Đánh giá độc tính bán trường diễn của cao lỏng bài thuốc Cửu vị Khương hoạt thang gia giảm trên động vật thực nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y LÊ THỊ ĐÀO ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH BÁN TRƢỜNG DIỄN CỦA CAO LỎNG BÀI THUỐC CỬU VỊ KHƢƠNG HOẠT THANG GIA GIẢM TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆ.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y LÊ THỊ ĐÀO ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH BÁN TRƢỜNG DIỄN CỦA CAO LỎNG BÀI THUỐC CỬU VỊ KHƢƠNG HOẠT THANG GIA GIẢM TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SỸ ĐẠI HỌC HÀ NỘI - 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y LÊ THỊ ĐÀO ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH BÁN TRƢỜNG DIỄN CỦA CAO LỎNG BÀI THUỐC CỬU VỊ KHƢƠNG HOẠT THANG GIA GIẢM TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SỸ ĐẠI HỌC Cán hƣớng dẫn: ThS Đỗ Thị Hƣơng Lan HÀ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian dài học tập Học viện Quân y, đƣợc giúp đỡ Nhà trƣờng Phòng, Ban, Bộ môn Học viện Viện Đào tạo Dƣợc, đến tơi hồn thành chƣơng trình học tập Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Đảng ủy - Ban Giám đốc Học viện Viện Đào tạo Dƣợc, Phịng Đào tạo, Bộ mơn Dƣợc lý - Viện Đào tạo Dƣợc tạo điều kiện thuận lợi cho tơi thực hồn thành khóa luận Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn đặc biệt đến ThS Đỗ Thị Hƣơng Lan ngƣời trực tiếp hƣớng dẫn, giúp đỡ kiến thức, tài liệu phƣơng pháp để tơi hồn thành đề tài khóa luận tốt nghiệp Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Thầy, Cơ tồn thể Cán bộ, Nhân viên Viện Đào tạo Dƣợc, đặc biệt Bộ môn Dƣợc lý ln ln nhiệt tình giúp đỡ, hƣớng dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho q trình học tập, nghiên cứu để tơi hồn thành khóa luận Tơi xin trân trọng cảm ơn Thầy, Cơ Hội đồng chấm khóa luận dành nhiều thời gian ý kiến quý báu q trình hồn thiện bảo vệ khóa luận Tơi vơ biết ơn chăm sóc, động viên gia đình, bạn bè ngƣời thân yêu tôi, luôn bên cạnh chia sẻ giúp đỡ suốt thời gian qua Hà Nội, ngày 21 tháng năm 2022 Học viên Lê Thị Đào MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG - TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ BÀI THUỐC CỬU VỊ KHƢƠNG HOẠT THANG GIA GIẢM TRONG ĐIỀU TRỊ 1.1.1 Nguồn gốc thuốc 1.1.2 Những vị thuốc thuốc 1.2 TỔNG QUAN VỀ PHƢƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐỘC TÍNH BÁN TRƢỜNG DIỄN CỦA THUỐC 24 1.2.1 Mục tiêu 24 1.2.2 Lựa chọn mơ hình thử 24 1.2.3 Thời gian thử 25 1.2.4 Liều dùng 25 1.2.5 Đƣờng dùng thuốc 26 1.2.6 Theo dõi, đánh giá 27 CHƢƠNG - NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 29 2.1.1 Nguyên vật liệu 29 2.1.2 Động vật thí nghiệm 29 2.1.3 Thiết bị, hóa chất 30 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.2.1 Thiết kế thí nghiệm 31 2.2.2 Các tiêu đánh giá 31 2.2.3 Thời điểm xét nghiệm 32 2.2.4 Phƣơng pháp xác định số nghiên cứu 33 2.2.5 Phƣơng pháp xử lý kết nghiên cứu 35 2.3 ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 35 2.4 ĐẠO ĐỨC NGHIÊN CỨU 35 CHƢƠNG - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 36 3.1 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 36 3.1.1 