BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y CAO THỊ TRIỀU ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP VÀ BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA VIÊN NANG TỐNG VỆ NHÂN TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC HÀ.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y CAO THỊ TRIỀU ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP VÀ BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA VIÊN NANG TỐNG VỆ NHÂN TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC HÀ NỘI - 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y CAO THỊ TRIỀU ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP VÀ BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA VIÊN NANG TỐNG VỆ NHÂN TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC Cán hướng dẫn: ThS Nguyễn Thái Biềng PGS.TS Nguyễn Hoàng Ngân HÀ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian dài học tập Học viện Quân y, giúp đỡ Nhà trường Phịng, Ban, Bộ mơn Học viện Viện Đào tạo Dược, đến hồn thành chương trình học tập Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Đảng ủy - Ban Giám đốc Học viện Viện Đào tạo Dược, Phòng Đào tạo, Bộ môn Dược lý - Viện Đào tạo Dược tạo điều kiện thuận lợi cho thực hồn thành khóa luận Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc đến Đại tá, Thạc sĩ Nguyễn Thái Biềng Phó giáo sư, Tiến sĩ Nguyễn Hoàng Ngân , người Thầy tận tình truyền đạt kiến thức cho tơi, động viên giúp đỡ trực tiếp hướng dẫn q trình học tập, nghiên cứu hồn thành khóa luận Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Thầy, Cơ tồn thể Cán bộ, Nhân viên Viện Đào tạo Dược, đặc biệt Bộ mơn Dược lý ln ln nhiệt tình giúp đỡ, hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập, nghiên cứu để tơi hồn thành khóa luận Tơi xin trân trọng cảm ơn Thầy Cô, Nhà khoa học Hội đồng chấm khóa luận dành nhiều thời gian tơi ý kiến q báu q trình hồn thiện bảo vệ khóa luận Tơi vơ biết ơn chăm sóc, động viên gia đình, người thân yêu tôi, luôn bên cạnh chia sẻ với điều sống Tôi trân trọng cảm ơn quan tâm giúp đỡ tình cảm quý báu bạn bè, đồng nghiệp dành cho Hà Nội, ngày 18 tháng 07 năm 2022 Học viên Cao Thị Triều MỤC LỤC Trang TRANG PHỤ BÌA LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH, CÁC ẢNH, SƠ ĐỒ DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG - TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 VIÊN NANG TỐNG VỆ NHÂN 1.1.1 Tổng quan viên nang Tống vệ nhân 1.1.2 Thành phần viên nang mềm Tống vệ nhân 1.2 TỔNG QUAN VỀ CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐỘC TÍNH CỦA THUỐC 18 1.2.1 Phương pháp xác định độc tính cấp thuốc 18 1.2.2 Phương pháp xác định độc tính bán trường diễn 21 CHƯƠNG - NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 31 2.1.1 Chế phẩm nghiên cứu 31 2.1.2 Động vật nghiên cứu 31 2.1.3 Thiết bị dụng cụ nghiên cứu 32 2.1.4 Hóa chất nghiên cứu 33 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.2.1 Độc tính cấp 33 2.2.2 Độc tính bán trường diễn 36 2.2.3 Phương pháp xác định số nghiên cứu 38 2.2.4 Xử lý số liệu 39 2.3 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 39 2.4 ĐẠO ĐỨC NGHIÊN CỨU 39 CHƯƠNG - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 40 3.1 KẾT QUẢ NGHIÊN XÁC ĐỊNH ĐƯỢC ĐỘC TÍNH CỦA VIÊN NANG TỐNG VỆ NHÂN TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG 40 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ ĐƯỢC ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA VIÊN NANG TỐNG VỆ NHÂN TRÊN CHUỘT CỐNG TRẮNG 41 3.3 BÀN LUẬN 54 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 KẾT LUẬN 60 KIẾN NGHỊ 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 62 DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 1.1 Thành phần viên nang mềm Tống vệ nhân Bảng 3.1 Độc tính cấp đường uống viên nang chuột nhắt trắng 40 Bảng 3.2 Ảnh hưởng viên nang thể trọng chuột 41 Bảng 3.3 Ảnh hưởng viên nang lên số lượng hồng cầu hàm lượng huyết sắc tố máu chuột 42 Bảng 3.4 Ảnh hưởng viên nang lên hematocrit thể tích trung bình hồng cầu máu chuột 43 Bảng 3.5 Ảnh hưởng viên nang lên số lượng bạch cầu tiểu cầu máu chuột 44 Bảng 3.6 Ảnh hưởng viên nang hoạt độ AST ALT 45 Bảng 3.7 Ảnh hưởng viên nang lên số albumin bilirubin toàn phần máu 46 Bảng 3.8 Ảnh hưởng viên nang lên cholesterol toàn phần máu 47 Bảng 3.9 Ảnh hưởng viên nang lên hàm lượng creatinin máu chuột 48 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, CÁC ẢNH, SƠ ĐỒ Tên hình Trang Hình 1.1 Hồng kỳ Hình 1.2 Bạch truật Hình 1.3 Đơng trùng hạ thảo Hình 1.4 Kê huyết đằng Hình 1.5 Mộc hương 11 Hình 1.6 Phịng phong 12 Hình 1.7 Hồng sâm 13 Hình 1.8 Phục thần 15 Hình 1.9 Đương quy 16 Hình 2.1 Động vật nghiên cứu 32 Hình 2.2 Thiết bị dụng cụ nghiên cứu 33 Hình 2.3 Thao tác cho chuột nhắt uống thuốc 34 Hình 2.4 Sơ đồ quy trình nghiên cứu độc tính cấp theo phương pháp Litchfield - Wilcoxon hướng dẫn Bộ Y tế 35 Hình 2.5 Sơ đồ mơ hình thử nghiệm độc tính bán trường diễn 37 Hình 2.6 Lấy máu xoang hốc mắt chuột 39 Ảnh 3.1; 3.2; 3.3 Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lô chứng, lô trị 1, lô trị 50 Ảnh 3.4; 3.5; 3.6 Hình ảnh vi thể gan chuột lô chứng, lô trị 1, lô trị 51 Ảnh 3.7; 3.8; 3.9 Hình ảnh vi thể lách chuột lô chứng, lô trị 1, lô trị 52 Ảnh 3.10; 3.11; 3.12 Hình ảnh vi thể thận chuột lơ chứng, lô trị 1, lô trị 53 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Viết đầy đủ ALT Alanin transaminase (enzyme có nhiều gan thận) AST Aspartat transaminase (enzyme có nhiều gan thận) CKD Chronic Kidney Disease ( bệnh thận mạn tính ) eGFR Glomerular filtration rate ( độ lọc cầu thận ) GOT Glutamat Oxaloacetat Transaminase (enzym trao đổi ) EDTA Ethylen diamin tetra acetic acid Hb Hemoglobin (Huyết sắc tố) HE Hematoxylin Eosin (Phương pháp nhuộm Hematoxylin Eosin) ICH International Conference on Harmonization (Hội nghị quốc tế hài hòa hóa thủ tục đăng ký dược phẩm sử dụng cho người) 10 OECD Organisation for Economic Co-operation and Development (Tổ chức Hợp tác Phát triển Kinh tế) 11 SPSS Statistical Package for the Social Sciences 12 WHO World Health Organization (Tổ chức Y tế Thế giới) 13 YHCT Y học cổ truyền TT ĐẶT VẤN ĐỀ Xã hội ngày phát triển, y học ngày đại nhu cầu chăm sóc sức khỏe người ngày cao Đặc biệt suốt hai năm vừa qua, đại dịch Coronavirus gây nhiều hậu ảnh hưởng nghiêm trọng đến tính mạng sức khoẻ người Triệu chứng covid biểu nhiều quan, hệ thống thể hô hấp, tim mạch, thần kinh- tâm thần, da toàn thân…nhưng phổ biến triệu chứng quan hơ hấp Ngồi vấn đề sức khỏe covid gây có nhiều yếu tố gây bệnh khác nhiễm khơng khí, nhiễm nguồn nước, nguồn thực phẩm không đảm bảo, hút thuốc lá, rượu bia Chính chủ động phịng ngừa tăng cường sức khỏe cần thiết với người Viên nang Tống vệ nhân Công ty Cổ phần Tập đoàn Dược - Mỹ phẩm VINPHARMA sản xuất dạng bào chế đại với kết hợp thuốc quý Ngọc bình phong