BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGUYỄN THỊ MINH THƯ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM PHỔI CẤP TÍNH CỦA VIÊN NANG TỐNG VỆ NHÂN TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠ.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGUYỄN THỊ MINH THƯ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM PHỔI CẤP TÍNH CỦA VIÊN NANG TỐNG VỆ NHÂN TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC HÀ NỘI – 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGUYỄN THỊ MINH THƯ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM PHỔI CẤP TÍNH CỦA VIÊN NANG TỐNG VỆ NHÂN TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC Cán hướng dẫn: ThS Nguyễn Thái Biềng TS Nguyễn Thị Liên HÀ NỘI – 2022 ĐẶT VẤN ĐỀ Theo báo cáo Tổ chức Y tế giới (WHO), có khoảng - 15 triệu người mắc bệnh viêm phổi hàng năm Tình trạng nhiễm khơng khí, nhiễm mơi trường phát triển cơng nghiệp, tình trạng hút thuốc già hóa dân số khiến số người mắc bệnh ngày tăng có nhiều ca bệnh nặng Con số tăng lên đáng kể từ năm 2019 dịch bệnh Covid-19, hậu tính đến ngày 4/9/2021, lây nhiễm cho 220 triệu người, có 4,56 triệu người tử vong Hội chứng viêm phổi cấp nguyên virus vi khuẩn chủ yếu hay gặp nước có kiểu hình khí hậu nóng ẩm, mưa nhiều Viêm phổi cấp tính ngun virus thường mang tính chất “mùa” - thời gian mà số mắc cộng đồng tăng cao, vào thời gian thời tiết lạnh ẩm Nếu phịng ngừa chữa trị sớm tỷ lệ mắc bệnh tử vong giảm đáng kể [1] Dân gian thường có câu “Phịng bệnh chữa bệnh” Sức khỏe khoản đầu tư sinh lãi trách nhiệm lớn người, việc chữa bệnh gây suy giảm sức khỏe tinh thần, tốn tiền bạc thời gian Vì lẽ đó, tất bệnh nói chung bệnh viêm phổi cấp tính nói riêng, cần coi trọng phịng bệnh chữa bệnh Một biện pháp áp dụng để phịng chống viêm phổi cấp tính dùng sản phẩm có khả hỗ trợ, tăng cường nâng cao sức đề kháng thể Hiện nay, người sử dụng ngày nhiều sản phẩm có nguồn gốc tự nhiên từ cỏ dự phòng nâng cao sức khỏe Xuất phát từ tình hình thực tế đó, viên nang Tống vệ nhân nghiên cứu, phát triển sản xuất Sản phẩm kết hợp thành phần dược liệu với tác dụng tăng sức đề kháng, tăng cường miễn dịch, phòng, chữa trị bệnh đường hô hấp Với mong muốn nghiên cứu sâu hiệu tác dụng viên nang Tống vệ nhân chống viêm phổi cấp tính, đề tài: “Đánh giá tác dụng chống viêm phổi cấp tính viên nang Tống vệ nhân động vật thực nghiệm” lựa chọn để nghiên cứu sâu phân tích với mục tiêu: Đánh giá tác dụng chống viêm phổi cấp tính viên nang Tống vệ nhân chuột cống trắng gây viêm phổi lipopolysaccharide CHƯƠNG 1- TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN CHẾ PHẨM NGHIÊN CỨU Viên nang Tống vệ nhân Công ty Cổ phần Tập đoàn Dược - Mỹ phẩm VINPHARMA sản xuất, sản phẩm nghiên cứu, phát triển dựa thuốc cổ phương bí truyền Ngọc bình phong tán đồng thời gia, giảm thêm số vị thuốc, kết hợp từ nhiều vị thuốc quý Đông y Tác dụng: hỗ trợ việc phòng, chữa trị bệnh đường hô hấp liên quan đến virus, vi khuẩn (ho, viêm họng, viêm phổi, viêm xoang, cảm, cúm mùa…); tăng sức đề kháng miễn dịch cho người thể suy nhược, mắc bệnh mãn tính hơ hấp, đại tràng, thiếu máu, ngủ kéo dài, người già, trẻ ăn gầy yếu… Hình 1.1 Viên nang Tống vệ nhân (Nguồn: DuocphamOTC.com [35]) Bảng 1.1 Các thành phần 01 viên nang Tống vệ nhân Dược liệu STT Khối lượng Đông trùng hạ thảo Hoàng kỳ 1.000 mg Hồng sâm 200 mg Bạch truật 300 mg Đương quy 100 mg Kê huyết đằng 150 mg Mộc hương 200 mg Phòng phong 300 mg Phục thần 100 mg 10 Thymomodulin 30 mg 11 Riboflavin (vitamin B2) 20 mg 12 Nicotinamid (vitamin B3) 20 mg 13 Beta glucan 15 mg 14 Pyridoxin hydrocloride (vitamin B6) mg 15 Thiamin nitrate (vitamin B1) mg 16 Thymomodulin 30 mg 17 Phụ liệu: dầu đậu nành, gelatin, glycerin, sorbitol lỏng, sáp ong trắng, lecithin, nước tinh khiết Vừa đủ viên 400 mg Đơng trùng hạ thảo Hình 1.2 Đơng trùng hạ thảo (Nguồn: https://tracuuduoclieu.vn/dong-trung-ha-thao-vt.html [36]) - Tên khoa học: Cordyceps militaris, họ Ophiocordycipitaceae - Tên khác: Trùng thảo, Hạ thảo đông trùng… - Mô tả: Đông trùng hạ thảo hình thành từ tượng ấu trùng lồi bướm giống Thitarodes bị nấm thuộc chi Ophiocordyceps Cordyceps ký sinh Đó dạng ký sinh