Đang tải... (xem toàn văn)
Bài viết Đánh giá độc tính bán trường diễn một số chế phẩm sinh học lưu hành tại Việt Nam trình bày đánh giá tính an toàn chế phẩm sinh học, mức độ độc hại ở mức độ di truyền, ảnh hưởng đến quần thể đa dạng sinh học là hết sức cần thiết với đơn vị khảo nghiệm và cơ quan quản lý.
ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN MỘT SỐ CHẾ PHẨM SINH HỌC LƯU HÀNH TẠI VIỆT NAM Phạm Thị Kiều Oanh1, Đỗ Thị Thảo2, Huỳnh Thị Thu Huệ3 Nguyễn Thị Thiên Phương1, Trần Quốc Trọng1* TÓM TẮT Đánh giá tính an tồn chế phẩm sinh học, mức độ độc hại mức độ di truyền, ảnh hưởng đến quần thể đa dạng sinh học cần thiết với đơn vị khảo nghiệm quan quản lý Nhóm nghiên cứu lựa chọn chế phẩm đại diện đánh giá độc tính bán trường diễn phơi cá ngựa vằn để đánh giá tỷ lệ nở, gây chết, quái thai Kết thí nghiệm cho thấy, mẫu M1 (enzym Blend), M4 (TRACATU), M5 (Remediator (Việt Nam)) an toàn; M2 (Prozym), M3 (Tictac), M6 (Remediator (Enretech, Australia)) có độc tính thấp thuộc nhóm an tồn Các phương pháp thể phù hợp kết tin cậy q trình thực Từ khóa: An tồn chế phẩm sinh học; độc tính bán trường diễn Nhận bài: 19/9/2022; Sửa chữa: 21/9/2022; Duyệt đăng: 23/9/2022 Mở đầu Tại Điều 6, Luật BVMT năm 2020 quy định: Cấm phát tán, thải môi trường chất độc hại ảnh hưởng đến sức khỏe người, sinh vật tự nhiên Hiện có nhiều phương pháp nước quốc tế hướng dẫn đánh giá độc tính chất Do vậy, xác định phương pháp đại có độ tin cậy cao phù hợp với điều kiện sở vật chất Việt Nam cần thiết Việc sử dụng cá động vật nhiều thí nghiệm đánh giá độc tính giới bị hạn chế Luật Bảo vệ động vật Vì vậy, thay việc sử dụng cá thí nghiệm độc tính, ngày nhiều thử nghiệm bắt đầu sử dụng phơi cá Ngồi ứng dụng để xác định độc tính cấp tính, phơi cá cịn mơ hình phù hợp cho nghiên cứu nhằm tìm hiểu chế gây độc xác định tác động có hại mang tính tích lũy lâu dài xảy cho cá thể quần thể (Wang et al., 2020) Nhóm nghiên cứu lựa chọn chế phẩm sinh học đại diện cho dạng chế phẩm có nguồn gốc nước quốc tế lưu hành thị trường để đánh giá độc tính bán trường diễn đối tượng phơi cá ngựa vằn Thí nghiệm phương pháp nghiên cứu 2.1 Mẫu thí nghiệm mẫu thí nghiệm: (1) M1: Mẫu enzym Blend xử lý nước (Nhập từ Mỹ) Thành phần kg: Protease: 5.200.000 U; Amylase: 1.560.000 U; Cellulose: 1.300.000 U; Xylanase: 1.300.000 U; Tá dược vừa đủ kg (2) M2: Prozym (Sản xuất Việt Nam) Thành phần kg: Protease: 3500 UI/ml; Lipase: 1500 UI/ml; Amylase: 2000 UI/ml; Cellulase: 1500 UI/ml; hemicellulase: 1200 UI/ml; Tá dược vừa đủ kg (3) M3: Men bể phốt Tictac (Nhập từ Thái Lan) Thành phần gồm loại vi sinh vật hữu ích, phân giải chất thải xenluloza, protein, tinh bột (4) M4: Micro Phốt TRACATU (Sản xuất Việt Nam) Thành phần gồm hàng tỉ vi sinh vật hiếu khí yếm khí Nồng độ 65g bột/500 ml dịch thể (5) M5: Remediator (Sản xuất Việt Nam) M5 chất thơ, bao gồm nhiều thành phần mang hình dạng khác nhau: hạt, sợi, tấm… Dung dịch pha từ M5 có phần lắng cặn, phần khuếch tán tan dung dịch E3 (6) M6: Remediator (Enretech, nhập từ Ơxtrâylia) M6 chất bột thơ, màu trắng ngà, tan khơng hồn tồn dung mơi E3 Dung dịch E3 lắng nhanh xuống đáy ống, trước thử nghiệm cần lắc kỹ trước thử nghiệm Vụ Khoa học, Công nghệ Hợp tác quốc tế - Tổng cục Môi trường, Bộ Tài nguyên Môi trường Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Viện nghiên cứu hệ gen, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam 86 Chuyên đề III, tháng năm 2022 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ ỨNG DỤNG CÔNG NGHỆ 2.2 Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Vật liệu nghiên cứu - Bể nuôi cá, - Đĩa nhựa giếng, - Kính hiển vi, - Pipet đầu tip, - Máy đo pH, - Máy đo nồng độ oxy, - Máy đo độ cứng nước, - Tủ ấm điều chỉnh nhiệt độ đến 26 ±1oC - Các ống thủy tinh bình thủy tinh để pha mẫu - Dung dịch E3 (dung dịch nuôi phôi, chứa mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2, 0.33 mM MgSO4) 2.2.2 Phương pháp thử nghiệm Thử nghiệm độc tính thực đối tượng phơi cá ngựa vằn (Daniorerio) theo hướng dẫn thử độc cấp tính hóa chất phơi cá OECD (OECD guideline 236) [OECD, Test No 236], với quy trình thực sau: Chuẩn bị nước điều kiện thử nghiệm: Nước sử dụng cho thí nghiệm nên đạt độ cứng khuyến cáo khoảng 100-300 mg/L CaCO3 Độ pH nước nằm khoảng từ 6.5-8 Chuẩn bị phôi cá: Phôi cá giai đoạn từ 2-8 tế bào (khoảng 1-2 sau thụ tinh) Chuẩn bị mẫu thử nghiệm: Các mẫu dạng bột pha nồng độ dung dịch gốc 5.000 mg/L Dải nồng độ sử dụng dựa tham chiếu GHS nồng độ LC50 thử nghiệm độc tính cấp (Bảng 1), nồng độ sử dụng thí nghiệm là: 500 - 1.000 - 2.000 3.000 - 5.000 mg/L pha dung dịch E3 (dung dịch nuôi phôi, chứa mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0,33 mM CaCl2, 0,33 mM MgSO4) Riêng M4 mẫu dạng lỏng không rõ nồng độ, thử nghiệm cách pha lỗng hóa chất theo tỷ lệ 1:2 1:4 dung dịch E3 Thiết kế thử nghiệm: Đĩa thử nghiệm độc tính đĩa giếng (SPL), giếng bổ sung ml dung dịch Giếng đối chứng chứa dung dịch E3, giếng lại chứa dung dịch theo nồng độ chuẩn bị Mật độ phơi nhiễm 20 cá thể/giếng Mỗi 24h, số lượng phôi chết dị dạng ghi chép thời điểm 96h, thử nghiệm lặp lại lần Phân tích số liệu tiêu chí đánh giá Kết thu thập từ lần lặp lại sử dụng để xây dựng đường cong đáp ứng liều tính tốn giá trị LC50 (Lethal Concentration 50 - nồng độ gây tử vong 50% cá thể thí nghiệm), EC50 (Effective Concentration 50–nồng độ gây ảnh hưởng hình thái lên 50% cá thể thí nghiệm) TI (Tetratogenic index – số gây quái thai, tính tỷ lệ LC50/EC50) phần mềm GraphPad Prism8.0 Chỉ số LC50 so sánh với tiêu chuẩn thử nghiệm độc tính cấp GHS để phân loại độc tính (Vereinte Nationen, 2021) Chỉ số TI với EC50 sử dụng để dự đốn khả xuất bất thường hình thái trường hợp chất không gây tử vong phôi, TI >= EC50 < 1.000 μM cho thấy chất có tiềm cao gây qi thai phơi (Jarque et al., 2020) Kết thảo luận Kết thí nghiệm thu trình bày theo mẫu thí nghiệm từ M1 - M6 3.1 Kết thử nghiệm mẫu M1 ▲Hình Đồ thị tỷ lệ sống ▲Hình Đồ thị tỷ lệ nở dị dạng phôi cá thử phôi cá phơi nhiễm nghiệm với M1 với M1 Kết cho thấy: + M1 không gây ảnh hưởng lớn lên sức sống phôi, nồng độ 5.000 mg/L xuất phôi tử vong tỷ lệ = 61.6% Giá trị LC50 tính tốn 4.930 mg/L, nằm khoảng 2.000 – 5.000 mg/L (Hình 1), M1 thuộc nhóm – nhóm an toàn theo thang phân loại GHS + Các phơi sống khơng xuất bất thường hình thái sau 96h phơi nhiễm, khơng tính tốn giá trị EC50 Bảng 1: Đánh giá LC50 (Acute toxicity estimate – ATE) theo tiêu chuẩn GHS Đường tiếp xúc Ăn/Uống (mg/kg P) Da (mg/kg P) Khơng khí (ppmV) Hơi (mg/L) Bụi sương mù (mg/L) Độc độ ATE≤5 ATE ≤ 50 ATE≤100 ATE≤0.5 ATE≤0.05 Độc độ 5