tán có tác dụng ích khí kiện tỳ, cố biểu hãn chủ trị chứng phế vệ khí hư, dễ bị cảm phong tà Quy tỳ thang giúp kiện tỳ dưỡng tâm, ích khí bổ huyết Đồng thời có thêm Đơng trùng hạ thảo giúp bổ khí chữa chứng bệnh tỳ, thận, phế khí hư gây ra, cải thiện chức miễn dịch thể tăng cường khả kháng bệnh, tăng thêm tác dụng ích vệ khí, ngăn tà khí Ngọc bình phong tán Là thuốc có tác dụng bảo vệ hô hấp tăng sức đề kháng Có thành phần gồm vị dược liệu Hồng kỳ, Đơng trùng hạ thảo, Bạch truật, Phịng phong, Hồng sâm, Mộc hương, Kê huyết đằng, Phục thần, Đương quy chế phẩm sinh học: thymomodulin, riboflavin, nicotiamid, beta glucan, thiamin nitrate, pyridoxin hydroclorid Tuy nhiên chưa có nghiên cứu cụ thể chứng minh tính an tồn thuốc Để tìm hiểu cách có khoa học đầy đủ tính an tồn viên nang mềm Tống vệ nhân làm sở để đánh giá hiệu sử dụng người, tiến hành đề tài: “Đánh giá độc tính cấp bán trường diễn viên nang Tống vệ nhân động vật thực nghiệm” Nghiên cứu có mục tiêu chính: Xác định độc tính cấp (LD50) viên nang Tống vệ nhân chuột nhắt trắng Đánh giá độc tính bán trường diễn viên nang Tống vệ nhân chuột cống trắng 3.2.7 Kết mô bệnh học tạng chuột thí nghiệm Quan sát đại thể mắt thường kính lúp có độ phóng đại 25 lần thấy: màu sắc, hình thái gan, lách thận hai lô dùng viên nang mềm Tống vệ nhân không khác so với chứng Ảnh 3.1 Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lơ chứng (chuột 08, lơ chứng) Ảnh 3.2 Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lô trị (chuột 16, lơ trị 1) Ảnh 3.3 Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lô trị (chuột 24, lô trị 2) Nhận xét ảnh: hình ảnh đại thể tạng gan, lách, thận chuột lô trị (ảnh 3.2), lô trị (ảnh 3.3), lô cho uống viên nang mềm Tống vệ nhân, có màu nâu đỏ thẫm đồng đều, bề mặt nhẵn, khơng có u cục xuất huyết, có đàn hồi ấn xuống, khơng khác biệt so với hình ảnh gan, lách, thận chuột lô chứng (ảnh 3.1) Các tiêu mô bệnh học đọc Bộ môn khoa Giải phẫu bệnh - Pháp y, bệnh viện Quân y 103 Kết nghiên cứu mô bệnh học gan, lách, thận chuột cho thấy viên nang mềm Tống vệ nhân dùng đường uống với liều 416 mg/kg/ngày liều 2080 mg/kg/ngày liên tục 30 ngày, không gây tổn thương gan, thận, lách chuột 50 Hình ảnh mơ bệnh học gan chuột sau 30 ngày uống thuốc Ảnh 3.4 Hình ảnh vi thể gan chuột lơ chứng (chuột 5, lơ chứng) HE, x 400 Ảnh 3.5 Hình ảnh vi thể gan chuột lô trị (chuột 12, lô trị 1) HE, x 400 Ảnh 3.6 Hình ảnh vi thể gan chuột lô trị (chuột 26, lô trị 2) HE, x 400 Nhận xét ảnh: Hình ảnh vi thể gan kính hiển vi với độ khuếch đại 400 lần chuột lô trị (ảnh 3.5) lô trị (ảnh 3.6), lô cho Tống vệ nhân , khơng khác biệt so với hình ảnh vi thể gan chuột lô chứng (ảnh 3.4) Trên hình ảnh khơng thấy xuất huyết ổ hoại tử, thối hóa tế bào gan 51 Hình ảnh mô bệnh học lách chuột sau 30 ngày uống thuốc Ảnh 3.8 Hình ảnh vi thể lách chuột lơ Ảnh 3.7 Hình ảnh vi thể lách chuột lơ chứng (chuột 9, lô chứng) HE, x 400 trị (chuột 18, lơ trị 1) HE, x 400 Ảnh 3.9 Hình ảnh vi thể lách chuột lô trị (chuột 27, lô trị 2) HE, x 400 Nhận xét ảnh: Hình ảnh vi thể lách kính hiển vi với độ khuếch đại 400 lần chuột lô trị (ảnh 3.8) lô trị (ảnh 3.9), lô cho uống Tống vệ nhân , không khác biệt so với hình ảnh vi thể lách chuột lơ chứng (ảnh 3.7) Trên hình ảnh thấy vùng tủy trắng bắt màu xanh thậm, tập trung nang lympho lớn Vùng tủy đỏ có màu xanh đỏ, với xoang nang chứa nhiều hồng cầu số đại thực bào Khơng thấy xuất huyết