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu lên tình trạng chung chuột cống trắng dùng dài ngày 36 3.1.2 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu lên trọng lƣợng thể chuột cống trắng dùng dài ngày 36 3.1.3 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu đến số số huyết học chuột dùng dài ngày 37 3.1.4 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu đến số số sinh hóa chuột dùng dài ngày 42 3.1.5 Kết mơ bệnh học gan, lách, thận chuột thí nghiệm 48 3.2 BÀN LUẬN 51 3.2.1 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu đến tình trạng chung thay đổi trọng lƣợng chuột 52 3.2.2 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu lên chức quan tạo máu 53 3.2.3 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu đến gan 54 3.2.4 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu đến thận 56 3.2.5 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu đến lách 57 KẾT LUẬN 58 KIẾN NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang 1.1 Thành phần thuốc Cửu vị Khƣơng hoạt thang gia giảm 3.1 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu lên trọng lƣợng thể chuột 36 3.2 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu lên số lƣợng hồng cầu chuột 37 3.3 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu lên hàm lƣợng 38 huyết sắc tố máu chuột 3.4 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu lên hematocrit chuột 39 3.5 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu lên thể tích trung bình hồng cầu chuột 40 3.6 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu lên số lƣợng bạch cầu chuột 41 3.7 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu lên số lƣợng tiểu cầu chuột 42 3.8 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu hoạt độ AST 43 3.9 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu hoạt độ ALT 44 3.10 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu số albumin huyết tƣơng 45 3.11 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu số bilirubin toàn phần 46 3.12 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu lên cholesterol toàn phần máu 47 3.13 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu lên nồng độ creatinin máu chuột 48 DANH MỤC CÁC HÌNH STT Tên hình Trang 1.1 Khƣơng hoạt 1.2 Phòng phong 1.3 Xuyên khung 1.4 Sinh địa 10 1.5 Cam thảo 12 1.6 Thƣơng truật 14 1.7 Quế chi 15 1.8 Bạch 17 1.9 Hoàng cầm 18 1.10 Kim ngân hoa 20 1.11 Cát cánh 21 1.12 Bách 23 2.1 Cao lỏng thuốc CVKHT gia giảm 29 2.2 Chuột cống trắng dòng Wistar 30 2.3 Máy xét nghiệm huyết học sinh hóa sử dụng nghiên cứu 31 2.4 Sơ đồ tiến hành nghiên cứu độc tính bán trƣờng diễn chuột cống trắng 33 3.1 Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lô chứng (chuột 05, lơ chứng) 49 3.2 Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lô trị (chuột 11, lô trị 1) 49 3.3 Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lô trị (chuột 25, lô trị 2) 49 3.4 Hình ảnh vi thể gan chuột (HE, X400) 50 3.5 Hình ảnh vi thể lách chuột (HE, X400) 50 3.6 Hình ảnh vi thể thận chuột (HE, X400) 51 Hình 3.1 H nh ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lơ chứng (chuột 05, lơ chứng) Hình 3.2 H nh ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lô trị (chuột 