lồi nấm túi có tên khoa học Ophiocordyceps sinensis với sâu non loài bướm đêm thuộc giống Thitarodes Các loài nấm phân bố rộng châu Á châu Đại Dương, tập trung nhiều vùng Đơng Á, nơi có cao ngun cao mặt biển từ 4.000 đến 5.000 m Vào mùa đông, nấm bắt đầu ký sinh sâu non chui xuống đất trú đơng làm chết sâu non, ăn hết chất dinh dưỡng thể chúng Đến sợi nấm phát triển mạnh, chúng xâm nhiễm vào mơ vật chủ, sử dụng hồn tồn chất dinh dưỡng thể sâu Đến giai đoạn định, thường vào mùa hè ấm áp, nấm bắt đầu mọc khỏi sâu cỏ vươn lên khỏi mặt đất phát triển thành dạng phát tán bào tử, Đơng trùng hạ thảo theo quan niệm truyền thống [2] - Thành phần: nhiều thành phần hoạt tính sinh học Đơng trùng hạ thảo chiết xuất, chẳng hạn cordycepin, axit cordycepic, ergosterol, polysaccharides, nucleoside peptide… [3] - Tính vị quy kinh: vị ngọt, tính ơn; quy kinh phế, thận - Công năng: bổ thận, chữa ho, ho lao, ích phế, thận, cầm máu, hóa đờm, chữa hư lao sinh ho, liệt dương, ho máu, lưng gối đau mỏi, di tinh - Tác dụng dược lý: cordycepin thành phần có Đơng trùng hạ thảo, chất kích hoạt cụ thể thụ thể adenosine adenosine ngoại bào có tác dụng chống viêm quan trọng tổn thương phổi cấp tính Các nghiên cứu nồng độ thấp cordycepin ức chế phản ứng oxy hóa gốc tự cách hiệu Polysaccharide có tác dụng chống viêm, chống oxy hóa, chống khối u, chống di căn, điều hòa miễn dịch, hạ đường huyết, steroidogenic giảm natri huyết Ergosterol thể hoạt động chống khối u điều hòa miễn dịch [4] Hồng kỳ Hình 1.3 Hồng kỳ (Nguồn: https://tracuuduoclieu.vn/hoang-ky-vt.html [36]) - Tên khoa học: Astragalus membranaceus, họ Đậu hay gọi họ Cánh bướm (Fabaceae; đồng nghĩa: Leguminosae, Papilionaceae) - Tên khác: Miên hoàng kỳ, Khẩu kỳ, Bắc kỳ Tiễn kỳ - Mơ tả: Hồng kỳ sống lâu năm, cao 50 - 80 cm rễ dài, mọc sâu, khó bẻ, đường kính - cm, vỏ ngồi màu vàng đỏ hay nâu Thân mọc thẳng đứng có phân nhiều cành Lá mọc so le, kép, có kèm hình cạnh, - 13 đơi chét hình trứng dài - 23 mm, mặt nhiều lông trắng mịn, cụm hoa mọc thành trùm kẽ lá, dài lá, gồm - 22 hoa, màu vàng tươi Quả giáp mỏng, dẹt, dài - 2,5 cm, đường kính 0,9 - 1,2 cm đầu dài thành hình gai nhọn, có lơng ngắn, - hạt màu đen - Thành phần hóa học: flavonoid, saponin, polysaccharid, axit amin dầu dễ bay - Tính vị: vị ngọt, tính ấm; quy kinh: tỳ, phế, đại trường tâm - Cơng năng: bổ khí cổ biếu, lợi tiểu, trừ mủ, sinh Chủ trị: khí hư mệt mỏi, ăn; trung khí hạ hãm, tiêu chảy lâu ngày, sa tạng phủ, tiện huyết, rong huyết; mồ hơi; nhọt độc khó vỡ; nội nhiệt tiêu khát; viêm thận mạn Hồng kỳ chích mật: kiện tỳ ích khí Hồng kỳ phiến: cố biểu, lợi tiểu, trừ mủ sinh [5] - Tác dụng dược lý: có tác dụng bảo vệ mạnh mẽ tim mạch, phổi, thận não Hoạt chất AS-IV (một saponin triterpenoid, hợp chất có dịch chiết nước Hồng kỳ) có tác dụng tốt bảo vệ thần kinh, bảo vệ gan, chống ung thư đái tháo đường, có đặc tính chống oxy hóa, chống viêm, tăng cường khả miễn dịch, làm giảm xâm lấn tế bào ung thư tăng hiệu loại thuốc hóa trị Năm 2018, Min Li cộng chứng minh Hoàng kỳ giảm độc lực thay đổi mô bệnh học phổi LPS gây ra, giảm đáng kể biểu protein mRNA thụ thể giống Toll số (TLR-4), kinase-1 liên kết với thụ thể interleukin-1 (IRAK-1) yếu tố nhân - kappa B (NF-κB) Những phát cho thấy Hồng kỳ có tác dụng bảo vệ điều trị chuột viêm phổi LPS gây thông qua việc điều chỉnh đường tín hiệu TLR-4 [6] Hồng sâm Hình 1.4 Nhân sâm (Nguồn: https://tracuuduoclieu.vn/nhan-sam-vt.html [36]) - Tên khoa học: Panax ginseng, họ Ngũ gia bì họ Nhân sâm (Araliaceae) - Mô tả: Hồng sâm Nhân sâm tươi sấy khơ theo quy trình cơng nghệ đại Chọn củ sâm to 37 g, rửa đất củ bàn chải, rửa nước, để nguyên rễ, kể rễ nhỏ, rửa củ sâm trắng ngà Cho vào nồi hấp áp lực nước cao atm từ 1h20p 1h30p Nhiệt độ 80 - 90 °C Sau sấy 60 - 70 °C - h 50 - 60 °C (8 - 10 h) Sau sấy rứt hết rễ con, củ sâm lại giống hình người phơi nắng - 15 ngày Hồng sâm [5] - Thành phần hóa học: saponin coi "xương sống" định giá trị Hồng sâm Hàm lượng saponin cao giá trị Hồng sâm lớn Saponin thành phần hóa học chính, chúng sản xuất hợp chất Nhận xét: - Ở lô chuột gây viêm phổi LPS, điểm đánh giá tổn thương phổi tăng có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng không gây viêm (chuột lô tăng khoảng 7.966 % so với lô 1) - Ở lô dùng chế phẩm nghiên cứu, điểm đánh giá tổn thương phổi giảm rõ so với lơ mơ hình khơng dùng chế phẩm nghiên cứu (chuột lô lô giảm khoảng 68,32 % 69,55 % so với lô 2) - Tác dụng làm giảm tổn thương phổi lô dùng chế phẩm nghiên cứu liều cao có xu hướng giảm so với lơ dùng chế phẩm nghiên cứu liều thấp, nhiên khác biệt chưa đạt ý nghĩa thống kê (giảm khoảng 3,85 %) 3.2 BÀN LUẬN 3.2.1 Tác dụng chống viêm thành phần dược liệu Viên nang Tống vệ nhân bào chế từ thành phần dược liệu theo phương pháp đại, sản phẩm nghiên cứu phát triển dựa thuốc cổ truyền Ngọc bình phong tán Ngọc bình phong tán thuốc cổ có cơng dụng ích khí, cố biểu hãn, thường sử dụng để chữa chứng bệnh phần biểu hư cảm mạo người thể chất hư nhược Bài thuốc Ngọc bình phong tán gồm vị thuốc Hồng kỳ, Bạch truật, Phịng phịng Từ sở thuốc Ngọc bình phong tán, viên nang Tống vệ nhân thêm nhiều vị thuốc bao gồm Mộc hương, Đông trùng hạ thảo, Kê huyết đằng, Phục thần, Đương quy, Hồng sâm Trong thành phần dược liệu có tác dụng trực tiếp chống viêm phổi cấp tính Đơng trùng hạ thảo, Hồng kỳ, Bạch truật, Phịng phong Cordycepin thành phần có Đơng trùng hạ thảo, chất kích hoạt cụ thể thụ thể adenosine adenosine ngoại bào có tác dụng chống viêm quan trọng tổn thương phổi cấp tính Các nghiên cứu dược lý di truyền thụ thể adenosine A2A đường truyền tín hiệu làm trung gian cho đặc tính chống viêm adenosine tổn thương phổi LPS Tăng điều hịa A2A cải thiện q trình chữa bệnh sau chấn thương phổi cấp tính LPS A2A điều chỉnh giảm biểu IL-12, thúc đẩy phát triển mơi 47 trường cytokine chống viêm kích thích q trình sửa chữa Một nghiên cứu gần cho thấy việc hít phải chất chủ vận ATL202 thụ thể adenosine chọn lọc A2A làm giảm di chuyển bạch cầu trung tính LPS gây ra, tính thấm vi mạch giải phóng chemokine, giúp cải thiện tình trạng tổn thương phổi cấp tính lâm sàng Hiện tại, có báo cáo cordycepin adenosine tương tác để thúc đẩy tác dụng chống viêm sửa chữa tế bào, để bảo vệ phổi Các nghiên cứu nồng độ thấp cordycepin ức chế phản ứng oxy hóa gốc tự cách hiệu Trong trình viêm phổi virus, gốc tự siêu oxy hóa làm hỏng chức ty thể gây rối loạn chức ty thể Điều dẫn đến tổn thương tế bào phổi giai đoạn suy hô hấp cấp, nguyên nhân quan trọng gây rối loạn chức phổi Do đó, cordycepin có tác dụng loại bỏ gốc tự trì hỗn, ức chế ngăn chặn phá hủy q trình oxy hóa gốc oxy hoạt tính / oxy tự để bảo vệ chức ty thể tế bào mô khỏi bị oxy hóa [3] Năm 2018, Min Li cộng tác dụng bảo vệ điều trị Hồng kỳ mơ hình gây viêm phổi LPS chuột làm sáng tỏ chế phân tử tiềm Kết chứng minh Hoàng kỳ giảm độc lực thay đổi mô bệnh học phổi LPS gây ra, giảm tỷ lệ trọng lượng ướt/ khô nồng độ protein, ức chế sản xuất yếu tố hoại tử khối ualpha (TNF-α) interleukin-6 (IL-6) trọng dịch rửa phế quản Hơn nữa, giảm đáng kể biểu protein mRNA TLR-4, kinase-1 liên kết với thụ thể interleukin-1 (IRAK-1) yếu tố nhân-kappa B (NF-κB) Những phát cho thấy Hồng kỳ có tác dụng bảo vệ điều trị chuột viêm phổi LPS gây thơng qua việc điều chỉnh đường tín hiệu TLR-4 Ni dưỡng kích hoạt lưu thơng máu phương pháp điều trị có lợi cho viêm phổi [5] Bạch truật loại dược liệu truyền thống có tác dụng chống viêm Nó sử dụng rộng rãi để điều trị hội chứng sốt, cảm lạnh, long đờm, phù nề đau khớp quốc gia Đông Nam Á Trong rễ Bạch truật có chứa atractylon, atractylon cho thấy tác dụng chống virus đáng kể Điều trị atractylon liều 10 - 40 mg/kg ngày làm giảm độc lực tổn thương 48 phổi vi rút cúm A (IAV- Influenza A virus, loại virus chủ yếu gây nhiễm trùng đường hô hấp người, với tỷ lệ mắc bệnh tử vong cao) gây giảm nồng độ interleukin (IL)-6 huyết thanh, yếu tố hoại tử khối u-α IL-1β, tăng mức interferon-β (IFN-β) Điều trị với atractylon điều chỉnh biểu thụ thể Toll-like (TLR7), yếu tố liên quan đến thụ thể yếu tố gây hoại tử khối u IFN-β mRNA giảm biểu protein yếu tố hạt nhân mô phổi chuột bị nhiễm IAV Những kết chứng minh atractylon làm giảm đáng kể tổn thương phổi IAV gây thông qua việc điều chỉnh đường truyền tín hiệu TLR7 đảm bảo đánh giá thêm NF-κB tác nhân điều trị virus cúm A (IAV) [34] Thành phần Hồng