hoại tử 52 Hình ảnh mô bệnh học thận chuột sau 30 ngày uống thuốc Ảnh 3.10 Hình ảnh vi thể thận chuột lơ chứng (chuột 3, lô chứng) HE, x 400 Ảnh 3.11 Hình ảnh vi thể thận chuột lơ trị (chuột 14, lơ trị 1) HE, x 400 Ảnh 3.12 Hình ảnh vi thể thận chuột lô trị (chuột 22, lơ trị 2) HE, x 400 Nhận xét ảnh: Hình ảnh vi thể thận kính hiển vi với độ khuếch đại 400 lần chuột lô trị (ảnh 3.11) lô trị (ảnh 3.12), lô cho uống Tống vệ nhân , không khác biệt so với hình ảnh vi thể thận chuột lơ chứng (ảnh 3.10) Cấu trúc vùng chức thận bình thường 53 3.3 BÀN LUẬN Nghiên cứu độc tính bước quan trọng nghiên cứu phát triển thuốc Thuốc muốn sử dụng hiệu lực cần phải an tồn Xét tổng thể an tồn cịn quan trọng hiệu lực, thuốc dù hiệu lực đến đâu, không an tồn khơng sử dụng [7] Để nghiên cứu tính an tồn thuốc, cần phải nghiên cứu độc tính cấp bán trường diễn Theo hướng dẫn WHO, ngoại trừ thuốc cổ phương chiết xuất theo phương pháp truyền thống, tất thuốc có nguồn gốc từ dược liệu phải đánh giá độc tính cấp bán trường diễn động vật thực nghiệm trước đưa vào thử nghiệm người [9] 3.3.1 Độc tính cấp Các thuốc YHCT có nguồn gốc từ thực vật động vật sử dụng từ lâu giới để trì sức khỏe điều trị bệnh Trước đây, người ta cho việc sử dụng dược liệu theo kinh nghiệm lâu đời an tồn khơng có độc tính Tuy nhiên, khảo sát gần tác dụng bất lợi nhiều dược liệu Điều làm tăng mối lo ngại độc tính tiềm ẩn xuất sử dụng dược liệu ngắn hạn dài hạn Vì vậy, việc đánh giá độc tính dược liệu dùng làm thuốc trước áp dụng lâm sàng bước thiếu Thử độc tính cấp nhằm cung cấp thơng tin cho việc xếp loại mức độ độc thuốc, dự đoán triệu chứng dự kiến biện pháp điều trị ngộ độc cấp, đồng thời làm để thiết lập mức liều cho nghiên cứu (nghiên cứu độc tính dài hạn, nghiên cứu tác dụng dược lý) Các số cần xác định phép thử độc tính cấp bao gồm: liều an toàn; liều dung nạp tối đa; liều gây độc tính quan sát được; liều thấp gây chết động vật thí nghiệm (nếu có); liều LD50 (liều gây chết 50% số động vật thực nghiệm) gần (nếu xác định được); triệu chứng ngộ độc điển hình quan sát động vật thí nghiệm khả hồi phục (nếu có) 54 Lồi động vật thường sử dụng nghiên cứu độc tính cấp lồi gặm nhấm, chuột cống chuột nhắt Đối tượng thí nghiệm lựa chọn để thử độc tính cấp đề tài chuột nhắt trắng, bao gồm chuột đực chuột cái, kết nghiên cứu bao hàm cho giống với phương pháp lựa chọn phương pháp Litchfield - Wilcoxon Đường đưa thuốc sử dụng đường uống, theo đường dự kiến sử dụng người Khi sử dụng đường uống, để bảo đảm cho chuột dùng lượng thuốc lớn với độ xác cao, việc đưa thuốc cưỡng vào dày chuột qua kim cong đầu tù chuyên dụng thực Thao tác gây tổn hại đường thực quản dày gây xuất huyết thủng dày, đưa nhầm thuốc vào đường hô hấp gây sặc thuốc, suy hô hấp làm chuột chết Ngoài ra, thao tác bắt chuột thực khơng tốt gây tổn thương chuột, chí làm chết chuột [8,18] Việc theo dõi đánh giá tình trạng chung chuột, số chuột chết lơ địi hỏi phải theo dõi thường xuyên liên tục, tránh việc để sót dấu hiệu bị độc Việc phẫu tích chuột chuẩn bị sẵn sàng để có chuột chết cần phải tiến hành phẫu tích nhằm đánh giá nguyên nhân gây chết chuột Các nguyên nhân gây chết chuột độc tính thuốc gây kích thích thần kinh làm chuột co giật, suy hô hấp chết; gây suy gan, suy thận; lỏng nhiều gây rối loạn điện giải mà chết; tắc ruột; tổn thương gây chảy máu … Trong nghiên cứu độc tính cấp viên nang Tống vệ nhân, khơng có chuột bị chết nên