11, lơ trị 1) Hình 3.3 H nh ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lô trị (chuột 25, lơ trị 2) 49 Nhận xét ảnh: Hình ảnh đại thể tạng gan, lách, thận chuột lơ trị (hình 3.2), lơ trị (hình 3.3), lơ cho uống CPNC, có màu nâu đỏ thẫm đồng đều, bề mặt nhẵn, khơng có u cục xuất huyết, có đàn hồi ấn xuống, khơng khác biệt so với hình ảnh gan, lách, thận chuột lơ chứng (hình 3.1) 3.1.5.2 Hình ảnh vi thể gan chuột Lô chứng Lô trị Lô trị H nh 3.4 H nh ảnh vi thể gan chuột (HE, X400) Nhận xét ảnh: Hình ảnh vi thể gan dƣới kính hiển vi với độ khuếch đại 400 lần chuột lô trị lô trị 2, lô cho uống CPNC không khác biệt so với hình ảnh vi thể gan chuột lơ chứng Trên hình ảnh khơng thấy ổ xuất huyết ổ hoại tử, thối hóa tế bào gan 3.1.5.3 Hình ảnh vi thể lách chuột Lơ chứng Lơ trị Lô trị H nh 3.5 H nh ảnh vi thể lách chuột (HE, X400) Nhận xét ảnh: Hình ảnh vi thể lách dƣới kính hiển vi với độ khuếch đại 400 lần chuột lô trị lô trị 2, lô cho uống CPNC, khơng khác biệt so với hình ảnh vi thể lách chuột lơ chứng Trên hình ảnh thấy vùng tủy trắng bắt màu xanh thẫm, tập trung nang lympho lớn Vùng tủy đỏ có màu 50 xanh đỏ, với xoang nang chứa nhiều hồng cầu số đại thực bào Không thấy ổ xuất huyết hoại tử 3.1.5.4 Hình ảnh vi thể thận chuột Lơ chứng Lơ trị Lơ trị Hình 3.6 H nh ảnh vi thể thận chuột (HE, X400) Nhận xét ảnh: Hình ảnh vi thể thận dƣới kính hiển vi với độ khuếch đại 400 lần chuột lô trị lô trị 2, lô cho uống CPNC, khơng khác biệt so với hình ảnh vi thể thận chuột lô chứng Cấu trúc vùng chức thận bình thƣờng Các tiêu mơ bệnh học đọc Bộ môn khoa Giải phẫu bệnh – Pháp y, bệnh viện Quân y 103 Kết nghiên cứu mô bệnh học gan, lách, thận chuột cho thấy CPNC dùng đƣờng uống với liều 9,6 g/kg/ngày liều 28,8 g/kg/ngày liên tục 30 ngày chƣa thấy gây tổn thƣơng gan, thận, lách chuột 3.2 BÀN LUẬN Nghiên cứu độc tính bƣớc quan trọng nghiên cứu phát triển thuốc Thuốc muốn đƣợc sử dụng ngồi hiệu lực cần phải an tồn Xét tổng thể an tồn cịn quan trọng hiệu lực, thuốc dù hiệu lực đến đâu, nhƣng khơng an tồn khơng đƣợc sử dụng [35] Để nghiên cứu tính an tồn thuốc, cần phải nghiên cứu độc tính cấp bán trƣờng diễn Nghiên cứu độc tính bán trƣờng diễn đƣợc thực cách cho động vật thí nghiệm uống thuốc thử hàng ngày liên tục khoảng thời 51 gian định Theo hƣớng dẫn WHO, hƣớng dẫn OECD quy định Bộ Y tế Việt Nam thời gian nghiên cứu bán trƣờng diễn động vật thƣờng gấp lần thời gian dự kiến dùng ngƣời [30], [31], [32] Tiến hành đánh giá độc tính bán trƣờng diễn cao lỏng thuốc CVKHT gia giảm lô chuột cống trắng, lô 10 con, lô chứng sinh lý: uống nƣớc cất; lô dùng CPNC với liều 9,6 g/kg/ngày (tƣơng đƣơng liều dự kiến ngƣời) lô dùng liều 28,8 g/kg/ngày (tƣơng đƣơng gấp 03 lần liều dự kiến ngƣời), uống liên tục 30 ngày Các tiêu để đánh giá bao gồm: tình trạng chung thay đổi trọng lƣợng chuột, số huyết học, số sinh hóa đánh giá chức gan, thận mô bệnh học gan, lách, thận chuột thí nghiệm Trên sở kết nghiên cứu, ta bàn luận ảnh hƣởng CPNC tiêu nghiên cứu 3.2.1 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu đến tình trạng chung thay đổi trọng lƣợng chuột Tình trạng chung thay đổi trọng lƣợng phản ánh tình trạng sức khỏe động vật số bắt buộc đánh giá nghiên cứu độc