sâm chất kháng khuẩn, đặc biệt chống lại mầm bệnh gây nhiễm trùng đường hô hấp động vật Một số chế có để ức chế virus cải thiện đáp ứng kháng thể toàn thân niêm mạc, ức chế hemagglutinin huyết thanh, tăng sinh tế bào lympho, tỷ lệ sống sót tế bào thải virus phổi Ngồi ra, làm giảm mức độ biểu cytokine tiền viêm chemokine sản xuất tế bào biểu mơ đường thở đại thực bào, ngăn ngừa giảm viêm Trong trường hợp nhiễm trùng vi khuẩn, Hồng sâm hoạt động cách giảm bớt sản xuất cytokine gây viêm, tăng tỷ lệ sống sót kích hoạt tế bào thực bào tế bào tiêu diệt tự nhiên Ngồi ra, cịn ức chế hình thành màng sinh học gây phân tán hòa tan màng sinh học trưởng thành Hầu hết thử nghiệm lâm sàng cho thấy Hồng sâm, liều lượng khác nhau, phương pháp dự phịng theo mùa an tồn hiệu quả, làm giảm triệu chứng giảm nguy thời gian bị cảm lạnh cúm Tổng hợp lại, phát hỗ trợ hiệu Hồng sâm tác nhân điều trị dự phịng nhiễm trùng đường hơ hấp [6] Chiết xuất rễ khơ Đương quy có tác dụng chống viêm Tác dụng chống viêm chiết xuất rễ khô Đương quy đại thực bào chuột RAW 264.7 lipopolysaccharide (LPS) gây đánh giá xét nghiệm đo màu dựa tetrazolium xét nghiệm thuốc thử Griess, xét nghiệm đa cytokine, phản ứng chuỗi polymerase phiên mã ngược thời gian thực, 49 xét nghiệm Fluo-4 canxi Chiết xuất rễ khô Đương quy phục hồi khả tồn tế bào RAW 264.7 nồng độ lên đến 200 µg/mL, cho thấy tác dụng chống viêm đáng ý Chiết xuất rễ khô Đương quy trưng bày IC50 = 257,0 µg/mL interleukin (IL)-6, yếu tố hoại tử khối u (TNF)-α, kích hoạt hóa tế bào monocyte yếu tố (MCP)-1, điều chỉnh hoạt hóa, tế bào T bình thường biểu tiết ra, yếu tố kích thích thuộc địa bạch cầu hạt, yếu tố kích thích thuộc địa đại thực bào bạch cầu hạt, yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu, chemokine cảm ứng LPS, protein gây viêm đại thực bào canxi nội bào tương ứng Ngồi ra, cịn ức chế sản xuất oxit nitric LPS gây biểu mRNA LPS gây Dữ liệu cho thấy có tác dụng chống viêm đại thực bào chuột RAW 264.7 LPS gây [11] Thí nghiệm chứng minh tác dụng chống viêm Kê huyết đằng Chien-Chen Hsu cộng chứng minh vào năm 2009 sau: chuột Sprague-Dawley điều trị đường uống với chất chiết xuất từ Kê huyết đằng 28 ngày liên tục, sau chuột tiêm vào màng bụng với CCl4 Những chuột cho thấy giảm đáng kể nồng độ huyết CCl4 gây dấu hiệu enzym gan (aspartate alanin aminotransferase) Mô bệnh học gan cho thấy làm giảm tỷ lệ tế bào chất hoại tử CCl4 gây chuột Tiền xử lý với dịch chiết từ Kê huyết đằng cho thấy khả chống viêm biểu cyclooxygenase-2, nitric oxide synthase cảm ứng myeloperoxidase, mức nitrit nitrat chuột Sprague-Dawley CCl4 gây Kết cho thấy việc uống dịch chiết Kê huyết đằng làm giảm căng thẳng oxy hóa viêm chuột Sprague-Dawley CCl4 (Cacbon tetrachloride) gây [13] Năm 2008, Feng Zhao cộng phát chiết xuất ete dầu hỏa Quảng mộc hương ức chế mạnh mẽ việc sản xuất mức NO tế bào đại thực bào chuột RAW 264,7 Các sesquiterpenes phân lập từ chiết xuất ete dầu mỏ hoạt động Hơn nữa, sesquiterpenes khác tổng hợp phương pháp hóa học Tác động chúng việc sản xuất NO LPS gây giải phóng TNF-α báo cáo Các hợp chất 1, 3, 9, 17 18 cho thấy hoạt động ức chế đáng kể việc 50 sản xuất NO giải phóng TNF-α với giá trị IC 50 thấp μmol/l Các nghiên cứu cho thấy liên kết đơi ngoại vịng cần thiết cho hoạt động ức chế sesquiterpenes việc sản xuất NO [15] Phòng phong sử dụng với tác dụng chống Tác dụng chống viêm dịch chiết rễ Phòng phong (SDE) đánh giá ống nghiệm tế bào gây viêm LPS Tế bào RAW 264,7 ni mơi trường mơi trường thích hợp Tế bào ủ môi trường ẩm % CO2 37 °C Để kích thích tế bào, mơi trường thay môi trường lipopolysaccharide mức 1 μg/mL thêm vào có khơng có SDE Thì kết cho thấy tế bào xử lí SDE kích thích LPS 24 giờ, SDE ức chế đáng kể việc sản xuất NO, PGE 2, TNF-α, IL-6 phạm vi 200 400 μg/mL Ngồi ra, SDE khơng ảnh hưởng đến khả tồn tế bào không độc hại tế bào RAW 264,7 SDE thúc đẩy trình phục hồi sức chịu đựng chi sau, ức chế sản xuất cytokine tiền viêm chất trung gian [17] Trong nghiên cứu Jin-Woo Jeong cộng năm 2018 chứng minh tác dụng chống viêm chiết xuất ethanol Phục thần đại thực bào RAW 264.7 kích thích lipopolysaccaride (LPS) Theo thông số viêm, việc