khơng có ngun nhân kể [8,13,19] 3.3.2 Độc tính bán trường diễn Nghiên cứu độc tính bán trường diễn thực cách cho động vật thí nghiệm uống thuốc thử hàng ngày liên tục khoảng thời gian định Thời gian dùng thuốc thử phụ thuộc vào thời gian dùng lâm sàng Theo hướng dẫn WHO quy định Bộ Y tế Việt Nam, thời gian nghiên cứu bán trường diễn động vật thường gấp lần thời gian dự kiến dùng người Tuy nhiên, nghiên cứu động vật thời gian dài, đặc biệt cho động vật dùng thuốc cưỡng (qua kim cong đầu tù), 55 số yếu tố nhiễu ảnh hưởng đến kết nghiên cứu Nghiên cứu độc tính bán trường diễn viên nang Tống vệ nhân thực thời gian 30 ngày, nghiên cứu bước đầu đủ cho phép để đánh giá lâm sàng giai đoạn đầu (pha I, II) Các tiêu để đánh giá độc tính bán trường diễn bao gồm: tình trạng chung thay đổi thể trọng, số huyết học, sinh hoá, đánh giá chức gan, thận đặc điểm giải phẫu bệnh gan, lách, thận Từ kết nghiên cứu, ta bàn luận ảnh hưởng viên nang Tống vệ nhân tiêu nghiên cứu [13,14-16] a) Tình trạng chung thay đổi thể trọng Tình trạng chung cân nặng động vật thực nghiệm số nghiên cứu bắt buộc theo dõi trước dùng thuốc định kỳ thời gian dùng thuốc [8] Trong suốt thời gian nghiên cứu, chuột lô hoạt động bình thường, lơng mượt, da niêm mạc bình thường, ăn uống bình thường, phân thành khn Bên cạnh tiêu quan sát khả tiêu thụ thức ăn, nước uống, tình trạng phân nước tiểu động vật thực nghiệm, thay đổi trọng lượng thể đóng vai trị dấu hiệu nhạy cảm để đánh giá tình trạng sức khỏe chung động vật dấu hiệu nguy hiểm cảnh báo độc tính Số liệu cho thấy, sau 30 ngày uống thuốc thử, cân nặng chuột lô tăng so với trước nghiên cứu, khơng có khác biệt lô trị so với lô uống nước cất thời điểm trước sau uống thuốc thử Từ kết kết luận rằng, cho chuột uống viên nang Tống vệ nhân với mức liều 416 mg/kg/ngày 2080 mg/kg/ngày 30 ngày liên tục không gây ảnh hưởng dến tình trạng chung thể trọng chuột b) Ảnh hưởng viên nang đến chức tạo máu Các số xét nghiệm tế bào máu ngoại vi có giá trị lớn việc đánh giá chức tạo máu.Vì vậy, đề tài tiến hành đánh giá ảnh hưởng viên nang Tống vệ nhân đến chức phận tạo máu thông qua số huyết học gồm: 56 số lượng hồng cầu, hàm lượng hemoglobin, hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu, số lượng bạch cầu tiểu cầu Ngồi ra, hình ảnh đại thể vi thể lách, quan quan trọng phản ánh chức tạo máu đời sống tế bào máu đánh giá Kết nghiên cứu cho thấy, xét nghiệm máu số huyết học thời điểm sau uống hỗn hợp cao khơ 15 30 ngày khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lơ chứng so với trước dùng thuốc thử tất số nghiên cứu (p > 0,05) Hình ảnh vi thể đại thể lách chuột bình thường Các kết phản ánh viên nang Tống vệ nhân mức liều dùng không gây ảnh hưởng xấu lên chức tạo máu đời sống hồng cầu chuột sau 30 ngày uống thuốc thử c) Ảnh hưởng viên nang đến chức gan Gan tạng lớn thể, vừa có chức ngoại tiết, vừa có chức nội tiết, vừa kho dự trữ nhiều chất, vừa trung tâm chuyển hóa quan trọng thể có tính chất sinh mạng [17] Vì vậy, nghiên cứu ảnh hưởng thuốc đến gan cần thiết đánh giá độc tính thuốc [8] Khi đưa thuốc vào thể, thuốc gây độc với gan, làm tổn thương gan Sự tổn thương tế bào gan làm tăng hoạt độ số enzym có nguồn gốc gan huyết thanh, quan trọng enzym ALT AST Khi tổn thương gan, AST ALT tăng cao so với bình thường, mức độ tăng ALT cao so với AST Trong nghiên cứu này, hoạt độ ALT AST máu chuột lô uống viên nang khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng so sánh thời điểm trước sau uống thuốc thử 15 30 ngày, chứng tỏ liều viên nang Tống vệ nhân dùng không gây tổn thương hủy hoại tế bào gan Kết mô bệnh học phù hợp với kết xét nghiệm hóa sinh máu Hình ảnh đại thể vi thể gan lô uống hỗn hợp cao khô có cấu trúc tế bào gan bình thường, khoảng cửa mạch máu bình thường giống lơ chứng, khơng thấy hình ảnh tổn thương vi thể gan 57 Bilirubin sản phẩm thối hóa hemoglobin lưới nội mạc võng mô gan, lách, tuỷ xương Trong nghiên cứu này, số bilirubin toàn phần máu đánh giá trước hết nhằm đánh giá xem thuốc có độc tính với gan khơng (như gây hủy hoại tế bào gan, gây tắc mật, làm suy giảm chức liên hợp gan làm tăng bilirubin máu) Đồng thời, số cho phép đánh giá thuốc có gây ảnh hưởng đến đời sống hồng cầu không (như gây độc làm tan máu dẫn đến tăng billirubin) [18] Kết nghiên cứu cho thấy số billirubin tồn phần máu bình thường, xem tiêu chí nói lên viên nang khơng gây độc với gan, không ảnh hưởng đến đời sống hồng cầu Albumin loại protein quan trọng huyết Albumin tham gia vào chức trì từ 70 đến 80% áp lực thẩm thấu huyết tương, đồng thời liên kết vận chuyển chất có dạng phân tử nhỏ bilirubin, acid béo thuốc có bên máu Gan nơi tổng hợp protein quan bị tổn thương kéo theo chức gan bị suy giảm Điều làm cho việc hấp thụ chất dinh dưỡng protein không tốt bị đình trệ dẫn tới tổng hợp albumin kém, việc xét nghiệm số nồng độ albumin máu có giá trị đánh giá tổn thương chức gan [18] Kết nghiên cứu cho thấy viên nang Tống vệ nhân dùng mức liều, 30 ngày không gây ảnh hưởng lên số albumin máu chuột, tiêu chứng tỏ chế phẩm không gây độc gan (không làm ảnh hưởng đến chức tổng hợp albumin gan) Một vai trò gan chuyển hóa lipid tổng hợp cholesterol sử dụng cholesterol để sản xuất muối mật Vì vậy, đánh giá phần chức chuyển hóa lipid gan thơng qua định lượng cholesterol tồn phần [18] Số liệu nghiên cứu cho thấy, viên nang Tống vệ nhân hai mức liều không làm thay đổi nồng độ cholesterol tồn phần so sánh với lơ chứng sinh lý tất thời điểm định lượng [19] d) Ảnh hưởng viên nang đến chức thận Trong đánh giá độc tính thuốc, ảnh hưởng chế phẩm tới gan thận yêu cầu bắt buộc phải đánh giá [8] Thứ nhất, quan 58 quan trọng trình chuyển hóa thải trừ thuốc Thứ hai, quan dễ bị tổn thương dùng thuốc Thận dễ bị tổn thương dùng thuốc đặc điểm quan thải trừ, đào thải chất thể qua nước tiểu Các thuốc sản phẩm chuyển hóa thuốc thường chất lạ thể, qua thận gây độc làm tổn thương thận, từ ảnh hưởng đến chức thận Hiện nay, creatinin số thường dùng để đánh giá theo dõi chức thận [18,22] Nguyên nhân creatinin thành phần đạm máu ổn định nhất, gần không phụ thuộc vào chế độ ăn thay đổi sinh lý mà phụ thuộc vào khả đào thải thận Khi cầu thận bị tổn thương, nồng độ creatinin máu tăng sớm Trong nghiên cứu này, kết định lượng creatinin máu chuột lô uống viên nang Tống vệ nhân mức liều dùng cho thấy lượng creatinin sau 15 30 ngày uống thuốc thử khác biệt so với lơ chứng so sánh thời điểm trước sau uống thuốc thử (p > 0,05) [19] Ngoài số creatinin, số albumin máu dùng để đánh giá xem có tổn thương thận hay khơng Mức nồng độ albumin thấp phản ánh tình trạng tổn thương hư hại thận ngăn chặn albumin rò rỉ từ máu vào nước tiểu nhanh chóng [18,23,24] Trong trường hợp này, xét nghiệm nồng độ albumin bên nước tiểu để xác định xác Kết nghiên cứu cho thấy việc dùng viên nang Tống vệ nhân thời gian dài không gây ảnh hưởng lên nồng