tính bán trƣờng diễn [36] Trong tồn thời gian thí nghiệm, chuột đƣợc nuôi nhốt điều kiện (nhiệt độ, độ ẩm, thức ăn ) quan sát thấy chuột lơ hoạt động bình thƣờng, lơng mƣợt, da niêm mạc bình thƣờng, ăn uống bình thƣờng, phân thành khn Khơng thấy có biểu bất thƣờng chuột tất lô suốt thời gian tiến hành nghiên cứu Từ kết nghiên cứu bảng 3.1 cho thấy, trọng lƣợng chuột lô, lơ tăng có ý nghĩa thống kê thời gian nghiên cứu Điều kiện nuôi dƣỡng tốt tăng trọng lƣợng chuột lô trƣớc sau nghiên cứu phù hợp Và so sánh hai lô dùng CPNC với lô chứng thời điểm thấy trọng lƣợng chuột khác biệt (p > 0,05) Nhƣ vậy, việc uống CPNC với mức liều thời gian sử dụng nghiên cứu chƣa thấy gây ảnh hƣởng đến tình trạng chung thay đổi trọng lƣợng chuột thí nghiệm 52 3.2.2 Ảnh hưởng chế phẩm nghiên cứu lên chức quan tạo máu Theo hƣớng dẫn WHO, số huyết học xét nghiệm bắt buộc đánh giá độc tính thuốc thử Máu tổ chức quan trọng máu liên quan mật thiết với phận, quan thể [36] Để tạo đƣợc máu yêu cầu chức quan tạo máu tốt có đầy đủ nguyên liệu tạo máu, hóa chất độc hại, thuốc xâm nhập vào thể ảnh hƣởng đến nhiều quan phận có quan tạo máu Nếu thuốc ảnh hƣởng đến quan tạo máu trƣớc hết thành phần máu bị thay đổi Vì vậy, để đánh giá ảnh hƣởng thuốc đến chức tạo máu, tiến hành xác định số lƣợng hồng cầu, hàm lƣợng huyết sắc tố (hemoglobin), hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu, số lƣợng bạch cầu, số lƣợng tiểu cầu máu chuột Chức quan trọng hồng cầu vận chuyển oxy đến quan vận chuyển khí carbonic từ quan đến phổi Hồng cầu thực hện chức nhờ vào hemoglobin Hemoglobin kết hợp với oxy tạo thành oxyhemoglobin, khả kết hợp lỏng lẻo thuận nghịch hemoglobin oxy tạo điều kiện cho việc hemoglobin nhận oxy phổi vận chuyển đến mơ giải phóng oxy cho tế bào Để đảm bảo lƣợng oxy cho mơ phải trì đủ lƣợng huyết sắc tố, định lƣợng huyết sắc tố cho biết chức hồng cầu Hematocrit tỷ lệ phần trăm khối hồng cầu máu toàn phần Nếu thuốc gây thiếu máu làm giảm lƣợng huyết sắc tố thay đổi số lƣợng hồng cầu hematocrit [37] Chức bạch cầu thực bào sản xuất gamma globulin, chống lại tác nhân lạ vào thể Số lƣợng bạch cầu gián tiếp cho thấy chức bảo vệ thể, đồng thời phản ánh hoạt động quan tạo máu Thuốc bệnh tật làm thay đổi số lƣợng công thức bạch cầu [38] Tiểu cầu có nhiệm vụ tham gia vào q trình đơng máu Thuốc làm tăng giảm số lƣợng tiểu cầu gây ảnh hƣởng đến q trình [38] Đồng thời, số lƣợng tiểu cầu đánh giá đƣợc phần ảnh hƣởng thuốc lên chức tạo máu 53 Qua kết nghiên cứu bảng 3.2 - 3.7, so sánh lô với thời điểm lô thời điểm nghiên cứu thấy số huyết học máu chuột khơng có khác biệt (p > 0,05) Nhƣ vậy, việc uống CPNC với mức liều thời gian sử dụng nghiên cứu chƣa thấy gây ảnh hƣởng lên chức quan tạo máu chuột thí nghiệm 3.2.3 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu đến gan Gan tạng lớn thể, trung tâm chuyển hóa quan trọng thể có tính chất sinh mạng Vì vậy, nghiên cứu ảnh hƣởng thuốc đến gan cần thiết đánh giá độc tính thuốc [39] Khi đƣa thuốc vào thể, thuốc gây độc với gan, làm tổn thƣơng gan Sự tổn thƣơng tế bào gan làm tăng hoạt độ số enzym có nguồn gốc gan huyết thanh, quan trọng enzym ALT AST ALT enzym có nhiều gan, khu trú bào tƣơng tế bào nhu mô gan Khi tổn thƣơng hủy