sản xuất oxit nitric (NO), prostaglandin E2 (PGE2), interleukin (IL)-1β yếu tố hoại tử khối u (TNF)-α đánh giá Kết chiết xuất ethanol Phục thần có tác dụng ức chế mạnh sản xuất NO ức chế giải phóng PGE2 đại thực bào LPS gây mà không ảnh hưởng đến khả tồn tế bào Chiết xuất ethanol Phục thần làm giảm đáng kể tiết LPS cytokine gây viêm IL-1β TNF-α gây Ngoài ra, biểu LPS gây NO synthase cảm ứng (iNOS), cyclooxygenase (COX-2), IL-1β TNF-α giảm điều trị trước với chiết xuất ethanol Phục thần mức phiên mã Hơn nữa, nõ ức chế rõ ràng chuyển vị hạt nhân LPS gây tiểu đơn vị NF-κB, tương quan với tác dụng ức chế chiết xuất ethanol Phục thần suy thoái chất ức chế kappaB (IκB) Chiết xuất ethanol Phục thần triệt tiêu rõ ràng hoạt động liên kết DNA LPS gây NF-κB, chuyển vị hạt nhân NF-κB p65, tương quan với tác 51 dụng ức chế chiết xuất ethanol Phục thần phân hủy kappaB (IκB) chất ức chế Kết hợp với chiết xuất ethanol Phục thần nhắm mục tiêu phản ứng viêm đại thực bào thông qua ức chế iNOS, COX-2, IL-1β TNF-α thơng qua việc bất hoạt đường tín hiệu NF-κB, hỗ trợ sở dược lý Phục thần loại thuốc thảo dược truyền thống để điều trị chứng viêm rối loạn liên quan [18] Từ thấy thành phần dược liệu viên nang Tống vệ nhân chứa chất có tác dụng chống viêm Các vị thuốc kết hợp với hỗ trợ làm tăng tác dụng chống viêm viên nang Tống vệ nhân.Việc tận dụng nguồn dược liệu kinh nghiệm sử dụng thuốc nhân dân với tiến y dược học góp phần tích cực phịng chống viêm phổi cấp tính Vì thế, nghiên cứu tác dụng chống viêm phổi cấp tính viên nang Tống vệ nhân tạo định hướng nghiên cứu khác tương lai 3.2.2 Mơ hình gây viêm phổi lipopolysaccharide Mơ hình động vật cung cấp cầu nối bệnh nhân nghiên cứu phịng thí nghiệm Các giả thuyết tạo nghiên cứu người thử nghiệm trực tiếp mơ hình động vật Tuy nhiên, khơng có mơ hình động vật kiểm tra giả thuyết lâm sàng khơng có cách để xác nhận tầm quan trọng phát nghiên cứu mà không cần trực tiếp thử nghiệm người Mơ hình gây viêm phổi cách tiêm phúc mạc chuột LPS triển khai theo phương pháp mô tả Alaa N.A.Fahmi cộng (2015) Mơ hình tiến hành lô chuột, lô 10 Đây cỡ mẫu đủ lớn để đảm bảo tính xác tương đối cho nghiên cứu Mơ hình động vật viêm phổi LPS gây sử dụng rộng rãi để nghiên cứu mơ hình phản ứng vật chủ khoang phổi Viêm LPS gây sử dụng để nắm phản ứng phổi phối tử vi khuẩn chọn phục vụ mơ hình đơn giản hóa cho tổn thương phổi cấp tính Các mơ hình nhiễm trùng với tồn vi khuẩn hữu ích việc hiểu đường tự vệ vật chủ chúng cung cấp 52 cơng cụ hữu ích để nghiên cứu hiệu thuốc giao thức tiêm chủng thể Việc gây viêm LPS làm nhiều loại chất trung gian gây viêm giải phóng NO, interleukin, chemokine, yếu tố tăng trưởng Do đó, đại thực bào chuột kích thích LPS mơ hình phổ biến để kiểm tra tác dụng chống viêm sản phẩm tự nhiên thuốc thảo dược Điều LPS tác động lưới nội chất, khởi đầu q trình kích hoạt hệ thống viêm sau chuỗi phản ứng sinh học đại thực bào [33] LPS chất kích thích mạnh hệ miễn dịch bẩm sinh, xâm nhập vào hệ thống tuần hoàn thể với lượng vượt ngưỡng cho phép theo quy định Cơ quan quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ (The United States Food and Drug Administration), chúng kích thích phản ứng miễn dịch, thường viêm LPS sử dụng rộng rãi để tạo viêm phổi thực nghiệm, biểu đặc điểm tổn thương mô phổi viêm phổi người, bao gồm thâm nhiễm bạch cầu, phù phổi, trao đổi khí bất thường tỷ lệ tử vong Các chế đóng góp tiềm bao gồm phá vỡ tính toàn vẹn màng phế nang, mao mạch thâm nhập mức bạch cầu trung tính vào khoảng không gian phế nang [33] Việc sử dụng LPS phúc mạc kích hoạt giải phóng chất trung gian gây viêm vào hệ tuần hồn, gây tổn thương phổi gián tiếp Trong trường hợp này, nội mơ mạch máu phổi cấu trúc bị tổn thương phù mô kẽ biến đổi sinh lý bệnh bật Chuột lô gây viêm phổi bị kích hoạt phản ứng miễn dịch dẫn đến tình trạng viêm phổi cấp tính tình trạng phù phổi xảy biểu tăng lên đáng kể tỷ lệ ướt/ khô phổi, thay đổi mơ bệnh học đáng kể, điển hình phù mô kẽ phế nang vào khoảng kẽ phế nang so sánh với lô không gây viêm phổi Tổng điểm tổn thương phổi chuột lô chứng lơ mơ hình gây viêm phổi cao đáng kể với điểm tổn thương 10 Sự tăng lên số Protein