độ albumin máu chứng chứng tỏ hỗn hợp cao khô không gây tổn thương thận [25,26] Các kết hồn tồn phù hợp với kết mơ bệnh học thận Quan sát đại thể thận, cấu trúc vi thể thận chuột thực nghiệm lô cho thấy: lô uống viên nang Tống vệ nhân, hình ảnh cấu trúc vi thể vùng chức thận bình thường chuột lơ chứng [27,28] 59 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu tính an tồn tác dụng dược lý viên nang mềm Tống vệ nhân động vật thực nghiệm, kết luận 1.1 Độc tính cấp Chưa tìm thấy LD50 viên nang mềm Tống vệ nhân theo đường uống chuột nhắt trắng Với mức liều cao cho chuột uống 19,5 g/kg thể trọng (gấp 31,25 lần liều tương đương liều điều trị quy đổi từ liều người sang liều chuột nhắt trắng) mà không gây chết chuột nào, khơng có biểu độc tính cấp 1.2 Độc tính bán trường diễn Trên lô chuột cống trắng cho uống viên nang mềm Tống vệ nhân liều 416 mg/kg/ngày (tương đương liều điều trị quy đổi từ liều người sang liều chuột cống trắng), liều 2080 mg/kg/ngày, liên tục 30 ngày, cho thấy: - Tình trạng chung gồm hoạt động, ăn uống, tình trạng lơng, da, niêm mạc, chất tiết chuột bình thường - Khơng gây ảnh hưởng đến phát triển cân nặng chuột - Không làm thay đổi số huyết học (số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, nồng độ huyết sắc tố, hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu) - Khơng làm thay đổi tiêu sinh hóa máu bao gồm hoạt độ enzym AST, ALT, bilirubin toàn phần, albumin, creatinin cholesterol tồn phần - Khơng gây tổn thương mô bệnh học gan, lách, thận Như viên nang Tống vệ nhân an toàn mức liều dùng thời gian sử dụng nghiên cứu thực nghiệm chuột cống trắng KIẾN NGHỊ - Tiếp tục nghiên cứu đánh giá tính an tồn viên nang Tống vệ nhân lâm sàng - Xác định độc tính cấp bán trường diễn viên nang Tống vệ nhân 60 động vật thí nghiệm khác khơng phải chuột - Nghiên cứu độc tính cấp bán trường diễn viên nang Tống vệ nhân phương pháp khác Perchin, Reed-Muench, Behrén-Karber - Tiếp tục nghiên cứu tác dụng viên nang Tống vệ nhân - Đánh giá tác dụng bảo vệ hô hấp viên nang Tống vệ nhân mô hình thực nghiệm với tác nhân khác carbon tetrachlorid, ethanol, Dgalactosamin… 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế (2011), Dược liệu học tập NXB Y học: pp 243, 286-328 Phạm Xuân Sinh (2014), Dược học cổ truyền NXB Y học: pp 236-252, 341 Trần Văn Kỳ (2013), Dược học cổ truyền NXB Đà Nẵng: pp 325, 421429 Đỗ Tất Lợi (2015) Những thuốc vị thuốc Việt Nam (tái lần thứ 14) NXB Y học: pp 376, 450-452, 905-807 http://tracuuduoclieu.vn/giao-co-lam.html, truy cập ngày 7/5/2022 Trần Quốc Bào, Trần Quốc Bình (2011) Thuốc Y học cổ truyền ứng dụng lâm sàng NXB Y học: pp 361-369 Đỗ Trung Đàm (2014), Phương pháp xác định độc tính thuốc Nhà xuất y học: pp 205-212, 338-345, 412-419 Cục Khoa học Công nghệ Đào tạo-Bộ Y tế (2015) Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu, Ban hành kèm theo Quyết định số 141/QĐ-K2ĐT ngày 27 tháng 10 năm 2015 Cục trưởng Cục Khoa học Công nghệ Đào tạo: pp 389-392 9.World Health Organisation (2000) General Guidelines for Methodologies on Research and Evaluation of Traditional Medicine, Geneva, Switzerland 10 Bạch Vọng Hải cs (2019) Hóa sinh y học, Nhà xuất Quân đội nhân dân, Hà Nội: pp 283-390 11 Lê Văn Sơn cs (2007) Sinh lý học, Tập 1, Nhà xuất Quân đội nhân dân, Hà Nội: pp 63-89 12 Hoàng Văn Cúc, Nguyễn Văn Huy cs (2006) Giải phẫu người, Nhà xuất Y học, Hà Nội: pp 244-290 13 Bộ Y tế (2015) Về việc