hoại tế bào gan, chí cần thay đổi tính thấm màng tế bào gan, hoạt độ ALT máu tăng cao Khác với ALT, 2/3 AST khu trú ty thể (mitochondria) 1/3 lƣợng AST khu trú bào tƣơng tế bào Khi tổn thƣơng tế bào gan mức độ dƣới tế bào, AST ty thể đƣợc giải phóng Do đó, tổn thƣơng gan, AST ALT tăng cao so với bình thƣờng, nhƣng mức độ tăng ALT cao so với AST, tăng sớm trƣớc có vàng da, tuần đầu vàng da [39], [40] Kết nghiên cứu bảng 3.8 3.9 cho thấy so sánh lô với thời điểm lô thời điểm nghiên cứu thấy hoạt độ enzym AST ALT máu chuột khơng có khác biệt (p > 0,05) Nhƣ vậy, việc uống CPNC với mức liều thời gian sử dụng nghiên cứu chƣa thấy gây tổn thƣơng tế bào gan Một chức quan trọng gan tổng hợp protein, albumin loại protein quan trọng thể với chức trì từ 70 đến 80% áp lực thẩm thấu huyết tƣơng, đồng thời liên kết vận chuyển chất có dạng phân tử nhỏ nhƣ bilirubin, acid béo thuốc có bên máu Khi gan bị tổn thƣơng kéo theo chức 54 gan bị suy giảm, làm giảm khả hấp thụ protein tổng hợp albumin Do việc xét nghiệm số nồng độ albumin máu có giá trị đánh giá tổn thƣơng chức gan [41] Kết nghiên cứu bảng 3.10 cho thấy, CPNC với mức liều thời gian sử dụng nghiên cứu chƣa thấy gây ảnh hƣởng đến số albumin máu chuột, tiêu chứng tỏ CPNC chƣa gây ảnh hƣởng đến chức gan Bilirubin sản phẩm thối hóa hemoglobin lƣới nội mạc võng mô nhƣ gan, lách, tuỷ xƣơng Trong nghiên cứu này, số bilirubin toàn phần máu đƣợc đánh giá trƣớc hết nhằm đánh giá xem thuốc có độc tính với gan khơng (nhƣ gây hủy hoại tế bào gan, gây tắc mật, làm suy giảm chức liên hợp gan làm tăng bilirubin máu) Đồng thời, số cho phép đánh giá thuốc có gây ảnh hƣởng đến đời sống hồng cầu không (nhƣ gây độc làm tan máu dẫn đến tăng billirubin) [41] Kết nghiên cứu bảng 3.11 cho thấy, CPNC với mức liều thời gian sử dụng nghiên cứu chƣa thấy gây ảnh hƣởng đến số bilirubin toàn phần máu chuột, đƣợc xem tiêu chí nói lên CPNC chƣa thấy gây độc với gan, nhƣ chƣa thấy ảnh hƣởng đến đời sống hồng cầu Một vai trị gan chuyển hóa lipid tổng hợp cholesterol sử dụng cholesterol để sản xuất muối mật Vì vậy, đánh giá phần chức chuyển hóa lipid gan thơng qua định lƣợng cholesterol toàn phần Chức gan suy giảm làm rối loạn trình tổng hợp cholesterol Kết nghiên cứu bảng 3.12 cho thấy, CPNC với mức liều thời gian sử dụng nghiên cứu chƣa thấy gây ảnh hƣởng đến nồng độ cholesterol toàn phần máu chuột Kết mô bệnh học gan phù hợp với kết xét nghiệm hóa sinh máu Hình ảnh đại thể vi thể gan lơ uống CPNC khơng có khác biệt so với lô chứng, chƣa thấy xuất ổ xuất huyết ổ hoại tử, thối hóa tế bào gan Nhƣ vậy, cao lỏng thuốc CVKHT gia giảm với mức liều thời gian sử dụng nghiên cứu chƣa thấy gây tổn thƣơng tế bào gan ảnh hƣởng đến chức gan chuột thí nghiệm 55 3.2.4 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu đến thận Thận quan tiết niệu, có vai trò quan trọng bậc để đảm bảo định nội môi Thận dễ bị tổn thƣơng dùng thuốc đặc điểm quan thải trừ, đào thải chất thể qua nƣớc tiểu Để tạo thành nƣớc tiểu, trình lọc thận mơ thận có nhiều máu qua nhất, thời gian lƣợng chất chuyển hoá mà mô thận tiếp xúc thƣờng nhiều [39] Các thuốc sản phẩm chuyển hóa thuốc thƣờng chất lạ thể, qua thận gây độc làm tổn thƣơng thận, từ ảnh hƣởng đến chức thận Hiện nay, nồng độ creatinin số thƣờng đƣợc dùng để đánh giá theo dõi chức thận [41] Nguyên nhân creatinin thành phần đạm máu ổn định nhất, gần nhƣ không phụ thuộc vào chế độ ăn thay đổi sinh lý mà phụ thuộc vào khả đào thải thận Khi cầu thận bị tổn thƣơng, nồng độ creatinin máu tăng sớm ure Kết nghiên cứu bảng 3.12 cho thấy so sánh lô với thời điểm lô thời điểm nghiên cứu thấy nồng độ creatinin máu chuột khơng có khác biệt (p > 0,05) Nhƣ vậy, việc uống CPNC với mức liều thời gian sử dụng nghiên cứu chƣa thấy gây ảnh hƣởng đến chức thận chuột thí nghiệm Kết hoàn toàn phù hợp với kết mơ bệnh học thận Hình ảnh đại thể vi thể thận lô uống CPNC khơng có khác biệt so với lơ chứng Cấu trúc vùng chức thận bình thƣờng 3.2.5 Ảnh hƣởng chế phẩm nghiên cứu đến lách Lách quan bạch huyết lớn nhất, có hình dạng kéo dài Lách tham gia sản xuất tế bào lympho, phá hủy tế bào máu già cỗi, giữ lại sắt, protein chất cần thiết để tạo tế bào máu mới, dự trữ máu cho thể [42] Vì vậy, nghiên cứu ảnh hƣởng thuốc đến lách cần thiết đánh giá độc tính thuốc Trong nghiên cứu này, đánh giá ảnh hƣởng CPNC đến mơ bệnh học lách chuột thí nghiệm Kết nghiên cứu cho thấy, hình ảnh đại thể vi thể lách chuột hai lô dùng CPNC khơng có khác biệt so với lơ chứng, chƣa thấy có hình ảnh 56 tổn thƣơng mơ bệnh học lách chuột Nhƣ vậy, cao lỏng thuốc CVKHT gia giảm với mức liều thời gian sử dụng nghiên cứu chƣa thấy gây ảnh hƣởng đến lách chuột thí nghiệm 57 KẾT LUẬN Trên lô chuột cống trắng cho uống cao lỏng thuốc CVKHT gia giảm liều 9,6 g/kg/ngày (tƣơng đƣơng liều điều trị quy đổi từ liều ngƣời sang liều chuột cống trắng) liều 28,8 g/kg/ngày, liên tục 30 ngày, cho thấy: - Tình trạng chung gồm hoạt động, ăn uống, tình trạng lơng, da, niêm mạc, chất tiết chuột bình thƣờng - Chƣa thấy ảnh hƣởng đến phát triển cân nặng chuột - Chƣa thấy ảnh hƣởng đến số huyết học bao gồm số lƣợng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, nồng độ huyết sắc tố, hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu - Chƣa thấy ảnh hƣởng đến số sinh hóa máu bao gồm hoạt độ enzym AST, ALT, albumin huyết tƣơng, bilirubin toàn phần, cholesterol toàn phần máu nồng độ creatinin máu - Chƣa thấy có hình ảnh tổn thƣơng mơ bệnh học gan, lách, thận chuột Nhƣ cao lỏng thuốc CVKHT gia giảm chƣa thấy gây ảnh hƣởng đến tiêu đánh giá với mức liều dùng thời gian sử dụng nghiên cứu thực nghiệm chuột cống trắng 58 KIẾN NGHỊ Qua kết nghiên cứu độc tính bán trƣờng diễn cao lỏng thuốc CVKHT gia giảm cho thấy tiềm chế phẩm sử dụng điều trị chứng cảm mạo bốn mùa Các vị thuốc thuốc vị thuốc quý có nhiều tác dụng sức khỏe Để đƣa chế phẩm thị trƣờng phục vụ chăm sóc sức khỏe cộng đồng mở rộng phạm vi sử dụng chế phẩm, xin đề xuất kiến nghị: - Tiếp tục nghiên cứu đánh giá tính an tồn chế phẩm lâm sàng - Tiếp tục nghiên cứu tác dụng chế phẩm: tác dụng giảm ho long đờm, tác dụng tăng cƣờng miễn dịch, tác dụng chống huyết khối 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO Học viện Quân Y (2010) Các thuốc thường dùng Y học cổ truyền ứng dụng lâm sàng Nhà xuất Quân đội nhân dân, 63 - 64 Nguyễn Trọng Điệp, Nguyễn Thị Thanh Hải, Nguyễn Tùng Linh cs (2021) Đánh giá độc tính cấp bán trƣờng diễn động vật thực nghiệm viên nang cứng Kaviran bào chế từ nhàu, cúc hoa vàng sâm ngọc linh sinh khối Tạp chí Nội khoa Việt Nam (21): 67 Bộ Y tế (2009) Phương tễ học Nhà xuất Y học, 26 Trần Văn Kỳ (2016), 250 thuốc Đông y cổ truyền chọn lọc Nhà xuất Đà Nẵng, 22 - 23 Bộ Y tế Viện Dƣợc liệu (2020) Một số Dược liệu, vị thuốc cổ truyền thuốc sử dụng phòng hỗ trợ điều trị viêm đường hô hấp cấp virus Sars-CoV-2 Theo công văn số 1306/BYT-YHCT Bộ trƣởng Bộ Y tế việc tăng cƣờng phịng, chống vệnh viêm đƣờng hơ hấp cấp SARS-CoV-2 thuốc phƣơng pháp YHCT, ngày 17/03/2020 Bộ Y tế (2014) Dược học cổ truyền Nhà xuất Y học, 166, 172 - 177, 222, 229, 288, 295, 332 Bộ y tế (2017) Dược điển Việt Nam V Nhà xuất Y học Đỗ Tất Lợi (2005) Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học, 312 - 313, 392 - 393, 599 - 601, 654 - 656, 664 - 668, 839 - 841, 863 - 867 Viện Dƣợc liệu (2006) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam (tập II) Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, 100, 523, 548 - 550, 936 - 937, 1134 -1135 10 Okuyama, E., Nishimura, S., Ozaki, Y., Satake, M., Yamazaki, M (1993) Analgesic component of Notopterygium insisum Ting Chemical Pharmaceutical Bullentin 41(5): 926 11 Nam, N.H (2002) Antiangiogenic and antitumor constituents from Vietnamese medicinal plants and their analogues Doctorate thesis: 25 12 Trần Quốc Bào, Trần Quốc Bình (2011) Thuốc Y học cổ truyền ứng dụng lâm sàng Nhà xuất Y học, 19 - 20, 25 - 26, 47 - 48, 65 - 66, 137 138, 215 - 216 13 Yang, J.-M., et al (2017) Feeble Antipyretic, Analgesic, and Antiinflammatory Activities were Found with Regular Dose 4’-O-β-D-Glucosyl5-O-Methylvisamminol, One of the Conventional Marker Compounds for Quality Evaluation of Radix Saposhnikoviae Pharmacognosy magazine 13(49): 168 - 174 14 Võ Văn Chi (2012) Từ điển thuốc Việt Nam (tập II) Nhà xuất Y học, 1923 - 1924 15 Viện Dƣợc liệu (2006) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam (tập I) Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, 328 - 329, 776 - 779 16 Bộ Y tế (2011) Dược liệu học (tập I) Nhà xuất Y học, 217 - 222, 227 - 231, 287 - 289, 399 - 404, 453 - 457 17 Chengjie CHEN (2012) Radio- protective effect of catalpol in cultured cells and mice Journal of Radiantion Research (54): 76 - 82 18 Chandrasekaran C V., Deepak H B., et al (2011) Dual inhibitory effect of Glycyrrhiza glabra on COX and LOX products Phytomedicine 18(4): 278 19 Zong Lei, Qu Ying, et al (2013) 18α-glycyrrhetinic acid extracted from Glycyrrhiza radix inhibits proliferation and promotes apoposis of the hepatic stellate cell line Journal of digestive diseases 14(6): 328 20 Mukherjee Moumita, Bhaskaran Natarajan, et al (2010) Anti-ulcer and antioxidant activity of GutGard TM 21 Bộ Y tế (2019) Sức khỏe Đời sống, Thương truật trị phong thấp, rối loạn tiêu hóa https://suckhoedoisong.vn/thuong-truat-tri-phong-thap-roiloan-tieu-hoa-169160877.htm, truy cập ngày 1/5/2022 22 Võ Văn Chi (2012) Từ điển thuốc Việt Nam (tập I) Nhà xuất Y học, 82 - 83, 349 - 350, 1243 - 1244 23 Trung tâm Nghiên cứu Nuôi trồng Dƣợc liệu Quốc gia Vietfarm (2021), Quế chi https://www.thuocdantoc.org/duoc-lieu/que-chi, truy cập ngày 1/5/2022 24 Bộ Y tế (2018) Dược liệu học (tập 2) Nhà xuất Y học, 170 - 173, 253 - 237 25 Nguyễn Thị Ngọc (2013) Nghiên cứu tác dụng ức chế enzyme xanthine oxydase in vitro hoạt chất từ Quế chi (Cinnamomum cassia) thu hái Việt Nam Luận văn thạc sỹ Dƣợc học, Học viện Quân Y: 59 26 Wang, C., et al (2016) In vivo anti-inflammatory activities of the essential oil from Radix Angelicae dahuricae J Nat Med 70(3): 563 - 570 27 Bác sĩ 247 (2022), Tìm hiểu bách - tính vị, cơng dụng thuốc https://bacsi247.org/blog/tim-hieu-ve-cay-bach-bo-tinh-vi-cong-dung-cua-thuoc, truy cập ngày 7/7/2022 28 Phạm Xuân Sinh, Nguyễn Mạnh Tuyền, Nguyễn Phƣơng Nhi (2009) Tác dụng giảm ho tác dụng thời gian đông máu, máu chảy vị thuốc hoàng cầm (Radix Scutellariae) trƣớc sau chế biến Tạp chí Dược học (402): 16 - 19 29 Bộ Y tế, Cục Khoa Học Công Nghệ Đào tạo (2015) Về việc ban hành tài liệu chuyên môn “Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu” Quyết định số 141/QĐ - K2ĐT, ngày 27/10/2015 30 Bộ Y tế (2018) Quy định thử thuốc lâm sàng Thông tƣ số 29/2018/TT-BYT, ngày 29/10/2018 31 World Health Organization - WHO (2000) General Guidelines for Methodologies on Research and Evaluation of Traditional Medicine, Geneva, Switzerland, 2000 32 Organization of Economic Co-operation and Development - OECD (1998), The OECD Guideline for Testing of Chemicals: 408 Subchronic Oral Toxicity—Rodent: 90 Day Study, OECD, Paris, France, 1998 33 Phan Văn Minh (2018) Đánh giá độc tính cấp, bán trường diễn tác dụng tăng khả chịu đựng với gánh nặng nhiệt thực nghiệm cao khô Giải khử thang Luận văn cao học, Học viện Quân Y: 31 - 33 34 Nguyễn Văn Bảo, Lê Mạnh Cƣờng (2022) Nghiên cứu độc tính bán trƣờng diễn Bạch phụ thang thực nghiệm Tạp chí y học Việt Nam 510(2): 38 35 Đỗ Trung Đàm (2014) Phương pháp xác định độc tính thuốc Nhà xuất Y học, 36 World Health Organization (2000), Working group on the safety and efficacy of herbal medicine, Report of regional office for the western pacific of the World Health Organization 37 Lê Văn Sơn cs (2007) Sinh lý học (tập 1) Nhà xuất Quân đội nhân dân, Hà Nội 38 Association of Southeast Asian nations (ASEAN) (2016), ASEAN common technical dossier for the registration of pharmaceuticals for human use 39 Tạ Thành Văn (2013) Hóa sinh lâm sàng Nhà xuất Y học, 16 - 73 40 Vũ Đình Vinh (2001) Hướng dẫn sử dụng xét nghiệm sinh hoá Nhà xuất Y học, 115 - 287 41 Nguyễn Đạt Anh, Nguyễn Thị Hƣơng (2013) Các xét nghiệm thường quy áp dụng thực hành lâm sàng Nhà xuất Y học, 46 - 98 42 Hoàng Văn Cúc, Nguyễn Văn Huy cs (2006) Giải phẫu người Nhà xuất Y học, 244 - 290 ... tài: ? ?Đánh giá độc tính bán trường diễn cao lỏng thuốc Cửu vị Khương hoạt thang gia giảm động vật thực nghiệm? ?? Nghiên cứu có mục tiêu: Đánh giá đƣợc độc tính bán trƣờng diễn cao lỏng thuốc Cửu vị. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y LÊ THỊ ĐÀO ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH BÁN TRƢỜNG DIỄN CỦA CAO LỎNG BÀI THUỐC CỬU VỊ KHƢƠNG HOẠT THANG GIA GIẢM TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM KHÓA... Khƣơng hoạt thang gia giảm chuột cống trắng CHƢƠNG - TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ BÀI THUỐC CỬU VỊ KHƢƠNG HOẠT THANG GIA GIẢM 1.1.1 Nguồn gốc thuốc Bài thuốc Cửu vị Khƣơng hoạt thang (CVKHT) thuốc