phản ứng C, số dịch rửa phế quản tăng lên đáng kể có ý nghĩa thống kê Các phần mô phổi nhuộm HE lơ chứng có cấu trúc bình thường khơng có dấu hiệu viêm Tuy nhiên, mơ nhóm lơ mơ hình cho thấy dày vách ngăn phế nang, phân bố 53 không khoảng không khí, phù mơ kẽ phổi thâm nhiễm tế bào viêm với đa số tế bào đa nhân trung tính [33] 3.2.3 Hiệu tác dụng chống viêm phổi cấp tính viên nang Tống vệ nhân Trong nghiên cứu việc tiêm phúc mạc LPS xây dựng mơ hình viêm phổi cấp có triệu chứng giống bệnh nhân mắc phải viêm phổi cấp với triệu chứng đặc trưng Tỷ lệ khối lượng ướt/ khơ phổi nhóm mơ hình cao nhóm chứng điều xảy tình trạng tràn dịch màng phổi Những liệu hàm lượng dịch màng phổi nhóm tiêm LPS tăng lên Điều trị dự phòng Tống vệ nhân giúp giảm tỷ lệ khối lượng ướt/ khô phổi, giảm lượng dịch tính thấm phổi so với lơ mơ hình Từ giúp giảm bớt viêm cải thiện phục hồi chức hô hấp phổi Xét nghiệm protein phản ứng C (CRP) sử dụng để tìm tình trạng viêm thể nhiên cho thấy vị trí viêm nghiên nhân gây Vì CRP phần phản ứng miễn dịch có tình trạng viêm diễn nên lơ mơ hình gây viêm phổi, nồng độ protein tăng cao đáng kể Tuy nhiên lơ dùng chế phẩm nghiên cứu số giảm Vì thấy chế phẩm nghiên cứu làm giảm tình trạng viêm phổi làm hệ thống miễn dịch giảm sản xuất CRP từ gan giảm có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 Về giải phẫu bệnh, kết cho thấy phù nề kẽ mức độ phù nề khác số khu vực cho thấy thâm nhiễm xuất huyết Ngồi ra, có thâm nhiễm bạch cầu trung tính, thành phế nang dày màng hyaline hoàn toàn tạo thành cấu trúc giống tổ ong phổi Kết giải phẫu bệnh cho thấy lô sử dụng viên nang Tống vệ nhân cấu trúc phế nang thay đổi mô học thuyên giảm, mô phổi cho thấy thâm nhiễm viêm quanh mạc, phế quản kèm theo tình trạng viêm vách ngăn phế nang xuất 54 huyết loang lổ phế nang kẽ, với biểu mao mạch phế nang mạch máu bị sung huyết nhẹ hơn, vách phế nang mỏng mức độ viêm thấp so với lơ mơ hình Các điểm tổn thương phổi lơ mơ hình 10 so với lơ chứng tăng lên nhiều Tổng điểm tổn thương phổi chuột tiêm LPS cao đáng kể so sánh với chuột bình thường lơ chứng Điểm số tổn thương phổi lô uống Tống vệ nhân thấp so với chuột tiêm LPS, cho thấy tác dụng bảo vệ việc sử dụng Vn-TVN chống lại thay đổi mô bệnh học LPS gây Các số dịch rửa tế bào bao gồm LDH, tổng số tế bào, nồng độ protein, NOx lô dùng chế phẩm nghiên cứu giảm đáng kể so với lơ mơ hình Điều chứng tỏ tác dụng chống viêm chế phẩm nghiên cứu làm giảm tình trạng mơ phổi bị tổn thương, từ giảm giải phóng LDH vào máu chất dịch thể khác, nồng độ LDH dịch rửa phế quản giảm chứng tỏ lượng mô thể bị tổn thương Khi tình trạng viêm cải thiện làm giảm iNOS từ NO có nguồn gốc từ iNOS giảm, khơng có NO phản ứng với oxy peroxynitrit để tạo nito dioxit peroxynitrit, tổng chất NOx từ làm giảm số NOx thí nghiệm dịch rửa phế quản Tổng tế bào dịch rửa phế quản giảm hạn chế kích thích tế bào thành mơ phổi viêm gây ra, protein dịch rửa phế quản tình trạng viêm giảm làm tính thấm màng phế nang - mao mạch hàng rào giảm nên dịch rửa phế quản số giảm lô dùng chế phẩm nghiên cứu Tất số nghiên cứu dịch rửa phế quản giảm đáng kể so với lô mơ hình, giảm đạt ý nghĩa thống kê với p < 0,05 Từ kết đánh giá số dịch rửa phế nang, mô bệnh học phổi xét nghiệm CRP máu cho thấy tác dụng chống viêm viên nang Tống vệ nhân động vật thực nghiệm 55 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Viên nang mềm Tống vệ nhân liều 416 mg/kg/ngày 832 mg/kg/ngày có tác dụng chống viêm phổi gây lipopolysaccharide chuột cống trắng Cụ thể: làm giảm phù phổi thông qua tỷ lệ ướt/ khô nhu mô phổi ( giảm 16,63 - 20,8 %); giảm tổn thương phổi thông qua đánh giá mơ bệnh học phổi; giảm tình trạng viêm phổi thông qua làm giảm protein phản ứng C máu chuột (giảm 61,57 - 64,71 %) đồng thời làm giảm protein (8,4 - 10,8%), tế bào (73,45 - 77,47 %), LDH (giảm 57,7 - 59,87 %) NOx (41,86 - 46,71 %) dịch rửa phế quản so với lô mơ hình (p < 0,05) Các tác dụng viên nang mềm Tống vệ nhân có xu hướng đáp ứng theo liều cụ thể lô chuột dùng chế phẩm nghiên cứu liều cao (832 mg/kg/ngày) thấy số đánh giá trong máu, dịch rửa phế quản mô bệnh học phổi giảm so với lô chuột dùng chế phẩm nghiên cứu