ban hành tài liệu chuyên môn “Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu”: pp 121139 62 14 Phạm Thị Nguyệt Hằng, Nguyễn Văn Khiêm Nguyễn Văn Khởi (2017) Nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn tác dụng tăng lực cao chiết cồn sâm cau, Tạp chí Dược liệu: pp 239-247 15.García MV, Poser GLV, Apel M, Tlatilpa RC, Mendoza-Ruiz A, Villarreal ML, Henriques AT, Taketa AC (2017), Anticholinesterase activity and identification of Huperzine A in three Mexican lycopods: Huperzia cuernavacensis, Huperzia dichotoma and Huperzia linifolia (Lycopodiaceae), Pak J Pharm Sci 2017 Jan;30(1 Suppl): pp 235-239 16 Organization of Economic Co-operation and Development-OECD (2001), The OECD Guideline for Testing of Chemicals: 423 Acute Oral Toxicity - Acute Toxic Class Method, OECD, Paris, France: pp 185-192 17 JooWanKim, Jae-SukChoi , DuJinSeol, JaiJunChoung, and SaeKwangKu (2018) Immunomodulatory Effects of Kuseonwangdogo-Based Mixed Herbal Formula Extracts on a Cyclophosphamide-Induced Immunosuppression Mouse Model Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine Volume: pp 289-305 18 Fahmi ANA, Shehatou GSG, Salem HA Levocetirizine Pretreatment Mitigates Lipopolysaccharide-Induced Lung Inflammation in Rats Biomed Res Int : pp 398-408 19 OECD Guidelines for testing of chemicals, Repeated dose 28-days Oral Toxicity study in Rodents, OECD: pp 407, 2008 20 Nguyễn Thế Khánh, Phạm Tử Dương (2005) Xét nghiệm sử dụng lâm sàng, Nhà xuất Y học: pp 650-680 21 Vũ Đình Vinh (2001) Hướng dẫn sử dụng xét nghiệm sinh hoá, Nhà xuất Y học: pp 115-287 22 Nguyễn Đạt Anh, Nguyễn Thị Hương (2013) Các xét nghiệm thường quy áp dụng thực hành lâm sàng, Nhà xuất Y học: pp 46-98 23 Tạ Thành Văn (2013) Hóa sinh lâm sàng, Nhà xuất Y học: pp 16-73 24 Association of Southeast Asian Nations (ASEAN) (2016) Asean common technical dossier for the registration of pharmaceuticals for human use: pp 398-405 63 25 Phan Quốc Kinh (2011) Giáo trình hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học, Nhà xuất Giáo dục Việt Nam: pp 215 26.Yoon HS, Kim JW, Cho HR, Moon SB, Shin HD, Yang KJ, Lee HS, Kwon YS, Ku SK (2010) Immunomodulatory effects of Aureobasidium pullulans SM-2001 exopolymers on the cyclophosphamide-treated mice J Microbiol Biotechnol: pp 438-45 27 Viện Dược liệu (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ dược thảo, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật: pp 220-223, 295, 377-392 28 Chaphalkar R., Apte K G., Talekar Y., et al (2017) Antioxidants of Phyllanthus emblica L Bark Extract Provide Hepatoprotection against Ethanol-Induced Hepatic Damage: A Comparison with Silymarin: pp 382391 64 ... viên nang Tống vệ nhân động vật thực nghiệm? ?? Nghiên cứu có mục tiêu chính: Xác định độc tính cấp (LD50) viên nang Tống vệ nhân chuột nhắt trắng Đánh giá độc tính bán trường diễn viên nang Tống vệ. .. VÀ BÀN LUẬN 40 3.1 KẾT QUẢ NGHIÊN XÁC ĐỊNH ĐƯỢC ĐỘC TÍNH CỦA VIÊN NANG TỐNG VỆ NHÂN TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG 40 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ ĐƯỢC ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA VIÊN NANG TỐNG VỆ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y CAO THỊ TRIỀU ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP VÀ BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA VIÊN NANG TỐNG VỆ NHÂN TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT