015) Về việc ban hành tài liệu chuyên môn “Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu” Số 141/QĐ-K2ĐT, 27/10/2015 12 Bộ Y tế (2007) Quyết định số 01/2007/ QĐ-BYT việc ban hành “Quy định thử thuốc lâm sàng” 13 Association of Southeast Asian Nations (ASEAN) (2016) Asean common technical dossier for the registration of pharmaceuticals for human use 14 Turner R.A (1971) “Screening method in pharmacology”, Volume II: pp 75 – 80 15 OECD (2002) Drug safety evaluation I: Acute and subchronic toxicity assessement, USA Academy Press 16 Đỗ Trung Đàm (2006) Phương pháp ngoại suy liều có hiệu tương đương người động vật thí nghiệm, Nhà xuất khoa học kỹ thuật 17 OECD Guidelines for testing of chemicals, Repeated dose 28 - days Oral Toxicity study in Rodents, OECD 407, 2008 18 Nguyễn Thế Khánh, Phạm Tử Dương (2005) Xét nghiệm sử dụng lâm sàng, Nhà xuất Y học, Hà Nội: tr.650 - 680 19 Tạ Thành Văn (2013) Hóa sinh lâm sàng, Nhà xuất Y học, Hà Nội: tr 16 73 20 Vũ Đình Vinh (2001) Hướng dẫn sử dụng xét nghiệm sinh hoá, Nhà xuất Y học, Hà Nội: tr 115 - 287 21 Nguyễn Đạt Anh, Nguyễn Thị Hương (2013) Các xét nghiệm thường quy áp dụng thực hành lâm sàng, Nhà xuất Y học, Hà Nội: tr 46 – 90 ... ? ?Đánh giá độc tính cấp bán trường diễn viên nang Nhất gan linh động vật thực nghiệm? ?? Nghiên cứu có mục tiêu chính: Xác định độc tính cấp viên nang Nhất gan linh chuột nhắt trắng Xác định độc tính. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QN Y NGUYỄN HẢI HỊA ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP VÀ BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA VIÊN NANG NHẤT GAN LINH TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT... để đánh giá cách 37 tồn diện độc tính bán trường diễn viên nang Nhất gan linh Phương pháp giúp đánh giá cách tồn diện độc tính viên nang Nhất gan linh chức cấu trúc quan quan trọng thể tim, gan,