với liều thấp (416 mg/kg/ngày) KIẾN NGHỊ - Áp dụng mơ hình đánh giá tác dụng dược liệu, vị thuốc y học cổ truyền phịng viêm đường hơ hấp - Tiếp tục đánh giá thêm nhiều tác dụng khác Viên nang Tống vệ nhân tăng sức đề kháng, tăng cường miễn dịch động vật thực nghiệm 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tổ chức Y tế Thế giới (2009) Tờ thông tin số 331 - Bệnh viêm phổi http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs331/en/index.html Bùi Công Hiển (2018) Sự thật Đông trùng hạ thảo Tạp chí khoa học cơng nghệ Việt Nam, 16 (3): 91 - 93 Kai Yue , Meng Ye , Zuji Zhou , et al (2019) The genus Cordyceps: a chemical and pharmacological review Pharm Pharmacol 65(4): 474-493 DOI: 10.1111/j.2042-7158.2012.01601 Jing Du , Weijing Kan , Hongkun Bao , et al (2021) Interactions Between Adenosine Receptors and Cordycepin (3'- Deoxyadenosine) from Cordyceps Militaris: Possible Pharmacological Mechanisms for Protection of the Brain and the Amelioration of Covid-19 Pneumonia Journal of Biotechnology and Biomedicine, 19 (5): 473 - 482 Đỗ Tất Lợi (2006), Những thuốc vị thuốc Việt Nam (xuất lần thứ 8) NXB Y học, 55 – 58 , 391- 392 , 396 - 397, 804 – 810 , 882 - 884, 887 - 889, 890 - 892 Li Qin , Hong-Ling Tan , Yu-Guo Wang , et al (2018) Astragalus membranaceus and Salvia miltiorrhiza Ameliorate LipopolysaccharideInduced Acute Lung Injury in Rats by Regulating the Toll-Like Receptor 4/Nuclear Factor-Kappa B Signaling Pathway National Library of Medicine DOI:10.1155 / 2018/3017571 Hamid Iqbal , Dong-kwon Rhee (2020) Ginseng alleviates microbial infections of the respiratory tract: a review National Center for Biotechnology Information DOI: 10.1016/j.jgr.2019.12.001 Yong-Xiang Wu , Wei-Wei Lu , Yu-Chuang Geng , et al (2020) Antioxidant, Antimicrobial and Anti-Inflammatory Activities of Essential Oil Derived from the Wild Rhizome of Atractylodes macrocephala Chem Biodivers 15; 226: 143-167 DOI: 10.1002/cbdv.202000268 Sihao Gu , Ling Li , Hai Huang , et al (2019) Antitumor, Antiviral, and AntiInflammatory Efficacy of Essential Oils from Atractylodes macrocephala 57 Koidz Produced with Different Processing Methods Molecules, 24(16) : 2956 DOI: 10.3390/molecules24162956 10 Jian-Ping Ma , Ling Jin , Ying-Dong Li , et al ( 2015) Phytochemical progress made in investigations of Angelica sinensis (Oliv.) Diels Chinese Journal of Natural Medicines Vol 13, Pages 241 - 249 11 Kim Sun-Ae , Hye-Kyung , Kim Ji-Young , et al (2011) A Review of Pharmacological Effects of Angelica gigas, Angelica sinensis, Angelica acutiloba and their Bioactive Compounds The Journal of Korean Medicine Vol 32, Issue 4, Pages:1-24 12 Young-Jin Kim , Ji Young Lee , Hyun-Ju Kim, et al (2018) AntiInflammatory Effects of Angelica sinensis (Oliv.) Diels Water Extract on RAW 264.7 Induced with Lipopolysaccharide National Center for Biotechnology Information DOI:10.3390/nu10050647 13 Min Ye , Wen-Zhi Yang , Ke-Di Liu , et al (2012) Characterization of flavonoids in Millettia nitida var hirsutissima by HPLC/DAD/ESI-MSn Vol 2, Issue 1, Pages 35-42 14 Chien-Chen Hsu , Chin-Lin Hsu , Shao-En Tsai , et al (2009) Protective Effect of Millettia reticulata Benth Against CCl4-Induced Hepatic Damage and Inflammatory Action in Rats Journal of Medicinal Food,12( 4) : 210 225 https://doi.org/10.1089/jmf.2008.1227 15 Ting Zhao , Mei Dong , Hiromasa Kiyota , et al (2017) Chemical constituents from the genus Saussurea and their biological activities The journal Heterocyclic Communications https://doi.org/10.1515/hc-20170069 16 Feng Zhao , Hui Xu , En-Qi He , et al (2008) Inhibitory effects of sesquiterpenes from Saussurea lappa on the overproduction of nitric oxide and TNF-α release in LPS-activated macrophages Journal of Asian Natural Products Research, Pages 1045-1053 17 Min Yang , Wen-le Wang , Jian-ping Xu , et al (2020) Saposhnikovia divaricat - An Ethnopharmacological, Phytochemical and Pharmacological Review Chinese Journal of Integrative Medicine,volume 26, pages 873880 58 18 Jin Mi Chun , Hyo Seon Kim , A Yeong Lee , et al (2016) AntiInflammatory and Antiosteoarthritis Effects of Saposhnikovia divaricata ethanol Extract: In Vitro and In Vivo Studies Evidence-Based Complementary and Alternative https://doi.org/10.1155/2016/1984238 19 Jin-Woo Jeong , Hye Hyeon Lee , Min Ho Han , et al (2014) Ethanol extract of Poria cocos reduces the production of inflammatory mediators by suppressing the NF-kappaB signaling pathway in lipopolysaccharidestimulated RAW 264.7 macrophages National Center for Biotechnology Information DOI: 10.1186/1472-6882-14-101 20 Grijalva C.G , Poehling K.A , Nuorti J.P (2006) National impact of universal childhood immunization with pneumococcal conjugate vaccine on outpatient medical care visits in the United States Department of Pediatrics; 118 : 865-873 21 Lee G.E , Lorch S.A , Sheffler-Collins S.M (2010) National hospitalization trends for pediatric pneumonia and associated complications National Library of Medicine DOI: 10.1542/peds.2009-3109 22 Heron M , Hoyert D.L , Murphy S.L (2009) Births: Final Data for 2006 Natl Vital Stat Rep 57 (7) : 1-134 https://www.cdc.gov/nchs/data/nvsr/nvsr57/nvsr57_07.pdf 23 Scott C Litin (2018) Mayo Clinic Family Health Book (5th Edition), NXB Mayo Clinic Press, pages 761-795 24 Trần Thái Hà (2020) Điều trị viêm phế quản theo Đông y Sức khỏe đời sống https://suckhoedoisong.vn/thuoc-dong-y-dieu-tri-viem-phe-quan169125901.htm 25 Li Qin , Hong-Ling Tan, Min Li , et al (2018) Astragalus membranaceus and Salvia miltiorrhiza Ameliorate Lipopolysaccharide-Induced Acute Lung Injury in Rats by Regulating the Toll-Like Receptor 4/Nuclear Factor-Kappa B Signaling Pathway National Library of Medicine DOI:10.1155/2018/3017571 26 Goncalves-de-Albuquerque C F , Silva A R , Burth P , et al (2012) Oleic acid induces lung injury in mice through activation of the ERK pathway Mediator of Inflammation p - 11 DOI: 10.1155/2012/956509 59 27 Ann-Sophie Alm , Ka Li , Hong Chen , et al ( 2010) Variation of Lipopolysaccharide-induced acute lung injury in eight strains of mice Respiratory Phýiology & Neurobiology Pages 157-164 28 Chen H , Ding Y , Chen W , et al (2019) Glibenclamide alleviates inflammation in oleic acid model of acute lung injury through NLRP3 inflammasome signaling pathway Drug design, Development and Therapy 20 (13): 1545 - 1554 DOI: 10.2147/dddt.s196040 29 Sara M Nehring , Amandeep Goyal , Bhupendra C Patel (2021) C Reactive Protein StatPearls Publishing; Treasure Island (FL): Aug 11, 2021 30 Alaa N.A Fahmi , George S.G Shehatou , Abdelhadi M Shebl , et al (2015) Febuxostat protects rats against lipopolysaccharide-induced lung inflammation in a dose-dependent manner Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology 389, pages 269-278 31 Zhang H X , Liu S J , Tang X L , et al (2016) H2S Attenuates LPSInduced Acute Lung Injury by Reducing Oxidative/Nitrative Stress and Inflammation Cellular Physiology and Biochemistry 40(2):1603–1612 doi: 10.1159/000453210 32 Gu Z , Ling Y , Cong B (2020) Peroxynitrite mediated acute lung injury induced by lipopolysaccharides in rats Zhonghua Yi Xue Za Zhi 2020;80(1): 58-61 33 Fahmi A.N.A , Shehatou G.S.G , Salem H.A (2018) Levocetirizine Pretreatment Mitigates Lipopolysaccharide-Induced Lung Inflammation in Rats Biomed Res Int 2018;2018 : 7019759 Published 2018 Aug 13 DOI:10.1155/2018/7019759 34 Yang Cheng , Jing-Yin Mai , Tian-Lu Hou , et al (2016) Antiviral activities of atractylon from Atractylodis Rhizoma National Library of Medicine, 14(4): 3704 - 3710 DOI: 10.3892/mmr.2016.5713 35 https://duocphamotc.com/tong-ve-nhan/ 36 https://tracuuduoclieu.vn/ 60 61 ... ? ?Đánh giá tác dụng chống viêm phổi cấp tính viên nang Tống vệ nhân động vật thực nghiệm? ?? lựa chọn để nghiên cứu sâu phân tích với mục tiêu: Đánh giá tác dụng chống viêm phổi cấp tính viên nang Tống. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGUYỄN THỊ MINH THƯ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM PHỔI CẤP TÍNH CỦA VIÊN NANG TỐNG VỆ NHÂN TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN... với tác dụng tăng sức đề kháng, tăng cường miễn dịch, phịng, chữa trị bệnh đường hơ hấp Với mong muốn nghiên cứu sâu hiệu tác dụng viên nang Tống vệ nhân chống viêm phổi cấp tính, đề tài: “Đánh